一种检测水产品中喹诺酮类药物的二合一胶体金试剂板的制作方法

1.本发明属于药物检测试剂板技术领域，尤其涉及一种检测水产品中喹诺酮类药物的二合一胶体金试剂板。


背景技术：

2.中国是世界第一水产养殖大国和水产品贸易大国，养殖水产品产量占全世界的70％左右，而水产品药物残留问题一直都是各方关注的焦点。喹诺酮类药物，又称吡酮酸类或吡啶酮酸类，是人工合成的含4
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喹诺酮基本结构的抗菌药，因其具有抗菌谱广、抗菌活性强、组织穿透力强、价格低廉、与其它抗菌药物无交叉耐药性等特点，曾被广泛应用于水产养殖业中。但不合理的用药可导致喹诺酮类药物及其代谢产物在水产品中的残留，进而引起食用者肠道菌群失衡或产生远期毒性作用及潜在“三致”(致癌、致畸、致突变)作用。近年来，随着社会对食品安全问题关注度逐渐增大，喹诺酮类药物在水产养殖等领域的应用开始受到限制，或制定了相应的最大残留限量(mrl)，例如欧盟已禁止诺氟沙星、环丙沙星在水产养殖业中使用；我国于禁止洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星4种喹诺酮类药物在食用动物中的使用，规定了动物肌肉中恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星的最高残留总限量。
3.故而开展对水产品中喹诺酮类药物残留的检测方法研究，实施对喹诺酮类药物残留的监控，对保障水产品质量安全、促进渔业可持续发展具有重要意义，药物残留的检测方法主要微生物法、仪器法和酶联免疫吸附法(elisa)。微生物法操作简便，但检测周期长，灵敏度低；仪器法，如高效液相色谱法(hplc)，虽然非常灵敏、准确，但仪器化程度高、样品处理较复杂、检测费用高等，不适合现场快速检测；elisa同样存在检测时间长、费用高、对检测人员要求较高等缺点，不利于在基层单位推广使用。


