一种灵芝孢子粉多糖的提取方法与流程

1.本发明属于天然产物深加工技术领域，尤其涉及一种灵芝孢子粉多糖的提取方法。


背景技术：

2.灵芝是一种大型药用真菌。性甘味平，归心、肺、肝、肾经。属担子菌类多孔菌科真菌赤芝ganodermalucidum(leyss.exfr.)karst.或紫芝ganodermasinensezhao,xuetzhang的干燥子实体。灵芝生长成熟后期从菌盖弹射出来的极其细小的颗粒即为灵芝孢子粉，生物学上称之为担孢子，它是灵芝的生殖细胞，具有灵芝全部的遗传活性物质，其主要有效成分含量高出灵芝75倍，其主要成分有多糖、三萜、蛋白质、氨基酸、核苷等，其中多糖和三萜是主要的活性物质，近年来是人们研究的重点。现代药理研究表明，灵芝孢子粉具有提升免疫力、抗氧化、抗肿瘤、抗衰老、保肝护肝和调节血糖等药理作用。
3.灵芝孢子(ganodermaspore)是灵芝在生长成熟期，从灵芝菌褶中弹射出来的极其微小的卵形生殖细胞即灵芝的种子。每个灵芝孢子只有4～6μm，呈细粉状，故称灵芝孢子粉(ganodermasporepowder)，是活体生物体，双壁结构，外被坚硬的几丁质纤维素所包围，人体很难充分吸收，破壁后更适合人体肠胃直接吸收。灵芝孢子具有双壁结构，双壁由几丁质与纤维素构成，质地坚硬，活性成分被包裹，不易溶出，影响人体吸收。因此，目前绝大多数的孢子粉产品都经不同的破壁工艺粉碎孢子壁，以提高其活性成分在人体内的生物利用度。但破碎后的孢子壁仍与有效成分混合在一起，最终产品的多糖和三萜含量未得到提高。目前市面上出售的破壁灵芝孢子粉，平均多糖含量约1.54％，三萜含量约4.22％。孢子粉壁的存在影响饮用口感，一些消化功能不全者在大量饮用后，易造成消化不良。
4.目前，关于灵芝孢子提取的公开文献有一些，例如：专利申请cn201610954473.4，公开了一种破壁灵芝孢子粉多糖的提取工艺，包括以下步骤：1)预处理；2)超声空化；3)初纯；4)浸膏浓缩；5)冷冻干燥；6)粉碎并收集：将冻干粉经粉碎机粉碎整齐，颗粒通过70～90目筛网，装袋，封口。该工艺过程均在低温、无化学溶剂接触条件下进行，有效地保留了破壁灵芝孢子粉多糖的生物活性，使其免受溶剂、温度等理化因素的影响。用这一工艺提取的灵芝孢子粉多糖口感醇香，无灵芝菌丝体多糖、子实体多糖的苦味而具有蔗糖甜醇感，在后续的成品配方中不需要添加遮味剂，可直接入组方；这种多糖物料具有良好的流动性、可压性及较大的堆积密度，适合加工成片剂、胶囊剂。
5.但是，其获取破壁灵芝孢子粉的步骤繁琐，且破壁灵芝孢子粉获得率不高。而破壁灵芝孢子粉多糖的提取率也并不高。


技术实现要素：

6.本发明为解决上述技术问题，提供了一种灵芝孢子粉多糖的提取方法。
7.为了能够达到上述所述目的，本发明采用以下技术方案：
8.一种灵芝孢子粉多糖的提取方法，包括以下步骤：
9.(1)前处理：选择无虫、无腐烂的新鲜灵芝孢子湿菌体，去杂、洗净后送入烘干机中烘干；
10.(2)破壁处理：将步骤(1)前处理好的灵芝孢子放入复合酶溶液中进行酶解破壁，搅拌均匀后再进行微波破壁处理，得破壁灵芝孢子；
11.(3)超声提取：向步骤(2)破壁处理好的破壁灵芝孢子中加入纯净水，然后送入超声波反应斧中进行超声波提取，得到提取液；
12.(4)浓缩：将步骤(3)的提取液抽真空并静置后取上清液，低温减压浓缩成灵芝孢子浸膏；
13.(5)冷冻干燥：将步骤(4)的灵芝孢子浸膏送入冷冻干燥室中进行真空冷冻干燥，然后粉碎，过筛，得到所述灵芝孢子粉多糖。
14.进一步地，在步骤(1)，所述烘干是将灵芝孢子烘至含水量为35～45％。
15.进一步地，在步骤(2)，所述复合酶为纤维素酶、几丁质酶和葡糖苷酶中的两种或两种以上。
16.进一步地，在步骤(2)，所述酶解破壁的温度为37～38.5℃，时间为120～130min。
17.进一步地，在步骤(2)，所述微波破壁的功率为600～700w，温度为85～95℃，时间为155～175s。
