本公开涉及cart细胞，更具体地涉及工程化的免疫细胞及应用。
背景技术：
1、嵌合抗原受体t细胞免疫疗法，简称cart技术疗法，是通过体外改造t细胞，使t细胞具备识别肿瘤细胞的能力，体外扩大培养后回输到病人体内进行治疗的一种方法。目前，以cd19为靶点的cart(cd19-cart)在治疗b细胞血液肿瘤方面取得了巨大的成果，但cd19-cart治疗b细胞淋巴瘤方面的疗效远远不及其在治疗b细胞急性淋巴细胞白血病方面的疗效，可能是因为b细胞淋巴瘤是实体肿瘤，cart细胞难以到达并浸润到肿瘤内部。对于浸润到肿瘤内部的cart细胞，实体瘤细胞能够通过表达大量的pd-l1分子，逃避cart细胞的杀伤，同时，cart细胞与实体瘤细胞的不充分接触还显著影响了cart细胞的增殖和持久性，加快了cart细胞在体内的耗竭速度。
2、鸟苷酸环化酶c(guanylyl cyclase c，缩写：gucy2c)是一种主要表达于肠腺和绒毛细胞顶部的跨膜受体。gucy2c的内源性配体为尿鸟苷素鸟苷蛋白。当gucy2c被配体激活后，可启动一系列下游信号传导，调节体液和电解质的稳态，维持肠道屏障的完整性。在正常生理情况下，仅有肠道组织存在一定的表达。而在结肠直肠肿瘤中，约95％的肿瘤细胞均可检测到高表达的gucy2c，此外，部分胃食管肿瘤，胰腺肿瘤也存在gucy2c的高表达。因此，gucy2c目前已成为一个全新的肿瘤治疗靶点。
3、趋化因子(chemokines)，是一类由细胞分泌的小细胞因子或信号蛋白。由于它们具有诱导附近反应细胞定向趋化的能力，因而命名为趋化细胞因子。趋化性细胞因子根据其氨基端(n端)半胱氨酸的排列方式，可分为cxc、cc、c和cx3c四个亚族，其中cc趋化因子亚族的ccl19和ccl21是ccr7的配体，t细胞表达ccr7蛋白，所以ccl19和ccl21趋化因子能够趋化t细胞迁移。
技术实现思路
1、如何对在现有免疫细胞的基础上，整合多种功能分子共同对抗实体瘤微环境，显著有效地改善免疫细胞的治疗效果是目前亟需解决的问题。趋化因子有利于对抗和改善实体瘤微环境，能够为免疫细胞提供持久的杀伤环境。因此，
2、一方面，本公开公开一种核酸分子，其包括编码嵌合抗原受体的核苷酸序列和编码趋化因子的核苷酸序列；其中所述嵌合抗原受体包括特异性结合gucy2c的第一抗原结合域和特异性结合cd19的第二抗原结合域。
3、在一些实施方案中，所述趋化因子选自cxc趋化因子、cc趋化因子、cx3c趋化因子或xc趋化因子中的至少一种。在一些实施方案中，所述cxc趋化因子为选自cxcl1、cxcl2、cxcl3、cxcl4、cxcl5、cxcl6、cxcl7、cxcl8、cxcl9、cxcl10、cxcl11、cxcl12、cxcl13、cxcl14、cxcl15、cxcl16或cxcl17中的至少一种，所述cc趋化因子为选自ccl1、ccl2、ccl3、ccl4、ccl5、ccl6、ccl7、ccl8、ccl9、ccl10、ccl11、ccl12、ccl13、ccl14、ccl15、ccl16、ccl17、ccl18、ccl19、ccl20、ccl21、ccl22、ccl23、ccl24、ccl25、ccl26、ccl27或ccl28中的至少一种；在一些实施方案中，所述趋化因子为ccl19。
4、在一些实施方案中，前面任一项所述的核酸分子，所述嵌合抗原受体还包括跨膜结构域和胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体包括以下所示的多肽：[特异性结合cd19的第二抗原结合域]-[特异性结合gucy2c的第一抗原结合域]-[跨膜结构域]-[胞内信号结构域]；
5、在一些实施方案中，前面任一项所述的核酸分子，所述核酸分子包括如下式a所示的核苷酸序列结构：
6、a.[编码特异性结合cd19的第二抗原结合域的核苷酸序列]-[编码特异性结合gucy2c的第一抗原结合域的核苷酸序列]-[编码跨膜结构域的核苷酸序列]-[编码胞内信号结构域的核苷酸序列]-[编码趋化因子的核苷酸序列]；
7、在一些实施方案中，前面任一项所述跨膜结构域为选自以下蛋白质的跨膜结构域：t细胞受体的α、β或ζ链、cd28、cd3ε、cd45、cd4、cd5、cd8、cd9、cd16、cd22、cd33、cd37、cd64、cd80、cd86、cd134、cd137和cd154；在一些实施方案中，所述跨膜结构域为人cd8a的跨膜结构域；
