本公开涉及多肽，特别涉及环四肽及其组合物和用途。
背景技术：
1、酪氨酸酶(ec1.14.18.1)，又称多酚氧化酶，是一种广泛存在于生物体内的催化黑色素合成的关键限速酶。在黑色素生成过程中，酪氨酸酶催化l-酪氨酸氧化成l-多巴，随后将l-多巴氧化生成l-多巴醌，再通过一系列非酶促反应转化为黑色素。在人体中，酪氨酸酶过量表达，可能导致色素沉着性疾病如老年斑、雀斑、黄褐斑和黑色素瘤等。同时，在哺乳动物大脑中发现酪氨酸酶活性与帕金森病和其它神经退行性疾病相关。通过抑制酪氨酸酶活性可实现减少皮肤黑色素的生成，因此酪氨酸酶抑制剂在化妆品、保健品和药品领域均有着广泛的应用前景。
2、目前常见的酪氨酸酶抑制剂主要包括曲酸、抗坏血酸和熊果苷等，然而发明人认识到上述酪氨酸酶抑制剂均存在一定的缺陷，如曲酸长期使用可导致皮肤癌，抗坏血酸易发生氧化反应，熊果苷具有高度光敏感性，三者的稳定性均不佳。多肽由于具有特殊的生理活性作用，能较好地改善皮肤的某些问题，一直是近几年来美容和医药领域中的研发热点。目前能用于抑制酪氨酸酶活性的多肽种类较少，在市场中仍存在巨大的需求。
技术实现思路
1、本公开涉及环四肽及其组合物和用途，所述环四肽及含有所述环四肽的组合物，具有护理或治疗皮肤或粘膜等作用。
2、一方面，本公开提供了一种环肽、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐，所述环肽的结构为cyclo-[pro-lys-glu-lys]。
3、本公开的环肽中含有大量不对称碳原子，本领域技术人员了解本公开的环肽具有立体异构体，并可以作为立体异构体或立体异构体混合物存在，并因此有可能得到同分异构的混合物以及外消旋混合物或非对映异构体混合物、或纯的非对映异构体或对映异构体，这取决于不对称碳的数目和存在的异构体或同分异构混合物。在一些实施方式中，本公开所述的环肽是纯的同分异构体，即，对映异构体或非对映异构体。在一些实施方式中，本公开的环肽的结构是l-异构体。
4、本公开还包括所述环肽的所有合适的同位素变体。本公开的环肽的同位素变体此处理解为是指这样的化合物：其中在本公开的环肽内至少一个原子被替换为相同原子序数的另一个原子，但所述另一原子的原子质量不同于自然界中通常或主要存在的原子质量。可掺入本公开的环肽中的同位素的实例是：氢、碳、氮或氧的那些，例如2h(氘)、3h(氚)、13c、14c、14n、15n、17o或18o。本公开的环肽的特定的同位素变体(特别是其中已经掺入一种或多种放射性同位素的那些)可能有利于，例如检查在体内的作用机理或活性化合物的分布；由于相对简单的可制备性和可检测性，尤其是用3h或14c同位素标记的环肽适用于该目的。另外，由于环肽的更强的代谢稳定性，同位素(例如氘)的掺入可以产生特定的治疗益处，例如体内半衰期的延长或所需活性剂量的降低。通过本领域技术人员已知的方法，例如通过在下文中进一步描述的方法和在实施例中所述的方法，通过使用各自的试剂和/或起始物质的相应的同位素改性物，可制备本公开的环肽的同位素变体。
5、术语“盐”指被认可的在动物，并且更确切地说在人类中使用的一种盐，包括所述环肽的金属盐，所述金属包括，但不局限于：锂、钠、钾、钙、镁、锰、铜、锌或铝等；包括所述环肽与有机碱形成的盐，所述有机碱包括，但不局限于：乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、精氨酸、赖氨酸、组氨酸或哌嗪等；包括所述环肽与无机酸或有机酸形成的盐，所述有机酸包括，但不局限于：乙酸、柠檬酸、乳酸、丙二酸、马来酸、酒石酸、延胡索酸、苯甲酸、天冬氨酸、谷氨酸、琥珀酸、油酸、三氟乙酸、草酸、扑酸(pamoate)或葡萄糖酸等；所述无机酸包括，但不局限于：盐酸、硫酸、硼酸或碳酸。
6、盐的性质不是决定性的，所述环肽的盐可以通过本领域公知的常规方法得到。