18.进一步地，在步骤(3)，所述超声波提取的功率为90～100w，频率为30～33khz，温度为50～55℃，采用超生作用3min停2min的方式提取，总提取时间15～20min。
19.进一步地，在步骤(4)，所述抽真空的真空度为
‑
0.2～
‑
0.15mpa。
20.进一步地，在步骤(4)，所述低温减压浓缩的温度为40～45℃，压力为100～200pa，浓缩成相对密度为1.20～1.25的浸膏。
21.进一步地，在步骤(5)，所述真空冷冻干燥是先在
‑
5℃～
‑
2℃下冷冻8h，在
‑
22℃～
‑
20℃下冷冻6h，然后在
‑
26℃下冷冻22～24h，再升温至28～33℃，升华时间为20～22h，冷冻干燥整个过程的真空度为
‑
0.2～
‑
0.1mpa。
22.进一步地，在步骤(5)，所述过筛是过50～60目筛网。
23.由于本发明采用了以上技术方案，具有以下有益效果：
24.(1)本发明中灵芝孢子破壁方法采用酶解加微波破壁，有效提高了灵芝孢子破壁率，破壁率高达99％，并且能有效保留原料中的有效成分。
25.(2)本申请通过超声波方法提取、真空冷冻干燥，有效地保留了灵芝孢子粉多糖的生物活性，避免免受溶剂、温度、压力等理化因素的影响，最终获得蔗糖香甜、纯度高、无有机溶剂残留的灵芝孢子粉多糖，且灵芝孢子粉多糖提取率较高，提取率高达99％。
26.(3)本申请不采用任何化学物质，尤其是有机溶剂乙醇，因为无水乙醇会破坏其中有效成分，甚至造成残留，操作简便，成本较低。
具体实施方式
27.下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，但本发明并不局限于这些实施方式，任何在本实施例基本精神上的改进或代替，仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。
28.实施例1
29.一种灵芝孢子粉多糖的提取方法，包括以下步骤：
30.(1)前处理：选择无虫、无腐烂的新鲜灵芝孢子湿菌体，去杂、洗净后送入烘干机中烘干；所述烘干是将灵芝孢子烘至含水量为35％；
31.(2)破壁处理：将步骤(1)前处理好的灵芝孢子放入复合酶溶液中进行酶解破壁，搅拌均匀后再进行微波破壁处理，得破壁灵芝孢子；所述复合酶为纤维素酶、几丁质酶和葡糖苷酶中的两种或两种以上；所述酶解破壁的温度为37℃，时间为120min；所述微波破壁的功率为600w，温度为85℃，时间为155s；
32.(3)超声提取：向步骤(2)破壁处理好的破壁灵芝孢子中加入纯净水，然后送入超声波反应斧中进行超声波提取，得到提取液；所述超声波提取的功率为90w，频率为30khz，温度为50℃，采用超生作用3min停2min的方式提取，总提取时间15min；
33.(4)浓缩：将步骤(3)的提取液抽真空并静置后取上清液，低温减压浓缩成灵芝孢子浸膏；所述抽真空的真空度为
‑
0.2mpa；所述低温减压浓缩的温度为40℃，压力为100pa，浓缩成相对密度为1.20的浸膏；
34.(5)冷冻干燥：将步骤(4)的灵芝孢子浸膏送入冷冻干燥室中进行真空冷冻干燥，然后粉碎，过筛，得到所述灵芝孢子粉多糖；所述真空冷冻干燥是先在
‑
5℃下冷冻8h，在
‑
22℃下冷冻6h，然后在
‑
26℃下冷冻22h，再升温至28℃，升华时间为20h，冷冻干燥整个过程的真空度为
‑
0.2mpa；所述过筛是过50目筛网。
35.实施例2
36.一种灵芝孢子粉多糖的提取方法，包括以下步骤：
37.(1)前处理：选择无虫、无腐烂的新鲜灵芝孢子湿菌体，去杂、洗净后送入烘干机中烘干；所述烘干是将灵芝孢子烘至含水量为45％；
38.(2)破壁处理：将步骤(1)前处理好的灵芝孢子放入复合酶溶液中进行酶解破壁，搅拌均匀后再进行微波破壁处理，得破壁灵芝孢子；所述复合酶为纤维素酶、几丁质酶和葡糖苷酶中的两种或两种以上；所述酶解破壁的温度为38.5℃，时间为130min；所述微波破壁的功率为700w，温度为95℃，时间为175s；
