本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种天然阿魏酸产品中气味检测方法。
背景技术：
成品阿魏酸产品总会略带香气，在阿魏酸产品的质量标准中，气味检验项目是其中的一项重要质量指标。但目前行业内没有定性确定是何种物质的存在使阿魏酸产品略带香气，即不清楚造成大量产品气味不合格的主要物质是什么，也就没有对其进行定量测量的对应检验手段。
目前的气味检验项目上，还是主要依靠感官测试，感官测试法检验气味主要还是依靠人的嗅觉系统评价产品情况，判断气味的类别和强度，对检验人员的嗅觉要求较高，并且每个检验人员对嗅觉的敏感性不同，检验造成的误差非常大，对产品没有办法进行有效的质量监控，导致产生大量的不合格品，客户投诉日益增多，给日常的生产和质量监控带来很大的困扰。
到目前为止，阿魏酸产品气味的检验还没有较好的质量控制手段，全依靠感官测试检验，在生产过程当中也不能得到较好的质量控制，这种带香气的杂质对产品最终的性状检查造成较大的干扰，对后续的产品应用当中造成一定的影响，查阅了大量的文献资料，也未见阿魏酸中有对气味的来源做深入的研究，同行业中也未有人进行研究，在目前的报道中未见专门针对阿魏酸气味的检验开发其他检验方法，对气味的检验也没有更先进、更科学、更可靠的检验技术。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种天然阿魏酸产品中气味检测方法，克服现有技术中存在的上述技术问题。
为此，本发明提供的技术方案如下：
一种天然阿魏酸产品中气味检测方法，通过对阿魏酸产品中4-乙烯基-2-甲氧基苯酚的定量测定来检测阿魏酸产品的气味。
所述4-乙烯基-2-甲氧基苯酚含量不大于50ppm时，则阿魏酸产品无香气或其他异味。
通过反相高效液相色谱法对4-乙烯基-2-甲氧基苯酚含量进行检测。
一种天然阿魏酸产品中气味检测方法，包括以下步骤：
步骤1）配制流动相、4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品溶液和样品阿魏酸溶液；
步骤2）按照液相色谱条件参数开机，平衡色谱系统；
步骤3）精密移取标准品溶液和样品溶液各10ul，分别注入液相色谱仪中测定峰面积，按照液相外标法计算4-乙烯基-2-甲氧基苯酚含量x；
式中：x为4-乙烯基-2-甲氧基苯酚含量值，ppm；
m标为4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品的重量，mg；
m样为称取的阿魏酸样品的重量，mg；
a标为色谱图中4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品的峰面积；
a样为样品阿魏酸色谱图中4-乙烯基-2-甲氧基苯酚的峰面积；
p为4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品的标示含量值；
10为阿魏酸样品的稀释度；
50为4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品的稀释度；
10000为单位换算转换系数。
所述流动相为甲醇和体积百分比浓度为0.1%的磷酸水溶液的混合液，所述0.1%磷酸水溶液和甲醇的体积比为40:60。
所述4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品溶液的浓度为0.6mg/ml-0.8mg/ml。
所述样品阿魏酸溶液的浓度为90mg/ml-120mg/ml。
所述色谱柱ultimatexb-c18柱；柱温30℃；检测器为vwd检测器；检测波长280nm；进样量10ul；流速1.0ml/min。
所述4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品溶液和样品阿魏酸溶液的配制均采用甲醇溶解进行配制。
本发明的有益效果是：
本发明提供的这种天然阿魏酸产品中气味检测方法，首先确定了阿魏酸产品中气味的来源为4-乙烯基-2-甲氧基苯酚，之后通过反相高效液相色谱测定阿魏酸中4-乙烯基-2-甲氧基苯酚的含量，与现有的感官测试法测定气味方法相比，其技术优势在于：
1、对生产过程中做到有效监控，对产品质量做到准确检验。
2、检验方法操作简便，样品处理方便快捷，不需要过多复杂的前处理过程，样品只需甲醇溶解即可，有效地提高了工作效率。
