用于治疗遗传性血管性水肿发作的血浆激肽释放酶抑制剂及其用途的制作方法

用于治疗遗传性血管性水肿发作的血浆激肽释放酶抑制剂及其用途
1.相关申请
2.本申请根据35 u.s.c.
§
119(e)要求于2018年8月30日提交的美国临时申请号62/725,216和于2019年2月21日提交的美国临时申请号62/808,612的权益，其每一篇通过引用以其整体并入本文。


背景技术：

3.血浆激肽释放酶是用于不同炎症、心血管、感染(脓毒)和肿瘤学疾病的接触系统和潜在药物靶标的丝氨酸蛋白酶成分(sainz i.m.等，thromb haemost 98，77
‑
83，2007)。接触系统在暴露于外来或带负电的表面时通过因子xiia或在内皮细胞表面通过脯氨酸羧肽酶激活(sainz i.m.等，thromb haemost 98，77
‑
83，2007)。血浆激肽释放酶的激活经其对因子xii的反馈激活增强内源性凝血和经促炎症九肽缓激肽的产生增强炎症。作为循环中主要的激肽原酶，血浆激肽释放酶主要负责脉管系统中缓激肽的生成。c1
‑
抑制剂蛋白质(c1
‑
inh)(血浆激肽释放酶的主要天然抑制剂)中的遗传缺陷导致遗传性血管性水肿(hae)。患有hae的患者遭受通常通过未知的触发促成的疼痛性水肿的急性发作(zuraw b.l.等，n engl j med 359，1027
‑
1036，2008)。


技术实现要素：

4.本文提供了使用能够结合和抑制活性形式的人血浆激肽释放酶(pkal)的抗体，例如，具有与dx
‑
2930(又名shp643，lanadelumab)的相同的互补决定区(cdr)的抗体治疗遗传性血管性水肿(hae)发作、减少hae发作率或阻断hae发作的方案。
5.在一些方面中，本公开提供治疗遗传性血管性水肿(hae)发作或减少hae发作率的方法，其包括向需要其的人受试者施用(例如，皮下)本文所述的任何抗体(例如，dx
‑
2930)。在一些实施方式中，在第一治疗周期中以每两周约300mg的多剂量向受试者施用抗体。在一些实施方式中，受试者患有hae、怀疑患有hae或处于hae的风险中并且是雌性；小于18岁或40
‑
65岁的年龄之间；和/或已经经历至少一次先前喉hae发作。
6.在一些方面中，本公开提供治疗遗传性血管性水肿(hae)发作或减少hae发作率的方法，其包括向需要其的人受试者施用(例如，皮下)本文所述的任何抗体(例如，dx
‑
2930)。在一些实施方式中，以每四周约150mg、以每四周约300mg或以每两周约300mg向受试者施用抗体。在一些实施方式中，受试者是12和18岁的年龄之间的青少年。
7.本文所述的任何方法可进一步包括在第一治疗周期后向受试者施用抗体第二治疗周期。在一些实施方式中，第二治疗周期的第一剂量在第一治疗周期的最后剂量后的约两周。在一些实施方式中，第二治疗周期包括以约300mg的一个或多个剂量的抗体。在一些实施方式中，第二治疗周期包括以每两周约300mg的多剂量的抗体。
8.本文所述的任何方法可进一步包括(a)在第一治疗周期后向人受试者施用约300mg的单剂量的抗体；和(b)如果在(a)后受试者经历hae发作，进一步向受试者施用约
300mg的一个或多个剂量的抗体。在一些实施方式中，在步骤(b)中，受试者被施用以每两周约300mg的多剂量的抗体。在一些实施方式中，步骤(b)的第一剂量在hae发作后的一周内。在一些实施方式中，(a)的单剂量和(b)的第一剂量相隔至少10天。
9.在本文所述的任何方法中，人受试者可患有i型或ii型hae。例如，受试者可在第一治疗周期之前已将经历每年至少两次hae发作。在一些实施方式中，受试者在第一治疗周期的第一剂量之前四周内已具有至少一次hae发作或在第一治疗周期的第一剂量之前八周内已具有至少两次hae发作。
10.在一些实施方式中，涉及使用本文所述的任何抗pkal抗体(例如，dx
‑
2930)的，由本文所述的任何方法待治疗的受试者在第一剂量的抗pkal抗体之前已经接受一次或多次hae治疗。这种先前hae治疗可涉及c1
‑
抑制剂(例如，c1
‑
inh)、血浆激肽释放酶抑制剂(例如，艾卡拉肽)、缓激肽受体拮抗剂(例如，艾替班特)、雄激素(例如，达那唑)、抗纤溶剂(例如，氨甲环酸)或其组合。这种受试者可经历渐进周期(tapering period)以从先前hae治疗逐渐过渡至本文所述的抗pkal抗体治疗。在一些示例中，渐进周期是约2
‑
4周。先前hae治疗可在给受试者第一剂量的抗体前或在第一剂量的抗体后三周内终止。可替选地，受试者可从任何先前hae治疗直接过渡至如本文所述的抗pkal抗体治疗。
11.在一些实施方式中，受试者在第一剂量的抗pkal抗体之前已经不接受hae治疗。在一些实施方式中，受试者在第一剂量的抗体前至少两个周没有先前hae治疗。
12.在一些实施方式中，受试者在第一治疗周期之前、在第一治疗周期期间和/或在第二治疗周期期间没有hae的长期预防或涉及血管紧张素
‑
转换酶(ace)抑制剂、含雌激素的药物或雄激素的hae治疗。
13.在一些实施方式中，抗体是全长抗体或其抗原
‑
结合片段。在一些示例中，抗体包括由seq id no:3所示的重链可变结构域和/或由seq id no:4所示的轻链可变结构域。在一些示例中，抗体包括由seq id no:1所示的重链和由seq id no:2所示的轻链。
14.在本文所述的任何方法中，抗体可以以包括药学上可接受的载体的药物组合物配制。在一些实施方式中，药学上组合物包括磷酸钠、柠檬酸、组氨酸、氯化钠和聚山梨醇酯80。在一个示例中，磷酸钠是以约30mm的浓度，柠檬酸是以约19mm的浓度，组氨酸是以约50mm的浓度，氯化钠是以约90mm的浓度和聚山梨醇酯80是约0.01％。
15.本发明的一个或多个施方式的细节在以下的描述中陈述。本发明的其他特征或优点将从以下附图和几个实施方式的详细描述中，以及从所附的权利要求书中是显而易见的。
附图说明
16.图1a
‑
1c包括在导入(run
‑
in)期期间基于hae发作的数量对患者在治疗周期(0
‑
182天)期间的研究者
‑
确认的hae发作的泊松回归图。图1a：导入期中每月1至<2次hae发作。图1b：导入期中每月2至<3次hae发作。图1c：导入期中每月≥3次hae发作。
17.图2a
‑
2b包括显示先前接受用c1
‑
抑制剂(c1
‑
inh)长期预防的患者中的hae发作率的图。图2a：平均值(标准偏差)历史(3个月)、基线和在lanadelumab治疗(0
‑
182天)期间每月hae发作率。图2b：每个指示的lanadelumab治疗组的hae患者的hae发作率的减少。
18.图3a
‑
3c包括青少年受试者中的每月hae发作率的图。图3a：显示青少年患者的每
月发作率相对于安慰剂的估计的最小二乘法均值(least square means)(ls)的图，具有95％置信区间。图3b：转期(rollover)和非转期(non
‑
rollover)青少年受试者在用lanadelumab治疗的周期期间每月hae发作率相对于基线的图。图3c：显示每个指示的lanadelumab治疗组中青少年患者的每月发作比率(相对于安慰剂)的估计的最小二乘法均值的图，具有95％置信区间。
19.图4a
‑
4e显示来自每个指示的人口统计数据的安慰剂的hae发作率百分数减少的图，具有95％置信区间。图4a：年龄；图4b：性别；图4c：体重；图4d：hae类型；图4e：喉发作(laryngeal attack)的历史。对于每个指示的组，列对应于，从左至右，每4周150mg、每4周300mg和每2周300mg。图下方的“n”指每组中受试者的数量。
20.图5显示基于指示的人口统计数据的研究者
‑
确认的hae发作的数量的比率的森林图。
21.详细描述
22.定义
23.为了方便起见，在进一步描述本发明前，这里定义了说明书、实施例和所附权利要求中使用的某些术语。其他术语按其在说明书中出现的定义。
24.单数形式“一个/一次”(“a”)、“一个/一次”(“an”)和“该”(“the”)包括复数，除非上下文另有明确规定。
25.如本文使用的，术语“约”指特定的值 /
‑
5％。例如，以约300mg的抗体包括285mg
–
315mg之间的任何量的抗体。
26.术语“抗体”指能够通过位于免疫球蛋白分子可变区的至少一个抗原识别位点特异性结合至靶标，比如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等的免疫球蛋白分子。抗体可包括至少一条包含重链免疫球蛋白可变结构域(v
h
)的重(h)链、至少一条包含轻链免疫球蛋白可变结构域(v
l
)的轻链或二者。例如，抗体可包括重(h)链可变区(本文缩写为v
h
或hv)和轻(l)链可变区(本文缩写为v
l
或lv)。在另一示例中，抗体包括两个重(h)链可变区和两个轻(l)链可变区。
27.如本文使用的，术语“抗体”不仅囊括完整的(即全长)多克隆或单克隆抗体，而且还囊括其抗原
‑
结合片段(比如fab、fab'、f(ab')2、fv)、单链(scfv)、结构域抗体(dab)片段(de wildt等，euro.j.i mmunol.(1996)26(3):629
‑
639)、其任何突变体、包含抗体部分的融合蛋白、人源化抗体、嵌合抗体、双抗体、直链抗体、单链抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)以及包含所需特异性的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其他修饰构造，包括抗体的糖基化变体、抗体的氨基酸序列变体和共价修饰的抗体。抗体包括任何类别的抗体，比如igd、ige、igg、iga或igm(或其亚类别)，并且抗体不必是任何特定的类别。根据其重链恒定结构域的抗体氨基酸序列，免疫球蛋白可被分配为不同类别。免疫球蛋白有五个主要类别：iga、igd、ige、igg和igm，其中这些的几个类别可进一步划分为亚类别(同种型)，例如igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2。与不同类别的免疫球蛋白相对应的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别的免疫球蛋白的亚单位结构和三维构造是众所周知的。抗体可以来自任何来源，但以灵长类(人和非人灵长类)和灵长类化的是优选的。
28.v
h
和/或v
l
区可包括天然存在的可变结构域的全部或部分氨基酸序列。例如，该序列可省略一个、两个或多个n
‑
末端或c
‑
末端氨基酸、内部氨基酸，可包括一个或多个插入或
另外的末端氨基酸或可包括其他改变。在一个实施方式中，包括免疫球蛋白可变结构域序列的多肽可与另一免疫球蛋白可变结构域序列缔合以形成抗原结合位点，例如，优先与血浆激肽释放酶相互作用的结构。
29.v
h
和v
l
区可进一步细分为超可变区，被称为“互补决定区”(“cdrs”)，其间插有更保守的区域，被称为“框架区”(“fr”)。框架区和cdr的范围已被定义(参见，kabat，e.a.等(1991)sequences of proteins of i mmunological interest,fifth edition,u.s.department of health and human services,nih publication no.91
‑
3242和chothia,c.等(1987)j.mol.biol.196:901
‑
917)。本文使用kabat定义。每个vh和vl通常由三个cdr和四个fr组成，从氨基
‑
终端至羧基
‑
终端以下列顺序排列：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。
30.除了v
h
或v
l
区外，抗体的重链或轻链可进一步包括重链或轻链恒定区的全部或部分。在一个实施方式中，抗体是两条免疫球蛋白重链和两条免疫球蛋白轻链的四聚体，其中免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链通过例如二硫键相互连接。在igg中，重链恒定区包括三个免疫球蛋白结构域，ch1、ch2和ch3。轻链恒定区包括包括cl结构域。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区通常介导抗体与宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一成分(clq))的结合。免疫球蛋白的轻链可以是κ或λ型。在一个实施方式中，抗体是糖基化的。抗体可以对抗体依赖性细胞毒性和/或补体
‑
介导的细胞毒性是功能性的。
31.抗体的一个或多个区域可以是人的或有效地是人的。例如，一个或多个可变区可以是人的或有效地是人的。例如，一个或多个cdr可以是人的，例如hc cdr1、hc cdr2、hc cdr3、lc cdr1、lc cdr2和/或lc cdr3。每条轻链(lc)和/或重链(hc)cdr可以是人的。hc cdr3可以是人的。一个或多个框架区可以是人的，例如hc和/或lc的fr1、fr2、fr3和/或fr4。例如，fc区可以是人的。在一个实施方式中，所有框架区都是人的，例如，来源于人的体细胞，例如，产生免疫球蛋白的造血细胞或非造血细胞。在一个实施方式中，人序列是种系序列，例如，由种系核酸编码。在一个实施方式中，所选fab的框架(fr)残基可转换成最相似的灵长类种系基因，尤其是人种系基因中相应残基的氨基酸类型。一个或多个恒定区域可以是人的或有效地是人的。例如，免疫球蛋白可变结构域、恒定区、恒定结构域(ch1、ch2、ch3和/或cl1)或整个抗体的至少70、75、80、85、90、92、95、98或100％可以是人的或有效地是人的。
32.抗体可由免疫球蛋白基因或其片段编码。示例性人免疫球蛋白基因包括κ、λ、α(iga1和iga2)、γ(igg1、igg2、igg3、igg4)、δ、ε和μ恒定区基因，以及许多免疫球蛋白可变区基因。全长免疫球蛋白“轻链”(约25kda或约214个氨基酸)由nh2
‑
末端处的可变区基因(约110个氨基酸)和cooh
‑
末端处的κ或λ恒定区基因编码。全长免疫球蛋白“重链”(约50kda或约446个氨基酸)相似地由可变区基因(约116个氨基酸)和其他上述的恒定区基因，例如γ(编码约330个氨基酸)之一编码。人hc的长度变化很大，因为hc cdr3从约3个氨基酸残基至超过35个氨基酸残基变化。
33.全长抗体的术语“抗原
‑
结合片段”指全长抗体的一个或多个保留了特异性结合至感兴趣的靶标的能力的片段。全长抗体的术语“抗原
‑
结合片段”中所涵盖的并且保留功能性的结合片段的示例包括(i)fab片段，由vl、vh、cl和ch1结构域组成的单价片段；(ii)f
(ab')2片段，包括在铰链区通过二硫桥连接的两个fab片段的二价片段；(iii)由v
h
和ch1结构域组成的fd片段；(iv)由抗体单臂的v
l
和v
h
结构域组成的fv片段，(v)dab片段(ward等(1989)nature 341:544
‑
546)，其由v
h
结构域组成；和(vi)分离的互补决定区(cdr)。此外，尽管fv片段的两个结构域，v
l
和v
h