39.(3)超声提取：向步骤(2)破壁处理好的破壁灵芝孢子中加入纯净水，然后送入超声波反应斧中进行超声波提取，得到提取液；所述超声波提取的功率为100w，频率为33khz，温度为55℃，采用超生作用3min停2min的方式提取，总提取时间20min；
40.(4)浓缩：将步骤(3)的提取液抽真空并静置后取上清液，低温减压浓缩成灵芝孢子浸膏；所述抽真空的真空度为
‑
0.15mpa；所述低温减压浓缩的温度为45℃，压力为200pa，浓缩成相对密度为1.25的浸膏；
41.(5)冷冻干燥：将步骤(4)的灵芝孢子浸膏送入冷冻干燥室中进行真空冷冻干燥，然后粉碎，过筛，得到所述灵芝孢子粉多糖；所述真空冷冻干燥是先在
‑
2℃下冷冻8h，在
‑
20℃下冷冻6h，然后在
‑
26℃下冷冻24h，再升温至33℃，升华时间为22h，冷冻干燥整个过程的真空度为
‑
0.1mpa；所述过筛是过60目筛网。
42.实施例3
43.一种灵芝孢子粉多糖的提取方法，包括以下步骤：
44.(1)前处理：选择无虫、无腐烂的新鲜灵芝孢子湿菌体，去杂、洗净后送入烘干机中烘干；所述烘干是将灵芝孢子烘至含水量为37％；
45.(2)破壁处理：将步骤(1)前处理好的灵芝孢子放入复合酶溶液中进行酶解破壁，搅拌均匀后再进行微波破壁处理，得破壁灵芝孢子；所述复合酶为纤维素酶、几丁质酶和葡糖苷酶中的两种或两种以上；所述酶解破壁的温度为37.5℃，时间为122min；所述微波破壁的功率为620w，温度为87℃，时间为160s；
46.(3)超声提取：向步骤(2)破壁处理好的破壁灵芝孢子中加入纯净水，然后送入超声波反应斧中进行超声波提取，得到提取液；所述超声波提取的功率为92w，频率为31khz，温度为51℃，采用超生作用3min停2min的方式提取，总提取时间16min；
47.(4)浓缩：将步骤(3)的提取液抽真空并静置后取上清液，低温减压浓缩成灵芝孢子浸膏；所述抽真空的真空度为
‑
0.16mpa；所述低温减压浓缩的温度为41℃，压力为120pa，浓缩成相对密度为1.21的浸膏；
48.(5)冷冻干燥：将步骤(4)的灵芝孢子浸膏送入冷冻干燥室中进行真空冷冻干燥，然后粉碎，过筛，得到所述灵芝孢子粉多糖；所述真空冷冻干燥是先在
‑
4℃下冷冻8h，在
‑
22℃下冷冻6h，然后在
‑
26℃下冷冻22h，再升温至29℃，升华时间为20h，冷冻干燥整个过程的真空度为
‑
0.18mpa；所述过筛是过53目筛网。
49.实施例4
50.一种灵芝孢子粉多糖的提取方法，包括以下步骤：
51.(1)前处理：选择无虫、无腐烂的新鲜灵芝孢子湿菌体，去杂、洗净后送入烘干机中烘干；所述烘干是将灵芝孢子烘至含水量为42％；
52.(2)破壁处理：将步骤(1)前处理好的灵芝孢子放入复合酶溶液中进行酶解破壁，搅拌均匀后再进行微波破壁处理，得破壁灵芝孢子；所述复合酶为纤维素酶、几丁质酶和葡糖苷酶中的两种或两种以上；所述酶解破壁的温度为38℃，时间为128min；所述微波破壁的功率为680w，温度为92℃，时间为170s；
53.(3)超声提取：向步骤(2)破壁处理好的破壁灵芝孢子中加入纯净水，然后送入超声波反应斧中进行超声波提取，得到提取液；所述超声波提取的功率为98w，频率为32khz，温度为54℃，采用超生作用3min停2min的方式提取，总提取时间18min；
54.(4)浓缩：将步骤(3)的提取液抽真空并静置后取上清液，低温减压浓缩成灵芝孢子浸膏；所述抽真空的真空度为
‑
0.18mpa；所述低温减压浓缩的温度为44℃，压力为180pa，浓缩成相对密度为1.24的浸膏；
55.(5)冷冻干燥：将步骤(4)的灵芝孢子浸膏送入冷冻干燥室中进行真空冷冻干燥，然后粉碎，过筛，得到所述灵芝孢子粉多糖；所述真空冷冻干燥是先在
‑
3℃下冷冻8h，在
‑
20℃下冷冻6h，然后在
‑
26℃下冷冻24h，再升温至32℃，升华时间为22h，冷冻干燥整个过程的真空度为
‑
0.14mpa；所述过筛是过58目筛网。
56.实施例5