3、有效地避免了感官测试法的不准确性、降低了检验误差。
4、改进了阿魏酸产品中气味检验的新方法，填补了检验的技术空白，可有效、准确评估产品质量，提高了产品的合格率。
下面将结合做进一步详细说明。
附图说明
图1是4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准曲线；
图2是4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准图谱。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭示的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
现介绍本发明的示例性实施方式，然而，本发明可以用许多不同的形式来实施，并且不局限于此处描述的实施例，提供这些实施例是为了详尽地且完全地公开本发明，并且向所属技术领域的技术人员充分传达本发明的范围。对于表示在示例性实施方式中的术语并不是对本发明的限定。
除非另有说明，此处使用的术语（包括科技术语）对所属技术领域的技术人员具有通常的理解含义。另外，可以理解的是，以通常使用的词典限定的术语，应当被理解为与其相关领域的语境具有一致的含义，而不应该被理解为理想化的或过于正式的意义。
实施例1：
本实施例提供了一种天然阿魏酸产品中气味检测方法，通过对阿魏酸产品中4-乙烯基-2-甲氧基苯酚的定量测定来检测阿魏酸产品的气味。
经过长时间的研究，研究人员发现在阿魏酸的生产过程中会产生4-乙烯基-2-甲氧基苯酚这种带天然香气的杂质，这是造成大量产品气味不合格的主要因素。
4-乙烯基-2-甲氧基苯酚是一种芳香物质，无色至淡黄色油状液体，有类似于丁香和发酵类香气，呈强烈香辛料香气，是造成荞麦天然香气的化合物之一，该产品不溶于水、溶于油类、混溶于乙醇类。结构式如下：
本发明确定了阿魏酸产品中气味的来源为4-乙烯基-2-甲氧基苯酚，从而对其进行定量检测确定阿魏酸产品的气味程度。
实施例2：
在实施例1的基础上，本实施例提供了一种天然阿魏酸产品中气味检测方法，所述4-乙烯基-2-甲氧基苯酚含量不大于50ppm时，则阿魏酸产品无香气或其他异味。
为了更好的控制阿魏酸产品的质量，把4-乙烯基-2-甲氧基苯酚含量控制在50ppm，此时阿魏酸产品无香气或其他异味，能有效地避免因嗅觉上的差异带来的误差。
实施例3：
在实施例1的基础上，本实施例提供了一种天然阿魏酸产品中气味检测方法，通过反相高效液相色谱法对4-乙烯基-2-甲氧基苯酚含量进行检测。
反相高效液相色谱法分离效能高，灵敏度高，应用范围广，分析速度快，对于含量低的4-乙烯基-2-甲氧基苯酚有很大优势。
实施例4：
在实施例1的基础上，本实施例提供了一种天然阿魏酸产品中气味检测方法，包括以下步骤：
步骤1）配制流动相、4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品溶液和样品阿魏酸溶液；
步骤2）按照液相色谱条件参数开机，平衡色谱系统；
步骤3）精密移取标准品溶液和样品溶液各10ul，分别注入液相色谱仪中测定峰面积，按照液相外标法计算4-乙烯基-2-甲氧基苯酚含量x；
式中：x为4-乙烯基-2-甲氧基苯酚含量值，ppm；
m标为4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品的重量，mg；
m样为称取的阿魏酸样品的重量，mg；
a标为色谱图中4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品的峰面积；
a样为样品阿魏酸色谱图中4-乙烯基-2-甲氧基苯酚的峰面积；
p为4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品的标示含量值；
10为阿魏酸样品的稀释度；
50为4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品的稀释度；
10000为单位换算转换系数。
方法验证：
1、线性关系考察
精密称取4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品38.22mg至50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成浓度为0.7644mg/ml的标准品溶液，自动进样器精密吸取上述标准品溶液2ul、4ul、6ul、8ul、10ul。
