一种快速进行烟草黑胫病抗性鉴定的方法与流程

专利2022-05-10  1



1.本发明涉及生物学领域,具体为一种快速进行烟草黑胫病抗性鉴定的方法。


背景技术:

2.烟草黑胫病由寄生疫霉菌引起,寄生疫霉菌隶属于茸鞭生物界卵菌门疫霉属。烟草黑胫病俗称烟草疫病,为世界性的烟草病害,在美洲、非洲和亚洲都有发生,是烟草生产上最具毁灭性的病害之一,每年给烟草生产造成巨大损失。目前在我国除黑龙江以外的各烟区均有发生,发生较重的省份有云南、贵州、四川、河南、山东等地。烟草黑胫病可以在烟草的任何生育阶段侵染为害。苗期受害呈猝倒状;旺长期烟株发病时茎秆上无明显症状,而茎基部出现缢缩的黑色坏死斑,根系变黑死亡,导致叶片迅速凋萎,变黄下垂,呈穿白大褂状,严重时全株死亡。纵刨病茎,可见髓部干缩呈褐色碟片状,其间有白色菌丝。因为黑胫病对烟草生产造成的巨大危害,对黑胫病的防治一直受到高度重视。长期以来,黑胫病的防治一直以来以化学防治为主。但化学防治对黑胫病的防治效果有限,治标不治本,且易引起环境污染,培育抗病品种是防治黑胫病的根本措施,对烟草种质资源进行抗病鉴定是培育抗病品种的重要环节。目前,对烟草种质资源的抗性鉴定主要在大田中进行,大田鉴定需要大量的人力物力财力,而且鉴定过程从春天播种到秋天调查,需要几个月时间,极不利于烟草抗病品质的筛选。


技术实现要素:

3.(一)解决的技术问题
4.针对现有技术的不足,本发明提供了一种快速进行烟草黑胫病抗性鉴定的方法,解决了烟草种质资源的抗性鉴定主要在大田中进行,大田鉴定需要大量的人力物力财力,而且鉴定时间过长的问题。
5.(二)技术方案
6.为实现以上目的,本发明通过以下技术方案予以实现:一种快速进行烟草黑胫病抗性鉴定的方法,按照以下步骤进行操作:
7.步骤1:配置ms固体培养基并倒板;
8.步骤2:将进行鉴定的烟草品种种子进行消毒;
9.步骤3:将消过毒的烟草种子播种在固体培养基上;
10.步骤4:将烟草黑胫病菌种活化后待用;
11.步骤5:待烟草种子在ms培养基上长到4

5片真叶时,将黑胫病菌饼接种到培养基上;
12.步骤6:一周后调查各烟草品种的发病情况,计算出病情指数,即可对烟草品种进行抗性评价。
13.优选的,所述步骤2进一步包括将不同品种烟草种子分别用75%酒精消毒10分钟,再用灭菌水清洗两次。
14.优选的,所述步骤4进一步包括待烟草幼苗长到5

6片真叶时,将黑胫病菌饼接种到培养皿中,每个培养皿放一个菌饼。
15.(三)有益效果
16.本发明提供了一种快速进行烟草黑胫病抗性鉴定的方法。具备以下有益效果:
17.该快速进行烟草黑胫病抗性鉴定的方法,本方法在实验室即可完成,不需要在大田的环境中进行鉴定,在烟草的抗黑胫病鉴定中节省了大量的人力财力物力,并大大缩短了时间,提高了鉴定效率。
附图说明
18.图1为本发明流程图。
具体实施方式
19.下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明。
20.本发明实施例提供一种快速进行烟草黑胫病抗性鉴定的方法,实验所用材料和试剂,材料:包括抗性对照品种革新3号、感病对照品种小黄金,待检测品种a1、a2、a3、a4、a5、a6、烟草黑胫病菌;试剂:ms固体培养基、75%酒精、灭菌水、燕麦培养基。
21.实施例一:一种快速进行烟草黑胫病抗性鉴定的方法,按照以下步骤进行操作:
22.步骤1:配置ms固体培养基,倒入培养皿,凝固;
23.步骤2、取待测a1种子置于无菌培养皿中,用75%酒精消毒10分钟,再用灭菌水清洗两次。将消毒后的烟草种子按不同品种分别播种在培养皿上;
24.步骤3:在燕麦培养基上活化烟草黑胫病菌;
25.步骤4:待烟草幼苗长到5