57.一种灵芝孢子粉多糖的提取方法，包括以下步骤：
58.(1)前处理：选择无虫、无腐烂的新鲜灵芝孢子湿菌体，去杂、洗净后送入烘干机中烘干；所述烘干是将灵芝孢子烘至含水量为40％；
59.(2)破壁处理：将步骤(1)前处理好的灵芝孢子放入复合酶溶液中进行酶解破壁，搅拌均匀后再进行微波破壁处理，得破壁灵芝孢子；所述复合酶为纤维素酶、几丁质酶和葡糖苷酶中的两种或两种以上；所述酶解破壁的温度为37.7℃，时间为125min；所述微波破壁
的功率为650w，温度为90℃，时间为165s；
60.(3)超声提取：向步骤(2)破壁处理好的破壁灵芝孢子中加入纯净水，然后送入超声波反应斧中进行超声波提取，得到提取液；所述超声波提取的功率为95w，频率为32khz，温度为53℃，采用超生作用3min停2min的方式提取，总提取时间17min；
61.(4)浓缩：将步骤(3)的提取液抽真空并静置后取上清液，低温减压浓缩成灵芝孢子浸膏；所述抽真空的真空度为
‑
0.17mpa；所述低温减压浓缩的温度为43℃，压力为150pa，浓缩成相对密度为1.23的浸膏；
62.(5)冷冻干燥：将步骤(4)的灵芝孢子浸膏送入冷冻干燥室中进行真空冷冻干燥，然后粉碎，过筛，得到所述灵芝孢子粉多糖；所述真空冷冻干燥是先在
‑
3℃下冷冻8h，在
‑
21℃下冷冻6h，然后在
‑
26℃下冷冻23h，再升温至30℃，升华时间为21h，冷冻干燥整个过程的真空度为
‑
0.15mpa；所述过筛是过55目筛网。
63.对比例1
64.按照专利申请cn201610954473.4(一种破壁灵芝孢子粉多糖的提取工艺)中的实施例进行灵芝孢子粉多糖的提取。
65.为了进一步说明本发明能够达到所述技术效果，做以下实验：
66.按照实施例1～5和对比例1的方法分别进行灵芝孢子粉多糖的提取，记录灵芝孢子破壁率和灵芝孢子粉多糖的提取率。
67.表1
68.组别破壁率提取率实施例198.2％99.0％实施例298.5％98.6％实施例399.0％98.8％实施例498.7％99.0％实施例599.0％99.0％对比例189.9％91.3％
69.由此可见，本申请提取工艺有效提高了灵芝孢子破壁率，破壁率高达99％；且灵芝孢子粉多糖的提取率得到了提高，提取率高达99％。
70.对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在没有背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同含义和范围内的所有变化囊括在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种灵芝孢子粉多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)前处理：选择无虫、无腐烂的新鲜灵芝孢子湿菌体，去杂、洗净后送入烘干机中烘干；(2)破壁处理：将步骤(1)前处理好的灵芝孢子放入复合酶溶液中进行酶解破壁，搅拌均匀后再进行微波破壁处理，得破壁灵芝孢子；(3)超声提取：向步骤(2)破壁处理好的破壁灵芝孢子中加入纯净水，然后送入超声波反应斧中进行超声波提取，得到提取液；(4)浓缩：将步骤(3)的提取液抽真空并静置后取上清液，低温减压浓缩成灵芝孢子浸膏；(5)冷冻干燥：将步骤(4)的灵芝孢子浸膏送入冷冻干燥室中进行真空冷冻干燥，然后粉碎，过筛，得到所述灵芝孢子粉多糖。2.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子粉多糖的提取方法，其特征在于：在步骤(1)，所述烘干是将灵芝孢子烘至含水量为35～45％。3.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子粉多糖的提取方法，其特征在于：在步骤(2)，所述复合酶为纤维素酶、几丁质酶和葡糖苷酶中的两种或两种以上。4.