本发明涉及免疫，尤其涉及一种cd25单域抗体、人源化抗体、及制备方法。所提供的cd25抗体在可以特异性结合cd25，特别是人cd25蛋白的同时，不阻断白介素2(il-2)与cd25的结合，或il-2的信号传导通路。基于此它能在不影响t细胞增殖活性的同时，可有效清除和消耗tregs，特别是在肿瘤微环境内。
背景技术：
1、cd25是实现调节性t细胞(regulatory t cells,treg)耗竭的潜在分子靶点之一。cd25，也称为白细胞介素2高亲和力受体α链(il-2rα)，在treg细胞上高表达，而在t效应细胞上不存在或以低水平表达，因此是treg耗竭的有效标靶。基于cd25抗体有效清除treg是解除免疫抑制，激活免疫反应的有效途径。开发一款优异性能的cd25抗体能够给临床抗肿瘤治疗提供更多选择。
技术实现思路
1、本发明要解决是技术问题是：提供一种cd25单域抗体、人源化抗体、及制备方法，给临床应用提供有力的支持。
2、本发明的技术方案如下：提供一种cd25单域抗体，具体的氨基酸序列为seq idno:1。
3、本发明还提供多种cd25单域抗体，具体的氨基酸序列为seq idno:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq idno:7、seq id no:8、seq id no:9、seqid no:10、seq id no:11、seq id no:12、seq id no:13、seq id no:14、seq id no:15、seqid no:16、seq id no:17中的任意一个。
4、本发明还提供一种人源化抗体，基于氨基酸序列为seq id no:1的cd25单域抗体，进行人源化改造后，具体的氨基酸序列为seq id no:18、seq id no:19中的任意一个。
5、本发明还提供一种人源化抗体，基于氨基酸序列为seq id no:1的cd25单域抗体，进行人源化改造后，具体的氨基酸序列为seq id no:20、seq id no:21、seq id no:22、seqid no:23中的任意一个。
6、本发明还提供一种cd25单域抗体的制备方法，包括以下步骤。
7、step 1：制备cd25抗原；
8、step 2：cd25抗原免疫羊驼及免疫效价的检测；
9、step 3：羊驼pbmc分离及vhh抗体片段的获得；
10、step 4：候选抗体亲和力检测；
11、step 5：候选抗体功能实验；
12、step 6：抗体人源化改造；
13、step 7：候选人源化抗体adcc检测；
14、step 8：候选人源化抗体与靶蛋白结合亲和力检测。
15、step 10：候选人源化抗体与il-2信号阻断实验。
16、还包括：facs抗原细胞结合实验，候选抗体adcc功能实验，不干扰配体il-2结合实验。
17、采用上述方案，本发明提供一种cd25单域抗体、人源化抗体、及制备方法。所获得的cd25单域抗体、人源化抗体具有良好的靶抗原结合性能，能够满足临床应用的需求，给临床应用提供有力的支持。所提供的抗cd25可以特异性结合cd25，特别是人cd25片段，但并不阻断白介素2(il-2)与cd25的结合，或il-2的信号传导。它能有效消耗tregs，特别是在肿瘤微环境内。本发明所获得的非il-2阻断性抗cd25人源化单域抗体，在具有与cd25特异性结合的功能外，同时不干扰il-2信号传导，不影响il-2对t细胞的活化功能，减少免疫毒性反应，能够满足临床应用的需求，给临床应用提供有力的支持。同时还包括此类序列的抗体及其抗原结合部分可用于药物组合物和治疗方法，特别是用于治疗癌症。
1.一种cd25单域抗体，其特征在于，具体的氨基酸序列为seq idno:1。
2.一种cd25单域抗体，其特征在于，具体的氨基酸序列为seq idno:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq idno:7、seq id no:8、seq id no:9、seq idno:10、seq id no:11、seq id no:12、seq id no:13、seq id no:14、seq id no:15、seq idno:16、seq id no:17中的任意一个。
3.一种人源化抗体，其特征在于，基于权利要求1所述的cd25单域抗体，进行人源化改造后，具体的氨基酸序列为seq id no:18、seq idno:19中的任意一个。
4.一种人源化抗体，其特征在于，基于权利要求1所述的cd25单域抗体，进行人源化改造后，具体的氨基酸序列为seq id no:20、seq idno:21、seq id no:22、seq id no:23中的任意一个。
5.一种人源化cd25单域抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的一种cd25单域抗体的制备方法，其特征在于，还包括：facs抗原细胞结合实验。
7.根据权利要求6所述的一种cd25单域抗体的制备方法，其特征在于，还包括：候选抗体adcc功能实验。
8.根据权利要求6所述的一种cd25单域抗体的制备方法，其特征在于，还包括：不干扰配体il-2结合实验。