是由单独的基因编码的，但他们可以使用重组方法，通过合成的连接体连接起来，所述连接体使他们能够被制成单蛋白链，其中v
l
和v
h
区配对以形成单价分子，被称为单链fv(scfv)。参见例如，美国专利号5,260,203、4,946,778和4,881,175；bird等(1988)science 242:423
‑
426和huston等(1988)proc.natl.acad.sci.usa 85:5879。抗体片段可使用包括本领域技术人员已知的常规技术的任何适当的技术获得。
34.术语“单特异性抗体”指对特定的靶标，例如表位显示单一结合特异性和亲和力的抗体。该术语包括“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”，其如本文使用的指单分子组合物的抗体或其片段的制备，而不管该抗体是如何产生的。抗体通过将框架区中的一个或多个非种系氨基酸恢复为抗体的相应的种系氨基酸被“种系化”，只要基本上保留了结合特性。
35.抑制常数(k
i
)提供了抑制剂效力的量度；它是将酶活性降低一半所需的抑制剂浓度，并且不依赖于酶或底物浓度。表观k
i
(k
i,app
)是在不同底物浓度下，通过测量不同浓度的抑制剂(例如抑制结合蛋白)对反应程度(例如酶活性)的抑制效果而获得的；将伪一阶速率常数(pseudo
‑
first order rate constant)的变化作为抑制剂浓度的函数拟合至morrison方程(方程式1)中，得到表观k
i
值的估计值。k
i
是从k
i,app
与底物浓度的图的线性回归分析中获取的y
‑
截距获得的。
[0036][0037]
方程式1
[0038]
其中，v＝测量的速度；v0＝在没有抑制剂的情况下的速度；k
i,app
＝表观抑制常数；i＝总抑制剂浓度；和e＝总酶浓度。
[0039]
如本文使用的，“结合亲和力”指表观缔合常数或k
a
。k
a
是解离常数(k
d
)的倒数。例如，结合抗体可以对特定靶标分子，例如血浆激肽释放酶具有至少105、106、107、108、109、1010和1011m
‑
1的结合亲和力。相对于第二靶标，结合抗体对第一靶标的更高亲和力结合可通过与对于结合第二靶标的k
a
(或数值k
d
)相比对于结合第一靶标的更高的k
a
(或较小的数值k
d
)来指示。在这种情况下，结合抗体相对于第二靶标(例如，第二构象的相同蛋白质或其模拟物；或第二蛋白质)对第一靶标(例如，第一构象或的蛋白质其模拟物)具有特异性。结合亲和力(例如，特异性或其他比较)的差异可以是至少1.5、2、3、4、5、10、15、20、30、40、50、70、80、90、100、500、1000、10,000或105倍。
[0040]
结合亲和力可通过包括平衡透析、平衡结合、凝胶过滤、elisa、表面等离子共振或光谱法(例如，使用荧光测定法)的各种方法确定。评估结合亲和力的示例性条件是在hbs
‑
p缓冲液(10mm hepes ph 7.4，150mm nacl，0.005％(v/v)表面活性剂p20)中。这些技术可用于测量结合的和游离的结合蛋白的浓度作为结合蛋白(或靶标)浓度的函数。通过下述方程式，结合的结合蛋白的浓度([结合的])与游离的结合蛋白的浓度([游离的])和结合蛋白在靶标上的结合位点的浓度有关，其中(n)是每个靶标分子的结合位点的数量：
[0041]
[结合的]＝n
·
[游离的]/((1/ka) [游离的])。
[0042]
这并不总是对k
a
进行精确的测定必须的，尽管，因为有时足以获得亲和力的定量测量，例如，使用如elisa或facs分析的方法确定，与k
a
成正比，因此可用于比较，比如确定较高亲和力是否例如2倍高，以获得亲和力的定性测量，或获得亲和力的推断，例如，通过在功能测定中的活性，例如，体外或体内测定。
[0043]
术语“结合抗体”(或本文可换地使用的“结合蛋白”)指可与靶标分子相互作用的抗体。术语“靶标分子”与“配体”互换地使用。“血浆激肽释放酶结合抗体”指可与血浆激肽释放酶相互作用(例如结合)的抗体，并且特别地，包括优选或特异性与血浆激肽释放酶相互作用和/或抑制血浆激肽释放酶的抗体。如果与没有抗体的情况下和在相同条件下血浆激肽释放酶的活性相比，抗体导致血浆激肽释放酶的活性下降，则该抗体抑制血浆激肽释放酶。
[0044]“保守氨基酸置换”是指氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基取代的置换。在本领域中已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β
‑
支链侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。
[0045]
结合蛋白的一个或多个框架和/或cdr氨基酸残基有可能包括一个或多个相对于本文所述的结合蛋白的突变(例如，置换(例如，非必需氨基酸的保守的置换或替换)、插入或缺失)。血浆激肽释放酶结合蛋白可以相对于本文所述的结合蛋白具有突变(例如，置换(例如，非必需氨基酸的保守置换或替换)、插入或缺失)(例如，至少一、二、三或四个突变，和/或少于15、12、10、9、8、7、6、5、4、3或2个突变)，例如，对蛋白功能没有实质性影响的突变。突变可存在于框架区、cdr和/或恒定区。在一些实施方式中，突变存在于框架区。在一些实施方式中，突变存在于cdr中。在一些实施方式中，突变存在于恒定区。特定的置换是否会被容忍，即将不会不利影响生物特性，比如结合活性，可以被预测，例如，通过评估突变是否是保守的，或通过bowie，等(1990)science 247:1306
‑
1310的方法。
[0046]“有效地是人的”免疫球蛋白可变区是包括足够数量的人框架氨基酸位置，使得免疫球蛋白可变区不引起正常人的免疫原性应答的免疫球蛋白可变区。“有效地是人的”抗体是包括足够数量的人氨基酸位置，使得抗体不会引起正常人的免疫原性应答的抗体。
[0047]“表位”指靶标化合物上由结合蛋白(例如，抗体比如fab或全长抗体)结合的位点。在靶标化合物上是蛋白质的情况下，位点可以完全由氨基酸成分组成，完全由蛋白质的氨基酸的化学修饰(例如，糖基部分)组成，或由其组合组成。重叠表位包括至少一个共同氨基酸残基、糖基基团、磷酸根基团、硫酸根基团或其他分子特征。
[0048]“人源化”免疫球蛋白可变区是被修饰为包括足够数量的人框架氨基酸位置，使得免疫球蛋白可变区不引起正常人的免疫原性应答的免疫球蛋白可变区。“人源化”免疫球蛋白的描述包括，例如u.s.6,407,213和u.s.5,693,762。
[0049]“分离”抗体指从可获得分离抗体的天然样品的至少一种成分的至少90％中去除的抗体。如果感兴趣的物种或物种种群按重量
‑
重量计的纯度是至少5、10、25、50、75、80、90、92、95、98或99％，则抗体可以具有“至少”一定程度的纯度。
[0050]
本文所述的方法涉及向需要其的人受试者施用多剂量的抗体。术语“患者”、“受试者”或“宿主”可互换地使用。受试者可以是已将经历了先前hae治疗，比如涉及本文所述抗体的治疗的受试者。在一些实施方式中，受试者是儿科受试者(例如，婴儿、儿童或青少年受试者)。在一些实施方式中，人受试者是小于18岁的青少年。在一些实施方式中，人受试者是在12和18岁的年龄之间的青少年。在一些实施方式中，受试者是在40和小于65岁的年龄之间。
[0051]
在一些实施方式中，人受试者由性别限定。例如，在一些实施方式中，受试者是雌性。
[0052]
在一些实施方式中，人受试者按重量计限定。在一些实施方式中，人受试者体重小于50kg。在一些实施方式中，人受试者体重在50kg和75kg之间。在一些实施方式中，人受试者体重在75kg和100kg之间。在一些实施方式中，人受试者体重为100kg或更多。
[0053]
在一些实施方式中，人受试者由喉发作或没有喉发作的先前历史限定。在一些实施方式中，受试者在施用本文所述的抗体之前，经历至少一次(例如，1、2、3、4、5或更多次)喉发作(即喉hae发作)。在一些实施方式中，受试者在施用本文所述的抗体之前，没有经历喉发作。
[0054]
术语“前激肽释放酶”和“前血浆激肽释放酶”在本文互换地使用并且指活性血浆激肽释放酶的酶原形式，其也称为前激肽释放酶。
[0055]
如本文使用的，术语“基本上同一性的”(或“基本上同源的”)在本文用于指第一氨基酸或核酸序列含有足够数量的与第二氨基酸或核酸序列同一或相等(例如，具有相似的侧链，例如，保守的氨基酸置换)的氨基酸残基或核苷酸，使得第一和第二氨基酸或核酸序列具有相似的活性，例如结合活性、结合倾向(binding preference)或生物活性(或编码具有所述相似的活性的蛋白质)。在抗体的情况下，第二抗体具有相同特异性，并且相对于相同抗原具有至少50％、至少25％或至少10％的亲和力。
[0056]
统计显著性可通过任何领域已知的方法来确定。示例性统计检验包括：学生t
‑
检验、mann whitney u非参数检验和wilcoxon非参数统计检验。一些统计学上显著的关系具有小于0.05或0.02的p值。特定的结合蛋白可显示，例如，统计学上是显著的在特异性或结合方面的差异(例如，p值<0.05或0.02)。术语“诱导”、“抑制”、“增强”、“升高”、“增加”、“减少”等(例如，其表示两种状态之间的可区分的定性或定量差异)可指两种状态之间的差异，例如，统计学上显著的差异。
[0057]“治疗有效的剂量”优选地相对于未治疗的受试者通过统计学上显著的程度或至少约20％、更优选地至少约40％，甚至更优选地至少约60％和仍更优选地至少约80％调节可测量参数，例如，血浆激肽释放酶活性。化合物调节可测量参数，例如，疾病相关的参数的能力可以在预测人紊乱和病症中的功效的动物模型系统中评估。可替选地，组合物的该性质可通过检查化合物在体外调节参数的能力来评估。
[0058]
如本文使用的术语“治疗”指向患有hae、hae的症状、怀疑患有hae或患有hae的易患病体质或风险的受试者应用或施用包括一种或多种活性剂的组合物，目的是治疗、治愈、缓和、缓解、改变、补救、减轻、改善或影响疾病、疾病症状或疾病的易患病体质。“预防性治疗”(“prophylactic treatment”)，也称为“预防治疗”(“preventive treatment”)，指旨在保护人免于或减少他或她已经被暴露或可被暴露的疾病的风险的治疗。在一些实施方式
中，本文所述的治疗方法旨在预防hae的发生和/或复发。
[0059]
术语“预防”受试者的疾病指使受试者进行药物治疗，例如，施用药物，使得预防疾病的至少一种症状，即，在不希望的条件(例如，宿主动物的疾病或其他不希望的状态)的临床表现之前施用，以便保护宿主不发生不希望的条件。“预防”疾病也可称为“预防”或“预防性治疗”。
[0060]“预防性有效量”指在实现期望的预防结果所需的剂量和时间周期下有效的量。典型地，由于预防剂量在疾病早期阶段之前或疾病早期阶段用于受试者，预防有效量将小于治疗有效量。
[0061]
结合至血浆激肽释放酶的抗体(pkal)
[0062]
用于本文所述的方法的血浆激肽释放酶结合抗体(抗pkal抗体)可以是全长(例如，igg(包括igg1、igg2、igg3、igg4)、igm、iga(包括iga1、iga2)、igd和ige)或可仅包括抗原
‑
结合片段(例如，fab、f(ab
′
)2或scfv片段。结合抗体可包括两个重链免疫球蛋白和两个轻链免疫球蛋白，或可以是单链抗体。血浆激肽释放酶结合抗体可以是重组蛋白比如人源化的、cdr接枝的、嵌合的、去免疫化的或体外产生的抗体，并且可任选地包括源自人种系免疫球蛋白序列的恒定区。在一个实施方式中，血浆激肽释放酶结合抗体是单克隆抗体。
[0063]
在一个方面中，本公开特征在于结合至血浆激肽释放酶(例如，人血浆激肽释放酶和/或鼠激肽释放酶)的抗体(例如，分离抗体)并且包括至少一个免疫球蛋白可变区。例如，抗体包括重链(hc)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(lc)免疫球蛋白可变结构域序列。在一个实施方式中，抗体结合至并且抑制血浆激肽释放酶，例如，人血浆激肽释放酶和/或鼠激肽释放酶。
[0064]
在一些实施方式中，本文所述的抗体具有与dx
‑
2930相同的cdr序列，例如，阐释为seq id no:5
‑
7的重链cdr序列和阐释为seq id no:8
‑
10的轻链cdr序列。在一些实施方式中，抗体包括与dx
‑
2930相同的cdr序列和与本文所述的lc可变结构域(例如，总体或框架区中)至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％同一性的lc免疫球蛋白可变结构域序列。在一些实施方式中，抗体包括与dx
‑
2930相同的cdr序列和与本文所述的hc可变结构域(例如，总体或框架区中)至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％同一性的hc免疫球蛋白可变结构域序列。在一些实施方式中，抗体包括与dx
‑
2930相同的cdr序列和与本文所述的lc序列(例如，总体或框架区中)至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％同一性的lc序列。在一些实施方式中，抗体包括与dx
‑
2930相同的cdr序列和与本文所述的hc序列(例如，总体或框架区中)至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％同一性的hc序列。
[0065]
血浆激肽释放酶结合蛋白质可以是分离抗体(例如，至少70、80、90、95或99％没有其他蛋白质)。在一些实施方式中，血浆激肽释放酶结合抗体或其组合物是从与血浆激肽释放酶结合抗体相比是无活性的或部分活性(例如，以5000nm或更高的k
i，app
结合血浆激肽释放酶)的抗体切割片段(例如，dx
‑
2930)分离的。例如，血浆激肽释放酶结合抗体是至少70％没有这种抗体切割片段；在其他实施方式中，结合抗体是至少80％、至少90％、至少95％、至少99％或甚至100％没有是无活性的或部分活性的抗体切割片段。
[0066]
血浆激肽释放酶结合抗体可另外抑制血浆激肽释放酶，例如，人血浆激肽释放酶。
[0067]
在一些实施方式中，血浆激肽释放酶结合抗体不结合前激肽释放酶(例如，人前激
肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但是结合血浆激肽释放酶(例如，人血浆激肽释放酶和/或鼠激肽释放酶)的活性形式。
[0068]
在某些实施方式中，抗体在血浆激肽释放酶或其片段的催化结构域的活性位点处或附近结合，或结合与血浆激肽释放酶的活性位点重叠的表位。
[0069]
抗体可以以至少105、106、107、108、109、10
10
和10
11
m
‑1的结合亲和力结合至血浆激肽释放酶，例如，人血浆激肽释放酶。在一个实施方式中，抗体以比1
×
10
‑3、5
×
10
‑4s
‑1或1
×
10
‑4s
‑1更慢的k
off
结合至人血浆激肽释放酶。在一个实施方式中，抗体以比1
×
102、1
×
103或5
×
103m
‑1s
‑1更快的k
on
