IL-11抗体的制作方法

il
‑
11抗体
1.本申请要求2018年6月13日提交的gb1809699.0的优先权，出于所有目的，其内容和元素通过引用并入本文。
发明领域
2.本发明涉及分子生物学领域，更具体地涉及抗体技术。本发明还涉及药物治疗和预防方法。特别地，本发明提供了能够结合il
‑
11的抗原结合分子。
3.发明背景
4.已显示il
‑
11介导的信号传导可刺激造血作用、刺激破骨细胞活性、刺激神经发生、抑制脂肪生成、减少促炎性细胞因子表达、调节细胞外基质(ecm)代谢，并介导胃肠道上皮细胞的正常生长控制。白介素11(il
‑
11)的生理作用仍不清楚。il
‑
11与造血细胞的活化和血小板的产生有最密切的联系，但也被认为具有促炎性、抗炎性、促血管生成性，并且对肿瘤形成很重要。
5.发明概述
6.在第一方面，本发明提供了一种任选分离的抗原结合分子，其能够结合il
‑
11，其中所述抗原结合分子包括：
7.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
8.具有如seq id no:36或37所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
9.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
10.具有如seq id no:39或40所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
11.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
12.具有如seq id no:41、42或43所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
13.具有如seq id no:44、45或46所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
14.具有如seq id no:80或81所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
15.在一些实施方式中，所述抗原结合分子包括：
16.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
17.具有如seq id no:36所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
18.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
19.具有如seq id no:39所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
20.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
21.具有如seq id no:41所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
22.具有如seq id no:44所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
23.具有如seq id no:80所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
24.在一些实施方式中，所述抗原结合分子包括：
25.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
26.具有如seq id no:37所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
27.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
28.具有如seq id no:40所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
29.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
30.具有如seq id no:42所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
31.具有如seq id no:45所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
32.具有如seq id no:81所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
33.在一些实施方式中，所述抗原结合分子包括：
34.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
35.具有如seq id no:37所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
36.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
37.具有如seq id no:40所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
38.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
39.具有如seq id no:43所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
40.具有如seq id no:46所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
41.具有如seq id no:80所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
42.在一些实施方式中，所述抗原结合分子包括：
43.(a)
44.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
45.具有如seq id no:36所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
46.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
47.具有如seq id no:39所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
48.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
49.具有如seq id no:41所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
50.具有如seq id no:44所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
51.具有如seq id no:48所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
52.(b)
53.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
54.具有如seq id no:36所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
55.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
56.具有如seq id no:39所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
57.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
58.具有如seq id no:41所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
59.具有如seq id no:44所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
60.具有如seq id no:49所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
61.(c)
62.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
63.具有如seq id no:36所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
64.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
65.具有如seq id no:39所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
66.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
67.具有如seq id no:41所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
68.具有如seq id no:44所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
69.具有如seq id no:50所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
70.(d)
71.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