在以下色谱条件下进行测定：色谱柱ultimatexb-c18柱；柱温30℃；检测器为vwd检测器；检测波长280nm；进样量10ul；流速1.0ml/min；流动相为体积百分比浓度0.1%磷酸水溶液：甲醇=40:60（v/v），记录液相色谱图，以峰面积y为纵坐标，对照品进样量x为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为y=3380x，r=0.9998，结果表明4-乙烯基-2-甲氧基苯酚在1.5288-7.644ug范围内呈良好的线性关系。进样量及峰面积对应数据见表1所示，标准曲线见图1所示，标准品图谱见图2。
表1标准曲线实验数据
2、精密度实验
取4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品溶液（0.7644mg/ml），按照上述色谱条件测定4-乙烯基-2-甲氧基苯酚的峰面积，连续进样5次，相对标准偏差rsd=0.34%，见表2，结果表明该色谱条件下精密度良好。
表2精密度实验检测数据
3、重复性实验
取同一批号样品（阿魏酸201012）6份，精密称取，按照上述液相色谱条件测定方法配制供试品溶液，在上述色谱条件下测定阿魏酸样品中4-乙烯基-2-甲氧基苯酚含量，平均含量在15.05ppm，rsd=1.91%，结果见表3，表明样品的重复性良好。
表3重复性分析数据（n=6）
4、稳定性实验
取同一份标准样品溶液，按上述色谱条件于1h、2h、3h、5h、8h、12h、1d、2d、3d、10d、30d、60d内进样，测定4-乙烯基-2-甲氧基苯酚峰面积，平均峰面积13002，rsd=0.53%，见表4。实验结果表明4-乙烯基-2-甲氧基苯酚甲醇溶液在冰箱冷藏状况下，保存60天内溶液稳定。
表4稳定性实验数据
5、加样回收率
取已知含量的同一批样品6份，精密称定，再精密加入一定量的4-乙烯基-2-甲氧基苯酚对照品溶液，分别按照上述液相色谱条件项下供试品溶液的配制方法，配制供试品溶液，在上述色谱条件下测定4-乙烯基-2-甲氧基苯酚含量，平均回收率98.43%，rsd0.46%，见表5所示，实验结果表明，本方法回收率较好、准确率高。
表5加样回收率分析结果
6、阿魏酸产品中4-乙烯基-2-甲氧基苯酚含量测定
取3批阿魏酸样品，在上述色谱条件下对每批样品测定3次，测定4-乙烯基-2-甲氧基苯酚的含量，测定结果见表6。每批样品重复测量3次，3批样品的平均含量分别是30.73ppm、26.4ppm、34.73ppm，rsd分别是1.85%、1.89%、1.64%，产品含量值测定稳定。
表6样品含量分析结果
实施例5：
在实施例1的基础上，本实施例提供了一种天然阿魏酸产品中气味检测方法，所述流动相为0.1%磷酸水溶液和甲醇的混合液，所述0.1%磷酸水溶液和甲醇的体积比为40:60。
本实施例实验了多种流动相分别进行梯度洗脱和等度洗脱进行检测实验，通过出峰时间、色谱峰形和检测结果的准确性最终选择体积比为40:60的0.1%磷酸水溶液和甲醇混合液进行等度洗脱。实验过程如下：
步骤1）标准品溶液配制
精密称取4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品30mg至50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，进样前用0.45um过滤器过滤。
步骤2）样品溶液配制
精密称取阿魏酸样品100mg至50ml容量瓶中，加少量甲醇超声波溶解，再加甲醇稀释至刻度，进样前用0.45um过滤器过滤，并标记为样品1。
精密称取阿魏酸样品200mg至50ml容量瓶中，加少量甲醇超声波溶解，再加甲醇稀释至刻度，进样前用0.45um过滤器过滤，并标记为样品2。
精密称取阿魏酸样品1g至10ml容量瓶中，加少量甲醇超声波溶解，再加甲醇稀释至刻度，进样前用0.45um过滤器过滤，并标记为样品3。
步骤3）分别进行实验一到实验七
实验一：
色谱条件：色谱柱ultimatexb-c18柱；vwd检测器；检测波长：280nm；柱温：30℃；进样量：10ul；采用梯度洗脱，流动相a：0.1%磷酸水溶液；流动相b：乙腈，梯度洗脱程序如表7所示。
表7实验一梯度洗脱程序