结合至人血浆激肽释放酶。在一个实施方式中，抗体结合至血浆激肽释放酶，但是不结合至组织激肽释放酶和/或血浆前激肽释放酶(例如，抗体与其结合至血浆激肽释放酶相比更不有效地结合至组织激肽释放酶和/或血浆前激肽释放酶(例如，5
‑
、10
‑
、50
‑
、100
‑
或1000
‑
倍少或完全没有，例如，与阴性对照相比)。
[0070]
在一个实施方式中，抗体抑制人血浆激肽释放酶活性，例如，以小于10
‑5、10
‑6、10
‑7、10
‑8、10
‑9和10
‑
10
m的ki。抗体可具有，例如，小于100nm、10nm、1、0.5或0.2nm的ic
50
。例如，抗体可调节血浆激肽释放酶活性，以及因子xiia(例如，来自因子xii)和/或缓激肽(例如，来自高分子量激肽原(hmwk))的产生。抗体可抑制血浆激肽释放酶活性，和/或因子xiia(例如，来自因子xii)和/或缓激肽(例如，来自高分子量激肽原(hmwk))的产生。人血浆激肽释放酶的抗体的亲和力可以是特征在于小于100nm、小于10nm、小于5nm、小于1nm、小于0.5nm的k
d
。在一个实施方式中，抗体抑制血浆激肽释放酶，但是不抑制组织激肽释放酶(例如，抗体与其抑制血浆激肽释放酶更不有效地抑制组织激肽释放酶(例如，5
‑
、10
‑
、50
‑
、100
‑
或1000
‑
倍少或完全没有，例如，与阴性对照相比)。
[0071]
在一些实施方式中，抗体具有小于1000、500、100、5、1、0.5或0.2nm的表观抑制常数(k
i,app
)。
[0072]
血浆激肽释放酶结合抗体可具有包括在单一多肽(例如，scfv)中或在不同多肽(例如，igg或fab)上的的他们的hc和lc可变结构域序列。
[0073]
在一个实施方式中，hc和lc可变结构域序列是相同多肽链的成分。在另一个中，hc和lc可变结构域序列是不同多肽链的成分。例如，抗体是igg，例如，igg1、igg2、igg3或igg4。抗体可以是可溶性fab。在其他实施中，抗体包括fab2'、scfv、微型抗体、scfv::fc融合体、fab::hsa融合体、hsa::fab融合体、fab::hsa::fab融合体或包括本文的结合蛋白之一的抗原组合位点的其他分子。这些fab的vh和vl区可被提供作为igg、fab、fab2、fab2'、scfv、pegylated fab、pegylated scfv、pegylated fab2、vh::ch1::hsa lc、hsa::vh::ch1 lc、lc::hsa vh::ch1、hsa::lc vh::ch1或其他适当的结构。
[0074]
在一个实施方式中，抗体是人或人源化的抗体或在人中是非免疫原性的。例如，抗体包括一个或多个人抗体框架区，例如，所有人框架区或与人框架区至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99％同一性的框架区。在一个实施方式中，抗体包括人fc结构域或与人fc结构域至少95、96、97、98或99％同一性的fc结构域。
[0075]
在一个实施方式中，抗体是灵长类或灵长类化抗体或在人中是非免疫原性的。例如，抗体包括一个或多个灵长类抗体框架区，例如，所有灵长类框架区，或与灵长类框架区至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99％同一性的框架区。在一个实施方式中，抗体包括灵长类fc结构域，或与灵长类fc结构域至少95、96、97、98或99％同一性的fc结构
域。“灵长类”包括人(智人)、黑猩猩(pan troglodytes和倭黑猩猩(pan paniscus)(倭黑猩猩(bonobos)))、大猩猩(gorilla gorilla)、长臂猿、猴子、狐猴、狐猿(指猴(daubentonia madagascariensis))和眼镜猴。在一些实施方式中，人血浆激肽释放酶的灵长类抗体的亲和力特征在于小于1000、500、100、10、5、1、0.5nm，例如，小于10nm、小于1nm或小于0.5nm的k
d
。
[0076]
在某些实施方式中，抗体不包括来自小鼠或兔的序列(例如，不是鼠或兔抗体)。
[0077]
在一些实施方式中，本文所述方法中使用的抗体可以是如本文所述的dx
‑
2930或其功能变体。
[0078]
在一个示例中，dx
‑
2930的功能变体包括与dx
‑
2930相同的互补决定区(cdr)。在另一示例中，与dx
‑
2930的v
h
和v
l
中的fr相比，dx
‑
2930的功能变体在v
h
或v
l
的fr中可含有一个或多个突变(例如，保守置换)。优选地，这种突变不发生在预测与一个或多个cdr相互作用的残基上，其可通过常规技术确定。在其他实施方式中，本文所述的功能变体在dx
‑
2930的一个或多个cdr区内含有一个或多个突变(例如，1、2或3个)。优选地，这种功能变体保留与亲本相同的负责抗原
‑
结合的区域/残基。在仍其他实施方式中，dx
‑
2930的功能变体可包括包含dx
‑
2930的v
h
的氨基酸序列至少85％(例如，90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的v
h
链和/或具有与dx
‑
2930的v
l
的氨基酸序列至少85％(例如，90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的v
l
链。这些变体能够结合至血浆激肽释放酶的活性形式并且优选地不结合前激肽释放酶。
[0079]
两个氨基酸序列的“同一性百分比”使用karlin和altschul proc.natl.acad.sci.usa 87:2264
‑
68,1990(如karlin和altschul proc.natl.acad.sci.usa 90:5873
‑
77,1993中改进的)的算法确定。将这种算法并入altschul等j.mol.biol.215:403
‑
10,1990的nblast和xblast程序(2.0版本)。blast蛋白质搜索可用xblast程序(评分＝50，字长＝3)进行以获得与感兴趣的蛋白分子同源的氨基酸序列。当两个序列之间存在差距时，如altschul等，nucleic acids res.25(17):3389
‑
3402,1997中描述的可利用gapped blast。当利用blast和gapped blast程序时，可使用各自程序(如xblast和nblast)的默认参数。
[0080]
在一些实施方式中，本文所述方法和组合物中使用的抗体可以是dx
‑
2930抗体。以下提供了dx
‑
2930的重链和轻链全序列和可变序列，信号序列用斜体表示。cdr用粗体和下划线表示。
[0081]
dx
‑
2930重链氨基酸序列(451个氨基酸，49439.02da)
[0082][0083]
dx
‑
2930轻链氨基酸序列(213个氨基酸，23419.08da)
[0084][0085]
dx
‑
2930重链可变结构域氨基酸序列
[0086][0087][0088]
dx
‑
2930轻链可变结构域氨基酸序列
[0089][0090]
表1.dx
‑
2930的cdr
[0091]
cdr氨基酸序列重链cdr1hyi mm(seq id no:5)重链cdr2giyssggitvyadsvkg(seq id no:6)重链cdr3rrigvprrdefdi(seq id no:7)轻链cdr1rasqsisswla(seq id no:8)轻链cdr2kastles(seq id no:9)轻链cdr3qqyntywt(seq id no:10)
[0092]
抗体制备
[0093]
如本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)可通过本领域已知的任何方法制造。参见，例如，harlow和lane，(1988)antibodies:a laboratory manual,cold spring harbor laboratory,new york and greenfield,(2013)antibodies:a laboratory manual,second edition,cold spring harbor laboratory press。
[0094]
编码感兴趣的抗体，例如，dx
‑
2930的序列可在宿主细胞中以载体保持，并且然后宿主细胞可以被扩展和冷冻以备将来使用。在可替选的选择中，多核苷酸序列可用于基因操作以“人性化”抗体或改善抗体的亲和力(亲和力成熟)或其他特点。例如，如果抗体用于人的临床测定和治疗，恒定区可被工程化为更相似的人恒定区以避免免疫应答。可以期望基因操作抗体序列以获得对靶标抗原的更大亲和力和抑制pkal活性的更大功效。对于本领域的技术人员显而易见的，可对抗体进行一个或多个多核苷酸改变并仍维持其对靶标抗原的结合特异性。
[0095]
在其他实施方式中，完全人抗体可通过使用商业上可得的已经工程化为表达具体的人免疫球蛋白蛋白质的小鼠获得。设计为产生更期望的(例如，完全人抗体)或更稳健的免疫应答的转基因动物也可用于人源化或人抗体的生成。这种技术的示例是来自amgen，inc.(fremont，calif.)的xenomouse
rtm
和来自medarex，inc.(princeton，n.j.)的humab
‑
mouse
rtm
和tc mouse
tm
。在另一可替选的选择中，抗体可通过噬菌体展示或酵母技术重组制造。参见，例如，美国专利号5,565,332、5,580,717、5,733,743和6,265,150；和winter等，
biotechnol 56(1
‑
2):157
‑
64；takahashi k.等，2000biosci biotechnol biochem 64(10):2138
‑
44；edqvist,j.等，1991j biotechnol 20(3):291
‑
300)、hanseula或酵母菌属中表达。本领域技术人员可通过优化，例如，氧条件(参见例如，baumann k.等，2010 bmc syst.biol.4:141)、渗透性(参见例如，dragosits,m.等，2010 bmc genomics 11:207)、温度(参见例如，dragosits,m.等，2009 j proteome res.8(3):1380
‑
92)、发酵条件(参见例如，ning,d.等2005j.biochem.和mol.biol.38(3)：294
‑
299)、酵母的菌株(参见例如，kozyr,av等2004mol biol(mosk)38(6):1067
‑
75；horwitz,ah.等，1988 proc natl acad sci usa 85(22):8678
‑
82；bowdish,k.等1991 j biol chem 266(18):11901
‑
8)、为增强抗体产生的蛋白质的过表达(参见例如，gasser,b.等，2006 biotechol.bioeng.94(2):353
‑
61)、培养基的酸度水平(参见例如，kobayashi h.等，1997 fems microbiol lett 152(2):235
‑
42)、底物和/或离子的浓度(参见例如，ko jh.等，2996 appl biochem biotechnol 60(1):41
‑
8)在酵母中优化抗体产生。另外，酵母系统可用于产生具有延长半衰期的抗体(参见例如，smith,bj.等，2001 bioconjug chem 12(5):750
‑
756)。
[0104]
在一个优选的实施方式中，抗体在哺乳动物细胞中产生。用于表达克隆抗体或其抗原
‑
结合片段的优选的哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(cho细胞)(包括dhfr
‑
cho细胞，urlaub和chasin，1980，proc.natl.acad.sci.usa 77:4216
‑
4220中描述的，与dhfr可选择标记物一起使用，例如，如kaufman和sharp，1982，mol.biol.159:601 621中描述的)、淋巴细胞系，例如ns0骨髓瘤细胞和sp2细胞、cos细胞、hek293t细胞(j.i mmunol.methods 289(1
‑
2):65
‑
80)以及来自转基因动物，例如转基因哺乳动物的的细胞。例如，细胞是乳腺上皮细胞。
[0105]
在一些实施方式中，血浆激肽释放酶结合抗体在基于无植物或细胞的系统中产生(参见例如，galeffi,p.等，2006 j transl med 4:39)。
[0106]
除了编码多样化免疫球蛋白域的核酸序列外，重组表达载体可携带另外序列，比如调节宿主细胞中载体的复制的序列(例如，复制的起源)和可选择的标记基因。可选择的标记基因有利于选择已引入载体的宿主细胞(参见例如，美国专利号4,399,216、4,634,665和5,179,017)。例如，通常可选择的标记基因赋予药物比如g418、潮霉素或甲氨蝶呤对已引入载体的宿主细胞的抗性。优选的可选择标记基因包括二氢叶酸还原酶(dhfr)基因(用于dhfr
‑
宿主细胞与甲氨蝶呤选择/扩增)和neo基因(用于g418选择)。
[0107]
在抗体或其抗原
‑
结合部分的重组表达的示例性系统中，通过磷酸钙
‑
介导的转染将编码抗体重链和抗体轻链二者的重组表达载体引入dhfr
‑
cho细胞。在重组表达载体内，抗体重链和轻链基因各自可操作地连接至增强子/启动子调节元件(例如，源自sv40、cmv、腺病毒等，比如cmv增强子/admlp启动子调节元件或sv40增强子/admlp启动子调节元件)，以驱动高水平基因转录。重组表达载体还携带dhfr基因，其允许使用甲氨蝶呤选择/扩增选择已以载体转染的cho细胞。将选择的转化体宿主细胞培养，以允许抗体重链和轻链的表达，并且从培养基中回收完整的抗体。使用标准分子生物学技术制备重组表达载体、转染宿主细胞，选择转化体、培养宿主细胞和从培养基中回收抗体。例如，一些抗体可以用蛋白a或蛋白g偶联基质的亲和层析法分离。
[0108]
对于包括fc结构域的抗体，抗体产生系统可产生其中fc区被糖基化的抗体。例如，igg分子的fc结构域在ch2域的天冬酰胺297处被糖基化。该天冬酰胺是用于具有双触角型
寡糖修饰的位点。已经证明该糖基化是由fcγ受体和补体c1q介导的效应子功能所必需的(burton和woof，1992，adv.i mmunol.51:1
‑
84；jefferis等人，1998，i mmunol.rev.163:59
‑
76)。在一个实施方式中，fc结构域是在哺乳动物表达系统中产生的，该系统适当地糖基化对应于天冬酰胺297的残基。fc结构域还可包括其他真核生物翻译后修饰。
[0109]
抗体也可以由转基因动物产生。例如，美国专利号5,849,992描述了在转基因哺乳动物的乳腺中表达抗体的方法。构建了转基因，其包括奶特异性启动子和编码感兴趣的抗体的核酸和用于分泌的信号序列。这种转基因哺乳动物的雌性所产生的奶包括，其中分泌的，感兴趣的抗体。抗体可以从奶中纯化，或对于一些应用，直接使用。
[0110]
药物组合物
[0111]