技术实现要素：

4.基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种检测水产品中喹诺酮类药物的二合一胶体金试剂板。
5.本发明提出的一种检测水产品中喹诺酮类药物的二合一胶体金试剂板，包括：pvc检测板，所述pvc检测板上设置有第一检测槽和第二检测槽，所述第一检测槽和第二检测槽的一端均设置有样孔，所述pvc检测板上设置有与第一检测槽和第二检测槽对应的输入板，两个所述输入板卡接在pvc检测板上，两个所述输入板的一端均与两个样孔相对应，两个所述样孔与第一检测槽和第二检测槽分别连通，所述样孔内设置有吸水棉，所述第二检测槽和第一检测槽内均设置有样品垫，所述吸水棉与样品垫通过棉布连接，所述第二检测槽和第一检测槽上均设置有吸附环，所述输入板上安装有滴加装置。
6.优选地，所述滴加装置装置包括吸管和插管，所述插管插设在输入管内，所述吸管远离插管的一端设置有活动机构，所述插管的下端设置有窄口。
7.优选地，所述活动机构包括管口，所述管口与吸管的上端固定连接，所述管口内螺
纹连接有盖子，所述盖子的中心开设有孔洞，所述密封棒卡接在孔洞处。
8.优选地，所述pvc检测板的两端均固定设置有辅助块，所述辅助块的一端与pvc检测板连接，所述pvc检测板的表面设置有波形纹，所述pvc检测板上设置有便签。
9.优选地，所述孔洞的内壁设置有硅胶层，所述密封棒的一端为球状。
10.优选地，所述输入板靠近样孔的一端设置有吸附环，所述吸附环为环形，所述吸附环的材质为透明橡胶。
11.优选地，所述输入管靠近吸管的一端内壁上设置有第一隔离膜，所述输入管靠近样孔的一端内壁上设置有第二隔离膜，所述第一隔离膜和第二隔离膜的中心均有缝隙。
12.优选地，两个所述输入板内均开设有卡槽，所述pvc检测板上安装有与卡槽对应的卡块，所述卡块与卡槽卡接，所述卡块的材质为硅胶。
13.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
14.1、本装置结构简单，操作简单，检测需要的时间也简单，能够有效的适应不同环境的需要，从而能够良好及时的得到检测结果，对样品缓冲液的反应灵敏度高，能够较好的得出检测结果，且使用了两个检验槽，可具体的检测某种喹诺酮类药物的存在与否，也可用于反复确认多次的检验；
15.2、本装置通过输入条间接的对样本缓冲液进行检测，能够有效的避免在检测样孔处出现污染，也能够精确的控制样品缓冲液的添加量。
16.3、本试剂板反应灵敏，对四环素、氯霉素、青霉素、庆大霉素、磺胺类抗生素的交叉反应率均小于1％，专一性，能较好满足不同层次人员需要，尤其适用于现场快速检测及大批量检测，具有广阔的应用前景，能够加速检验流程，同时不降低检验的精度和效果。
17.4、本装置通过查看检测线，检测线显示为红色且比质检线深或者一样深，表明为阴性，若检测线显示为红色且比质检线浅，则表明为阳性，若未显示出质控线，则说明检测样本失效，需要重新检测，检验结果的显示简单明了，方便使用。
附图说明
18.图1为本发明提出的一种检测水产品中喹诺酮类药物的二合一胶体金试剂板的俯视结构示意图；
19.图2为本发明提出的一种检测水产品中喹诺酮类药物的二合一胶体金试剂板的侧视结构示意图；
20.图3为图2中a处结构放大图；
21.图4为图2中b处结构放大图；
22.图5为图2中c处结构放大图。
23.图中：1 pvc检测板、2第一检测槽、3第二检测槽、4便签、5样孔、6输入板、7辅助块、8吸附环、9样品垫、10输入管、11插管、12吸管、13卡块、14窄口、15第一隔离膜、16管口、17盖子、18密封棒、19第二隔离膜、20连接圈、21吸水棉。
具体实施方式
24.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
25.参照图1
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5，一种检测水产品中喹诺酮类药物的二合一胶体金试剂板，包括：pvc检测板1，pvc检测板1上设置有第一检测槽2和第二检测槽3，第一检测槽2和第二检测槽3的一端均设置有样孔5，pvc检测板1上设置有与第一检测槽2和第二检测槽3对应的输入板6，两个输入板6卡接在pvc检测板1上，两个输入板6的一端均与两个样孔5相对应，两个样孔5与第一检测槽2和第二检测槽3分别连通，样孔5内设置有吸水棉21，第二检测槽3和第一检测槽2内均设置有样品垫9，吸水棉21与样品垫9通过棉布连接，第二检测槽3和第一检测槽2上均设置有吸附环8，输入板6上安装有滴加装置，滴加装置装置包括吸管12和插管11，插管11插设在输入管10内，吸管12远离插管11的一端设置有活动机构，插管11的下端设置有窄口14，活动机构可以用于添加额外的溶液，使用者通过按压吸管12吸取测验溶液，插管11插入到输入管10的一端，然后将溶液灌入输入管10内，进行检测，窄口14的存在可用于控制内外气压。
26.活动机构包括管口16，管口16与吸管12的上端固定连接，管口16内螺纹连接有盖子17，盖子17的中心开设有孔洞，密封棒18卡接在孔洞处，管口16、盖子17和密封棒18封住吸管12的上端，当需要通过继续添加液体让测验结果更加明显的时候，使用者可以将盖子17从管口16中旋出，继而添加液体继续测验，在添加液体的过程中，对吸管12一次按压能够输入的量有效，拔出密封棒18，填充空气使得内外气压一致，方便进行下一次的液体输入，pvc检测板1的两端均固定设置有辅助块7，辅助块7的一端与pvc检测板1连接，pvc检测板1的表面设置有波形纹，pvc检测板1上设置有便签4，两端设置的辅助块7便于使用者拿起来，波形纹具有防滑的效果，便签4上显示检测结果的参考值，孔洞的内壁设置有硅胶层，密封棒18的一端为球状，内壁为硅胶，材质柔软便于密封和卡接，球状的一端便于使用者操作，输入板6靠近样孔5的一端设置有吸附环8，吸附环8为环形，吸附环8的材质为透明橡胶。当输入管10的一端与样孔5正对的时候，稍微进行按压能够通过连接圈20与pvc检测板1吸附起来，避免液体向周围遗漏；