72.具有如seq id no:36所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
73.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
74.具有如seq id no:39所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
75.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
76.具有如seq id no:41所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
77.具有如seq id no:44所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
78.具有如seq id no:51所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
79.(e)
80.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
81.具有如seq id no:36所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
82.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
83.具有如seq id no:39所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
84.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
85.具有如seq id no:41所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
86.具有如seq id no:44所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
87.具有如seq id no:52所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
88.(f)
89.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
90.具有如seq id no:36所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
91.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
92.具有如seq id no:39所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
93.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
94.具有如seq id no:41所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
95.具有如seq id no:44所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
96.具有如seq id no:53所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
97.(g)
98.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
99.具有如seq id no:36所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
100.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
101.具有如seq id no:39所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
102.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
103.具有如seq id no:41所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
104.具有如seq id no:44所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
105.具有如seq id no:54所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；或
106.(h)
107.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
108.具有如seq id no:36所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
109.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
110.具有如seq id no:39所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
111.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
112.具有如seq id no:41所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
113.具有如seq id no:44所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
114.具有如seq id no:55所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
115.在一些实施方式中，所述抗原结合分子包括：
116.(a)
117.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
118.具有如seq id no:37所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
119.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
120.具有如seq id no:40所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
121.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
122.具有如seq id no:42所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
123.具有如seq id no:45所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
124.具有如seq id no:57所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
125.(b)
126.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
127.具有如seq id no:37所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
128.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
129.具有如seq id no:40所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
130.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
131.具有如seq id no:42所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
132.具有如seq id no:45所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
133.具有如seq id no:58所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
134.(c)
135.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
136.具有如seq id no:37所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
137.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
138.具有如seq id no:40所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
139.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
140.具有如seq id no:42所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
141.具有如seq id no:45所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
142.具有如seq id no:59所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