本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)可以存在于组合物，例如，药学上可接受的组合物或药物组合物中。本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)可以与药学上可接受的载体一起配制。在一些实施方式中，150mg或300mg的dx
‑
2930抗体存在于任选地与药学上可接受的载体一起的组合物，例如，药学上可接受的组合物或药物组合物中。
[0112]
药学上可接受的载体包括生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、涂覆料(coating)、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。优选地，载体适合于皮下、静脉内、肌内、肠胃外、脊柱或表皮施用(例如，通过注射或输注)，尽管也考虑适合于吸入和鼻内施用的载体。
[0113]
本文所述的药物组合物中的药学上可接受的载体可包括缓冲剂、氨基酸和张度调节剂中的一种或多种。任何合适的缓冲剂或缓冲剂的组合可用于本文所述的药物组合物中，以维持或帮助保持组合物的适当ph。缓冲剂的非限制性示例包括磷酸钠、磷酸钾、柠檬酸、琥珀酸钠、组氨酸、tris和乙酸钠。在一些实施方式中，缓冲剂可以是约5
‑
100mm、5
‑
50mm、10
‑
50mm、15
‑
50mm或约15
‑
40mm的浓度。例如，一种或多种缓冲剂可以是约15mm、16mm、17mm、18mm、19mm、20mm、21mm、22mm、23mm、24mm、25mm、26mm、27mm、28mm、29mm、30mm、31mm、32mm、33mm、35mm、36mm、37mm、38mm、39mm或约40mm的浓度。在一些示例中，药学上可接受的载体包括磷酸钠和柠檬酸，其分别可以是约30mm和约19mm的浓度。
[0114]
在一些实施方式中，药学上可接受的载体包括一种或多种氨基酸，其可减少抗体的聚集和/或增加抗体在施用之前储存期间的稳定性。用于制造本文所述药物组合物的示例性氨基酸包括但不限于丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、脯氨酸或丝氨酸。在一些示例中，药物组合物中氨基酸的浓度可以是约5
‑
100mm、10
‑
90mm、20
‑
80mm、30
‑
70mm、40
‑
60mm或约45
‑
55mm。在一些示例中，氨基酸(例如，组氨酸)的浓度可以是约40mm、41mm、42mm、43mm、44mm、45mm、46mm、47mm、48mm、49mm、50mm、51mm、52mm、53mm、54mm、55mm、56mm、57mm、58mm、59mm或约60mm。在一个示例中，药物组合物含有约50mm浓度的组氨酸。
[0115]
任何合适的张度调节剂可用于制备本文所述的药物组合物。在一些实施方式中，张度调节剂是盐或氨基酸。合适的盐的示例包括但不限于氯化钠、琥珀酸钠、硫酸钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁和氯化钙。在一些实施方式中，药物组合物中的张度调节剂可以是约10
‑
150mm、50
‑
150mm、50
‑
100mm、75
‑
100mm或约85
‑
95mm的浓度。在一些实施方式中，张度调节剂可以是约80mm、81mm、82mm、83mm、84mm、85mm、86mm、87mm、88mm、89mm、90mm、91mm、92mm、93mm、94mm、95mm、96mm、97mm、98mm、99mm或约100mm的浓度。在一个示例中，张度调节剂可以
是氯化钠，其可以是约90mm的浓度。
[0116]
本文所述药物组合物中药学上可接受的载体可进一步包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。一般而言，药学上可接受的赋形剂是药学上无活性的物质。赋形剂的非限制性示例包括乳糖、甘油、木糖醇、山梨糖醇、甘露醇、麦芽糖、肌醇、海藻糖、葡萄糖、牛血清白蛋白(bsa)、葡聚糖、聚乙酸乙烯酯(pva)、羟丙基甲基纤维素(hpmc)、聚乙烯亚胺(pei)、明胶、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、羟乙基纤维素(hec)、聚乙二醇(peg)、乙二醇、甘油、二甲亚矾(dmso)、二甲基甲酰胺(dmf)、聚氧乙烯山梨醇酐单月桂酸酯(tween
‑
20)、聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯(tween
‑
80)、十二烷基磺酸钠(sds)、聚山梨醇酯、聚氧乙烯共聚物、磷酸钾、乙酸钠、硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、三甲胺n
‑
氧化物、甜菜碱、锌离子、铜离子、钙离子、锰离子、镁离子、chaps、蔗糖单月桂酸酯和2
‑
o
‑
β
‑
甘露甘油酸酯(mannoglycerate)。在一些实施方式中，药学上可接受的载体包括约0.001％
‑
0.1％、0.001％
‑
0.05％、0.005
‑
0.1％、0.005％
‑
0.05％、0.008％
‑
0.05％、0.008％
‑
0.03％或约0.009％
‑
0.02％之间的赋形剂。在一些实施方式中，赋形剂是约0.005％、0.006％、0.007％、0.008％、0.009％、0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％或约0.1％。在一些实施方式中，赋形剂是聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯(tween
‑
80)。在一个示例中，药学上可接受的载体含有0.01％tween
‑
80。
[0117]
在一些示例中，本文所述的药物组合物包括也如本文所述的抗pkal抗体(例如，dx
‑
2930)和磷酸钠(例如，二水合磷酸氢二钠)、柠檬酸(例如，一水柠檬酸)、组氨酸(例如，l
‑
组氨酸)、氯化钠和聚山梨醇酯80的一种或多种。例如，药物组合物可包括抗体、磷酸钠、柠檬酸、组氨酸、氯化钠和聚山梨醇酯80。在一些示例中，抗体在约30mm磷酸钠、约19mm柠檬酸、约50mm组氨酸、约90mm氯化钠和约0.01％聚山梨醇酯80中配制。组合物中抗体(例如，dx
‑
2930)的浓度可以是约150mg/ml或300mg/ml。在一个示例中，组合物包括以下或由以下组成：约150mg dx
‑
2930每1ml溶液、约30mm二水合磷酸氢二钠、约19mm(例如，19.6mm)一水柠檬酸、约50mm l
‑
组氨酸、约90mm氯化钠和约0.01％聚山梨醇酯80。在另一示例中，组合物包括以下或由以下组成：约300mg dx
‑
2930每1ml溶液、约30mm二水合磷酸氢二钠、约19mm(例如，19.6mm)一水柠檬酸、约50mm l
‑
组氨酸、约90mm氯化钠和约0.01％聚山梨醇酯80。
[0118]
药学上可接受的盐是保留化合物的期望的生物活性和不赋予任何非期望的毒理效应的盐(参见，例如，berge,s.m.等，1977，j.pharm.sci.66:1
‑
19)。这种盐的示例包括酸加成盐和碱加成盐。酸加成盐包括源自非毒性无机酸比如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚磷酸等，以及源自非毒性有机酸比如脂肪族一元和二元羧酸、苯基取代的烷酸、羟基烷酸、芳族酸、脂肪族和芳族磺酸等的酸加成盐。碱加成盐包括源自碱土金属比如钠、钾、镁、钙等，以及源自非毒性有机胺比如n,n'
‑
二苄乙烯二胺、n
‑
甲葡糖胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、普鲁卡因等的碱加成盐。
[0119]
组合物可以是各种形式。这些包括，例如，液体、半固体和固体剂型比如液体溶液(例如，可注射的和不溶解的溶液)、分散体或悬液、片剂、丸剂、粉末、脂质体和栓剂。形式可取决于预期施用的方式和治疗应用。许多组合物是以可注射的或不溶解的溶液的形式，比如与用于施用给人抗体类似的组合物。施用的示例性方式是肠胃外(例如，静脉内、皮下、腹膜内、肌内)。在一个实施方式中，血浆激肽释放酶结合蛋白质通过静脉内输注或注射施用。在另一实施方式中，血浆激肽释放酶结合蛋白质通过肌内注射施用。在另一实施方式中，血
浆激肽释放酶结合蛋白质通过皮下注射施用。在另一优选的实施方式中，血浆激肽释放酶结合蛋白质通过腹膜内注射施用。
[0120]
本文使用的短语“肠胃外施用”(“parenteral administration”)和“肠胃外地施用”(“administered parenterally”)指除肠内和局部施用以外的施用方式，通常通过注射，并且其包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注。在一些实施方式中，抗体是皮下施用的。
[0121]
组合物可以配制成溶液、微乳剂、分散体、脂质体或其他适合高药物浓度的有序结构。无菌注射溶液可通过将所需量的结合蛋白并入具有上述列举的一种或多种成分组合的适当溶剂中，如按要求的，随后过滤消毒制备。一般而言，分散体通过将活性化合物并入含有基本分散介质和来自上述列举的那些的所需其他成分的无菌载体中制备。在用于制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，这样从先前无菌过滤的其溶液中产生活性成分加上另外期望的成分的粉末。溶液的适当流动性可以保持，例如，通过使用比如卵磷脂的涂覆料，通过在分散的情况下保持所需的粒径和通过使用表面活性剂。注射组合物的延缓吸收可通过在组合物中包括延迟吸收的试剂，例如，单硬脂酸盐和明胶带来。
[0122]
如本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)可通过各种方法施用，包括静脉内注射、皮下注射或输注。例如，对于一些治疗应用，抗体可以以小于30、20、10、5或1mg/min的速度以达到约1至100mg/m2或7至25mg/m2的剂量通过静脉内输注施用。施用的途径和/或方式将取决于期望的结果改变。在某些实施方式中，活性化合物可用将保护化合物免于快速释放的载体制备，比如控制释放制剂，其包括植入物和微胶囊化的递送系统。可使用生物可降解的、生物相容的聚合物，比如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。制备这种制剂的许多方法是可获得的。参见，例如，sustained and controlled release drug delivery systems,j.r.robinson,ed.,1978,marcel dekker,inc.,new york。
[0123]
药物组合物可用医疗设备施用。例如，在一个实施方式中，本文公开的药物组合物可用设备，例如无针皮下注射设备、泵或植入物施用。
[0124]
在某些实施方式中，如本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)可配制为确保在体内适当的分布。例如，血脑屏障(bbb)排除了许多高度亲水性化合物。为了确保本文公开的治疗化合物穿过bbb(如果期望)，他们可以，例如，以脂质体配制。对于制造脂质体的方法，参见，例如，美国专利号4,522,811、5,374,548和5,399,331。脂质体可包括一个或多个选择性输送至特定细胞或器官中的部分，从而增强靶向药物递送(参见，例如，v.v.ranade，1989，j.clin.pharmacol.29:685)。
[0125]
调整剂量方案以提供最佳期望的应答(例如，治疗应答)。例如，可施用单次大药丸，随着时间可施用几次分开的剂量或如治疗情况的紧急程度指示的按比例减少或增加剂量。为了便于施用和剂量的均匀性，以剂量单位形式配制肠胃外组合物是特别有利的。如本文所用的剂量单位形式指物理上离散的单位，适合作为待治疗的受试者的单位剂量；每个单位含有计算以与所需药物载体结合产生期望的治疗效果的预定量的活性化合物。剂量单位形式的规格可由以下决定并且直接取决于以下：(a)活性化合物的独特特点和要达到的特定治疗效果，以及(b)为治疗个体的敏感性合成这种活性化合物的技术领域中固有的限
制。
[0126]
如本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)的治疗或预防有效量的示例性、非限制范围是约150mg或300mg。如本领域普通技术人员将理解的，对于儿科受试者，抗体的治疗或预防有效量可比成人受试者的更低。在一些实施方式中，向儿科受试者施用的有效量是固定剂量或基于重量的剂量。在一些实施方式中，小于约150mg或300mg的有效量被施用至儿科受试者。在一些实施方式中，第一治疗周期每两周或每四周施用抗体的治疗或预防有效量。在一些实施方式中，第二治疗周期向受试者施用抗体。在一些实施方式中，第一治疗周期中抗体的治疗或预防有效量与第二治疗周期中抗体的治疗或预防有效量不同。在一些实施方式中，第一治疗周期中抗体的治疗或预防有效量是150mg和第二治疗周期中抗体的治疗或预防有效量是300mg。在一些实施方式中，第一治疗周期中抗体的治疗或预防有效量与第二治疗周期中抗体的治疗或预防有效量相同。在一个示例中，第一治疗周期和第二治疗周期中抗体的治疗或预防有效量是300mg。
[0127]
在一些实施方式中，如本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)的治疗或预防有效量的示例性、非限制范围是约300mg。在一些实施方式中，抗体的治疗或预防有效量以单剂量施用。如果受试者经历hae发作，抗体可进一步以多剂量向受试者施用，如以每两周施用约300mg的剂量。
[0128]
试剂盒
[0129]
如本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)可以以试剂盒提供，例如，作为试剂盒的成分。例如，试剂盒包括(a)dx
‑
2930抗体，例如，包括抗体的组合物(例如，药物组合物)，和任选地(b)信息材料。信息材料可以是与本文所述方法和/或例如，用于本文所述方法的本文所述抗体(例如dx
‑
2930)的使用有关的描述性、指导性、营销性或其他材料。在一些实施方式中，试剂盒包含一个或多个剂量的dx
‑
2930。在一些实施方式中，一个或多个剂量是150mg或300mg。
[0130]
试剂盒的信息材料的形式不受限制。在一个实施方式中，信息材料可包括关于化合物生产、化合物的分子量、浓度、失效日期、批次或生产位点信息等的信息。在一个实施方式中，信息材料与使用抗体来治疗、预防或诊断紊乱和病症，例如，血浆激肽释放酶相关疾病或病症有关。
[0131]
