本发明涉及生物，尤其是涉及一种抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体及其应用和产品。
背景技术：
1、p24抗原是人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,hiv)的主要结构蛋白。gag基因编码55kda的p55蛋白，在病毒成熟时被蛋白酶h裂解生成衣壳蛋白p24，大小24-25kda。hiv感染机体后，血液中出现最早的可被检测到的病毒标志物为p24抗原，而抗体出现的窗口期相对较长。第四代和第五代hiv检测在筛选检测中增加了p24抗原检测，将检测阴性窗口缩短至11-14天。因此，p24抗原的检测在hiv感染的早期诊断、患者的预后判断、筛选和评价抗hiv药物，以及诊断母婴传播等方面具有重要作用。
2、对hiv感染的检测方法包括抗体检测、p24抗原检测、核酸检测以及cd4+t淋巴细胞水平检测等。一些早期测试(如hivchek)和一次性诊断系统(murex)可以在5-20分钟内完成，但结果需要经过专业人员解析。第一代检测igg抗体，但感染后抗体阴性窗口长达6-12周或更长时间，并且只检测抗体无法准确诊断母体抗体清除前的婴儿感染(产前和母乳传播)、尚未血清转化的婴儿感染以及无抗体反应或抗体反应不典型的散发病例。第二代hiv检测增加了重组抗原，将检测窗口期缩短至感染后4-6周。第三代hiv检测增加了igm检测，将检测阴性窗口缩短到感染后约3周。第四代和第五代hiv检测在筛选检测中增加了p24抗原检测，将检测阴性窗口缩短至11-14天。p24蛋白作为结构基因gag的编码产物，分子结构及其对机体的免疫作用机理已得到阐明，其氨基酸序列在不同hiv毒株之间高度保守，在病毒包装和成熟过程中至关重要。并且p24蛋白特异性很强，与其他逆转录病毒无明显交叉反应。
3、抗p24的单克隆抗体开发通常采用完整的p24重组蛋白作为免疫原。多数p24重组抗原使用原核表达系统，但这种抗原的表达方式存在蛋白折叠性差，没有翻译后修饰的缺点，可能导致在作为免疫原时无法更真实的模拟天然抗原引起动物免疫反应。有研究报道选择hiv-1型中国株cn54，在293f细胞中表达p24蛋白，利用pcr技术分别扩增p24基因和drvi信号肽基因，通过融合pcr在p24基因前添加来自gp140质粒的drvi信号肽序列，并分别将其克隆至pdrvi1.0载体，获得两种重组质粒pdrvi-p24和pdrvi-p24s。将重组质粒转染293f细胞，通过sds-page检测p24蛋白的表达与分泌，利用ni-nta金属螯合层析法和分子筛纯化p24s蛋白，并利用免疫印迹法检测该蛋白质的抗原特异性。通过间接elisa法进行hiv-1阳性小鼠和hiv-1阳性感染者血清的检测。经hiv-1阳性和阴性小鼠，以及经临床验证的30份hiv-1阳性感染者和50份hiv阴性血清标本鉴定，重组蛋白具有较高的检出特异性和敏感性。
4、为了解决现场大规模应用的问题，免疫学法由于其检测速度快，成本低，通量高，部分免疫学检测方法(胶体金纸层析法)还具有操作简单，不需要额外设备等优点，倍受重视。因此，开发出优良的p24抗体成为了决定免疫学法应用前景的关键。
5、有鉴于此，特提出本发明。
技术实现思路
1、本发明的第一目的在于提供抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体，以解决上述问题。
2、本发明的第二目的在于提供生物材料。
3、本发明的第三目的在于提供上述抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体的制备方法。
4、本发明的第四目的在于提供上述抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体在制备艾滋病毒检测产品中的应用。
5、本发明的第五目的在于提供一种艾滋病毒标记物。
6、本发明的第六目的在于提供一种用于艾滋病毒检测的免疫层析试纸条。
7、本发明的第七目的在于提供一种组合物。
8、为了实现以上目的，特采用以下技术方案：
9、第一方面，本发明提供了抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体，所述单克隆抗体选自单克隆抗体mab18、单克隆抗体mab20或单克隆抗体mab30；
10、所述单克隆抗体mab18包括氨基酸序列依次如seq id no.1～3所示的重链互补决定区cdr1-vh、cdr2-vh、cdr3-vh，以及氨基酸序列依次如seq id no.4、32、5所示的轻链互补决定区cdr1-vl、cdr2-vl、cdr3-vl；
11、所述单克隆抗体mab20包括氨基酸序列依次如seq id no.6～8所示的重链互补决定区cdr1-vh、cdr2-vh、cdr3-vh，以及氨基酸序列依次如seq id no.9、33、10所示的轻链互补决定区cdr1-vl、cdr2-vl、cdr3-vl；
12、所述单克隆抗体mab30包括氨基酸序列依次如seq id no.11～13所示的重链互补决定区cdr1-vh、cdr2-vh、cdr3-vh，以及氨基酸序列依次如seq id no.14、34、15所示的轻链互补决定区cdr1-vl、cdr2-vl、cdr3-vl。
13、作为进一步技术方案，所述单克隆抗体mab18包括氨基酸序列依次如seq idno.16、18所示的重链可变区和轻链可变区；
14、所述单克隆抗体mab20包括氨基酸序列依次如seq id no.20、22所示的重链可变区和轻链可变区；
15、所述单克隆抗体mab30包括氨基酸序列依次如seq id no.24、26所示的重链可变区和轻链可变区。