143.(d)
144.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
145.具有如seq id no:37所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
146.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
147.具有如seq id no:40所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
148.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
149.具有如seq id no:42所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
150.具有如seq id no:45所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
151.具有如seq id no:60所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
152.(e)
153.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
154.具有如seq id no:37所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
155.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
156.具有如seq id no:40所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
157.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
158.具有如seq id no:42所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
159.具有如seq id no:45所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
160.具有如seq id no:61所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
161.(f)
162.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
163.具有如seq id no:37所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
164.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
165.具有如seq id no:40所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
166.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
167.具有如seq id no:42所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
168.具有如seq id no:45所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
169.具有如seq id no:62所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
170.(g)
171.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
172.具有如seq id no:37所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
173.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
174.具有如seq id no:40所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
175.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
176.具有如seq id no:42所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
177.具有如seq id no:45所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
178.具有如seq id no:63所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；或
179.(h)
180.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
181.具有如seq id no:37所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
182.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
183.具有如seq id no:40所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
184.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
185.具有如seq id no:42所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
186.具有如seq id no:45所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
187.具有如seq id no:64所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
188.在一些实施方式中，所述抗原结合分子包括：
189.(a)
190.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
191.具有如seq id no:37所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
192.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
193.具有如seq id no:40所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
194.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
195.具有如seq id no:43所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
196.具有如seq id no:46所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
197.具有如seq id no:48所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
198.(b)
199.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
200.具有如seq id no:37所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
201.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
202.具有如seq id no:40所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
203.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
204.具有如seq id no:43所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
205.具有如seq id no:46所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
206.具有如seq id no:49所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
207.(c)
208.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
209.具有如seq id no:37所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
210.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
211.具有如seq id no:40所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
212.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
213.具有如seq id no:43所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
214.具有如seq id no:46所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