在一个实施方式中，信息材料可包括以合适的方式施用本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)以进行本文所述的方法的说明书，例如，以合适的剂量、剂型、施用方式或给药方案(例如，本文所述的剂量、剂型、给药方案或施用方式)。在另一实施方式中，信息材料可包括向合适的受试者，例如，人，例如，患有血浆激肽释放酶相关的疾病或病症或处于血浆激肽释放酶相关的疾病或病症风险中的人施用本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)的说明书。例如，材料可包括例如，根据本文所述的给药方案向患有本文所述的紊乱或病症，例如，血浆激肽释放酶相关的疾病的患者施用如本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)的说明书。试剂盒的信息材料的形式不受限制。在许多情况下，信息材料，例如，说明书是以印刷品形式提供的，但也可以是其他格式，例如计算机可读材料。
[0132]
如本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)可以以任何形式提供，例如，液体、干燥或冻干形式。优选地，抗体基本上是纯的和/或无菌的。当抗体以液体溶液提供时，液体溶液优选地是水溶液，优选的是无菌水溶液。当抗体以干燥形式提供时，一般通过添加合适的溶剂重
构。溶剂，例如，无菌水或缓冲液，可任选地提供在试剂盒中。
[0133]
试剂盒可包括一个或多个用于含有如本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)的组合物的容器。在一些实施方式中，试剂盒包含用于组合物和信息材料的单独容器、分隔器或隔间。例如，组合物包含在瓶子、小瓶或注射器中，并且信息材料可以与容器相关联被包含。在其他实施方式中，试剂盒的单独元件被包含在单个不可分割的容器中。例如，组合物被包含在以标签形式附着信息材料在其上的瓶子，小瓶或注射器中。在一些实施方式中，试剂盒包括多个(例如，一包)单独容器，每个含有一个或多个如本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)的单位剂型(例如，本文所述的剂型)。例如，试剂盒包括多个注射器、安瓿瓶、铝箔包装或泡罩包装，每个都含有本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)的单一单位剂量。试剂盒的容器可以是气密的、防水的(例如，对湿气或蒸发的变化是不渗透的)和/或光密的。
[0134]
试剂盒任选地包括适合于施用组合物的设备，例如，注射器或任何这种递送设备。在一个实施方式中，设备是可植入的设备，其分配计量剂量的抗体。本公开还特征在于提供试剂盒的方法，例如，通过组合本文所述的成分。
[0135]
治疗
[0136]
在一些方面中，本公开提供了在治疗hae中如本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)的用途。
[0137]
(i)遗传性血管性水肿
[0138]
遗传性血管性水肿(hae)也称为“昆克水肿”(“quincke edema”)、c1酯酶抑制剂缺陷、c1抑制剂缺陷和遗传性血管神经性水肿(hane)。hae的特征在于不可预测的、反复发作的恶劣的皮下或粘膜下肿胀(血管性水肿)，其可影响，例如，四肢、面部、生殖器、胃肠道和气道(zuraw，2008)。hae的症状包括，例如，手臂、腿、嘴唇、眼睛、舌头和/或喉咙的肿胀；可涉及喉咙(喉部)肿胀、突然的嘶哑和/或导致窒息死亡的气道阻塞(bork等，2012；bork等，2000)。所有hae患者的近似50％将在他们的一生中经历喉发作，并且没有办法预测哪些患者处于喉发作的风险(bork等，2003；bork等，2006)。hae症状还包括无明显原因的腹部绞痛的反复发作；和/或肠道肿胀，其可以是恶劣的并且可导致腹部绞痛、呕吐、脱水、腹泻、疼痛、休克和/或类似腹部急症的肠道症状，其可导致不必要的手术(zuraw，2008)。肿胀可持续高达5天或更多天。患有该hae的个体的约三分之一在发作期间会出现不痒的皮疹，称为边缘性红斑。大多数患者每年遭遇多次发作。
[0139]
hae是孤儿病，确切的发病率尚不清楚，但目前的估计范围为每10,000人中有1人至每150,000人中有1人，许多作者认为每50,000人中有1人可能是最接近的估计值(bygum，2009；goring等，1998；lei等，2011；nordenfelt等，2014；roche等，2005)。
[0140]
血浆激肽释放酶在hae发作的发病机制中起着关键作用(davis，2006；kaplan和joseph，2010)。在正常生理学中，c1
‑
inh调节血浆激肽释放酶以及各种其他蛋白酶，比如c1r、c1s、因子xia和因子xiia的活性。血浆激肽释放酶调节从高分子量激肽原(hmwk)释放缓激肽。由于hae中c1
‑
inh的缺陷，发生失控的血浆激肽释放酶活性并且导致缓激肽的过度生成。缓激肽为血管舒张剂，其被认为对局部肿胀、炎症和疼痛的特征性hae症状负责(craig等，2012；zuraw等，2013)。
[0141]
气道肿胀可危及生命并且会导致一些患者的死亡。死亡率被估计为15
‑
33％。hae每年导致约15,000
‑
30,000人访问急诊室。
[0142]
创伤或压力，例如牙科手术、疾病(例如，病毒性疾病比如感冒和流感)、月经和外科手术可引发血管性水肿发作。为了预防hae的急性发作，患者可尝试避免先前引起发作的特定刺激。然而，在许多情况下，发作发生而没有已知的诱因。典型地，hae症状在儿童时期首次出现，并且在青春期期间加重。平均而言，未治疗的个体每1至2周发作，并且大多数发作持续约3至4天(ghr.nlm.nih.gov/condition/hereditary
‑
angioedema)。患有遗传性血管性水肿的人之中，发作频率和持续时间变化很大，即使在相同家族的人之中也是如此。
[0143]
有三种类型的hae，已知为i型、ii型和iii型，均可通过本文所述的方法治疗。据估计，hae在50,000个人中影响1个人，i型占约85％的病例、ii型占约15％的病例并且iii型非常罕见。iii型是最新描述的形式，并且最初认为只发生在妇女身上，但已确定有男性受影响的家庭。
[0144]
hae是以常染色体显性模式遗传，使得受影响的人可从一个受影响的亲本遗传突变。新的基因突变也可发生，并且因此，hae也可在他们家族没有该紊乱史的人中发生。据估计，20
‑
25％的病例由新的自发突变引起。
[0145]
serping1基因的突变引起i型和ii型遗传性血管性水肿。serping1基因提供了制造对于控制炎症是重要的c1抑制蛋白的指令。c1抑制剂阻断某些促进炎症的蛋白质的活性。引起i型遗传性血管性水肿的突变导致血液中c1抑制剂水平降低。相反，引起ii型的突变导致产生功能异常的c1抑制剂。大约85％的患者具有i型hae，其特征在于功能正常的c1
‑
inh蛋白的非常低的产生，而其余大约15％的患者具有ii型hae，并且产生正常或升高水平的功能受损的c1
‑
inh(zuraw，2008)。没有适当水平的功能c1抑制剂，从高分子量激肽原(hmwk)产生过量的缓激肽，并且由结合至内皮细胞表面上的b2受体(b2
‑
r)的缓激肽介导的血管渗漏增加(zuraw，2008)。缓激肽通过增加流体穿过血管壁渗漏至身体组织中来促进炎症。流体在身体组织中的过度积聚引起患有i型和ii型遗传性血管性水肿的个体中看到的肿胀发作。
[0146]
f12基因的突变与一些iii型遗传性血管性水肿的病例有关。f12基因提供制造凝血因子xii的指令。除了在血液凝结(凝固)中起关键作用外，因子xii还是炎症的重要刺激物，并且参与缓激肽的产生。f12基因中的某些突变导致具有增加活性的的因子xii的产生。结果，产生更多的缓激肽，并且血管壁变得更渗漏，其导致肿胀的发作。其他iii型遗传性血管性水肿病例的病因仍不清楚。在这些病例中，一个或多个尚未鉴定的基因的突变可以是紊乱的原因。
[0147]
hae可类似出现起因于变态反应或其他医学病症的其他形式的血管性水肿，但其在病因和治疗上显著不同。当遗传性血管性水肿被误诊为变态反应时，最常用抗组胺剂、类固醇和/或肾上腺素治疗，其对hae通常无效，尽管肾上腺素可用于威胁生命的反应。误诊也导致患有腹部肿胀的患者进行不必要的探查术，并且在一些hae患者中腹痛被错误地诊断为受心理影响的(psychosomatic)。
[0148]
像成年人，患有hae的儿童可经历反复的且使衰弱的发作。症状可在儿童时期非常早出现，小如3岁的hae患者中已经报道出现了上气道血管性水肿(bork等，2003)。在49名儿科hae患者的一项病例研究中，有23名在18岁时已经遭受至少一次气道血管性水肿的发作(farkas，2010)。患有hae的儿童之中，尤其青少年，存在着重要的未满足的医疗需求，因为该疾病通常在青春期后恶化(bennett和craig，2015；zuraw，2008)。
[0149]
hae的c1抑制剂疗法以及其他疗法在kaplan,a.p.,j allergy clin immunol,2010,126(5):918
‑
925中描述。
[0150]
提供hae发作的急性治疗尽可能快速地阻止水肿的发展。静脉内施用的来自供体血液的c1抑制剂浓缩物是一种急性治疗；然而，许多国家无法获得这种治疗。在无法获得c1抑制剂浓缩物的紧急情况下，新鲜的冷冻血浆(ffp)可用作替代物，因为其也含有c1抑制剂。
[0151]
源自人血液的纯化c1抑制剂自1979年起已经在欧洲使用。目前美国已经获得几种c1抑制剂治疗，并且现在加拿大已经获得两种c1抑制剂产品。被巴氏消毒的berinert p(csl behring)在2009年被f.d.a.批准用于急性发作。被纳米过滤的cinryze(viropharma)在2008年被f.d.a.批准用于预防。rhucin(pharming)是正在开发的重组c1抑制剂，其不携带由于人血源性病原体而传播传染病的风险。
[0152]
急性hae发作的治疗也可包括用于止痛和/或iv液体的药物。
[0153]
其他治疗形式可刺激c1抑制剂的合成，或减少c1抑制剂消耗。雄激素药物，如达那唑，可通过刺激c1抑制剂的产生，减少发作的频率和严重程度。
[0154]
幽门螺旋杆菌可触发腹部发作。治疗幽门螺旋杆菌的抗生素将减少腹部发作。
[0155]
较新的治疗攻击接触性级联(contact cascade)。ecallantide(dx
‑
88，dyax)抑制血浆激肽释放酶，并且已经在美国批准。icatibant(shire)抑制缓激肽b2受体，并且已经在欧洲和美国批准。
[0156]
hae的诊断可以依靠例如，家族史和/或血液测试。与i型、ii型和iii型hae相关的实验室发现，例如，在kaplan,a.p.，j allergy clin immunol，2010，126(5):918
‑
925中描述。在i型hae中，c1抑制剂的水平降低，c4的水平也降低，而c1q水平正常。在ii型hae中，c1抑制剂水平正常或增加；然而，c1抑制剂功能异常。c4水平下降，并且c1q水平正常。在iii型中，c1抑制剂、c4、c1q的水平均正常。
[0157]
例如，使用问卷，例如，由患者、临床医生或家庭成员完成的问卷可评估hae的症状。例如，可以使用问卷，例如，由患者、临床医生或家庭成员完成的问卷来评估hae的症状。这种问卷是本领域已知的，并且包括例如视觉模拟量表。参见，例如，mcmillan,c.v.等，patient.2012；5(2):113
‑
26。在一些实施方式中，受试者具有i型hae或ii型hae。i型hae或ii型hae可使用本领域已知的任何方法诊断，比如通过与hae一致的临床病史(例如，皮下或粘膜、非瘙痒性肿胀发作)或诊断性测试(例如，c1
‑
inh功能测试和c4水平评估)。
[0158]
(ii)用抗pkal抗体治疗hae
[0159]
本公开提供了通过向患有或怀疑患有hae的受试者施用本文所述的抗体(例如，治疗有效量的本文所述的抗体)，例如，根据本文所述的给药方案，治疗(例如，减轻、稳定或消除一种或多种症状)遗传性血管性水肿(hae)的方法。另外提供了通过施用本文所述的抗体(例如，治疗有效量的本文所述的抗体)，例如，根据本文所述的给药方案，或与第二疗法，例如，以一种其他试剂(例如本文所述的)组合来治疗hae的方法。本公开还提供了通过向处于发展hae风险的受试者(例如，具有患有hae或其遗传倾向性的家庭成员的受试者)施用本文所述的抗体(例如，预防有效量的本文所述的抗体的)，例如，根据本文所述的给药方案，预防hae或其症状的方法。在一些示例中，受试者可以是在治疗时没有hae症状的人患者。在一
些实施方式中，受试者是患有i型hae或ii型hae的人患者。在一些实施方式中，受试者是在治疗之前的那年内已经经历至少两次(例如，2、3、4、5次或更多次)hae发作的人患者。
[0160]
在一些实施方式中，受试者是女性。在一些实施方式中，受试者是儿科受试者。在一些实施方式中，受试者是小于18岁的青少年。在一些实施方式中，受试者是在12和18岁的年龄之间的青少年。在一些实施方式中，受试者是在40和65岁以下的年龄之间。
[0161]
在一些实施方式中，受试者可由性别限定。例如，在一些实施方式中，受试者是女性。
[0162]
在一些实施方式中，人受试者由体重限定。在一些实施方式中，人受试者体重为小于50kg。在一些实施方式中，人受试者体重为50kg和75kg之间。在一些实施方式中，人受试者体重为75kg和100kg之间。在一些实施方式中，人受试者体重为100kg或更多。
[0163]
在一些实施方式中，任何人患者亚组可以以每两周约300mg给予抗pkal抗体(例如，dx
‑
2930)。在其他情况下，这种人患者可以以每两周或四周约150mg给予抗体。在仍其他情况中，这种人患者可以以每四周约300mg给予抗体。
[0164]
在一些实施方式中，人受试者由喉发作或其不存在的先前历史限定。在一些实施方式中，受试者在施用本文所述的抗体之前已经经历至少一次(例如，1、2、3、4、5次或更多次)喉发作(即喉hae发作)。在一些实施方式中，受试者在施用本文所述的抗体之前没有经历喉发作。
[0165]
治疗包括施用有效缓和、缓解、改变、补救、改善或影响紊乱、紊乱的症状或易患紊乱的量。治疗也可延迟发病，例如，预防发病或预防疾病或病症的恶化。
[0166]
施用dx
‑
2930抗体的方法还在“药物组合物”中描述。使用的适当剂量的抗体可取决于受试者的年龄和重量以及使用的特定药物。抗体可用作竞争试剂以抑制、减少非期望的相互作用，例如，血浆激肽释放酶和其底物(例如，因子xii或hmwk)之间的。抗体的剂量可以是足以阻断患者内的，尤其在疾病的位点处的血浆激肽释放酶的90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％99％或99.9％的活性的量。在一些实施方式中，每两周或每四周施用150mg或300mg的抗体。在一些实施方式中，在包括每两周或每四周施用150mg或300mg的抗体的第一治疗周期中向受试者施用抗体。在一些实施方式中，在第一治疗周期之后的第二治疗周期中向受试者施用抗体。在一些实施方式中，以单剂量施用300mg的抗体。如果受试者在单剂量后经历hae发作，抗体可以以每两周300mg施用。
[0167]
