本发明涉及真菌保存，尤其涉及一种真菌保存介质及其制备方法与应用。
背景技术：
1、现有真菌保存方法：
2、矿物油保存：另外一种相当简便的保存方法，是在斜面试管培养的菌株上添加灭过菌的矿物油(liquidparaffin)，油量约高于培养基顶部一公分左右。这个方法除可避免培养基干掉外，主要借矿物油以隔绝气体交换，减少氧气的供给，使真菌生长及其代谢活动减缓。此法要注意矿物油的量，太多的矿物油，会造成菌株无法获得足够的氧气而死亡。当活化菌株时，须尽量减少agar块所黏附的矿物油，当首次移植活化的菌株时通常会生长较慢，而须多进行多一次移植程序以恢复菌株正常生长速度。以此法保存，大部分菌株通常可存活5-10年，不过为避免菌株退化，通常建议每两年需继代移植一次。这个方法的缺点主要是，容易被空气中的孢子所污染及活化菌种时较麻烦。
3、继代保存：是最简便的真菌保存方法，将菌种接种于含适当培养基斜面的玻璃试管中，并定期进行继代移植，将生长良好的菌种放置于温度15℃-20℃下，大多数的菌种约每2-3个月移植一次即可。若将这些试管菌种放置于4℃冰箱中，多数菌种可延长到4-6个月再进行继代移植，有些菌种甚至可以达1-2年之久。这个方法的缺点主要是，需要实验人员定期进行继代移植操作，否则无法实现保存，操作起来耗时且繁琐。
4、低温冷冻保存：先以解剖刀切取约1公分见方大小之菌丝块放入冷冻小管内，并添加10％甘油作为冷冻保护剂，经程式降温仪缓慢降温，速率为-1℃/min，直至-70℃后将冷冻小管移入-80℃冰箱或液态氮槽中长期保存。菌种活化时可将冷冻小管取出，以37℃水浴环境下快速回温，之后将菌丝块取出于适当培养基上培养。这个保存法对绝大多数的菌种皆可以适用，且菌种特性无明显退化，被认为是最好的保存方法。然而对于卵菌类的水生菌类，成功率并不高。
5、由于现有保存方法需定期继代培养。继代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉；②菌株的遗传性状容易发生变异；③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低；④需要定期转种，工作量大；⑤杂菌的污染机会较多。现有一种真菌磁珠保存方法，通过多孔磁珠对菌株的吸附，最大程度的减少反复冻融对菌株的伤害，一管菌株可反复多次利用。通过对配方的研究，最大程度提高菌株的保存时长，避免反复传代使菌株基因缺失。
6、为此，设计一种真菌保存介质及其制备方法与应用，解决以上问题。
技术实现思路
1、本发明为克服以上不足，提供一种真菌保存介质及其制备方法与应用。
2、一种真菌保存介质包括真菌保存液和若干个多孔磁珠；
3、所述真菌保存液的组分为(按百分比计)：
4、蛋白胨0.1-2份；
5、葡萄糖1-3份；
6、氯化钠或氯化钾0.3-1份；
7、te缓冲液0.2-1份；
8、甘油15-40份；
9、活性检测剂0.01-0.3份；
10、抗氧化剂0.0001-0.001份；
11、纯化水60-85份；
12、所述真菌保存液的ph为4.6-4.8；
13、优选的，所述多孔磁珠设置数量为20粒/管。
14、优选的，所述活性检测剂为1％的美兰试剂。
15、优选的，所述抗氧化剂为0.01g/100ml的迷迭香酸。
16、一种真菌保存介质的制备方法包括如下步骤：
17、第一步：称量：
18、称量蛋白胨0.1-2份，葡萄糖1-3份，氯化钠或氯化钾0.3-1份，te缓冲液0.2-1份，纯化水60-85份，搅拌均匀；
19、第二步：加入活性检测剂和调节ph：
20、再加入15-40份甘油，活性检测剂0.01-0.3份，充分混匀后，使用0.1mol/l盐酸调节ph至4.6-4.8；
21、第三步：灭菌：
22、115℃高压蒸汽灭菌20min；
23、第四步：加入迷迭香酸抗氧化：
24、待溶液温度降至50℃以下时，加入0.01g/100ml的迷迭香酸水溶液0.0001-0.001份，充分混匀；
25、第五步：装冷冻管：
26、将配置好的溶液加入至灭好菌的冷冻管中，1ml/管；同时加入无菌多孔磁珠，20粒/管。
27、一种真菌保存介质可应用于真菌保存。
28、一种真菌保存介质在零下20度-零下80度保存三年后的酵母类真菌可保持活性高达86％。
29、本发明的有益效果是：
30、本发明所述的一种真菌保存介质，磁珠法加低温冷冻保存结合的方法，用于零下20度-零下80度的真菌保存，三年后的酵母类真菌可保持活性高达86％。
31、适宜多种真菌生长，无需反复传代，有利于真菌的保存。
32、多孔磁珠的加入使菌种管可反复多次使用，同时减少反复冻融对菌株的伤害。
33、保存后的酵母类真菌活性较霉菌活性高；保存后的霉菌很好的保留了孢子活性，保证霉菌试验的可重复性和再现性。
34、一种真菌保存介质的制备方法简单易操作。
35、本发明所述的一种真菌保存介质可应用于真菌保存。
1.一种真菌保存介质，其特征在于，包括真菌保存液和若干个多孔磁珠；
2.根据权利要求1所述的一种真菌保存介质，其特征在于，制备方法包括如下步骤：
3.根据权利要求1所述的一种真菌保存介质，其特征在于，可应用于真菌保存。
4.根据权利要求1所述的一种真菌保存介质，其特征在于，在零下20度-零下80度保存三年后的酵母类真菌可保持活性高达86％。