7、本公开所述环肽、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐的合成可以根据现有技术中已知的常规方法来进行，例如固相合成法、液相合成法或固相与液相结合的方法，还可以通过以产生所希望的序列为目标的生物技术方法、或通过具有动物、真菌、或植物来源的蛋白质的控制水解来制备。
8、例如，一种获得本公开所述环肽的方法包括以下步骤：
9、-将具有受保护的n-末端和自由的c-末端的氨基酸与具有自由的n-末端和受保护的或与固体载体结合的c-末端的氨基酸偶联；
10、-消除保护n-末端的基团；
11、-重复该偶联顺序和消除保护n-末端的基团，直到获得所希望的肽序列；
12、-消除保护c-末端的基团或从该固体载体裂解；
13、-将肽链n-末端的氨基与c-末端的羧基偶联环合；
14、-消除保护侧链的基团。
15、在一些实施方式中，c-末端与一种固体载体结合并且该方法是在固相上进行，包括将具有受保护的n-末端和自由的c-末端的氨基酸与具有自由的n-末端和与一种聚合物载体结合的c-末端的氨基酸偶联；消除保护n-末端的基团；并且重复此顺序所需要的次数以便因此获得具有所希望的长度的肽，接着从最初的聚合物载体裂解所合成的肽，并将肽链n-末端的氨基与c-末端的羧基偶联环合。
16、在整个合成中这些氨基酸的侧链的官能团用临时或永久的保护基团保持充分地保护。
17、在一些实施方式中，固相合成可以通过将二肽或三肽偶联到聚合物支持体上或偶联到先前与聚合物支持体结合的二肽或氨基酸上的汇集策略(convergent strategy)来进行。
18、由于在哺乳动物的身体外部的应用，本公开的环肽可以形成各种类型的组合物的一部分。因此本公开的另一方面，提供一种组合物，包含有效量的上述环肽、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐，以及至少一种赋形剂和任选的佐剂。所述组合物可以通过本领域技术人员已知的常规方法制备。
19、在一些实施方式中，所述佐剂选自：激活clock表达的剂、镇痛剂、抑制par-2活性的剂、调节pgc-1α合成的剂、调节pparγ的活性的剂、增加或减少脂肪细胞的甘油三酸酯含量的剂、刺激或延迟脂肪细胞分化的剂、脂解剂或刺激脂肪分解的剂、溶脂剂、生脂剂、乙酰胆碱受体聚集的抑制剂、抑制肌肉收缩的剂、抗胆碱能试剂、弹性蛋白酶抑制剂、基质金属蛋白酶抑制剂、黑色素合成刺激或抑制剂、增白剂或脱色剂、促色素沉着剂、自晒黑剂、抗老化剂、no-合酶抑制剂、5α-还原酶抑制剂、赖氨酰羟化酶和/或脯氨酰羟化酶的抑制剂、抗氧化剂、自由基清除剂和/或抗大气污染的剂、活性羰基类物质清除剂、抗糖化剂、抗组胺剂、抗病毒剂、抗寄生虫剂、乳化剂、润肤剂、有机溶剂、液体推进剂、保留水分的物质、α羟基酸、β羟基酸、增湿剂、表皮水解酶、维生素、氨基酸、蛋白质、色素、染料、生物聚合物、胶凝聚合物、增稠剂、表面活性剂、软化剂、粘合剂、防腐剂、抗皱剂、能够减少或治疗下眼袋的剂、角质层分离剂、抗微生物剂、刺激真皮或表皮大分子的合成和/或能够抑制或预防它们的降解的剂、刺激弹性蛋白合成的剂、刺激核心蛋白聚糖合成的剂、刺激层粘连蛋白合成的剂、刺激防御素合成的剂、刺激伴侣蛋白合成的剂、刺激camp合成的剂、刺激透明质酸合成的剂、刺激纤连蛋白合成的剂、刺激去乙酰化酶合成的剂、刺激脂质和角质层组分的合成的剂、神经酰胺、脂肪酸、抑制弹性蛋白降解的剂、抑制丝氨酸蛋白酶的剂、刺激成纤维细胞增殖的剂、刺激角质形成细胞增殖的剂、刺激脂肪细胞增殖的剂、刺激黑色素细胞增殖的剂、刺激角质形成细胞分化的剂、抑制乙酰胆碱酯酶的剂、皮肤松弛剂、刺激糖胺聚糖合成的剂、抗角化过度剂、粉刺溶解剂、抗银屑病剂、抗湿疹剂、dna修复剂、dna防护剂、稳定剂