本发明涉及疾病诊断及生物制药，具体涉及一种抗原肽及其在制备类风湿关节炎诊断产品中的应用。
背景技术：
1、类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，ra）是临床最常见的致残性自身免疫性疾病之一，抗环瓜氨酸多肽（cyclic citrullinated peptide，ccp）抗体和类风湿因子（rheumatoid factor，rf）是临床上常用于诊断ra的血清生物标志物。抗ccp抗体对ra诊断的敏感性为47%-72%，特异性为94%-98%，尽管表现了良好的诊断效率，但是仍存在部分抗体阴性的ra患者，为其早期诊断带来较大的挑战（van venrooij wj, van beers jj, pruijngj. anti-ccp antibodies: the past, the present and the future. nat revrheumatol. 2011;7(7):391-398）。rf的敏感性为69%，特异性为85%，可见于健康人、其他自身免疫性疾病或感染患者中，对ra诊断存在较大的漏诊率和误诊率（nielsen sf, bojesense, schnohr p, nordestgaard bg. elevated rheumatoid factor and long term riskof rheumatoid arthritis: a prospective cohort study. bmj. 2012;345:e5244）。因此，目前临床常见检测方法对ra的诊断价值仍有待提高，亟需开发一种新的高灵敏度的ra诊断方法。
2、有鉴于此，特提出本发明。
技术实现思路
1、本发明的目的是针对现有诊断方法对ra诊断价值有限的问题，提供一种新的抗原肽，构建多肽检测探针，为ra诊断提供更多选择。
2、本发明技术方案详述如下：
3、第一方面，本发明提供了一种抗原肽，其氨基酸序列为cpg-cit-vyat-cit-ssav-cit-l-cit-ssvp（seq id no.1）。该抗原肽不但可以用来检测其对应自身抗体的含量，还能够高灵敏性靶向识别抗原特异性b细胞，对ra具有诊断价值。
4、第二方面，本发明提供了上述抗原肽在制备类风湿关节炎诊断产品中的应用，所述产品用于检测患者生物样品中抗原特异性b细胞的比例和/或用于检测患者生物样品中自身抗体的水平，所述自身抗体与所述抗原肽能特异性识别。
5、可选或优选的，上述应用中，所述生物样品为血液、血浆、血清或组织液。
6、可选或优选的，上述应用中，所述产品为流式检测探针和/或elisa检测试剂。
7、第三方面，本发明提供了一种类风湿关节炎诊断产品，含有以上所述抗原肽，所述抗原肽用于识别患者生物样品中抗原特异性b细胞。
8、可选或优选的，所述产品为流式检测探针，所述流式检测探针由所述抗原肽分别共价连接荧光染料和八臂聚乙二醇马来酰亚胺构成。将本发明上述抗原肽制备成多肽探针，进行流式细胞术检测，统计抗原特异性b细胞的比例，即可进行ra的诊断。实验结果表明，使用探针进行流式细胞术检测，敏感性能达到85%，特异性为95%。
9、可选或优选的，所述荧光染料为af647和/或cy5.5。
10、第四方面，本发明提供了另一种类风湿关节炎诊断产品，所述产品为elisa检测试剂，所述elisa检测试剂中含有由所述抗原肽作为捕获抗原制备的包被抗原。
11、第五方面，本发明提供了流式检测探针联合elisa检测试剂在制备类风湿关节炎诊断产品中的应用，所述流式检测探针由上述抗原肽分别共价连接荧光染料和八臂聚乙二醇马来酰亚胺构成，所述elisa检测试剂中含有由上述抗原肽作为捕获抗原制备的包被抗原。
12、本发明具有如下有益效果：
13、本发明提供的抗原肽，是突变的瓜氨酸化波形蛋白（mcv）中的一段氨基酸序列，具有高度特异性和亲和力，能够与b细胞表面受体（bcr）结合诱导mcv抗原特异性b细胞活化和抗体的产生，可直接靶向识别ra患者体内抗原特异性b细胞，有效提高了诊断准确率。
14、ra相关抗原可以通过bcr识别激活抗原特异性b细胞，并导致抗原特异性b细胞分泌自身抗体。本发明利用抗原多肽靶向识别抗原特异性b细胞的特点，研发了流式检测探针（即抗原多肽探针），可作为ra的新型诊断方法。与检测抗原对应的自身抗体相比，检测抗原特异性b细胞的比例作为ra的诊断指标，可避免下游抗体分泌因素的干扰，更具准确性和灵敏性，提高了ra诊断效力。
15、本发明提供的流式检测探针，诊断ra的敏感性为85%，特异性为95%；相较于使用相同抗原肽制备的elsia检测试剂诊断ra的敏感性70%，特异性90%来说，在保证特异性的情况下，流式检测探针的敏感性更优于elisa检测试剂，对于ra的诊断具有重要意义。
16、抗原特异性b细胞的探针流式检测与相同氨基酸序列的抗原肽作为捕获抗原的自身抗体elisa检测进行联合，能进一步提高ra诊断效率。
1.一种抗原肽，其特征在于，氨基酸序列为cpg-cit-vyat-cit-ssav-cit-l-cit-ssvp（seq id no.1）。
2.权利要求1所述抗原肽在制备类风湿关节炎诊断产品中的应用，所述产品用于检测患者生物样品中抗原特异性b细胞的比例和/或用于检测患者生物样品中自身抗体的水平，所述自身抗体与所述抗原肽能特异性识别。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述生物样品为血液、血浆、血清或组织液。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述产品为流式检测探针和/或elisa检测试剂。
5.一种类风湿关节炎诊断产品，其特征在于，含有权利要求1所述的抗原肽，所述抗原肽用于识别患者生物样品中抗原特异性b细胞。
6.根据权利要求5所述的产品，其特征在于，所述产品为流式检测探针，所述流式检测探针由权利要求1所述抗原肽分别共价连接荧光染料和八臂聚乙二醇马来酰亚胺构成。
7.根据权利要求6所述的产品，其特征在于，所述荧光染料为af647和/或cy5.5。
8.一种类风湿关节炎诊断产品，其特征在于，所述产品为elisa检测试剂，所述elisa检测试剂中含有由权利要求1所述抗原肽作为捕获抗原制备的包被抗原。
9.流式检测探针联合elisa检测试剂在制备类风湿关节炎诊断产品中的应用，其特征在于，所述流式检测探针由权利要求1所述抗原肽分别共价连接荧光染料和八臂聚乙二醇马来酰亚胺构成，所述elisa检测试剂中含有由权利要求1所述抗原肽作为捕获抗原制备的包被抗原。
