本发明涉及细胞治疗，具体而言，涉及一种工程化的免疫细胞及其应用。
背景技术：
1、间皮素(mesothelin，msln)是一种存在于正常间皮细胞上的分化抗原，可表达于正常胸膜、心包和腹膜的间皮细胞中。在正常组织中表达有限，但msln被发现表达在90％的上皮样恶性胸膜间皮瘤细胞、69％的肺腺癌细胞、60％的乳腺癌细胞、46％的食管癌细胞、胰腺肿瘤细胞和卵巢癌细胞。
2、msln基因位于染色体16p13.3，其基因全长8kb，cdna大小为2138bp，含有1884bp的开放阅读框，17个外显子，编码628个氨基酸。msln基因编码一个71kda的前体蛋白。msln前体蛋白由糖磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol，gpi)锚定在细胞膜上，可被弗林蛋白酶(furin)水解为两个部分：分子量为31kda的n端可溶性蛋白(1-286aa)，被称为巨核细胞增强因子(megakaryocyte-potentiating factor，mpf)和分子量为40kda的细胞表面糖蛋白(296-598aa)，即为成熟的msln。但间皮素的生物学功能尚未完全阐明。
3、目前针对人间皮素(msln)的嵌合抗原受体t细胞(car-t)的研究或临床试验较多，但在临床上都没有取得令人鼓舞的临床疗效。
技术实现思路
1、本发明提供一种工程化的免疫细胞及其应用，其靶向msln，具对msln阳性肿瘤细胞具有较好的杀伤效果。
2、具体地，一方面，本发明提供一种工程化的免疫细胞，其细胞膜表达有嵌合抗原受体，且其能表达融合蛋白并分泌至胞外；
3、该嵌合抗原受体的胞外区包括特异性结合msln的抗原结合域，该抗原结合域包括重链可变区和轻链可变区；前述重链可变区包括seq id no.13中的hcdr1、hcdr2和hcdr3，前述轻链可变区包括seq id no.14中的lcdr1、lcdr2和lcdr3；
4、前述融合蛋白包括免疫检查点抗体、以及与前述免疫检查点抗体融合的细胞因子。
5、另一方面，本发明提供分离的核酸分子，其编码如上所述的工程化的免疫细胞中的嵌合抗原受体和融合蛋白。
6、另一方面，本发明提供一种转基因免疫细胞，其含有前述的核酸分子。
7、另一方面，本发明提供一种重组载体，其含有前述的核酸分子。
8、另一方面，本发明提供一种制备上述工程化的免疫细胞或转基因免疫细胞的方法，其包括：将前述的核酸分子导入免疫细胞。
9、另一方面，本发明提供前述的工程化的免疫细胞、前述的核酸分子、和前述的重组载体在制备肿瘤治疗药物中的应用。
10、另一方面，本发明提供一种细胞药物组合物，其含有前述的工程化的免疫细胞或转基因免疫细胞。
11、另一方面，本发明提供一种肿瘤的治疗方法，其包括：向需要治疗的主体施用如前所述的细胞药物组合物。
1.一种工程化的免疫细胞，其特征在于，其细胞膜表达有嵌合抗原受体，且其能表达融合蛋白并分泌至胞外；
2.根据权利要求1所述的工程化的免疫细胞，其特征在于，
3.根据权利要求1或2所述的工程化的免疫细胞，其特征在于，所述免疫检查点抗体特异性识别并结合如下免疫检查点分子中的至少一种：pd-1、ccr8、tigit、pvrig、cd47、cd137、cd134、kir、lag-3、pd-l1、ctla-4、b7.1、b7h3、ccry、ox-40和cd40；
4.根据权利要求1-3任一项所述的工程化的免疫细胞，其特征在于，所述细胞因子选自白细胞介素、干扰素、集落刺激因子、趋化因子、和生长因子；
5.根据权利要求1-4任一项所述的工程化的免疫细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体的跨膜区选自如下任一蛋白分子中的跨膜结构域：cd8、cd8α、cd5、cd28、cd137、cd3ε、cd154、cd45、cd4、cd9、cd37、cd16、cd33、cd22、和cd134；
6.根据权利要求1-5任一项所述的工程化的免疫细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体从n端至c端包括：[msln scfv]-[cd8 hinge]-[cd8 tm]-[4-1bb]-[cd3ζ]；
7.根据权利要求1-6任一项所述的工程化的免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞为t细胞、nk细胞、nkt细胞、巨噬细胞或cik细胞；
8.一种分离的核酸分子，其特征在于，其编码如权利要求1-7中任一项所述的工程化的免疫细胞中的嵌合抗原受体和融合蛋白；
9.一种转基因免疫细胞，其特征在于，其含有如权利要求8所述的核酸分子；
10.一种重组载体，其特征在于，其含有如权利要求8所述的核酸分子；
11.制备如权利要求1-7中任一项所述的工程化的免疫细胞的方法，其特征在于，其包括，将如权利要求8所述的核酸分子导入免疫细胞。
12.权利要求1-7中任一项所述的工程化的免疫细胞、权利要求8所述的核酸分子、权利要求9所述的工程化的转基因免疫细胞、或权利要求10所述的重组载体在制备肿瘤治疗药物中的应用。
13.一种细胞药物组合物，其特征在于，其含有如权利要求1-7中任一项所述的工程化的免疫细胞，或权利要求9所述的转基因免疫细胞。
14.根据权利要求13所述的细胞药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括药学上可接受的载体。