测定方法：精密移取标准品溶液和供试品溶液（样品1）各10ul，分别注入液相色谱仪中，分别测定峰面积，按照液相外标法计算4-乙烯基-2-甲氧基苯酚杂质含量。由色谱图可知，4-乙烯基-2-甲氧基苯酚出峰时间20.46min；出峰时间很晚，主峰后面的杂质如果要安全洗脱出来需要运行很长的时间。
实验二：
色谱条件：色谱柱ultimatexb-c18柱；vwd检测器；检测波长：280nm；柱温：30℃；进样量：10ul；采用梯度洗脱，流动相a：0.1%磷酸水溶液；流动相b：乙腈，梯度洗脱程序见表8。
表8实验二梯度洗脱程序
测定方法：精密移取标准品溶液和供试品溶液（样品1）各10ul，分别注入液相色谱仪中，分别测定峰面积，按照液相外标法计算4-乙烯基-2-甲氧基苯酚杂质含量。由色谱图可知，44-乙烯基-2-甲氧基苯酚出峰时间19.635min。
实验三：
色谱条件：色谱柱ultimatexb-c18柱；vwd检测器；检测波长：280nm；柱温：30℃；进样量：10ul；采用梯度洗脱，流动相a：0.1%磷酸水溶液；流动相b：乙腈；梯度洗脱程序见表9。
表9实验三梯度洗脱程序
测定方法：精密移取标准品溶液和供试品溶液（样品1）各10ul，分别注入液相色谱仪中，分别测定峰面积，按照液相外标法计算4-乙烯基-2-甲氧基苯酚杂质含量。由色谱图可知，44-乙烯基-2-甲氧基苯酚出峰时间14.224min。
实验四：
色谱条件：色谱柱ultimatexb-c18柱；vwd检测器；检测波长：280nm；柱温：30℃；进样量：10ul；采用等度洗脱，0.1%磷酸水溶液：甲醇=50:50。
测定方法：精密移取标准品溶液和供试品溶液（样品1）各10ul，分别注入液相色谱仪中，分别测定峰面积，按照液相外标法计算4-乙烯基-2-甲氧基苯酚杂质含量。由色谱图可知，4-乙烯基-2-甲氧基苯酚出峰时间7.834min积分拖尾较长，检验结果偏高。
实验五：
色谱条件：色谱柱ultimatexb-c18柱；vwd检测器；检测波长：280nm；柱温：30℃；进样量：10ul；采用等度洗脱，0.1%磷酸水溶液：甲醇=40:60。
测定方法：精密移取标准品溶液和供试品溶液（样品1）各10ul，分别注入液相色谱仪中，分别测定峰面积，按照液相外标法计算4-乙烯基-2-甲氧基苯酚杂质含量。由色谱图可知，4-乙烯基-2-甲氧基苯酚出峰时间5.1min；色谱峰对称性较好，拖尾因子1.01。
实验六：
色谱条件：色谱柱ultimatexb-c18柱；vwd检测器；检测波长：280nm；柱温：30℃；进样量：10ul；采用等度洗脱，0.1%磷酸水溶液：甲醇=40:60。
测定方法：精密移取标准品溶液和供试品溶液（样品2）各10ul，分别注入液相色谱仪中，分别测定峰面积，按照液相外标法计算4-乙烯基-2-甲氧基苯酚杂质含量。由色谱图可知，4-乙烯基-2-甲氧基苯酚出峰时间5.1min。
实验七：
色谱条件：色谱柱ultimatexb-c18柱；vwd检测器；检测波长：280nm；柱温：30℃；进样量：10ul；采用等度洗脱，0.1%磷酸水溶液：甲醇=40:60。
测定方法：精密移取标准品溶液和供试品溶液（样品3）各10ul，分别注入液相色谱仪中，分别测定峰面积，按照液相外标法计算4-乙烯基-2-甲氧基苯酚杂质含量。由色谱图可知，4-乙烯基-2-甲氧基苯酚出峰时间5.1min。
实验一到实验七的实验数据及结果见表10。
表10实验一到实验七的实验数据
由表10分析结果可知，采用梯度洗脱出峰时间长，因此采用等度洗脱，流动相选用0.1%磷酸水溶液：甲醇=40:60（v/v）；样品浓度小时，峰面积小，结果偏差大，因此样品浓度选择90mg/ml-120mg/ml。由此可知，采用实验七的方法对4-乙烯基-2-甲氧基苯酚进行检验，检验方法最简便、易于操作，分析时间最短，整个分析时间可控制在20min，样品里面的所有杂质峰能够安全被洗脱出来，检验结果最准确，检验偏差最小。
实施例6：
分别取200612批、200619批、200702批、200717批天然阿魏酸样品，按照实施例5中实验七的液相色谱条件对天然阿魏酸中的4-乙烯基-2-甲氧基苯酚进行含量测定，计算结果，并用感官测试法来进行对比验证，结果见表11。
表11不同批次天然阿魏酸样品中4-乙烯基-2-甲氧基苯酚测量结果对比
由实验结果可知，当阿魏酸中的4-乙烯基-2-甲氧基苯酚含量小于98ppm左右时，不同的检验人员基本上能给出相同的检验结论，为了更好的控制产品质量，把4-乙烯基-2-甲氧基苯酚杂质的限量值控制在50ppm，能有效地避免因嗅觉上的差异的带来的误差，利用具体的杂质数值来控制气味检查项目，更方便、更科学、更准确。