、止痒剂、用于治疗和/或护理敏感性皮肤的剂、固化剂、紧致剂、重构剂、抗拉伸纹剂、调节皮脂产生的剂、止汗剂、刺激愈合的剂、协助愈合的剂、刺激再上皮化的剂、协助再上皮化的剂、细胞因子、镇静剂、抗炎剂、麻醉剂、作用于毛细血管循环和/或微循环的剂、刺激血管生成的剂、抑制血管渗透性的剂、静脉紧张剂、作用于细胞代谢的剂、用于改善真皮-表皮接合的剂、诱导毛发生长的剂、毛发生长抑制或延缓剂、香料、螯合剂、植物提取物、精油、海洋提取物、得自生物发酵过程的剂、无机盐、细胞提取物、防晒剂、以及有效抗a和/或b紫外线的有机或无机光防护剂或其混合物。
20、待施用的有效量的本公开的环肽以及它们的剂量将依赖于许多因素，包括年龄、使用者的状态、状况的严重性、施用的途径和频率以及待使用的环肽的具体性质。
21、“有效量”意指无毒性的但足以提供希望的效果的本公开的环肽的量。在本公开的组合物中以获得希望的效果的有效的浓度使用本公开的环肽。在一些实施方式中，相对于组合物的总重量，浓度在0.00000001％(按重量计)和20％(按重量计)之间；在一些实施方式中，相对于组合物的总重量，浓度在0.000001％(按重量计)和15％(按重量计)之间；在一些实施方式中，相对于组合物的总重量，浓度在0.0001％(按重量计)和10％(按重量计)之间；在一些实施方式中，相对于组合物的总重量，浓度在0.0001％(按重量计)和5％(按重量计)之间。
22、本公开的另一方面，提供一种递送系统或缓释系统，以便实现有效成分的更好渗透，其包含有效量的上述环肽、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐、或上述的组合物。
23、术语“递送系统”是指与本公开的环肽一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或载体，它们选自：水、油或表面活性剂、包括石油来源、动物来源、植物来源、或合成来源的那些，例如并且不限于花生油、大豆油、矿物油、芝麻油、蓖麻油、聚山梨醇酯、脱水山梨糖醇酯、醚硫酸酯、硫酸酯、甜菜碱、葡萄糖苷、麦芽糖苷、脂肪醇、壬苯醇醚、泊洛沙姆、聚氧乙烯、聚乙二醇、右旋糖、甘油、毛地黄皂苷和类似物。本领域的普通技术人员已知在可以给予本公开的环肽的不同递送系统中可以使用的稀释剂。
24、术语“缓释”以常规含义使用，指提供化合物在一段时间内逐渐释放的化合物的递送系统。在一些实施方式中，缓释系统在整个时间段内具有相对恒定的化合物释放水平。
25、递送系统或缓释系统的实例包括，但不局限于：脂质体、油质体、醇质体、毫米胶囊、微米胶囊、纳米胶囊、纳米结构的脂质载体、海绵状物、包合物、类脂囊泡、胶束、毫米球、微米球、纳米球、脂质球、微米乳液、纳米乳液、毫米粒子、微米粒子或纳米粒子。
26、本公开的另一方面，提供一种化妆品，包含有效量的上述环肽、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐、或上述的组合物、或上述的递送系统或缓释系统。
27、在一些实施方式中，所述化妆品的剂型包括膏、霜、乳剂、水剂、油剂、凝胶、粉剂、片剂、泥剂、贴剂、膜剂、气雾剂、喷雾剂、冻干制剂或纳米制剂。
28、本公开的另一方面，提供一种上述环肽、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐、或上述的组合物、或上述的递送系统或缓释系统在制备用于护理或治疗皮肤或粘膜的组合物中的用途。
29、本公开的另一方面，提供一种上述环肽、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐、或上述的组合物、或上述的递送系统或缓释系统在制备用于美白、祛斑、增亮皮肤颜色或消除肤色不均匀的组合物中的用途。