16、作为进一步技术方案，所述抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体包括igg抗体。
17、第二方面，本发明提供了生物材料，所述生物材料选自a～c中的任一项：
18、a.核苷酸，所述核苷酸包括编码所述抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体的核苷酸序列；
19、b.载体，所述载体携带所述a中的核苷酸；
20、c.细胞，所述细胞携带所述a中的核苷酸，或者含有所述b中的载体，或者表达所述抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体。
21、第三方面，本发明提供了上述抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体的制备方法，包括：培养上述细胞，获得所述抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体。
22、第四方面，本发明提供了上述抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体在制备艾滋病毒检测产品中的应用；
23、优选地，所述产品包括免疫层析检测试剂盒、elisa检测试剂盒、免疫磁微粒检测试剂盒、免疫荧光检测试剂盒或免疫印记检测试剂盒。
24、第五方面，本发明提供了一种艾滋病毒标记物，包括所述的抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体和标记物；
25、所述抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体和标记物偶联；
26、优选地，所述标记物包括酶、荧光分子标记、荧光微球、彩色微球、胶体金、生物素或链霉亲或素。
27、第六方面，本发明提供了一种用于艾滋病毒检测的免疫层析试纸条，所述免疫层析试纸条包括底板和依次叠压设置于底板上的上样垫、标记垫、检测垫和吸样垫；
28、所述标记垫含有所述的艾滋病毒标记物；
29、所述检测垫设置有检测线和质控线，检测线包被有所述抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体。
30、作为进一步技术方案，所述艾滋病毒标记物中的单克隆抗体为单克隆抗体mab30；
31、所述检测线上包被的单克隆体为单克隆抗体mab18。
32、第七方面，本发明提供了一种组合物，包括上述抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体。
33、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
34、本发明运用真核系统表达并纯化出的hiv-p24免疫原免疫新西兰大白兔，经过免疫后检测血清，效价高到可以筛选抗体时，提取兔外周血分离pbmc，再分选获得b细胞，通过特异性的高通量筛选得到具有高度特异性的b细胞株。再通过mrna提取、反转录以及pcr获得抗体的重轻链序列，重组至表达载体并进行转染表达，经多步筛选获得高纯度、高灵敏度、高特异性和识别不同抗原表位的抗hiv-p24的单克隆抗体anti-hiv-p24-mab18、mab20、mab30(简称单克隆抗体mab18、mab20、mab30)，此抗体不仅可以识别真核系统开发出来的抗原，也能识别原核系统开发出来的抗原，为开发检测早期感染艾滋病病毒的免疫试纸条提供了所需的原料。本发明开发的抗hiv-p24的单克隆抗体anti-hiv-p24-mab18、mab20、mab30抗体识别不同的抗原表位，可用于免疫印迹、免疫荧光等免疫学检测，所获三个抗体经验证能特异性识别艾滋病病毒的p24蛋白。
1.抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体选自单克隆抗体mab18、单克隆抗体mab20或单克隆抗体mab30；
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体mab18包括氨基酸序列依次如seq id no.16、18所示的重链可变区和轻链可变区；
3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体包括igg抗体。
4.生物材料，其特征在于，所述生物材料选自a～c中的任一项：
5.权利要求1～3任一项所述抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括：培养权利要求4中所述的细胞，获得所述抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体。
6.权利要求1～3任一项所述抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体在制备艾滋病毒检测产品中的应用；
7.一种艾滋病毒标记物，其特征在于，包括权利要求1～3任一项所述的抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体和标记物；
8.一种用于艾滋病毒检测的免疫层析试纸条，其特征在于，所述免疫层析试纸条包括底板和依次叠压设置于底板上的上样垫、标记垫、检测垫和吸样垫；
9.根据权利要求8所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述艾滋病毒标记物中的单克隆抗体为单克隆抗体mab30；
10.一种组合物，其特征在于，包括权利要求1～3任一项所述的抗艾滋病毒p24抗原的单克隆抗体。