27.输入管10靠近吸管12的一端内壁上设置有第一隔离膜15，输入管10靠近样孔5的一端内壁上设置有第二隔离膜19，第一隔离膜15和第二隔离膜19的中心均有缝隙，第一隔离膜15和第二隔离膜19均用于密封，当插管11接触到第一隔离膜15的时候，对第一隔离膜15具有作用力，在该作用力下，第一隔离膜15上的缝隙将会打开，从而需要检测的液体就可以顺着缝隙输入到输入管10内，当输入管10内被填充入液体之后，输入管10内的空气不断的被挤压，第二隔离膜19上的缝隙也将会被打开，第一隔离膜15和第二隔离膜19均用于密封，避免其他杂质进入到输入管10内而影响测验结果，两个输入板6内均开设有卡槽，pvc检测板1上安装有与卡槽对应的卡块13，卡块13与卡槽卡接，卡块13的材质为硅胶，硅胶材质具有一定的弹性，卡块13卡接在输入板6内，利用弹性实现两者连接的紧密性，同时也便于安装和拆卸。
28.本实施例中可选的技术方案，将用于检测喹诺酮类药物的单克隆抗体置于第二检测槽3和第一检测槽2内，第二检测槽3和第一检测槽2内可以是对相同喹诺酮类药物的单克隆抗体，也可以是不同喹诺酮类药物的单克隆抗体，使用则会通过输入板6精确的控制样品缓冲液的容量，通过转动盖子17从管口16上取下来，将破碎离心后的样品缓冲液倒置与吸管12内，插管11插入到输入管10的一端，第一隔离膜15上的缝隙将会被撑开，可伸缩的吸管12能够灵活的存储不同量的样品，向下按压吸管12，吸管12内的样品缓冲液穿过第一隔离
膜15，输送到输入管10内，并且从输入管10的另一端输出，输入管10内不断输入样品缓冲液；
29.其中载体蛋白偶联物的制备，首先需要qns半抗原的合成，取吡哌酸600mg溶于30ml水中，加入乙基碳二亚胺(edc)室温反应1h，再加入对氨基苯乙酸反应，然后经酸洗提取出qns半抗原；再将qns半抗原与载体蛋白偶联物的合成，先称取bsa溶解于pbs(0.05mol/l，ph 7.4)中，再加入二甲基甲酰胺(dmf)；然后，称取适量qns半抗原，溶于dmf中，向qns半抗原溶液中加入三丁胺，混匀后加入氯甲酸异丁酯，于4℃下磁力搅拌30min，,搅拌下，反应液ph值至9.0即可，偶联物冷冻干燥后，
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20℃下冻存备用，即为qns半抗原
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bsa偶联物；然后进行恩诺沙星
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牛血清白蛋白偶联物的合成，将牛血清蛋白(bsa)溶解在pbs(0.01mol/l，ph 5.0)中，分别加入edc和恩诺沙星，室温反应3h，透析，此为enr
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bsa偶联物。
30.其中抗喹诺酮类药物单克隆抗体的制备过程为，将qns半抗原
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bsa偶联物与等体积的弗氏完全佐剂乳化后皮下注射balb/c小鼠，细胞融合按常规方法进行，将多发性骨髓瘤细胞与免疫脾细胞按1：10的比例混合，在50％聚乙二醇作用下融合，悬浮，分种于培养板中，进行培养，待细胞融合完成后，待细胞生长到培养孔面积的1/4时，筛选杂交瘤细胞，初筛选择10mg/l qns半抗原
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bsa包被酶联板，被测孔加培养上清，进行opd显色，筛选出的阳性孔再用卵清蛋白偶联物包被的酶联板进行阻断间接elisa，将细胞培养上清与喹诺酮类药物溶液等量混合，反应作为对照试验，若喹诺酮类药物阻断后的od值将至对照孔的50％以下，则判为阳性孔，经2
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3次检测都呈阳性的孔，立即用有限稀释法进行克隆化。通过这种方式制备出来的试剂能够对四环素、氯霉素、青霉素、庆大霉素、磺胺类抗生素的交叉反应率均小于1％，检测的范围很广，能够有效的适应不同的环境需要。
31.样品缓冲液首先会进入到样孔5内，将样孔5浸湿，样品缓冲液顺着吸水棉21向下浸染样品垫9，样品垫9上有检测喹诺酮类药物的单克隆抗体，浸染完毕后，等待样孔5
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输入管10min，通过吸附环8观察检测结果，检测线显示为红色且比质检线深或者一样深，表明为阴性，若检测线显示为红色且比质检线浅，则表明为阳性，若未显示出质控线，则说明检测样本失效，需要重新检测。
32.以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