30、本公开的另一方面，提供一种上述环肽、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐、或上述的组合物、或上述的递送系统或缓释系统在制备用于抑制酪氨酸酶活性或抑制黑色素生成的组合物中的用途。
31、本公开的另一方面，提供一种上述环肽、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐、或上述的组合物、或上述的递送系统或缓释系统在制备用于抗衰、舒缓、保湿或修护的组合物中的用途。
32、本公开的另一方面，提供一种上述环肽、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐、或上述的组合物、或上述的递送系统或缓释系统在制备用于抑制弹性蛋白酶活性的组合物中的用途，或在制备用于增加皮肤弹性和/或提高皮肤紧致度的组合物中的用途，或在制备用于抑制透明质酸酶活性的组合物中的用途，或在制备用于修护皮肤屏障的组合物中的用途。
33、本公开的另一方面，提供一种上述环肽、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐、或上述的组合物、或上述的递送系统或缓释系统在制备化妆品中的用途。
34、在本公开中，术语“皮肤”应理解为是构成它的多个层，从最上层或角质层至最下层或皮下组织，两个端点都包括在内。这些层由不同类型的细胞组成，如角质形成细胞、成纤维细胞、黑色素细胞、和/或脂肪细胞等。在本公开中，术语“皮肤”包括头皮。
35、术语“护理皮肤”，指的是对皮肤进行维护和保养，改善皮肤的状态，使皮肤细腻、光洁、柔嫩、健康。
36、本公开具有以下优点和效果：
37、1、本公开的环肽能有效抑制酪氨酸酶的活性。抑制酪氨酸酶的活性能减少生物体黑色素的合成，从而实现美白、淡斑的功效。因此，本公开的环肽能够减少黑色素的合成，具有美白、祛斑的功效。
38、2、本公开的环肽能有效抑制弹性蛋白酶的活性。抑制弹性蛋白酶的活性能抑制弹性蛋白的水解，提高皮肤组织中弹性蛋白的含量水平，而弹性蛋白的缺失是皮肤老化产生松弛、下垂和细皱纹的主要原因。因此，本公开的环肽能抑制弹性蛋白酶的活性，从而有利于增加皮肤弹性，提高皮肤紧致度，祛除皮肤皱纹。
39、3、本公开的环肽能有效抑制透明质酸酶的活性。抑制透明质酸酶的活性能减少细胞中透明质酸的分解，提高细胞中透明质酸的含量水平，有利于增加皮肤或粘膜的水化，修护皮肤屏障，具有保湿、舒缓、修护的功效。因此，本公开的环肽能够提高细胞中透明质酸的含量水平，具有保湿、舒缓、修护的功效。
40、4、本公开的环肽由四肽-30的n-末端和c-末端偶联环合而得，但与线性的四肽-30相比，本公开的环肽不仅具有更高的稳定性和透皮性，还具有更优的抑制酪氨酸酶活性、抑制弹性蛋白酶活性和抑制透明质酸酶活性的作用，有效提升了美白、淡斑、紧致、祛皱、保湿、舒缓、修护的功效。
1.环肽或其盐，其特征在于，所述环肽的结构为cyclo-[pro-lys-glu-lys]。
2.根据权利要求1所述的环肽或其盐，其特征在于，所述盐包括所述环肽的金属盐，所述金属包括：锂、钠、钾、钙、镁、锰、铜、锌或铝；
3.一种组合物，其特征在于，包括有效量的权利要求1或2所述的环肽或其盐，以及至少一种赋形剂和任选的佐剂。