本发明涉及免疫检测，具体涉及用于检测bspqi的配对抗体及其应用。
背景技术：
1、bspqi(uniprot:d2d3s6；genbank:acr15108.1)是来源于球形芽孢杆菌的iis类限制性内切酶(rease)，其识别序列为5'-gctcttcn1/n4-3'，在不对称识别位点一侧下游的特定距离处切割dna双链，产生粘性末端，且对切割位点的序列没有要求。bspqⅰ、bsaⅰ、sapⅰ(bspqi的同裂酶)，均为iis型限制性内切酶，这类酶的序列识别区域和催化区域通常被一段多肽连接序列分开，使得酶的切割位点在识别序列之外。
2、在体外转录ivt反应中，以合成mrna为目的的线性dna模板不能有3'突出末端，因为3′突出末端会增加体外转录副产物的产生。ivt产物rna应不含限制位点序列，比如poly(a)尾后多余的碱基会导致mrna翻译蛋白效率降低。iis型限制性内切酶的酶切特性能够避免这些问题，因而成为mrna疫苗开发ivt反应中质粒线性化的首选酶。
3、生物制品生产过程中，存在bspqi的残留和污染的可能性，如果跟随生物制品进入人体内，有可能引发免疫原性等反应，引起安全风险。因此需要对bspqi的残留进行准确的分析检测，使之控制在安全范围内。
技术实现思路
1、本发明通过bspqi抗原小鼠免疫及筛选获得了anti-bspqi高亲和力配对抗体，其中克隆号3g3h8作为elisa试剂盒捕获抗体，克隆号10c8c2作为elisa试剂盒检测抗体，开发出bspqi残留检测elisakit。
2、本发明第一个方面公开了一对高亲和力配对抗体，包括3g3h8和10c8c2；
3、根据imgt编号系统，所述抗体3g3h8具有如seq id no:1所示的轻链互补决定区cdr1、如seq id no:2所示的轻链互补决定区cdr2和如seq id no:3所示的轻链互补决定区cdr3；
4、cdr-1stvky(seq id no:1)
5、cdr-2yts(seq id no:2)
6、cdr-3qqfsrspyt(seq id no:3)；
7、以及如seq id no:4所示的重链互补决定区cdr1、如seq id no:5所示的重链互补决定区cdr2和如seq id no:6所示的重链互补决定区cdr3；
8、cdr-1gysfssyv(seq id no:4)
9、cdr-2inpdndgt(seq id no:5)
10、cdr-3grssittnamdy(seq id no:6)。
11、所述抗体10c8c2具有如seq id no:7所示的轻链互补决定区cdr1、如seq id no:8所示的轻链互补决定区cdr2和如seq id no:9所示的轻链互补决定区cdr3；
12、cdr-1qdingy(seq id no:7)
13、cdr-2ran(seq id no:8)
14、cdr-3lqydefpwt(seq id no:9)
15、以及如seq id no:10所示的重链互补决定区cdr1、如seq id no:11所示的重链互补决定区cdr2和如seq id no:12所示的重链互补决定区cdr3。
16、cdr-1gysitsgys(seq id no:10)
17、cdr-2mhysdyt(seq id no:11)
18、cdr-3aslgklawfay(seq id no:12)
19、所述抗体3g3h8包括序列如seq id no:13所示的轻链可变区以及序列如seq idno:14所示的重链可变区。
20、envltqspaimsaslgekvtmscrasstvkyiywyqqksdaspklwiyytsnlapg vparfsgsgsgnsysltisnmegedaatyycqqfsrspytfgggtkleik(seq id no:13)
21、evqlqqsgpelvkpgasvkmsckasgysfssyvlhwvkqkpgqglewigyinpdn dgtkynekfkgkatltsdkssstaymdlisltsedsavyycgrssittnamdywgqgtsv tvss(seq id no:14)
22、所述抗体3g3h8包括如seq id no:15所示的轻链氨基酸序列(轻链恒定区mouseigkappa)；以及如seq id no:16所示的重链氨基酸序列(重链恒定区mouse igg1)。
23、mdfqvqifsfllisisvvmsrgenvltqspaimsaslgekvtmscrasstvkyiywyqqksdaspklwiyytsnlapgvparfsgsgsgnsysltisnmegedaatyycqqfsrspytfgggtkleikradaaptvsifppsseqltsggasvvcflnnfypkdinvkwkidgserqngvlnswtdqdskdstysmsstltltkdeyerhnsytceathktstspivksfnrnec(seq id no:15)
24、mewswiflfllsgtagvhsevqlqqsgpelvkpgasvkmsckasgysfssyvlhwvkqkpgqglewigyinpdndgtkynekfkgkatltsdkssstaymdlisltsedsavyycgrssittnamdywgqgtsvtvssakttppsvyplapgsaaqtnsmvtlgclvkgyfpepvtvtwnsgslssgvhtfpavlqsdlytlsssvtvpssprpsetvtcnvahpasstkvdkkivprdcgckpcictvpevssvfifppkpkdvltitltpkvtcvvvdiskddpevqfswfvddvevhtaqtqpreeqfnstfrsvselpimhqdwlngkefkcrvnsaafpapiektisktkgrpkapqvytipppkeqmakdkvsltcmitdffpeditvewqwngqpaenykntqpimntngsyfvysklnvqksnweagntftcsvlheglhnhhtekslshspgk(seq id no:16)所述抗体10c8c2包括序列如seq id no:17所示的轻链可变区以及序列如seq id no:18所示的重链可变区。