8、在一些实施方案中，前面任一项所述胞内信号传导结构域为选自以下的蛋白质的至少一个功能性信号结构域：mhc i类分子、tnf受体蛋白、免疫球蛋白样蛋白质、细胞因子受体、整联蛋白、淋巴细胞活化信号分子、活化nk细胞受体、btla、toll配体受体、ox40、cd2、cd7、cd27、cd28、cd30、cd40、cds、icam-1、lfa-1、4-1bb、b7-h3、cds、icam-1、icos、gitr、baffr、light、hvem、kirds2、slamf7、nkp80、nkp44、nkp30、nkp46、cd19、cd4、cd8α、cd8β、il2rβ、il2rγ、il7rα、itga4、vla1、cd49a、itga4、ia4、cd49d、itga6、vla-6、cd49f、itgad、cd11d、itgae、cd103、itgal、cd11a、lfa-1、itgam、cd11b、itgax、cd11c、itgb1、cd29、itgb2、cd18、lfa-1、itgb7、nkg2d、nkg2c、tnfr2、rankl、cd226、slamf4、cd84、cd96、ceacam1、crtam、cd229、cd160、psgl1、cd100、cd69、slamf6、slam、blame、selplg、ltbr、lat、gads、slp-76、pag/cbp、cd19a和cd83配体；在一些实施方案中，所述胞内信号传导结构域包括共刺激分子4-1bb胞内信号传导结构域和/或人cd3分子信号传导结构域cd3zeta。
9、在一些实施方案中，前面任一项所述的核酸分子，所述的嵌合抗原受体包括信号肽。在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体包括以下所示的多肽结构：[信号肽]-[特异性结合cd19的第二抗原结合域]-[特异性结合gucy2c的第一抗原结合域]-[跨膜结构域]-[胞内信号结构域]。在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体包括：a)人cd8a信号肽，可选地，人cd8a信号肽包含seq id no：30的氨基酸序列，b)特异性结合gucy2c的第一抗原结合域，其包括重链可变区g-vh和轻链可变区g-vl，所述重链可变区g-vh和轻链可变区g-vl直接连接或通过连接子l1连接，c)特异性结合cd19的第二抗原结合域，其包括重链可变区c-vh和轻链可变区c-vl，所述重链可变区c-vh和轻链可变区c-vl直接连接或通过连接子l2连接，d)人cd8a铰链-跨膜区，可选地，人cd8a铰链-跨膜区包含seq id no：27的氨基酸序列，e)4-1bb免疫共刺激分子胞内区，可选地，包含seq id no：28的氨基酸序列，和f)人cd3分子胞内区cd3zeta，可选地，人cd3分子胞内区cd3zeta包含seq id no：29的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述趋化因子为ccl19，可选地，趋化因子ccl19包含seq id no：19的氨基酸序列。
10、在一些实施方案中，所述核酸分子包括如下所示的核苷酸序列结构：[编码信号肽的核苷酸序列]-[编码特异性结合cd19的第二抗原结合域的核苷酸序列]-[编码特异性结合gucy2c的第一抗原结合域的核苷酸序列]-[编码跨膜结构域的核苷酸序列]-[编码胞内信号结构域的核苷酸序列]-[编码趋化因子的核苷酸序列]；
11、在一些实施方案中，前面任一项所述核酸分子，从n端至c端包含：
12、a)编码人cd8a信号肽的核苷酸序列，可选地，人cd8a信号肽包含seq id no：30的氨基酸序列，
13、b)编码特异性结合gucy2c的第一抗原结合域的核苷酸序列，其包括重链可变区g-vh和轻链可变区g-vl，所述重链可变区g-vh和轻链可变区g-vl直接连接或通过连接子l1连接，
14、c)编码特异性结合cd19的第二抗原结合域的核苷酸序列，其包括重链可变区c-vh和轻链可变区c-vl，所述重链可变区c-vh和轻链可变区c-vl直接连接或通过连接子l2连接，
15、d)编码人cd8a铰链-跨膜区的核苷酸序列，可选地，人cd8a铰链-跨膜区包含seqid no：27的氨基酸序列，
16、e)编码4-1bb免疫共刺激分子胞内区的核苷酸序列，可选地，可选地，包含seq idno：28的氨基酸序列，
17、f)编码人cd3分子胞内区cd3zeta的核苷酸序列，可选地，人cd3分子胞内区cd3zeta包含seq id no：29的氨基酸序列，和