在一个实施方式中，抗体用于，例如，体内抑制血浆激肽释放酶的活性(例如，抑制至少一种血浆激肽释放酶的活性，例如，减少因子xiia和/或缓激肽产生)，。结合蛋白可以通过自身使用或被缀合至试剂，例如，细胞毒性药物、细胞毒素酶或放射性同位素。
[0168]
抗体可在体内直接地使用以经天然补体依赖性细胞毒性(cdc)或抗体依赖性细胞毒性(adcc)消除抗原
‑
表达细胞。本文所述的抗体可包括补体结合效应结构域，比如来自igg1、
‑
2或
‑
3的fc部分或结合补体的igm的相应部分。在一个实施方式中，靶细胞群体用本文所述的抗体和适当的效应细胞离体处理。处理可以通过添加补体或含补体的血清补充。进一步，用本文所述的抗体涂覆的靶细胞的吞噬作用可以通过结合补体蛋白来改善。在另一实施方式目的中，用包括补体结合效应结构域的抗体涂覆的细胞通过补体裂解。
[0169]
施用dx
‑
2930抗体的方法在“药物组合物”中描述。使用的适当剂量的分子将取决于受试者的年龄和重量以及使用的特定药物。抗体可用作竞争试剂以抑制或减少非期望的
相互作用，例如，在天然或病理试剂和血浆激肽释放酶之间。
[0170]
向患有、怀疑患有或处于hae风险的受试者施用治疗有效量的如本文所述的抗体，从而治疗(例如，减轻或改善紊乱的症状或特征，减缓、稳定和/或停止疾病进展)该疾病。
[0171]
本文所述的抗体可以以治疗有效量施用。治疗有效量的抗体是当单剂量或多剂量施用至受试者时，有效治疗受试者，例如，治愈、缓和、缓解或改善受试者的紊乱中的至少一种症状至超过在没有这种治疗的情况下期望的程度的量。
[0172]
可以调整剂量方案以提供最佳的期望应答(例如，治疗应答)。例如，可施用单次大药丸，可随着时间施用几次分开的剂量，或可如治疗情况的紧急程度指示按比例减少或增加剂量。在其他示例中，可施用大药丸，随后随着时间施用几次剂量或可如治疗情况的紧急程度指示的按比例减少或增加剂量。在其他示例中，剂量可分为几次剂量并且随着时间施用。为了便于施用和剂量的均匀性以剂量单位形式配制肠胃外组合物是尤其有利的。如本文使用的剂量单位形式指物理上离散的单位，适合作为待治疗的受试者的单位剂量；每个单位含有计算以与所需的药物载体结合产生期望的治疗效果的预定数量的活性化合物。
[0173]
在一些实施方式中，在第一治疗周期期间以剂量方案施用如本文所述的抗体。在一些实施方式中，在第一治疗周期中以多剂量施用抗体。在该周期中，治疗或预防有效量的抗体(例如，dx
‑
2930)可以是约150mg或300mg并且每周、每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长施用。在一些实施方式中，治疗或预防有效量的抗体(例如，dx
‑
2930)可以是约300mg并且受试者每周、每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长向雌性受试者施用。在一些实施方式中，治疗或预防有效量的抗体(例如，dx
‑
2930)可以是约300mg并且每周、每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长向小于18岁的受试者施用。在一些实施方式中，治疗或预防有效量的抗体(例如，dx
‑
2930)可以是约300mg并且每周、每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长向40和65岁年龄之间的受试者施用。
[0174]
在一些实施方式中，治疗或预防有效量的抗体(例如，dx
‑
2930)可以是约300mg并且每周、每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长向大于或等于65岁的受试者施用。在特别的实施例中，以每两周约300mg给予受试者抗体。在其他特别的实施例中，以每四周约300mg给予受试者抗体。
[0175]
在一些实施方式中，治疗或预防有效量的抗体(例如，dx
‑
2930)可以是约300mg并且每周、每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长向已经经历至少一次先前喉hae发作的受试者施用。在特别的示例中，以每两周约300mg向受试者给予抗体。在其他特别的示例中，以每四周约300mg向受试者给予抗体。
[0176]
在一些实施方式中，治疗或预防有效量的抗体(例如，dx
‑
2930)可以是约150mg或300mg并且每周、每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长向小于18岁的受试者施用。在特别的实施例中，以每两周约300mg向受试者给予抗体。在其他特别的示例中，以每四周约300mg向受试者给予抗体。
[0177]
在一些实施方式中，治疗或预防有效量的抗体(例如，dx
‑
2930)可以是约150mg或300mg并且每两周或每四周施用。在一些实施方式中，治疗或预防有效量的抗体(例如，dx
‑
2930)可以是300mg并且每两周向受试者施用。在一些实施方式中，治疗或预防有效量的抗体(例如，dx
‑
2930)可以是300mg并且每四周向受试者施用。在一些实施方式中，治疗或预防
有效量的抗体(例如，dx
‑
2930)可以是150mg并且每四周向受试者施用。在一些实施方式中，治疗或预防性有效量被施用至少两次、至少三次、至少四次、至少五次、至少六次、至少七次、至少八次、至少九次、至少十次、至少十一次、至少十二次、至少十三次或更多次。在一些实施方式中，第一治疗周期是26周。在一些实施方式中，治疗或预防性有效量是150mg并且每四周向受试者施用(例如，26周的每四周，导致总共递送7次剂量)。在一些实施方式中，治疗或预防性有效量是300mg并且每两周向受试者施用(例如，26周的每两周，导致总共递送13次剂量)。在一些实施方式中，治疗或预防性有效量是300mg并且每四周向受试者施用(例如，26周的每四周，导致总共递送7次剂量)。
[0178]
在一个示例中，第一治疗周期是26周并且在第0天、第28天、第56天、第84天、第112天、第140天和第168天施用抗体。在另一示例中，第一治疗周期是26周并且在第0天、第14天、第28天、第42天、第56天、第70天、第84天、第98天、第112天、第126天、第140天、第154天和第168天施用抗体。本技术领域技术人员本应理解，所列出的治疗方案允许
±
4天(例如，
±
3天、
±
2天或
±
1天)的窗口。例如，在第10
‑
18天给予的剂量将被以上指出的第14天的剂量涵盖。
[0179]
在一些实施方式中，在第一治疗周期后的第二治疗周期期间以剂量方案施用治疗或预防性有效量。在一些实施方式中，治疗或预防性有效量在第一治疗周期和第二治疗周期中是不同的。在一些实施方式中，第二治疗周期的治疗或预防性有效量是约300mg。在该周期期间，抗体可以以约300mg的多剂量施用，比如每两周300mg施用。在一些实施方式中，在第二治疗周期中，多剂量的抗体被施用至少两次、至少三次、至少四次、至少五次、至少六次、至少七次、至少八次、至少九次、至少十次、至少十一次、至少十二次、至少十三次。在一些实施方式中，第二治疗周期是26周。在一些实施方式中，26周的每两周(例如，导致递送13次剂量)以约300mg的剂量施用抗体。在一些实施方式中，在第一治疗周期的最后剂量后约两周施用第二治疗周期的单次第一剂量。
[0180]
在本文所述的任何实施方式中，抗体的施用时机是大概的并且可包括在指示日之前三天和之后三天(例如，每两周施用涵盖在第11天、第12天、第13天、第14天、第15天、第16天或第17天的施用)。
[0181]
在一些实施方式中，向已经经历先前hae治疗(第一治疗)，比如用相同的如本文所述的抗pkal抗体(例如，dx
‑
2930)的多剂量治疗的受试者以约300mg的单剂量施用如本文所述的抗体。如果受试者在单剂量后经历hae发作，可以通过以每两周约300mg的多剂量的抗体治疗受试者以适当的周期，例如，26周。在一些实施方式中，在hae发作的一周内(例如，hae发作的1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天内)施用第一多剂量。在一些实施方式中，抗体施用至少两次、至少三次、至少四次、至少五次、至少六次、至少七次、至少八次、至少九次、至少十次、至少十一次、至少十二次、至少十三次或更多次。
[0182]
先前hae治疗可涉及相同的如本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)。在一些实施方式中，先前hae治疗可涉及每两周或每四周多剂量的dx
‑
2930。在一些实施方式中，以每四周150mg、以每两周300mg或以每四周300mg向受试者(例如，皮下)给予dx
‑
2930。在一个示例中，受试者在施用单剂量抗体之前事先每两周或四周向受试者施用抗体26周。在一些实施方式中，先前治疗的多剂量抗体被施用至少两次、至少三次、至少四次、至少五次、至少六次、至少七次、至少八次、至少九次、至少十次、至少十一次、至少十二次、至少十三次。在一
些实施方式中，事先施用抗体至第0天、第28天、第56天、第84天、第112天、第140天和第168天。在一些实施方式中，在之前治疗的最后剂量之后约两周施用单剂量的约300mg的抗体。在一个示例中，在第一治疗周期的第182天施用第二治疗周期的单剂量。
[0183]
在本文所述的任何实施方式中，施用抗体的试剂是大概的并且包括在指示日之前三天和之后三天(例如，每两周施用涵盖在11天、第12天、第13天、第14天、第15天、第16天或第17天的施用)。
[0184]
在一些实施方式中，在根据本文所述的任何方法施用抗体之前，可评估受试者以建立hae发作的基线率。这种评估期可称为“导入期”。在一些实施方式中，hae发作的基线率必须满足或超过给予时间段内hae发作的最小数量。在一个示例中，受试者在第一次施用抗体之前的四周导入期内经历至少一次hae发作。在另一示例中，受试者在第一次施用抗体之前的四周导入期内经历每月1次和小于2次之间的发作。在另一示例中，受试者在第一次施用抗体之前的四周导入期内经历每月2次和小于3次之间的发作。在另一示例中，受试者在第一次施用抗体之前的四周导入期内经历每月3次或更多次的发作。在另一示例中，受试者在第一次施用抗体之前的八周导入期内经历至少两次hae发作。在仍另一示例中，受试者经历每月平均至少一次hae发作。
[0185]
在一些实施方式中，治疗或预防有效量的抗体(例如，dx
‑
2930)可以是约150mg或300mg并且每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长向在第一次施用抗体之前的导入期内已经经历每月1次和小于次2次之间的hae发作的受试者施用。在一些实施方式中，治疗或预防有效量的抗体(例如，dx
‑
2930)可以是约150mg或300mg并且每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长向在第一次施用抗体之前的导入期内已经经历每月2次和小于3次hae之间的发作的受试者施用。在一些实施方式中，治疗或预防有效量的抗体(例如，dx
‑
2930)可以是约150mg或300mg并且每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长向在第一次施用抗体之前的导入期内已经经历每月大于3次hae发作的受试者施用。
[0186]
在一些实施方式中，根据本文所述的任何方法施用抗体导致受试者的平均hae发作速率减少。在一些实施方式中，在根据本文所述的任何方法施用抗体之后平均hae发作率的减少百分比可以相对于没有接受抗体的受试者(例如，施用安慰剂的受试者)中hae发作率确定。在一些实施方式中，平均hae发作率的减少百分比可以是相对于没有接受抗体的受试者(例如，施用安慰剂的受试者)的hae发作率的至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％。
[0187]
本文所述的任何受试者可已经经历hae的先前治疗，比如hae的预防性或治疗性治疗。本公开的方面还提供向已经接受一种或多种hae的先前治疗的受试者施用如本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)的方法。在一些实施方式中，hae的先前治疗是涉及本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)的治疗。在一些实施方式中，受试者先前施用每两周或每四周多剂量的dx
‑
2930。在一些实施方式中，受试者先前施用以每两周150mg的dx
‑
2930。在一些实施方式中，受试者先前施用以每两周300mg的dx
‑
2930。在一些实施方式中，受试者先前施用以每四周300mg的dx
‑
2930。在一些实施方式中，先前治疗的多剂量抗体被施用至少两次、至少三次、至少四次、至少五次、至少六次、至少七次、至少八次、至少九次、至少十次、至少十一次、至
少十二次、至少十三次。
[0188]
在一些实施方式中，受试者已经接受一个或多个hae的先前治疗，比如长期预防性治疗，其可涉及本领域已知的hae的任何治疗剂。示例性抗hae试剂包括但不限于c1
‑
抑制剂(例如，或)、血浆激肽释放酶抑制剂(例如，)、缓激肽受体抑制剂(例如，)、减毒雄激素(例如，达那唑)和抗纤维蛋白溶解剂(例如，氨甲环酸)。在一些实施方式中，受试者在第一治疗周期之前已经接受用c1
‑
抑制剂治疗。在一些示例中，受试者在接受如本文所述的抗pkal抗体治疗之前可经历渐进周期。渐进周期指在抗pkal抗体治疗之前，在正在进行抗hae治疗(例如，c1
‑
inh、口服雄激素和/或口服抗纤维蛋白溶解剂)的受试者逐渐减少抗hae试剂的剂量、频率或二者，使得受试者可从先前hae治疗逐渐转变至如本文所述的抗pkal抗体治疗的期间的周期。在一些实施方式中，渐进涉及减少先前治疗的剂量和/或用施用的先前治疗的频率的逐渐的或分步的方法。渐进周期可持续2
‑
4周并且可基于个体患者的因素改变。在一些示例中，先前治疗在抗pkal抗体治疗开始之前终止。在其他示例中，先前治疗可在受试者被给予他或她第一剂量的抗pkal抗体之后在适当的时间框架(例如，2周、3周或4周)内终止。
[0189]
可替选地，正在进行先前hae治疗的受试者可没有渐进周期直接转换至如本文所述的抗pkal抗体治疗。
[0190]
在一些实施方式中，治疗或预防有效量的抗体(例如，dx
‑
2930)可以是约150 mg或300 mg并且每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长向已经接受一种或多种hae的先前治疗的受试者施用。
[0191]
在其他实施方式中，受试者在第一治疗、第一治疗周期和/或如本文所述的后续单和多剂量治疗(第二治疗周期)之前没有任何先前的hae治疗。在一些实施方式中，受试者在第一治疗周期期间和/或在第二治疗周期期间除了用本文所述的抗体没有任何治疗。在一些实施方式中，受试者在第一治疗或第一治疗周期之前、在第一治疗或第一治疗周期期间和/或在第二治疗周期期间没有hae的任何先前治疗至少两周(例如，至少两周、三周、四周、五周或更多周)。在一些实施方式中，受试者在第一治疗或第一治疗周期之前、在第一治疗周期期间和/或在第二治疗周期期间没有hae的长期预防(例如，c1抑制剂、减毒雄激素、抗纤维蛋白溶解剂)至少两周。在一些实施方式中，受试者在第一治疗或第一治疗周期之前、在第一治疗周期期间和/或在第二治疗周期期间没有涉及血管紧张素