25、dikmtqspssmyaslgervtitckasqdingylswfqqkpgkspktliyranrlvdg vpsrfsgsgsgqdfsltissleyedtgiyyclqydefpwtfgggtkleit(seq id no:17)
26、dvqlqesgpdlvkpsqslsltctvtgysitsgyschwirqfpgnklewmgymhysd ytnynpslksrisitrdtsknqfflqlnsvttedtatyycaslgklawfaywgqgtlvtv sa(seq id no:18)
27、所述抗体10c8c2包括如seq id no:19所示的轻链氨基酸序列(轻链恒定区mouseigkappa)；以及如seq id no:20所示的重链氨基酸序列(重链恒定区mouse igg2a)。
28、mrtpaqflgilllwfpgikcdikmtqspssmyaslgervtitckasqdingylswfqqkpgkspktliyranrlvdgvpsrfsgsgsgqdfsltissleyedtgiyyclqydefpwtfgggtkleitradaaptvsifppsseqltsggasvvcflnnfypkdinvkwkidgserqngvlnswtdqdskdstysmsstltltkdeyerhnsytceathktstspivksfnrnec(seq id no:19)
29、mrvpillclftafpgflsdvqlqesgpdlvkpsqslsltctvtgysitsgyschwirqfpgnklewmgymhysdytnynpslksrisitrdtsknqfflqlnsvttedtatyycaslgklawfaywgqgtlvtvsaakttapsvyplapvcgdttgssvtlgclvkgyfpepvtltwnsgslssgvhtfpavlqsdlytlsssvtvtsstwpsqsitcnvahpasstkvdkkieprgptikpcppckcpapnllggpsvfifppkikdvlmislspivtcvvvdvseddpdvqiswfvnnvevhtaqtqthredynstlrvvsalpiqhqdwmsgkefkckvnnkdlpapiertiskpkgsvrapqvyvlpppeeemtkkqvtltcmvtdfmpediyvewtnngktelnykntepvldsdgsyfmysklrvekknwvernsyscsvvheglhnhhttksfsrtpgk(seq id no:20)术语“抗体”(ab)应包括但不限于免疫球蛋白，其特异性结合抗原并包含通过二硫键互连的至少两条重(h)链和两条轻(l)链，或其抗原结合部分。每条h链包含重链可变区(本文缩写为vh)和重链恒定区。重链恒定区包含三个恒定结构域ch1、ch2和ch3。每条轻链包含轻链可变区(本文缩写为vl)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个恒定结构域cl。vh和vl区可以进一步细分为称为互补决定区(cdr)的高变区，其散布有更保守的称为框架区(fr)的区域。每个vh和vl包含三个cdr和四个fr，从氨基末端到羧基末端按照以下顺序排列：fr1，cdr1，fr2，cdr2，fr3，cdr3，fr4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。
30、应理解，本文中氨基酸名称采用国际通用的单英文字母标识，与其相对应的氨基酸名称三英文字母简写分别是：ala(a)、arg(r)、asn(n)、asp(d)、cys(c)、gln(q)、glu(e)、gly(g)、his(h)、i1e(i)、leu(l)、lys(k)、met(m)、phe(f)、pro(p)、ser(s)、thr(t)、trp(w)、tyr(y)、val(v)。
31、本发明第二个方面公开了一种核酸组合物，包括编码权利要求1-5任一项所述抗体3g3h8和10c8c2的核酸分子。
32、编码3g3h8的抗体轻链基因序列的核苷酸序列如seq id no：21所示：
33、atggacttccaagtacaaattttttctttccttctcatttccatctctgtggtgatgagtagaggagagaacgtacttacacagtcacctgctattatgtccgcatctctcggtgaaaaggttacgatgtcctgccgggcaagcagtaccgttaagtacatctactggtaccaacagaaaagtgatgccagtccaaagctctggatctactatacgtcaaacctggctccaggagtgccagcaaggttttctggcagtgggtctggaaactcctattcactgaccatcagcaatatggaaggcgaagatgctgccacttattattgccaacagttcagcagatccccttacacttttggcggaggcacaaaactcgagataaaacgcgccgatgccgctcctacagtgagcatctttcctccttcctccgagcagctgacaagcggcggcgccagcgtggtgtgtttcctgaacaacttctatcctaaggacatcaatgtgaagtggaagatcgacggcagcgagagacagaacggcgtgctgaactcctggaccgaccaggattccaaggactccacctactccatgtcctccacactgaccctgaccaaggatgagtacgagaggcacaacagctacacatgcgaggccacacacaagacctccaccagccctatcgtgaagagcttcaatagaaacgagtgc(seq id no：21)；