215.具有如seq id no:50所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
216.(d)
217.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
218.具有如seq id no:37所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
219.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
220.具有如seq id no:40所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
221.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
222.具有如seq id no:43所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
223.具有如seq id no:46所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
224.具有如seq id no:51所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
225.(e)
226.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
227.具有如seq id no:37所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
228.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
229.具有如seq id no:40所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
230.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
231.具有如seq id no:43所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
232.具有如seq id no:46所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
233.具有如seq id no:52所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
234.(f)
235.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
236.具有如seq id no:37所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
237.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
238.具有如seq id no:40所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
239.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
240.具有如seq id no:43所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
241.具有如seq id no:46所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
242.具有如seq id no:53所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
243.(g)
244.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
245.具有如seq id no:37所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
246.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
247.具有如seq id no:40所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
248.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
249.具有如seq id no:43所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
250.具有如seq id no:46所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
251.具有如seq id no:54所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；或
252.(h)
253.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
254.具有如seq id no:37所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
255.具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
256.具有如seq id no:40所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
257.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
258.具有如seq id no:43所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
259.具有如seq id no:46所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
260.具有如seq id no:55所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
261.在一些实施方式中，所述抗原结合分子包括：
262.vh区，其包含与seq id no:6、8或10所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
263.vl区，其包含与seq id no:82、83或84所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。
264.在一些实施方式中，所述抗原结合分子包括：
265.vh区，其包含与seq id no:6所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
266.vl区，其包含与seq id no:82所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。
267.在一些实施方式中，所述抗原结合分子包括：
268.vh区，其包含与seq id no:8所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
269.vl区，其包含与seq id no:83所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。
270.在一些实施方式中，所述抗原结合分子包括：
271.vh区，其包含与seq id no:10所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
272.vl区，其包含与seq id no:84所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。
273.在一些实施方式中，所述抗原结合分子包括：
274.(a)
275.vh区，其包含与seq id no:6所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
276.vl区，其包含与seq id no:12所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；
277.(b)
278.vh区，其包含与seq id no:6所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
279.vl区，其包含与seq id no:13所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸；
280.(c)
281.vh区，其包含与seq id no:6所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
282.vl区，其包含与seq id no:14所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸；
283.(d)
284.vh区，其包含与seq id no:6所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
285.vl区，其包含与seq id no:15所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基
酸；
286.(e)