18、g)编码趋化因子ccl19的核苷酸序列，可选地，趋化因子ccl19包含seq id no：19的氨基酸序列；
19、在一些实施方案中，前面任一项所述核酸分子，其具有如下所示结构：
20、[编码人cd8a信号肽的核苷酸序列]-[编码c-vl的核苷酸序列]-[编码l2的核苷酸序列]-[编码c-vh的核苷酸序列]-[编码l3的核苷酸序列]-[编码g-vh的核苷酸序列]-[编码l1的核苷酸序列]-[编码g-vl的核苷酸序列]-[编码人cd8a铰链-跨膜区的核苷酸序列]-[编码4-1bb分子胞内区的核苷酸序列]-[编码人cd3分子胞内区cd3zeta的核苷酸序列]-[编码l4的核苷酸序列]-[编码趋化因子ccl19的核苷酸序列]，其中，l1、l2、l3和l4为肽连接子；在一些实施方案中，所述连接子l1、l2、l3独立地选自(gxs)y连接子，其中，x选自1-5的整数，y选自0-6的整数；所述l4为2a肽连接子；在一些实施方案中，所述l4连接子为选自p2a、t2a、f2a或e2a中的至少一种；在一些实施方案中，l1和l2连接子的氨基酸序列如seqid no：25所示、l3连接子的氨基酸序列如seq id no：26所示，l4的连接子的氨基酸序列如seq id no：24所示。
21、在一些实施方案中，前面任一项所述的核酸分子，其中所述特异性结合gucy2c的第一抗原结合部为抗gucy2c抗体；在一些实施方案中，所述抗gucy2c抗体的单链抗体(scfv)；在一些实施方案中，其中，
22、(a)所述抗gucy2c抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括seqid no：1中的hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链可变区包括seq id no：2中的lcdr1、lcdr2和lcdr3；可选地，所述hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3由imgt、kabat、chothia、contact或abm编号系统定义；
23、(b)所述抗gucy2c抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的hcdr1包含seq id no：5的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no：6的氨基酸序列，和hcdr3包含seq idno：7的氨基酸序列；所述轻链可变区的lcdr1包含seq id no：8的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no：9的氨基酸序列，和lcdr3包含seq id no：10的氨基酸序列；
24、(c)所述抗gucy2c抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中，重链可变区包含与seq id no：1具有至少85％(例如85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同一性的氨基酸序列，轻链可变区包含与seq id no：2具有至少85％(例如85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同一性的氨基酸序列；所述重链可变区和轻链可变区包括(a)或(b)所述的抗gucy2c抗体的hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3；在一些实施方案中，所述抗gucy2c抗体包含seq id no：1所示的重链可变区和seq id no：2所示的轻链可变区；或
25、(d)所述抗gucy2c抗体为单链抗体，其包括与seq id no：18具有至少85％(例如85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同一性的氨基酸序列；所述抗gucy2c抗体为单链抗体包含(a)、(b)或(c)所述的抗gucy2c抗体的重链可变区和轻链可变区；在一些实施方案中，所述抗gucy2c单链抗体包括seq id no：18的氨基酸序列。
26、在一些实施方案中，前面任一项所述的核酸分子，其中所述特异性结合cd19的第二抗原结合部为抗cd19抗体；在一些实施方案中，所述抗cd19抗体为单链抗体；在一些实施方案中，其中，