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述佐剂选自：激活clock表达的剂、镇痛剂、抑制par-2活性的剂、调节pgc-1α合成的剂、调节pparγ的活性的剂、增加或减少脂肪细胞的甘油三酸酯含量的剂、刺激或延迟脂肪细胞分化的剂、脂解剂或刺激脂肪分解的剂、溶脂剂、生脂剂、乙酰胆碱受体聚集的抑制剂、抑制肌肉收缩的剂、抗胆碱能试剂、弹性蛋白酶抑制剂、基质金属蛋白酶抑制剂、黑色素合成刺激或抑制剂、增白剂或脱色剂、促色素沉着剂、自晒黑剂、抗老化剂、no-合酶抑制剂、5α-还原酶抑制剂、赖氨酰羟化酶和/或脯氨酰羟化酶的抑制剂、抗氧化剂、自由基清除剂和/或抗大气污染的剂、活性羰基类物质清除剂、抗糖化剂、抗组胺剂、抗病毒剂、抗寄生虫剂、乳化剂、润肤剂、有机溶剂、液体推进剂、保留水分的物质、α羟基酸、β羟基酸、增湿剂、表皮水解酶、维生素、氨基酸、蛋白质、色素、染料、生物聚合物、胶凝聚合物、增稠剂、表面活性剂、软化剂、粘合剂、防腐剂、抗皱剂、能够减少或治疗下眼袋的剂、角质层分离剂、抗微生物剂、刺激真皮或表皮大分子的合成和/或能够抑制或预防它们的降解的剂、刺激弹性蛋白合成的剂、刺激核心蛋白聚糖合成的剂、刺激层粘连蛋白合成的剂、刺激防御素合成的剂、刺激伴侣蛋白合成的剂、刺激camp合成的剂、刺激透明质酸合成的剂、刺激纤连蛋白合成的剂、刺激去乙酰化酶合成的剂、刺激脂质和角质层组分的合成的剂、神经酰胺、脂肪酸、抑制弹性蛋白降解的剂、抑制丝氨酸蛋白酶的剂、刺激成纤维细胞增殖的剂、刺激角质形成细胞增殖的剂、刺激脂肪细胞增殖的剂、刺激黑色素细胞增殖的剂、刺激角质形成细胞分化的剂、抑制乙酰胆碱酯酶的剂、皮肤松弛剂、刺激糖胺聚糖合成的剂、抗角化过度剂、粉刺溶解剂、抗银屑病剂、抗湿疹剂、dna修复剂、dna防护剂、稳定剂、止痒剂、用于治疗和/或护理敏感性皮肤的剂、固化剂、紧致剂、重构剂、抗拉伸纹剂、调节皮脂产生的剂、止汗剂、刺激愈合的剂、协助愈合的剂、刺激再上皮化的剂、协助再上皮化的剂、细胞因子、镇静剂、抗炎剂、麻醉剂、作用于毛细血管循环和/或微循环的剂、刺激血管生成的剂、抑制血管渗透性的剂、静脉紧张剂、作用于细胞代谢的剂、用于改善真皮-表皮接合的剂、诱导毛发生长的剂、毛发生长抑制或延缓剂、香料、螯合剂、植物提取物、精油、海洋提取物、得自生物发酵过程的剂、无机盐、细胞提取物、防晒剂、以及有效抗a和/或b紫外线的有机或无机光防护剂或其混合物。
5.一种递送系统或缓释系统，其特征在于，包含有效量的权利要求1或2所述的环肽或其盐、或权利要求3或4所述的组合物；
6.一种化妆品，其特征在于，包含有效量的权利要求1或2所述的环肽或其盐、或权利要求3或4所述的组合物、或权利要求5所述的递送系统或缓释系统。
7.根据权利要求6所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品的剂型包括膏、霜、乳剂、水剂、油剂、凝胶、粉剂、片剂、泥剂、贴剂、膜剂、气雾剂、喷雾剂、冻干制剂或纳米制剂。
8.权利要求1或2所述的环肽或其盐、或权利要求3或4所述的组合物、或权利要求5所述的递送系统或缓释系统在制备用于护理或治疗皮肤或粘膜的组合物中的用途。
9.权利要求1或2所述的环肽或其盐、或权利要求3或4所述的组合物、或权利要求5所述的递送系统或缓释系统在制备用于美白、祛斑、增亮皮肤颜色或消除肤色不均匀的组合物中的用途。
10.权利要求1或2所述的环肽或其盐、或权利要求3或4所述的组合物、或权利要求5所述的递送系统或缓释系统在制备用于抑制酪氨酸酶活性或抑制黑色素生成的组合物中的用途。
11.权利要求1或2所述的环肽或其盐、或权利要求3或4所述的组合物、或权利要求5所述的递送系统或缓释系统在制备用于抗衰、舒缓、保湿或修护的组合物中的用途。
12.权利要求1或2所述的环肽或其盐、或权利要求3或4所述的组合物、或权利要求5所述的递送系统或缓释系统在制备用于抑制弹性蛋白酶活性的组合物中的用途，或在制备用于增加皮肤弹性和/或提高皮肤紧致度的组合物中的用途，或在制备用于抑制透明质酸酶活性的组合物中的用途，或在制备用于修护皮肤屏障的组合物中的用途。
13.权利要求1或2所述的环肽或其盐、或权利要求3或4所述的组合物、或权利要求5所述的递送系统或缓释系统在制备化妆品中的用途。