34、编码3g3h8的抗体重链基因序列的核苷酸序列如seq id no：22所示：
35、atggaatggtcatggatctttctctttctgctctccggaaccgccggcgttcactccgaggtccaacttcagcagtccggacctgagcttgttaagccaggcgcatccgtgaaaatgtcctgtaaggcttccggatatagtttctcctcctacgtactccactgggtcaagcagaaacctggacaaggactcgagtggatcgggtatatcaaccccgataatgatggcaccaaatataacgagaagttcaaaggcaaggccactctgaccagtgacaaatccagctctacagcatatatggacctgattagcctcacctctgaggactctgccgtgtattactgcggtcgctcctctattaccaccaatgcaatggactactggggtcaaggaacctccgtgacagtgagctctgccaagaccacccctcctagcgtgtaccccctggcccctggatccgccgctcagacaaactctatggtgaccctgggctgcctggtgaagggctacttccccgagcctgtgacagtcacatggaactccggcagcctgtctagcggcgtgcacaccttcccagccgtgctgcagagcgacctgtacaccctgagcagcagcgttaccgtgcctagcagccctagaccctccgagacagtgacatgtaatgtggcccacccagcctcctccaccaaggtggacaagaagatcgtgcctagggactgcggctgcaagccctgtatctgtacagtgcctgaggtgtcctccgtgttcatcttcccacctaagcctaaggatgtgctgaccatcacactgacacctaaggtgacatgtgtggtggtggatatctccaaggacgatcctgaggtgcagtttagctggtttgtggacgacgtggaggtgcacaccgcccagacccagcccagagaggagcagttcaattccacattcaggagcgtgagcgagctgcctatcatgcaccaggattggctgaatggcaaggagttcaagtgtagagtgaacagcgccgccttcccagctcctatcgagaagaccatcagcaagacaaagggcagacctaaggctcctcaggtgtacaccatcccacctcctaaggagcagatggccaaggacaaggtgagcctgacctgtatgatcaccgatttcttcccagaggatatcaccgtggagtggcagtggaatggccagcccgccgagaattacaagaacacccagcccatcatgaatacaaacggctcctactttgtgtactccaagctgaacgtgcagaagtccaactgggaggccggcaatacattcacctgctccgtgctgcacgagggcctgcacaatcaccacaccgagaagagcctgtcccacagcccaggcaag(seq id no：22)。
36、编码10c8c2的抗体轻链基因序列的核苷酸序列如seq id no：23所示：
37、atgcgcaccccagctcagttcctcggcattttgctcctctggtttcctggcatcaagtgtgacatcaagatgactcagagccctagtagtatgtatgcatccctgggagagcgggtgaccatcacatgtaaagctagccaggatatcaacggttacttgtcatggttccaacagaagccaggcaagagcccaaaaacgcttatctatagagccaatcgactggtggacggagtccctagcagattcagcggatctggctccggacaagatttttccctgaccatcagctcactcgagtatgaggacaccggcatctattactgtctgcagtacgatgagtttccgtggacttttggcggtggcaccaaactggaaattacccgcgccgatgccgctcctacagtgagcatctttcctccttcctccgagcagctgacaagcggcggcgccagcgtggtgtgtttcctgaacaacttctatcctaaggacatcaatgtgaagtggaagatcgacggcagcgagagacagaacggcgtgctgaactcctggaccgaccaggattccaaggactccacctactccatgtcctccacactgaccctgaccaaggatgagtacgagaggcacaacagctacacatgcgaggccacacacaagacctccaccagccctatcgtgaagagcttcaatagaaacgagtgc(seq id no：23)；
38、编码10c8c2的抗体重链基因序列的核苷酸序列如seq id no：24所示：