27、(a)所述抗cd19抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括seq idno：3中的hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链可变区包括seq id no：4中的lcdr1、lcdr2和lcdr3；在一些实施方案中，所述hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3由imgt、kabat、chothia、contact或abm编号系统定义；
28、(b)所述抗cd19抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的hcdr1包含seq id no：11的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no：12的氨基酸序列，和hcdr3包含seq idno：13的氨基酸序列；所述轻链可变区的lcdr1包含seq id no：14的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no：15的氨基酸序列，和lcdr3包含seq id no：16的氨基酸序列；
29、(c)所述抗cd19抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中，重链可变区包含与seqid no：3具有至少85％(例如85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同一性的氨基酸序列，轻链可变区包含与seq id no：4具有至少85％(例如85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同一性的氨基酸序列；所述重链可变区和轻链可变区包括(a)或(b)所述的抗cd19抗体的hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3；在一些实施方案中，所述抗cd19抗体包含seq id no：3所示的重链可变区和seq id no：4所示的轻链可变区；或
30、(d)所述抗cd19抗体为单链抗体，其包括与seq id no：17具有至少85％(例如85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同一性的氨基酸序列；所述抗cd19抗体为单链抗体包含(a)、(b)或(c)所述的抗cd19抗体的重链可变区和轻链可变区；在一些实施方案中，所述抗cd19单链抗体包括seq id no：17的氨基酸序列。
31、在一些实施方案中，前面任一项所述的核酸分子，所述趋化因子为ccl19；在一些实施方案中，所述ccl19包括seq id no：19的氨基酸序列；在一些实施方案中，所述核酸分子包括编码seq id no：20的融合蛋白的核苷酸序列。
32、在一些实施方案中，本公开公开一种载体，其包含前面任一项所述的核酸分子。
33、在一些实施方案中，本公开公开一种载体，其包括编码特异性结合gucy2c的第一抗原结合域的核酸、编码特异性结合cd19的第二抗原结合域的核酸和编码趋化因子的核酸；在一些实施方案中，其还包括编码跨膜结构域的核酸、编码胞内结构域的核酸和/或编码信号肽的核酸；
34、在一些实施方案中，前面任一项所述的载体，所述载体包括依次串联的核酸序列：[编码信号肽的核酸]-[编码特异性结合cd19的scfv的核酸]-[编码特异性结合gucy2c的scfv的核酸]-[编码跨膜结构域的核酸]-[编码胞内信号结构域的核酸]-[编码趋化因子的核酸]；
35、在一些实施方案中，前面任一项所述载体，其包括：
36、a)编码人cd8a信号肽的核酸；可选地，人cd8a信号肽包含seq id no：30的氨基酸序列，
37、b)编码特异性结合gucy2c的第一抗原结合域的核酸；可选地，所述特异性结合gucy2c的第一抗原结合域包括seq id no：18的氨基酸序列，
38、c)编码特异性结合cd19的第二抗原结合域的核酸；可选地，所述特异性结合cd19的第一抗原结合域包括seq id no：17的氨基酸序列，
39、d)编码人cd8a铰链-跨膜区的核酸；可选地，所述人cd8a铰链-跨膜区包含seq idno：27的氨基酸序列，