287.vh区，其包含与seq id no:6所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
288.vl区，其包含与seq id no:16所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸；
289.(f)
290.vh区，其包含与seq id no:6所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
291.vl区，其包含与seq id no:17所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸；
292.(g)
293.vh区，其包含与seq id no:6所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
294.vl区，其包含与seq id no:18所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；或
295.(h)
296.vh区，其包含与seq id no:6所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
297.vl区，其包含与seq id no:19所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。
298.在一些实施方式中，所述抗原结合分子包括：
299.(a)
300.vh区，其包含与seq id no:8所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
301.vl区，其包含与seq id no:20所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；
302.(b)
303.vh区，其包含与seq id no:8所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
304.vl区，其包含与seq id no:21所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；
305.(c)
306.vh区，其包含与seq id no:8所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
307.vl区，其包含与seq id no:22所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；
308.(d)
309.vh区，其包含与seq id no:8所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基
酸序列；和
310.vl区，其包含与seq id no:23所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；
311.(e)
312.vh区，其包含与seq id no:8所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
313.vl区，其包含与seq id no:24所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；
314.(f)
315.vh区，其包含与seq id no:8所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
316.vl区，其包含与seq id no:25所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；
317.(g)
318.vh区，其包含与seq id no:8所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
319.vl区，其包含与seq id no:26所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；或
320.(h)
321.vh区，其包含与seq id no:8所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
322.vl区，其包含与seq id no:27所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。
323.在一些实施方式中，所述抗原结合分子包括：
324.(a)
325.vh区，其包含与seq id no:10所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
326.vl区，其包含与seq id no:28所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；
327.(b)
328.vh区，其包含与seq id no:10所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
329.vl区，其包含与seq id no:29所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；
330.(c)
331.vh区，其包含与seq id no:10所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
332.vl区，其包含与seq id no:30所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；
333.(d)
334.vh区，其包含与seq id no:10所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
335.vl区，其包含与seq id no:31所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；
336.(e)
337.vh区，其包含与seq id no:10所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
338.vl区，其包含与seq id no:32所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；
339.(f)
340.vh区，其包含与seq id no:10所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
341.vl区，其包含与seq id no:33所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；
342.(g)
343.vh区，其包含与seq id no:10所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
344.vl区，其包含与seq id no:34所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；或
345.(h)
346.vh区，其包含与seq id no:10所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
347.vl区，其包含与seq id no:35所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。
348.本发明还提供了一种任选分离的抗原结合分子，其能够结合il
‑
11，其中所述抗原结合分子包括：
349.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
350.具有如seq id no:95所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
351.具有如seq id no:96所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
352.具有如seq id no:97所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
353.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
354.具有如seq id no:98或101所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
355.具有如seq id no:99或102所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
356.具有如seq id no:100或103所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
357.在一些实施方式中，所述抗原结合分子包括：
358.(a)
359.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
360.具有如seq id no:95所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
361.具有如seq id no:96所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
362.具有如seq id no:97所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
363.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