6片真叶时,将黑胫病菌饼接种到培养皿中,每个培养皿放1个菌饼;
26.步骤5:待5

6天后调查发病情况,对比抗性对照品种革新3号、感病对照品种小黄金,计算发病指数,对品种抗病性进行评价。
27.实施例二:一种快速进行烟草黑胫病抗性鉴定的方法,按照以下步骤进行操作:
28.步骤1:配置ms固体培养基,倒入培养皿,凝固;
29.步骤2、取待测a2种子置于无菌培养皿中,用75%酒精消毒10分钟,再用灭菌水清洗两次。将消毒后的烟草种子按不同品种分别播种在培养皿上;
30.步骤3:在燕麦培养基上活化烟草黑胫病菌;
31.步骤4:待烟草幼苗长到5

6片真叶时,将黑胫病菌饼接种到培养皿中,每个培养皿放1个菌饼;
32.步骤5:待5

6天后调查发病情况,对比抗性对照品种革新3号、感病对照品种小黄金,计算发病指数,对品种抗病性进行评价。
33.实施例三:一种快速进行烟草黑胫病抗性鉴定的方法,按照以下步骤进行操作:
34.步骤1:配置ms固体培养基,倒入培养皿,凝固;
35.步骤2、取待测a3种子置于无菌培养皿中,用75%酒精消毒10分钟,再用灭菌水清洗两次。将消毒后的烟草种子按不同品种分别播种在培养皿上;
36.步骤3:在燕麦培养基上活化烟草黑胫病菌;
37.步骤4:待烟草幼苗长到5

6片真叶时,将黑胫病菌饼接种到培养皿中,每个培养皿放1个菌饼;
38.步骤5:待5

6天后调查发病情况,对比抗性对照品种革新3号、感病对照品种小黄金,计算发病指数,对品种抗病性进行评价。
39.实施例四:一种快速进行烟草黑胫病抗性鉴定的方法,按照以下步骤进行操作:
40.步骤1:配置ms固体培养基,倒入培养皿,凝固;
41.步骤2、取待测a4种子置于无菌培养皿中,用75%酒精消毒10分钟,再用灭菌水清洗两次。将消毒后的烟草种子按不同品种分别播种在培养皿上;
42.步骤3:在燕麦培养基上活化烟草黑胫病菌;
43.步骤4:待烟草幼苗长到5

6片真叶时,将黑胫病菌饼接种到培养皿中,每个培养皿放1个菌饼;
44.步骤5:待5

6天后调查发病情况,对比抗性对照品种革新3号、感病对照品种小黄金,计算发病指数,对品种抗病性进行评价。
45.实施例五:一种快速进行烟草黑胫病抗性鉴定的方法,按照以下步骤进行操作:
46.步骤1:配置ms固体培养基,倒入培养皿,凝固;
47.步骤2、取待测a5种子置于无菌培养皿中,用75%酒精消毒10分钟,再用灭菌水清洗两次。将消毒后的烟草种子按不同品种分别播种在培养皿上;
48.步骤3:在燕麦培养基上活化烟草黑胫病菌;
49.步骤4:待烟草幼苗长到5

6片真叶时,将黑胫病菌饼接种到培养皿中,每个培养皿放1个菌饼;
50.步骤5:待5

6天后调查发病情况,对比抗性对照品种革新3号、感病对照品种小黄金,计算发病指数,对品种抗病性进行评价。
51.实施例六:一种快速进行烟草黑胫病抗性鉴定的方法,按照以下步骤进行操作:
52.步骤1:配置ms固体培养基,倒入培养皿,凝固;
53.步骤2、取待测a6种子置于无菌培养皿中,用75%酒精消毒10分钟,再用灭菌水清洗两次。将消毒后的烟草种子按不同品种分别播种在培养皿上;
54.步骤3:在燕麦培养基上活化烟草黑胫病菌;
55.步骤4:待烟草幼苗长到5

6片真叶时,将黑胫病菌饼接种到培养皿中,每个培养皿放1个菌饼;
56.步骤5:待5

6天后调查发病情况,对比抗性对照品种革新3号、感病对照品种小黄金,计算发病指数,对品种抗病性进行评价。
57.结果对比试验:
58.在模拟大田种植相同光照、温度和湿度条件下得出不同品种材料的鉴定结果。
59.抗性评定按国家标准gb/t23224

2008规定进行,具体标准如下:
60.高抗或免疫(i):病情指数为0;
61.抗病(r):病情指数为0.1

20.0;
62.中抗(mr):病情指数为20.0

40.0;
63.中感(ms):病情指数为40.1

60.0;
64.感病(s):病情指数为60.1

80
65.高感(hs):病情指数为80.1

100
66.表1检测品种名称以及对照
67.待检测品种名称病情指数抗性a123.22mra270.31sa358.92msa425.31mra519.69ra635.12mr革新3号(抗病对照)15.89r小黄金1025(感病对照)69.53s
68.以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
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