40、e)编码4-1bb免疫共刺激分子胞内区的核酸；可选地，所述4-1bb免疫共刺激分子胞内区包含seq id no：28的氨基酸序列，
41、f)编码人cd3分子胞内区cd3zeta的核酸；可选地，所述人cd3分子胞内区cd3zeta包含seq id no：29的氨基酸序列，和
42、g)编码趋化因子ccl19的核酸，可选地，所述趋化因子ccl19包含seq id no：19的氨基酸序列。
43、在一些实施方案中，所述载体包括seq id no：21的核苷酸序列。
44、在一些实施方案中，本公开公开一种工程化的免疫效应细胞，其包括前面任一项所述的的核酸分子、或包括前面任一项所述的载体。在一些实施方案中，前面任一项所述免疫效应细胞选自t细胞、nk细胞、nkt细胞、巨噬细胞和cik细胞；在一些实施方案中，所述免疫效应细胞为t细胞。
45、在一些实施方案中，本公开公开一种工程化的免疫效应细胞，所述免疫效应细胞表达嵌合抗原受体并分泌趋化因子，其中所述嵌合抗原受体和趋化因子如前面任一项中所述的嵌合抗原受体和趋化因子；在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体包括特异性结合gucy2c的第一抗原结合域、特异性结合cd19的第二抗原结合域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域；在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体包括信号肽；在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体从n端至c端包含：a)人cd8a信号肽，可选地，人cd8a信号肽包含seq id no：30的氨基酸序列，b)特异性结合gucy2c的第一抗原结合域，其包括重链可变区g-vh和轻链可变区g-vl，所述重链可变区g-vh和轻链可变区g-vl直接连接或通过连接子l1连接，c)特异性结合cd19的第二抗原结合域，其包括重链可变区c-vh和轻链可变区c-vl，所述重链可变区c-vh和轻链可变区c-vl直接连接或通过连接子l2连接，d)人cd8a铰链-跨膜区，可选地，人cd8a铰链-跨膜区包含seq id no：27的氨基酸序列，e)4-1bb免疫共刺激分子胞内区，可选地，包含seq id no：28的氨基酸序列，和f)人cd3分子胞内区cd3zeta，可选地，人cd3分子胞内区cd3zeta包含seq id no：29的氨基酸序列；在一些实施方案中，所述免疫效应细胞，其中所述嵌合抗原受体中，所述特异性结合gucy2c的第一抗原结合域的氨基酸序列如seq idno：18，特异性结合cd19的第二抗原结合域的氨基酸序列如seq id no：17，跨膜区包括人cd8a铰链-跨膜区的氨基酸序列如seq id no：27，4-1bb免疫共刺激分子胞内区的氨基酸序列如seq id no：28，人cd3分子cd3zeta胞内区的氨基酸序列如seq id no：29；所述趋化因子的氨基酸序列如seq id no：19；在一些实施方案中，所述免疫效应细胞选自t细胞、nk细胞、nkt细胞、巨噬细胞和cik细胞；在一些实施方案中，所述免疫效应细胞为t细胞。
46、在一些实施方案中，本公开公开一种工程化的免疫效应细胞，所述免疫效应细胞能表达嵌合抗原受体和分泌趋化因子；在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体和趋化因子如前面任一项中所述嵌合抗原受体和趋化因子。在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体包括特异性结合gucy2c的第一抗原结合域和特异性结合cd19的第二抗原结合域；在一些实施方案中，所述的嵌合抗原受体包括胞外区、跨膜区、胞内区。在一些实施方案中，所述胞外区包括特异性结合gucy2c的第一抗原结合域和特异性结合cd19的第二抗原结合域，跨膜区包括人cd8a铰链-跨膜区，胞内区包括4-1bb免疫共刺激分子胞内区及人cd3分子cd3zeta胞内区。在一些实施方案中，所述免疫效应细胞能表达融合蛋白，所述融合蛋白包括：[特异性结合cd19的第二抗原结合域]-[特异性结合gucy2c的第一抗原结合域]-[跨膜结构域]-[胞内信号结构域]和[趋化因子]；在一些实施方案中，所述免疫效应细胞表达的融合蛋白包括：[人cd8a信号肽]-[特异性结合cd19的第二抗原结合域]-[特异性结合gucy2c的第一抗原结合域]-[人cd8a铰链-跨膜区]-[4-1bb免疫共刺激分子胞内区]-[人cd3分子cd3zeta胞内区]和[趋化因子包括ccl19]。