实施例7：
选取留样产品中客户确认过的产品，按照实施例5中实验七的液相色谱条件对天然阿魏酸中的4-乙烯基-2-甲氧基苯酚进行含量测定，计算结果，并用感官测试法来进行验证，见表12。
表12客户确认产品检验比较
由以上实验可知，阿魏酸产品的气味检查，依靠感官测试法有很大的不准确性，和每个人的感官测试有很大的误差，无法得到统一的、准确的检验结果，会对最终产品造成很多的误判，造成一定的经济损失。
目前利用高效液相色谱测定4-乙烯基-2-甲氧基苯酚限量值的方法来替代感官测试法的新方法，色谱条件确定为：色谱柱ultimatexb-c18柱；柱温30℃；检测器为vwd检测器；检测波长280nm；进样量10ul；流速1.0ml/min；流动相为0.1%磷酸水溶液：甲醇=40:60（v/v）。当杂质含量能降低到98ppm左右时，不同的检验人员基本上能给出相同的检验结论，为了更好的控制产品质量，把杂质的限量值控制在50ppm，能有效地避免因嗅觉上的差异的带来的误差，利用具体的杂质数值来控制气味检查项目，更方便、更科学、更准确。
以上例举仅仅是对本发明的举例说明，并不构成对本发明的保护范围的限制，凡是与本发明相同或相似的设计均属于本发明的保护范围之内。
1.一种天然阿魏酸产品中气味检测方法，其特征在于：通过对阿魏酸产品中4-乙烯基-2-甲氧基苯酚的定量测定来检测阿魏酸产品的气味。
2.根据权利要求1所述的一种天然阿魏酸产品中气味检测方法，其特征在于：所述4-乙烯基-2-甲氧基苯酚含量不大于50ppm时，则阿魏酸产品无香气或其他异味。
3.根据权利要求1所述的一种天然阿魏酸产品中气味检测方法，其特征在于：通过反相高效液相色谱法对4-乙烯基-2-甲氧基苯酚含量进行检测。
4.根据权利要求3所述的一种天然阿魏酸产品中气味检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1）配制流动相、4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品溶液和样品阿魏酸溶液；
步骤2）按照液相色谱条件参数开机，平衡色谱系统；
步骤3）精密移取标准品溶液和样品溶液各10ul，分别注入液相色谱仪中测定峰面积，按照液相外标法计算4-乙烯基-2-甲氧基苯酚含量x；
式中：x为4-乙烯基-2-甲氧基苯酚含量值，ppm；
m标为4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品的重量，mg；
m样为称取的阿魏酸样品的重量，mg；
a标为色谱图中4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品的峰面积；
a样为样品阿魏酸色谱图中4-乙烯基-2-甲氧基苯酚的峰面积；
p为4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品的标示含量值；
10为阿魏酸样品的稀释度；
50为4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品的稀释度；
10000为单位换算转换系数。
5.根据权利要求4所述的一种天然阿魏酸产品中气味检测方法，其特征在于：所述流动相为甲醇和体积百分比浓度为0.1%的磷酸水溶液的混合液，所述0.1%磷酸水溶液和甲醇的体积比为40:60。
6.根据权利要求4所述的一种天然阿魏酸产品中气味检测方法，其特征在于：所述4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品溶液的浓度为0.6mg/ml-0.8mg/ml。
7.根据权利要求4所述的一种天然阿魏酸产品中气味检测方法，其特征在于：所述样品阿魏酸溶液的浓度为90mg/ml-120mg/ml。
8.根据权利要求4所述的一种天然阿魏酸产品中气味检测方法，其特征在于：所述液相色谱条件参数为：色谱柱ultimatexb-c18柱；柱温30℃；检测器为vwd检测器；检测波长280nm；进样量10ul；流速1.0ml/min。
9.根据权利要求4所述的一种天然阿魏酸产品中气味检测方法，其特征在于：所述4-乙烯基-2-甲氧基苯酚标准品溶液和样品阿魏酸溶液的配制均采用甲醇溶解进行配制。
技术总结