364.具有如seq id no:98所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
365.具有如seq id no:99所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
366.具有如seq id no:100所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3；或
367.(b)
368.(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
369.具有如seq id no:95所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
370.具有如seq id no:96所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
371.具有如seq id no:97所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
372.(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
373.具有如seq id no:101所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
374.具有如seq id no:102所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
375.具有如seq id no:103所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
376.在一些实施方式中，所述抗原结合分子包括：
377.vh区，其包含与seq id no:91、92、116、117、118、119或120所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
378.vl区，其包含与seq id no:93、94、121、122、123、124、125、126、127或128所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。
379.在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:220所示的氨基酸序列具有至少70％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:223所示的氨基酸序列具有至少70％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:224所示的氨基酸序列具有至少70％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:236至240之一所示的氨基酸序列具有至少70％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:220或223所示的氨基酸序列具有至少70％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列；并且所述抗原结合分子包含多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:224、236、237、238、239或240之一所示的氨基酸序列具有至少70％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
380.在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:225所示的氨基酸序列具有至少70％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:228所示的氨基酸序列具有至少70％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:229所示的氨基酸序列具有至少70％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:230所示的氨基酸序列具有至少70％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:225或228所示的氨基酸序列具有至少70％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列；并且所述抗原结合分子包含多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:229或230所示的氨基酸序列具有至少70％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
381.根据本发明的各个方面，在一些实施方式中，所述抗原结合分子能够抑制il
‑
11介导的信号传导。
382.本发明还提供了一种任选分离的抗原结合分子，其包含(i)如本文所述的抗原结合分子，和(ii)能够结合除il
‑
11以外的抗原的抗原结合分子。
383.根据本发明的各个方面，在一些实施方式中，所述抗原结合分子能够抑制il
‑
11或包含il
‑
11的复合物与il
‑
11受体之间的相互作用。
384.本发明还提供了包含如本文所述的抗原结合分子的嵌合抗原受体(car)。
385.本发明还提供了一种或多种任选分离的核酸，其编码如本文所述的抗原结合分子或如本文所述的car。
386.本发明还提供了一种或多种表达载体，其包含如本文所述的一种或多种核酸。
387.本发明还提供了一种细胞，其包含如本文所述的抗原结合分子、car、一种或多种核酸，或一种或多种表达载体。
388.本发明还提供了一种方法，所述方法包括在适合于从如本文所述的一种或多种核酸或一种或多种表达载体中表达抗原结合分子或car的条件下，培养包含本文所述的一种或多种核酸或一种或多种表达载体的细胞。
389.本发明还提供了一种组合物，其包含如本文提供的抗原结合分子、car、一种或多种核酸、一种或多种表达载体，和/或细胞。
390.本发明还提供了用于治疗或预防方法的如本文所述的抗原结合分子、car、一种或多种核酸、一种或多种表达载体、细胞或组合物。
391.本发明还提供了用于治疗或预防纤维化、以纤维化为特征的疾病、癌症、炎症或以
炎症为特征的疾病的方法的如本文所述的抗原结合分子、car、一种或多种核酸、一种或多种表达载体、细胞或组合物。
392.本发明还提供了如本文所述的抗原结合分子、car、一种或多种核酸、一种或多种表达载体、细胞或组合物的用途，用于生产用于治疗或预防纤维化、以纤维化为特征的疾病、癌症、炎症或以炎症为特征的疾病的方法的药物。
393.本发明还提供了一种治疗或预防纤维化、以纤维化为特征的疾病、癌症、炎症或以炎症为特征的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用治疗或预防有效量的如本文所述的抗原结合分子、car、一种或多种核酸、一种或多种表达载体、细胞或组合物。
394.本发明还提供了一种抑制il
‑
11介导的信号传导的方法，所述方法包括使表达il
‑
11的细胞与如本文所述的抗原结合分子接触。所述方法可以是体外的、体内的、原位的或离体的。
395.本发明还提供了一种任选分离的体外复合物，其包含如本文所述的与il
‑
11或包含il
‑
11的复合物结合的抗原结合分子。
396.本发明还提供了一种方法，所述方法包括使含有或疑似含有il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的样品与如本文所述的抗原结合分子接触，并检测抗原结合分子与il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的复合物的形成。
397.本发明还提供了一种对用il
‑
11靶向剂治疗的受试者进行筛选和分级的方法，所述方法包括将来自受试者的样品与如本文所述的抗原结合分子体外接触，并检测抗原结合分子与il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的复合物的形成。
398.本发明还提供了如本文所述的抗原结合分子作为体外或体内诊断或预后剂的用途。
399.本发明还提供了一种试剂盒，其包含预定量的如本文所述的抗原结合分子、car、一种或多种核酸、一种或多种表达载体、细胞或组合物。
400.详述
401.本发明涉及与已知的抗il
‑
11抗体相比具有改善的性质的新型il
‑
11结合分子。与现有技术中公开的il
‑
11结合抗原结合分子相比，本发明的il
‑
11结合分子具有所需的生物物理和功能特性的组合。
402.白介素11和il
‑
11受体
403.白介素11(il
‑
11)，也称为脂肪形成抑制因子，是一种多效性细胞因子，并且是il
‑
6家族细胞因子的成员，所述il
‑
6家族细胞因子包括il
‑
6、il
‑
11、il
‑
27、il
‑
31、制瘤素、白血病抑制因子(lif)、心肌营养因子1(ct
‑
1)、心肌营养因子样细胞因子(clc)、睫状神经营养因子(cntf)和神经蛋白(np
‑
1)。
404.白介素11(il
‑
11)在多种间充质细胞类型中表达。il
‑
11基因组序列已被定位到19号染色体和71号染色体的着丝粒区域上，并与常规信号肽一起转录，以确保从细胞的有效分泌。il
‑
11的激活蛋白复合物cjun/ap
‑
1位于其启动子序列内，对il
‑
11的基础转录调节至关重要(du和williams，blood 1997，第89卷：3897
–
3908)。人il
‑
11的未成熟形式是199个氨基酸的多肽，而il
‑
11的成熟形式则编码178个氨基酸残基的蛋白质(garbers和scheller，biol.chem.2013；394(9):1145