技术特征：
1.一种检测水产品中喹诺酮类药物的二合一胶体金试剂板，其特征在于，包括：pvc检测板(1)，所述pvc检测板(1)上设置有第一检测槽(2)和第二检测槽(3)，所述第一检测槽(2)和第二检测槽(3)的一端均设置有样孔(5)，所述pvc检测板(1)上设置有与第一检测槽(2)和第二检测槽(3)对应的输入板(6)，两个所述输入板(6)卡接在pvc检测板(1)上，两个所述输入板(6)的一端均与两个样孔(5)相对应，两个所述样孔(5)与第一检测槽(2)和第二检测槽(3)分别连通，所述样孔(5)内设置有吸水棉(21)，所述第二检测槽(3)和第一检测槽(2)内均设置有样品垫(9)，所述吸水棉(21)与样品垫(9)通过棉布连接，所述第二检测槽(3)和第一检测槽(2)上均设置有吸附环(8)，所述输入板(6)上安装有滴加装置。2.根据权利要求1所述的一种检测水产品中喹诺酮类药物的二合一胶体金试剂板，其特征在于，所述滴加装置装置包括吸管(12)和插管(11)，所述插管(11)插设在输入管(10)内，所述吸管(12)远离插管(11)的一端设置有活动机构，所述插管(11)的下端设置有窄口(14)。3.根据权利要求2所述的一种检测水产品中喹诺酮类药物的二合一胶体金试剂板，其特征在于，所述活动机构包括管口(16)，所述管口(16)与吸管(12)的上端固定连接，所述管口(16)内螺纹连接有盖子(17)，所述盖子(17)的中心开设有孔洞，所述密封棒(18)卡接在孔洞处。4.根据权利要求1所述的一种检测水产品中喹诺酮类药物的二合一胶体金试剂板，其特征在于，所述pvc检测板(1)的两端均固定设置有辅助块(7)，所述辅助块(7)的一端与pvc检测板(1)连接，所述pvc检测板(1)的表面设置有波形纹，所述pvc检测板(1)上设置有便签(4)。5.根据权利要求3所述的一种检测水产品中喹诺酮类药物的二合一胶体金试剂板，其特征在于，所述孔洞的内壁设置有硅胶层，所述密封棒(18)的一端为球状。6.根据权利要求1所述的一种检测水产品中喹诺酮类药物的二合一胶体金试剂板，其特征在于，所述输入板(6)靠近样孔(5)的一端设置有吸附环(8)，所述吸附环(8)为环形，所述吸附环(8)的材质为透明橡胶。7.根据权利要求1所述的一种检测水产品中喹诺酮类药物的二合一胶体金试剂板，其特征在于，所述输入管(10)靠近吸管(12)的一端内壁上设置有第一隔离膜(15)，所述输入管(10)靠近样孔(5)的一端内壁上设置有第二隔离膜(19)，所述第一隔离膜(15)和第二隔离膜(19)的中心均有缝隙。8.根据权利要求1所述的一种检测水产品中喹诺酮类药物的二合一胶体金试剂板，其特征在于，两个所述输入板(6)内均开设有卡槽，所述pvc检测板(1)上安装有与卡槽对应的卡块(13)，所述卡块(13)与卡槽卡接，所述卡块(13)的材质为硅胶。
技术总结
本发明公开了一种检测水产品中喹诺酮类药物的二合一胶体金试剂板，包括：PVC检测板，所述PVC检测板上设置有第一检测槽和第二检测槽，所述第一检测槽和第二检测槽的一端均设置有样孔，所述PVC检测板上设置有与第一检测槽和第二检测槽对应的输入板，两个所述输入板卡接在PVC检测板上，两个所述输入板的一端均与两个样孔相对应，两个所述样孔与第一检测槽和第二检测槽分别连通。本装置结构简单，操作简单，检测需要的时间也简单，能够有效的适应不同环境的需要，从而能够良好及时的得到检测结果，对样品缓冲液的反应灵敏度高，能够较好的得出检测结果，且使用了两个检验槽，可具体的检测某种喹诺酮类药物的存在与否，也可用于反复确认。复确认。复确认。


技术研发人员：喻双平
受保护的技术使用者：喻双平
技术研发日：2021.03.25
技术公布日：2021/6/29