‑
转换酶(ace)抑制剂的hae治疗至少四周。在一些实施方式中，受试者在第一治疗或第一治疗周期之前、在第一治疗周期期间和/或在第二治疗周期期间没有含雌激素的药物至少四周。在一些实施方式中，受试者在第一治疗或第一治疗周期之前、在第一治疗周期期间和/或在第二治疗周期期间没有雄激素(例如康力龙、达那唑、氧雄龙、甲基睾酮、睾酮)至少二周。
[0192]
本文所述的任何方法可进一步包括在治疗之前和之后或治疗过程期间监测患者的副作用(例如肌酸磷酸酶水平的升高)和/或抗体对pkal的抑制水平(例如，抗体的血清或血浆浓度或pkal活性水平)。如果观察到一种或多种不良反应，可减少抗体的剂量或可终止治疗。如果抑制水平低于最低治疗水平，可向患者施用进一步剂量的抗体。还可以评估患者针对施用的抗体的抗体产生；c1抑制剂、c4和/或c1q的活性；生活质量；任何hae发作的发生率、与健康相关的生活质量、焦虑和/或抑郁(例如，医院焦虑和抑郁症量表(hads))、工作生
产力(例如，工作生产力和活动障碍问卷(wpai))、相对于其他注射剂皮下施用抗体(如d
‑
2930)的偏好、生活质量(例如，血管性水肿
‑
生活质量(ae
‑
qol)、euroqol组5维报告)。
[0193]
在一些实施方式中，抗体(例如，dx
‑
2930)的血浆或血清浓度可在治疗过程期间(例如，在初始剂量之后)测量，用于评估治疗的效力。如果抗体的血浆或血清浓度小于约80nm，可能需要后续剂量，其可以与初始剂量相同或更高。抗体的血浆或血清浓度可例如，通过免疫测定或ms测定确定从受试者获得的血浆或血清样品中的抗体的蛋白水平来测量。抗体的血浆或血清浓度也可通过确定从用抗体治疗的受试者获得的血浆或血清样品中pkal的抑制水平来测量。这种测定可包括用于测量如本文所述的裂解激肽原的合成底物测定或蛋白质印迹测定。
[0194]
可选地或另外地，肌酸激酶的血浆或血清水平和/或一种或多种凝血参数(例如，激活部分促凝血酶原激酶时间(aptt)、凝血酶原时间(pt)、出血事件)可在治疗过程期间监测。如果在治疗过程期间发现肌酸激酶的血浆或血清水平升高，可减少抗体的剂量或终止治疗。相似地，如果在治疗期间发现一个或多个凝血参数被显著影响，可更改抗体的剂量或可终止治疗。
[0195]
在一些实施方式中，抗体(例如dx
‑
2930)的最佳剂量(例如，最佳预防剂量或最佳治疗剂量)可如下确定。将抗体以初始剂量给予需要治疗的受试者。测量受试者中抗体的血浆浓度。如果血浆浓度小于80 nm，则在随后施用中增加抗体的剂量。可以选择将抗体血浆浓度维持在约80nm以上的抗体剂量作为受试者的最佳剂量。在治疗过程期间可以监测受试者的肌酸磷酸激酶水平，并且基于肌酸磷酸激酶水平进一步调整该受试者的最佳剂量，例如，如果在治疗期间观察到肌酸磷酸激酶升高，可减少抗体的剂量。
[0196]
(iii)组合疗法
[0197]
如本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)可以与一种或多种其他疗法组合施用，以治疗与血浆激肽释放酶活性相关的疾病或病症，例如，本文所述的疾病或病症。例如，本文所述的抗体(例如dx
‑
2930)可以与另一抗血浆激肽释放酶fab或igg(例如，本文所述的另一fab或igg)、另一血浆激肽释放酶抑制剂、肽抑制剂、小分子抑制剂或外科手术一起治疗性或预防性使用(例如，在治疗过程之前、期间或之后)。可用于具有本文所述的血浆激肽释放酶结合抗体的组合疗法中的血浆激肽释放酶抑制剂的示例包括在，例如，wo 95/21601或wo 2003/103475中描述的血浆激肽释放酶抑制剂。
[0198]
一种或多种血浆激肽释放酶抑制剂可以与本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)组合使用。例如，组合可导致更低的所需抑制剂的剂量，使得减少副作用。
[0199]
如本文所述的抗体(例如，dx
‑
2930)可与一种或多种当前用于治疗hae的疗法组合施用。例如，dx
‑
2930抗体可与第二种抗hae治疗剂比如艾卡拉肽、c1酯酶抑制剂(例如，cinryze
tm
)、抑蛋白酶肽和/或缓激肽b2受体抑制剂(例如，艾替班特)共同使用。
[0200]
术语“组合”指使用两种或多种试剂或疗法来治疗同一患者，其中试剂或疗法的使用或作用在时间上是重叠的。试剂或疗法可同时(例如，作为单一制剂向患者施用或作为两个分开的制剂同时施用)或以任何顺序依次施用。依次施用是在不同时间给予的施用。一种试剂和另一试剂的施用之间的时间可以是几分钟、几小时、几天或几周。使用本文所述的血
浆激肽释放酶结合抗体也可用于减少另一疗法的剂量，例如，以减少与正在被施用的另一试剂相关的副作用。相应地，组合可包括以比在没有血浆激肽释放酶结合抗体的情况下使用的剂量低至少10、20、30或50％的剂量施用第二试剂。在一些实施方式中，受试者可如本文所述的在用第一剂量的抗pkal抗体(例如dx
‑
2930)的同时，给予c1抑制剂作为负荷iv剂量或sc剂量。然后，受试者可继续用抗pkal抗体治疗(不需要进一步剂量的c1
‑
抑制剂)。
[0201]
组合疗法可包括施用减少其他疗法的副作用的试剂。试剂可以是减少血浆激肽释放酶相关的疾病治疗的副作用的试剂。
[0202]
(iv)用于评估治疗方案的测定
[0203]
本公开的范围内还有的是用于评估本文所述的任何治疗方法的效力的测定方法。在一些实施方式中，可以在治疗过程之前和/或期间(例如，初始剂量之后)测量与hae相关的一种或多种生物标志物(例如，2
‑
链hmwk)的血浆或血清浓度，以评估治疗的效力。在一些实施方式中，在施用剂量后的时间点获得的与hae相关的一种或多种生物标志物的血浆或血清浓度(水平)与在施用剂量后或在施用初始剂量之前的较早时间点获得的样品中的生物标志物浓度进行比较。在一些实施方式中，生物标志物是2
‑
hmwk。
[0204]
生物标志物的水平可通过检测从受试者获得的血浆或血清样品中的生物标志物来测量，例如，通过免疫分析，比如蛋白质印迹测定或elisa，使用特异性检测生物标志物的抗体。在一些实施方式中，通过免疫测定评估从受试者获得的血浆或血清样品中2
‑
hwmk的水平。用于检测2
‑
hwmk的免疫测定中的抗体是本技术领域已知的，并且用于本文所述的方法的这种抗体的选择对本技术领域的普通技术人员来说将是显而易见的。
[0205]
无需进一步阐述，相信本领域技术人员可基于以上描述，在最大程度上利用本发明。因此，以下具体实施方式仅被解释为说明性的，而不是以任何方式限制本公开的其余部分。为了本文参考的目的或主题，本文列举的所有出版物通过引用并入。
实施例
[0206]
实施例1：人患者亚群中dx
‑
2930治疗的效力和安全性
[0207]
lanadelumab是用于注射的无菌的、无防腐剂的溶液，ph 6.0。使用以下药典成分配制活性成分，抗体dx
‑
2930：30mm二水合磷酸氢二钠、19.6mm一水柠檬酸、50mm l
‑
组氨酸、90mm氯化钠、0.01％聚山梨醇酯80。每个小瓶含有1ml溶液的150mg dx
‑
2930活性成分的标示浓度。测试产品以盲法方式通过皮下(sc)注射入上臂被施用。
[0208]
安慰剂由测试产品无活性制剂组成：30mm二水合磷酸氢二钠、19.6mm一水柠檬酸、50mm l
‑
组氨酸、90mm氯化钠，ph 6.0，与0.01％聚山梨醇酯80。将安慰剂剂量施用至随机分配至安慰剂治疗组的受试者，以及dx
‑
2930的剂量之间施用至随机分配至每4周300mg或150mg dx
‑
2930治疗组的受试者。
[0209]
基线处患有i/ii型hae并且≥1次发作/月的≥12岁的患者以2:2:2:3被随机分配至每4周(q4wks)150mg的lanadelumab、300mg q4wks、300mg q2wks或安慰剂。计划对具有足够数量的患者的亚组的泊松回归进行探索性分析。
[0210]
从第14天到第182天，评估了以下主要和次要的效力端点。研究的主要端点是hae发作的数量和平均hae发作率。次要端点包括，按顺序排列：
[0211]
1.需要急性治疗的hae发作的数量
[0212]
2.中等至恶劣的hae发作的数量
[0213]
探索性效力端点
[0214]
1.第14天后首次发作的时间，即受试者在第14天后无发作直到其首次发作的持续时间。
[0215]
2.每周高发病率hae发作数量；高发病率hae发作被定义为具有以下特征中的至少一次的任何发作：恶劣的，导致住院(住院观察<24小时除外)，血液动力学显著的(收缩压<90，需要iv补液(hydration)或与晕厥或接近晕厥相关的)；或喉部的。
[0216]
临床实验室测试
[0217]
涉及临床研究的患者进行实验室检测，其包括一般安全参数(血液学、凝固、尿分析和血清化学)、血清学、妊娠测试、c1
‑
inh功能测定、c4测定、c1q测定、pk样品、血浆抗药物抗体测试和pd样品。所有实验室测试都使用确立的、经过验证的方法进行。
[0218]
结果
[0219]
总体上，125名患者用lanadelumab(n＝84)或安慰剂(n＝41)治疗。对于所有患者和相应的对于所有患者亚组确定平均hae发作率。平均hae发作数量用于确定相对于接受安慰剂的患者，施用dx
‑
2930的患者的平均hae发作率减少的百分比。在所有患者和患者亚组中，相对于安慰剂，用dx
‑
2930一致地减少hae发作率。然而，如表2显示，对于几个患者亚组，当相对于以每四周300mg的dx
‑
2930(或以每四周150mg的dx
‑
2930)以每两周300mg的dx
‑
2930施用时，相对于安慰剂治疗可以观察到更大百分比的减少，即更有治疗效果的减少。具体地，相对于安慰剂，接受以每4周300mg的dx
‑
2930的＜18岁年龄的患者具有hae发作率20.5％的降低；接受以每2周300mg的dx
‑
2930的＜18岁年龄的患者具有约42个百分点的发作率的进一步降低(62.3％)(图3a)。相对于安慰剂，接受以每4周300mg的dx
‑
2930的40
‑
<65岁年龄的患者具有hae发作率71.5％的降低。接受以每2周300mg的dx
‑
2930的40
‑
<65岁年龄的患者具有约18个百分点的发作率的进一步降低(89.8％)。相对于安慰剂，接受以每4周300mg的dx
‑
2930的女性患者具有hae发作率69.6％的降低；接受以每2周300mg的dx
‑
2930的女性患者具有约16个百分点的进一步降低(85.8％)。相对于安慰剂，接受以每4周300mg的dx
‑
2930的有先前喉发作历史的患者具有hae发作率64.2％的降低；接受以每2周300mg的dx
‑
2930的有先前喉发作历史的患者具有约21个百分点的进一步降低(85.7％)。
[0220]
表2：相对于安慰剂治疗患者亚组中的降低百分比
[0221][0222]
尽管与安慰剂相比，所有用lanadelumab 300mg q2wks或q4wks治疗i/ii型hae的患者都经历临床意义和hae发作率的持续降低，但是某些亚群的患者，例如，女性、<18岁或在40
‑
65之间的患者，和具有至少有一次先前喉发作的那些患者，显示以每两周300mg的更好的治疗效力。
[0223]
还基于在导入期期间hae发作将患者分级来评估这些患者亚组中每种lanadelumab治疗方案的效力。如表3
‑
5和图1a
‑
1c中显示，在所有亚组中，与安慰剂相比，每种lanadelumab治疗方案导致hae发作率的显著降低。
[0224]
表3：导入时具有每月1次至<2次发作的患者(n＝38)
[0225][0226]
表4：导入时具有每月2次至<3次发作的患者(n＝22)
[0227]
[0228]
表5：导入时具有每月≥3次发作的患者(n＝65)
[0229][0230]
在只使用c1
‑
抑制剂(c1
‑
inh)作为长期预防的患者中，在停止每个方案的c1
‑
inh期间，基线的发作率相对于历史发作率(在最后3个月期间)有所增加(图2a)。在lanadelumab治疗期间的发作率小于历史发作率。在分别用lanadelumab 150mg q4wks、300mg q4wks和300mg q2wks治疗期间，相对于长期预防时的历史发作率，发作率平均下降68.8％、59.3％和82.1％。
[0231]
使用泊松回归模型当与安慰剂相比时，在仅使用c1
‑
inh用于预防的患者中和在未使用长期预防的患者中，lanadelumab的治疗效果一致(图2b)。在施用lanadelumab之前仅使用c1
‑
inh用于长期预防的患者中，与安慰剂相比，在lanadelumab 150mg q4wks、300mg q4wks和300mg q2wks方案中，平均发作率分别显著降低73.6％、71.6％和82.5％(p<0.001，对于所有比较)。
[0232]
对于受试者的亚组，比如基于年龄、性别、重量、hae类型(例如，i型或ii型)和先前喉发作，评估在与安慰剂相比，每个给药方案中施用lanadelumab的受试者的hae发作率的减少百分比。图4a
‑
4e和5。
[0233]
lanadelumab明显地抑制pkal激活，这显示在其对chmwk水平的作用上。在大的体重范围内的青少年和成年人中，观察到以每两周300mg的固定剂量方案具有最佳临床应答。
[0234]
实施例2：人青少年患者中的dx
‑
2930(lanadelumab)治疗的效力和安全性
[0235]
在该3期研究和开放性标签扩展(open
‑
label extension)(ole)研究中，研究了lanadelumab(一种靶向血浆激肽释放酶的单克隆抗体)在患有c1抑制剂缺乏的hae的青少年中的效力和安全性。
[0236]
对于3期研究，具有≥1的研究者确认的发作/4周的年龄≥12岁的患者被随机分配至安慰剂，或每4周150mg(150mg q4w)、300mg q4w或300mg q2w lanadelumab。在3期研究中，125名患者中有10名(8％)是青少年(≥12至<18岁)。在3期研究启动前，60.0％的患者仅接受c1
‑
inh用于长期预防。
[0237]
一般而言，开放性标签扩展研究中的转期受试者按照3期试验的治疗方案(即，每4周150mg、每4周300mg、每2周300mg)用lanadelumab治疗。在开放性标签扩展研究中，受试者在第0天接受皮下施用的300mg lanadelumab的单一开放性标签剂量。受试者没有接受任何另外的lanadelumab剂量，直到其第一次报告的并且经研究者证实的hae发作。一旦转期受试者报告了他或她的第一次hae发作，受试者尽快接受第二开放性标签剂量的lanadelumab，第一开放性标签剂量和第二开放性标签剂量之间最小有10天。在第二剂量之
后，转期受试者在治疗期的剩余时间内按预定给药继续接受重复的每2周皮下施用开放性标签300mg lanadelumab。治疗期从第一开放性标签剂量的日期起持续350天。
[0238]