在一些实施方案中，所述特异性结合gucy2c的第一抗原结合域的氨基酸序列如seq id no：18，特异性结合cd19的第二抗原结合域的氨基酸序列如seqid no：17，人cd8a铰链-跨膜区的氨基酸序列如seq id no：27，4-1bb免疫共刺激分子胞内区的氨基酸序列如seq id no：28，人cd3分子cd3zeta胞内区的氨基酸序列如seq id no：29，趋化因子ccl19的氨基酸序列如seq id no：19。在一些实施方案中，前面任一项所述免疫效应细胞选自t细胞、nk细胞、nkt细胞、巨噬细胞和cik细胞；在一些实施方案中，所述免疫效应细胞为t细胞。
47、在一些实施方案中，本公开还公开前面任一项所述免疫效应细胞的构建方法，所述构建方法包括，将前面任一项所述核酸分子或载体导入免疫效应细胞中，收获免疫效应细胞。
48、在一些实施方案中，本公开公开融合蛋白，其由前面任一项所述的核酸分子编码获得、或由前面任一项所述载体表达获得、或由前面任一项所述免疫效应细胞表达获得；可选地，所述融合蛋白包括seq id no：20的氨基酸序列。
49、在一些实施方案中，本公开还公开一种药物组合物，其包括：前面任一项所述免疫效应细胞或融合蛋白；在一些实施方案中，其还包括药学上可接受的载体。
50、在一些实施方案中，本公开还公开前面任一项所述核酸分子、载体、免疫效应细胞、融合蛋白或药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
51、在一些实施方案中，本公开还公开用作药物的前面任一项所述核酸分子、载体、免疫效应细胞、融合蛋白或药物组合物。在一些实施方案中，所述药物用于治疗肿瘤。
52、在一些实施方案中，本公开还公开一种治疗肿瘤的方法，所述方法包括给与有需要的对象治疗有效量的前面任一项所述核酸分子、载体、免疫效应细胞、融合蛋白或药物组合物。
53、在一些实施方案中，前面任一所述肿瘤为鸟苷酸环化酶c表达异常的肿瘤，在一些实施方案中，其选自结直肠肿瘤、大肠癌、胃食管肿瘤及胰腺肿瘤中的至少一种。
1.一种核酸分子，其包括编码嵌合抗原受体的核苷酸序列和编码趋化因子的核苷酸序列；其中所述嵌合抗原受体包括特异性结合gucy2c的第一抗原结合域和特异性结合cd19的第二抗原结合域。
2.根据权利要求1所述的核酸分子，所述嵌合抗原受体包括跨膜结构域和胞内信号传导结构域；
3.根据权利要求1或2所述的核酸分子，所述的嵌合抗原受体包括信号肽；
4.根据权利要求1至3任一项所述的核酸分子，可选地，所述趋化因子选自cxc趋化因子、cc趋化因子、cx3c趋化因子或xc趋化因子中的至少一种；
5.根据权利要求1至4任一项所述的核酸分子，其中所述特异性结合gucy2c的第一抗原结合部为抗gucy2c抗体；可选地，所述抗gucy2c抗体为单链抗体；
6.根据权利要求1至5任一项所述的核酸分子，其中所述特异性结合cd19的第二抗原结合部为抗cd19抗体；可选地，所述抗cd19抗体为单链抗体；
7.根据权利要求1至6任一项所述的核酸分子，所述趋化因子为ccl19；可选地，所述ccl19包括seq id no：19的氨基酸序列；
8.一种载体，其包含权利要求1至7任一项所述的核酸分子；
9.一种工程化的免疫效应细胞，其包含权利要求1至7任一项所述的核酸分子、或包括权利要求8所述的载体；
10.一种工程化的免疫效应细胞，所述免疫效应细胞表达嵌合抗原受体并分泌趋化因子，其中所述嵌合抗原受体和趋化因子如权利要求1至7任一项中所述；
11.权利要求9或10所述免疫效应细胞的构建方法，所述构建方法包括将权利要求1至7任一项所述核酸分子或权利要求8所述载体导入免疫效应细胞中，收获免疫效应细胞。
12.融合蛋白，其由权利要求1至7任一项所述的核酸分子编码获得、由权利要求8所述载体表达获得、或由权利要求9或10所述免疫效应细胞表达获得。
13.一种药物组合物，其包括权利要求9或10所述的免疫效应细胞或权利要求12所述的融合蛋白。
14.根据权利要求1至7任一项所述核酸分子、权利要求8所述的载体、权利要求9或10所述的免疫效应细胞、权利要求12所述的融合蛋白或权利要求13所述的药物组合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。