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子粉多糖的提取方法，其特征在于：在步骤(2)，所述酶解破壁的温度为37～38.5℃，时间为120～130min。5.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子粉多糖的提取方法，其特征在于：在步骤(2)，所述微波破壁的功率为600～700w，温度为85～95℃，时间为155～175s。6.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子粉多糖的提取方法，其特征在于：在步骤(3)，所述超声波提取的功率为90～100w，频率为30～33khz，温度为50～55℃，采用超生作用3min停2min的方式提取，总提取时间15～20min。7.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子粉多糖的提取方法，其特征在于：在步骤(4)，所述抽真空的真空度为
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0.2～
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0.15mpa。8.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子粉多糖的提取方法，其特征在于：在步骤(4)，所述低温减压浓缩的温度为40～45℃，压力为100～200pa，浓缩成相对密度为1.20～1.25的浸膏。9.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子粉多糖的提取方法，其特征在于：在步骤(5)，所述真空冷冻干燥是先在
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5℃～
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2℃下冷冻8h，在
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22℃～
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20℃下冷冻6h，然后在
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26℃下冷冻22～24h，再升温至28～33℃，升华时间为20～22h，冷冻干燥整个过程的真空度为
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0.2～
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0.1mpa。10.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子粉多糖的提取方法，其特征在于：在步骤(5)，所述过筛是过50～60目筛网。
技术总结
本发明公开了一种灵芝孢子粉多糖的提取方法，包括前处理；破壁处理；超声提取；浓缩；冷冻干燥等步骤。本发明中灵芝孢子破壁方法采用酶解加微波破壁，有效提高了灵芝孢子破壁率，破壁率高达99％，并且能有效保留原料中的有效成分；通过超声波方法提取、真空冷冻干燥，有效地保留了灵芝孢子粉多糖的生物活性，避免免受溶剂、温度、压力等理化因素的影响，最终获得蔗糖香甜、纯度高、无有机溶剂残留的灵芝孢子粉多糖，且灵芝孢子粉多糖提取率较高，提取率高达99％。达99％。


技术研发人员：李鹏 张林 陈荔 李敏 王森 柳学 方华刚 邓桂秀 胡登峰 张超然 罗倩 杨玲 洪江 向准 程志飞 罗丹
受保护的技术使用者：贵州省山地资源研究所
技术研发日：2021.03.16
技术公布日：2021/6/24