39、atgcgcgtgcctattctcctttgcctgtttaccgcctttccaggattcttgagtgacgtacagctgcaggagtctggacctgatcttgtgaaaccatcccaaagtctgagcctgacctgcacagtaactggctattccataaccagtgggtactcttgtcactggataagacagttccccggcaataagctggagtggatgggatatatgcactactccgactacaccaactacaatccaagcctcaagagtagaatatccataactcgggatacgtccaagaaccagttcttcctgcaactgaactccgtgacaacagaggataccgccacatactattgcgcctccctcgggaaactggcatggtttgcatattgggggcagggaaccctcgttaccgtaagcgcggcaaagacaaccgctccgagtgtctacccattggcacctgtttgtggtgacacaactggcagcagcgtaacactcggttgtttggtgaaaggctacttcccggagccagtgacccttacctggaacagcggaagcctgtcaagtggagtccacaccttcccagcagttctccaatctgacctttacactctttccagctctgtgaccgtaactagcagcacatggccatcccaatccatcacatgtaatgttgctcatccggcttcttctaccaaggtggacaagaagatagaaccccgcgggcctactattaagccttgtccaccgtgcaagtgccccgcacctaacctcttgggtggcccctccgtgttcatctttcctcccaagatcaaggatgtgctgatgatcagccttagccctatcgtgacatgcgtggtggtggacgtgtccgaggacgaccccgacgtgcagatttcttggttcgtgaacaacgtggaggtgcacaccgctcagacccagacccacagggaggactacaactctacactgcgggtggtgtccgccctgcctattcagcaccaggactggatgtccggaaaggagttcaagtgcaaggtgaacaacaaagacctgcccgcaccaatagagagaaccatcagcaaacccaaaggctctgtcagggctcctcaggtgtatgtcttgccaccaccagaggaagaaatgacaaaaaaacaggtcactcttacatgtatggtgacagatttcatgcccgaggatatatacgtggagtggaccaataacgggaagactgaactcaactacaaaaatactgagccagttctggatagtgatggctcctactttatgtacagtaagttgcgagtggagaaaaagaactgggttgaacgcaacagctacagttgcagtgtcgtgcatgaaggactgcacaatcaccatacaaccaagagtttttcacgaacgccaggtaaa(seq id no：24)。
40、编码期望分子的核酸序列可利用在本领域中已知的重组方法获得，诸如例如通过从表达基因的细胞中筛选文库，通过从已知包括该基因的载体中得到该基因，或通过利用标准的技术，从包含该基因的细胞和组织中直接分离。可选地，感兴趣的基因可被合成生产。
41、本发明第三个方面公开了上述配对抗体或核酸组合物在制备用于检测bspqi的产品中的应用。
42、其中所述产品包括试剂盒，利用上述配对抗体对bspqi进行检测
43、本发明取得如下有益技术效果：
44、本发明通过对bspqi的免疫筛选获得了一对anti-bspqi抗体，3g3h8和10c8c2，用该配对抗体进一步开发了高灵敏度bspqi残留检测elisa试剂盒，anti-bspqi配对抗体检测bspqi的灵敏度为156pg/ml；bspqi残留检测elisa kit检测线性范围10ng/ml-156pg/ml。该试剂盒可以应用于对bspqi定量及其残留检测适用于疫苗生产领域对线性化dna模板中bspqi残留检测质控。
1.一种用于检测bspqi的配对抗体，其特征在于，包括抗体3g3h8和10c8c2；所述抗体3g3h8具有如seq id no:1所示的轻链互补决定区cdr1、如seq id no:2所示的轻链互补决定区cdr2和如seq id no:3所示的轻链互补决定区cdr3，以及如seq id no:4所示的重链互补决定区cdr1、如seq id no:5所示的重链互补决定区cdr2和如seq id no:6所示的重链互补决定区cdr3；所述抗体10c8c2具有如seq id no:7所示的轻链互补决定区cdr1、如seq idno:8所示的轻链互补决定区cdr2和如seq id no:9所示的轻链互补决定区cdr3，以及如seqid no:10所示的重链互补决定区cdr1、如seq id no:11所示的重链互补决定区cdr2和如seq id no:12所示的重链互补决定区cdr3。
2.根据权利要求1所述的配对抗体，其特征在于，所述抗体3g3h8包括序列如seq idno:13所示的轻链可变区以及序列如seq id no:14所示的重链可变区。
3.根据权利要求2所述的配对抗体，其特征在于，所述抗体3g3h8包括如seq id no:15所示的轻链氨基酸序列；以及如seq id no:16所示的重链氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的配对抗体，其特征在于，所述抗体10c8c2包括序列如seq idno:17所示的轻链可变区以及序列如seq id no:18所示的重链可变区。
5.根据权利要求4所述的配对抗体，其特征在于，所述抗体10c8c2包括如seq id no:19所示的轻链氨基酸序列；以及如seq id no:20所示的重链氨基酸序列。
6.一种核酸组合物，其特征在于，包括编码权利要求1-5任一项所述抗体3g3h8和10c8c2的核酸分子。
7.权利要求1-5任一项所述的配对抗体或权利要求6所述的核酸组合物在制备用于检测bspqi的产品中的应用。