开放性标签扩展研究中的非转期受试者在第0天接受开放性标签剂量的皮下施用的300mg lanadelumab，并且在整个治疗周期的持续时间按预定给药继续接受每2周皮下施用的开放性标签300mg lanadelumab。总计26次剂量被施用，最后剂量在第350天随访时施用。
[0239]
对于转期患者，62.5％在启动开放性标签扩展研究之前只接受c1
‑
inh。对于非转期的青少年患者，61.6％在启动研究之前接受长期预防疗法(仅c1
‑
inh或c1
‑
inh和口服治疗)(主要是仅c1
‑
inh；46.2％)。记录了每月发作率(mar)和其他治疗
‑
突发事件(teae)。
[0240]
三名青少年受试者具有13件非严重的治疗突发不良事件(teae)。在开放性标签扩展研究中，21/212名患者(9.9％)是青少年。转期患者(n＝8)和非转期患者(n＝13)在基线时分别具有1.65(1.158)和1.54(0.971)的平均(sd)每月发作率和在治疗周期期间的0.35(0.635)和0.07(0.166)，即
‑
84.371(18.9415)和
‑
94.893(10.5230)的平均(sd)百分比变化。九名患者具有65件非严重的lanadelumab相关的teae。
[0241]
来自该研究的结果在以下表6中提供。发现lanadelumab有效地减少患有hae的青少年的mar并且安全。
[0242]
表6：12岁和小于18岁之间青少年受试者的减少百分比。
[0243][0244]
在3期研究中，与接受安慰剂的患者(n＝4；0.548[0.224])相比，在用lanadelumab 300mg q4wks(n＝3；0.436[0.253])或lanadelumab 300mg q2wks(n＝2；0.207[0.148])治疗的患者中从第0天至第182天观察到较低的最小二乘法均值(se)hae发作率。由于150mg q4wks治疗组只包括1名青少年患者，所以没有评估这一点。估计的最小二乘法均值每月发作率比(与安慰剂相比)，为95％ci，有利于用lanadelumab的治疗，特别是300mg q2wks剂量方案(图3c)。在开放性标签扩展研究中，平均每月发作率中从基线的平均(sd)百分比变化对于转期患者(n＝8；在常规给药阶段)是84.37(18.94)并且对于非转期患者是
–
94.89(10.52)(n＝13；图3b)。
[0245]
在3期研究中，3名青少年患者具有13件非严重lanadelumab相关的teae(表7)。在用lanadelumab治疗期间，>1名患者发生的最常见的teae是注射部位疼痛(3名患者)和皮疹(2名患者)。在开放性标签扩展研究中，9名患者在0.63年的平均受试时间内具有65件非严重的lanadelumab相关的teae。在>1名患者中发生的最常见的teae是注射部位疼痛(9名患者)、病毒性上呼吸道感染(3名患者)、流感(2名患者)、链球菌性咽炎(2名患者)、上呼吸道感染(2名患者)、腹痛(2名患者)和头痛(2名患者)。在>1名患者中记录的与lanadelumab施用相关的最常见的teae是注射部位疼痛(3期研究中的3名患者和ole研究中的8名患者；表7)。这些情况与3期研究的总体人群中鉴定的情况相似。
[0246]
在3期研究及其ole中，都没有出现因teae而死亡或研究中止。
[0247]
表7：在治疗周期期间对于3期研究和其ole中的青少年患者的teae(排除hae发作)。
[0248][0249][0250][0251]
hae：遗传性血管性水肿；m＝事件数；teae＝治疗
‑
突发不良事件；q2wks＝每2周；q4wks＝每4周。teae显示在3期研究的治疗周期期间(第0天至第182天)。*在3期研究中，没有严重或恶劣的teae与lanadelumab相关。严重的teae被定义为任何导致死亡、威胁生命的经历、非计划内住院、持续/严重残疾/丧失能力、重要的医疗事件或为先天性异常/出生缺陷的经历的teae。恶劣的teae是被研究者分类为恶劣的(3级，导致活动明显受限，其中通常需要一些帮助，需要医疗干预/疗法，和/或可能住院)或威胁生命的(4级，导致活动极度受限，需要显著的帮助，需要显著的医疗干预/疗法和/或可能住院/临终关怀)的teae。
[0252]
总之，在3期研究和开放性标签扩展研究中，lanadelumab施用是耐受性良好的，并且减少了青少年受试者的每月发作率。
[0253]
其他实施方式
[0254]
本说明书中公开的所有特征可以以任何组合被组合。本说明书中公开的每个特征可以被用作相同、等同或相似目的的可替代的特征所取代。因此，除非另有明确地说明，公开的每个特征仅是等同或相似的特征的通用系列的示例。
[0255]
从以上描述中，本领域的技术人员可以很容易地确定本发明的基本特征，并且在不脱离其精神和范围的情况下，可以对本发明进行各种改变和修饰，以适应各种用途和条件。因此，其他实施方式也在权利要求内。
[0256]
等同方式
[0257]
虽然本文已经描述和阐释了几个发明性实施方式，但本领域技术人员将很容易设想各种其他手段和/或结构来执行功能和/或获得结果和/或本文所述的一个或多个优点，并且每个这种变化和/或修饰被认为是在本文所述的发明性实施方式的范围内。更一般地，本领域技术人员将容易认识到本文所述的所有参数、尺寸、材料和构型意指是示例性的，并且实际的参数、尺寸、材料和/或构型将取决于发明教导被使用的具体的一个或多个应用。本领域技术人员将认识到，或能够使用不超过常规实验来确定许多与本文所述的具体发明性实施方式的等同方式。因此，应该理解，上述实施方式仅通过示例呈现，在所附权利要求及其等同方式的范围内，发明性实施方式可以以具体描述和所要求保护的以外的其他方式实践。本公开的发明性实施方式针对本文所述的每个单独的特征、系统、物品、材料、套件和/或方法。另外，如果这些特征、系统、物品、材料、套件和/或方法不是相互不一致的，这种特征、系统、物品、材料、套件和/或方法的两个或更多个的任何组合包括在本公开的发明范围内。
[0258]
如本文所定义和使用的所有定义，应被理解为优于字典定义、以参考方式并入的文件中的定义和/或定义术语的普通含义。
[0259]
如本说明书和权利要求书中使用的不定冠词“a”(“一个/一种”)和“an”(“一个/一种”)，除非有明确的相反指示，应理解为“至少一个/一种”。
[0260]
如本说明书和权利要求书中使用的短语“和/或”应理解为意味着如此连在一起的元素的“一种或两种”，即在一些情况下是联合存在的元素，在其他情况下是不联合存在的元素。用“和/或”列出的多个元素应以相同方式解释，即如此联合的元素的“一个或多个”。除了由“和/或”句子具体确定的元素之外，其他元素可任选地存在，无论其与具体确定的那些元素相关或无关。因此，作为非限制性的示例，当与比如“包括”的开放式语言一起使用时，对“a和/或b”的提及可以在一个实施方式中仅指a(任选地包括b以外的元素)；在另一实施方式中，仅指b(任选地包括a以外的元素)；在仍另一实施方式中，同时指a和b(任选地包括其他元素)等等。
[0261]
如本说明书和权利要求书中使用的“或”应理解为与如以上定义的“和/或”具有相同的含义。例如，当分开列表中的条目时，“或”或“和/或”应被解释为是包含性的，即包括至少一个，但也包括大于一个元素的数量或列表，以及任选地另外未列出的术语。仅明确的相反指示的术语，例如“仅其中之一”或“恰好其中之一”，或当在权利要求书中使用“由
…
组成”时，将指包括元素的数量或列表的恰好一个元素。一般而言，如本文使用的术语“或”，当前面有排他性术语，比如“任一”、“其中之一”、“仅其中之一”或“恰好其中之一”时，应解释为指示排他性选择(即“一个或另一个，但不是两个”)。在权利要求书中使用的“基本上由
…
组成”应具有专利法领域使用的普通含义。
[0262]
如本说明书和权利要求书中使用的提及一个或多个元素的列表的短语“至少一个”，应理解为意味着选自元素列表中的任何一个或多个元素的至少一个元素，但不一定包括在元素列表内具体列出的每个和全部元素中的至少一个，并且也不排除元素列表中元素
的任何组合。该定义还允许，除了短语“至少一种”所指的元素列表内具体确定的元素之外，还可以任选地存在其他元素，无论这些元素与具体确定的元素相关或不相关。因此，作为非限制性示例，在一个实施方式中，“a和b的至少一个”(或等同地，“a或b的至少一个”，或等同地，“a和/或b的至少一个”)可以指至少一个，任选地包括大于一个a，而没有b存在(并且任选地包括b以外的元素)。在另一实施方式中，指至少一个，任选地包括大于一个b，而没有a存在(并且任选地包括a以外的元素)；在仍另一实施方式中，指至少一个，任选地包括大于一个a，和至少一个，任选地包括大于一个b(并且任选地包括其他元件)等等。
[0263]
还应理解，除非有明确的相反指示，在包括大于一个步骤或行为的本文所要求的任何方法方法中，方法的步骤或行为的顺序不一定限于方法的步骤或行为阐述的顺序。
[0264]
在以上权利要求书以及说明书中，所有的过渡短语比如“包括”(“comprising”)、“包括”(“including”)、“携带”、“具有”、“含有”、“涉及”、“保持”、“由
…
组成”(“composed of”)等都应理解为开放式的，即指包括但不限于。仅过渡短语“由
…
组成”和“基本上由
…
组成”各自应为美国专利局的专利审查程序手册的第2111.03节陈述的封闭或半封闭的过渡短语。

技术特征：
1.一种治疗遗传性血管性水肿(hae)发作或减少hae发作率的方法，所述方法包括：向需要其的人受试者施用包括与dx
‑
2930相同的互补决定区(cdr)的抗体进行第一治疗周期；其中，在第一治疗周期中，以每两周约300mg向所述人受试者以多剂量施用抗体；和其中所述人受试者患有、怀疑患有或处于hae的风险中并且是：(i)女性；(ii)小于18岁或在40
‑
65岁的年龄之间；(iii)已经经历至少一次先前喉hae发作；(iv)在第一治疗周期的第一剂量之前四周内已经具有1和2之间、2和3之间或大于3次的hae发作；和/或(v)在第一治疗周期之前已经接受用c1
‑
抑制剂的治疗。2.一种治疗遗传性血管性水肿(hae)发作或减少hae发作率的方法，所述方法包括向需要其的人受试者施用包括与dx
‑
2930相同的互补决定区(cdr)的抗体，其中所述人受试者是(i)12和18岁的年龄之间的青少年；和/或(ii)在抗体的第一剂量之前四周内已经具有2和3之间或大于3次的hae发作，和其中所述抗体以每四周约150mg、以每四周约300mg或以每两周约300mg施用至所述人受试者。3.权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述抗体是全长抗体或其抗原
‑
结合片段。4.根据权利要求1
‑
3的任一项所述的方法，其中所述抗体包括由seq id no:3所示的重链可变结构域和/或由seq id no:4所示的轻链可变结构域。5.根据权利要求1
‑
4的任一项所述的方法，其中所述抗体包括由seq id no:1所示的重链和由seq id no:2所示的轻链。6.根据权利要求1
‑
5的任一项所述的方法，其中所述抗体被配制在包括药学上可接受的载体的药物组合物中。7.根据权利要求6所述的方法，其中药学组合物包括磷酸钠、柠檬酸、组氨酸、氯化钠和聚山梨醇酯80。8.根据权利要求7所述的方法，其中磷酸钠以约30mm的浓度、柠檬酸以约19mm的浓度、组氨酸以约50mm的浓度、氯化钠以约90mm的浓度和聚山梨醇酯80以约0.01％。9.根据权利要求1
‑
8的任一项所述的方法，其中皮下施用所述抗体。10.根据权利要求1
‑
9的任一项所述的方法，其中所述人受试者具有i型hae或ii型hae。11.根据权利要求1
‑
10的任一项所述的方法，其中所述人受试者在第一治疗周期之前已经经历每年至少两次hae发作。12.根据权利要求1
‑
11的任一项所述的方法，其中所述人受试者在第一治疗周期之前已经接受一个或多个先前hae治疗。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述先前hae治疗包括c1
‑
抑制剂、血浆激肽释放酶抑制剂、缓激肽受体拮抗剂、雄激素、抗纤维蛋白溶解剂或其组合。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述先前hae治疗包括c1
‑
inh、艾卡拉肽、艾替班特、达那唑、氨甲环酸或其组合。15.根据权利要求12
‑
14的任一项所述的方法，其中所述方法包括用于一个或多个先前
hae治疗的渐进周期。16.根据权利要求15所述的方法，其中所述渐进周期是约2
‑
4周。17.根据权利要求12
‑
16的任一项所述的方法，其中在抗体的第一剂量之前或在抗体的第一剂量之后的三周内所述一个或多个先前hae治疗终止。18.根据权利要求1
‑
11的任一项所述的方法，其中所述人受试者无先前hae治疗。19.根据权利要求18所述的方法，其中所述人受试者在抗体的第一剂量之前至少两个周无先前hae治疗。20.根据权利要求1
‑
19的任一项所述的方法，其中所述人受试者在第一治疗周期的第一剂量之前四周内已经具有至少一次hae发作或在第一治疗周期的第一剂量之前八周内已经具有至少两次hae发作。21.根据权利要求1
‑
20的任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括在第一治疗周期之后向受试者施用抗体进行第二治疗周期。22.根据权利要求21所述的方法，其中第二治疗周期的第一剂量在第一治疗周期的最后剂量之后的约两周。23.根据权利要求21或权利要求22所述的方法，其中所述第二治疗周期包括以约300mg的一个或多个剂量的抗体。24.根据权利要求23所述的方法，其中所述第二治疗周期包括以每两周约300mg的多剂量的抗体。25.根据权利要求1
‑
24的任一项所述的方法，其中所述人受试者在第一治疗周期之前、在第一治疗周期期间和/或在第二治疗周期期间无hae的长期预防或涉及血管紧张素
‑
转换酶(ace)抑制剂、含雌激素的药物或雄激素的hae治疗。26.根据权利要求1
‑
25的任一项所述的方法，进一步包括：(a)在第一治疗周期之后向需要其的人受试者以约300mg的单剂量施用抗体；和(b)如果在(a)之后受试者经历hae发作，以约300mg的一个或多个剂量进一步向受试者施用抗体。27.根据权利要求26所述的方法，其中在步骤(b)中，以每两周约300mg向受试者施用多剂量的抗体。28.根据权利要求27所述的方法，其中步骤(b)的第一剂量在hae发作之后的一周内。29.根据权利要求26
‑
28的任一项所述的方法，其中(a)的单剂量和(b)的第一剂量相隔至少10天。
技术总结
本文提供了用特别的治疗方案，例如，以每两周约300mg，使用结合至活性血浆激肽释放酶的抗体治疗和预防某些人患者亚群中的遗传性血管性水肿发作的方法。示例性人患者亚群包括女性患者、小于18岁的患者、在40和小于65岁之间的患者、青少年患者、已经具有一次或多次先前喉发作的患者、在第一治疗周期的第一剂量之前在四周内已具有1次和2次之间、2次和3次之间或大于3次HAE发作的患者；和/或在第一治疗周期之前已接受用C1


技术研发人员：P
受保护的技术使用者：戴埃克斯有限公司
技术研发日：2019.08.30
技术公布日：2021/6/29