‑
1161)。人il
‑
11氨基酸序列可由uniprot获得，登录号为p20809(p20809.1 gi：124294；seq id no：1)。重组人il
‑
11(奥普瑞白介素(opvevekin))也
可商购获得。来自其他物种(包括小鼠、大鼠、猪、牛、几种骨鱼和灵长类动物)的il
‑
11也已被克隆和测序。
405.在本说明书中，“il
‑
11”是指来自任何物种的il
‑
11，并且包括来自任何物种的il
‑
11的同种型、片段、变体或同源物。如本文所用，蛋白质的“片段”、“变体”或“同源物”可以任选地表征为与参照蛋白的氨基酸序列具有至少60％，优选地为70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性。在一些实施方式中，所述参照蛋白的片段、变体、同种型和同源物可表征为能够具有参照蛋白所具有的功能。
[0406]“片段”通常是指参照蛋白的一部分。“变体”通常是指一蛋白，该蛋白所具有的氨基酸序列包含相比于参照蛋白质的氨基酸序列的一个或多个氨基酸取代、插入、缺失或其他修饰，但保留与参照蛋白质的氨基酸序列相当程度的序列同一性(例如，至少60％)。“同种型”通常是指由与参照蛋白的物种相同的物种表达的参照蛋白的变体。“同源物”通常是指与参照蛋白的物种相比不同的物种产生的参照蛋白的变体。同源物包括直系同源物。“片段”可以具有任何长度(以氨基酸数目计)，尽管可以任选地为参照蛋白(即衍生出该片段的蛋白质)长度的至少20％，并且可以具有参照蛋白长度的50％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％之一的最大长度。il
‑
11片段的最小长度为10个氨基酸，最大长度为15个、20个、25个、30个、40个、50个、100个、110个、120个、130个、140个、150个、160个、170个、180个、190个或195个氨基酸之一。
[0407]
在一些实施方式中，il
‑
11是来自哺乳动物的il
‑
11(例如灵长类(恒河猴、食蟹猴、非人灵长类或人)和/或啮齿动物(例如大鼠或小鼠)的il
‑
11)。il
‑
11的同种型、片段、变体或同源物可以任选地表征为与来自给定物种(例如人)的未成熟或成熟il
‑
11同种型的氨基酸序列具有至少70％，优选地为80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性。在一些实施方式中，本公开的il
‑
11包含与seq id no:1的氨基酸序列具有至少70％，优选地为80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列，或由其组成。
[0408]
il
‑
11的同种型、片段、变体或同源物可以任选地表征为能够结合il
‑
11受体(例如il
‑
11rα、gp130和/或包含il
‑
11rα和gp130的复合物，优选来自相同物种)并在表达il
‑
11rα和gp130的细胞中刺激信号转导(例如，如curtis等，blood，1997，90(11)；或karpovich等，mol.hum.reprod.2003 9(2):75
‑
80中所描述的)。
[0409]
il
‑
11通过广泛表达的糖蛋白130(gp130；也称为糖蛋白130、il
‑
6st、il
‑
6β或cd130)的同型二聚体发出信号。gp130是一种跨膜蛋白，与il
‑
6受体家族共同形成i型细胞因子受体的一个亚基。通过单独的白介素11受体亚基α(il
‑
11rα)获得特异性，尽管最初的细胞因子与α受体的结合事件导致最终与gp130形成复合物，但它不直接参与信号转导。
[0410]
人gp130(包括22个氨基酸的信号肽)是918个氨基酸的蛋白质，成熟形式是866个氨基酸，包括597个氨基酸的胞外域、22个氨基酸的跨膜域和277个氨基酸的胞内域。蛋白的胞外域包含gp130的细胞因子结合模块(cbm)。gp130的cbm包括ig样结构域d1，和gp130的纤连蛋白iii型结构域d2和d3。人gp130的氨基酸序列可从uniprot获得，登录号为p40189
‑
1(seq id no：2)。
[0411]
人il
‑
11rα是422个氨基酸的多肽(uniprot q14626；seq id no：3)，与小鼠il
‑
11r
α共有约85％的核苷酸和氨基酸序列同一性(du和williams，blood第89卷，第11号，1997年6月1日)。已经报道了两种il
‑
11rα同种型，它们在胞质结构域上有所不同(du和williams，同上)。il
‑
11受体α链(il
‑
11rα)与il
‑
6受体α链(il
‑
6rα)具有许多结构和功能相似性。胞外结构域显示24％的氨基酸同一性，包括特征性的保守trp
‑
ser
‑
x
‑
trp
‑
ser(wsxws)基序。短的胞质结构域(34个氨基酸)缺少激活jak/stat信号通路所需的框1和2区域。
[0412]
已经绘制了小鼠il
‑
11上的受体结合位点，并鉴定了三个位点
‑
i、ii和iii位点。通过位点ii区域中的取代和通过位点iii区域中的取代，减少了与gp130的结合。位点iii突变体没有显示出可检测的激动剂活性并且具有il
‑
11rα拮抗剂活性(细胞因子抑制剂第8章；由gennaro ciliberto和rocco savino编辑，marcel dekker公司，2001)。
[0413]
在本说明书中，il
‑
11受体/il
‑
11的受体(il
‑
11r)是指能够结合il
‑
11和/或包含il
‑
11的复合物的多肽或多肽复合物。在一些实施方式中，il
‑
11受体能够结合il
‑
11和/或包含il
‑
11的复合物，并在表达il
‑
11受体的细胞中诱导信号转导。“包含il
‑
11的复合物”可以是il
‑
11和能够与il
‑
11非共价结合的多肽形成的非共价复合物。
[0414]
il
‑
11受体可以来自任何物种，并且包括来自任何物种的il
‑
11受体的同工型、片段、变体或同源物。在优选的实施方式中，所述物种是人(智人)。
[0415]
在一些实施方式中，所述il
‑
11受体(il
‑
11r)可以是il
‑
11rα。在一些实施方式中，所述il
‑
11的受体可以是包含il
‑
11rα的多肽复合物。在一些实施方式中，所述il
‑
11受体可以是包含il
‑
11rα和gp130的多肽复合物。在一些实施方式中，所述il
‑
11受体可以是gp130或包含il
‑
11结合的gp130的复合物。
[0416]
il
‑
11rα的同工型、片段、变体或同源物可以任选地表征为与给定物种(例如人)的il
‑
11rα的氨基酸序列具有至少70％，优选地为80％、85％。90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性。il
‑
11α的同工型、片段、变体或同源物可以任选地表征为能够结合il
‑
11(优选来自相同物种)并在表达il
‑
11rα和gp130的细胞中刺激信号转导(例如，如curtis等，blood，1997，90(11)或karpovich等，mol.hum.reprod.2003 9(2):75
‑
80中所描述的)。il
‑
11受体的片段可以是任何长度的(以氨基酸数目计)，尽管可以任选地为成熟il
‑
11rα的长度的25％，并且具有成熟il
‑
11rα的长度的50％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％之一的最大长度。il
‑
11受体片段的片段的最小长度为10个氨基酸，最大长度为15个、20个、25个、30个、40个、50个、100个、110个、120个、130个、140个、150个、160个、170个、180个、190个、200个、250个、300个、400个或415个氨基酸之一。
[0417]
il
‑
11信号传导
[0418]
il
‑
11以低亲和力(kd～10nmol/l)与il
‑
11rα结合，仅这些结合伴侣之间的相互作用不足以转导生物信号。能够信号转导的高亲和力受体(kd～400至800pmol/l)的产生需要il
‑
11rα和gp130的共表达(curtis等，blood 1997 12月1日；90(11)：4403
‑
12；hilton等，embo j 13：4765，1994；nandurkar等，oncogene 12：585，1996)。il
‑
11与细胞表面il
‑
11rα的结合主要通过有丝分裂原激活的蛋白激酶(mapk)级联和janus激酶/信号转导子和转录激活子(jak/stat)途径来诱导异二聚化、酪氨酸磷酸化、gp130激活和下游信号传导(garbers和scheller，同上)。
[0419]
原则上，可溶性il
‑
11rα还可与il
‑
11形成具有生物学活性的可溶性复合物
(pflanz等，1999febs lett，450，117
‑
122)，这增加了il
‑
11与il
‑
6类似的可能性，即在某些情况下，在结合细胞表面gp130之前先结合可溶性il
‑
11rα(garbers和scheller，同上)。curtis等(blood 1997 12月1日；90(11)：4403
‑
12)描述了可溶性鼠il
‑
11受体α链(sil
‑
11r)的表达并测定了表达gp130的细胞中的信号传导。在存在gp130但没有跨膜il
‑
11r的情况下，sil
‑
11r介导的m1白血病细胞的il
‑
11依赖性分化以及在ba/f3细胞的增殖以及早期细胞内事件(包括gp130、stat3和shp2的磷酸化)，类似于通过跨膜il
‑
11r的信号传导。最近已经证明，通过与可溶性il
‑
11rα结合的il
‑
11可以激活通过细胞膜结合gp130发出的信号(lokau等，2016cell reports 14，1761
–
1773)。这种所谓的il
‑
11反式信号传导可能是il
‑
11介导的信号传导的非常重要的组成部分，甚至可能是il
‑
11介导的信号传导的最常见形式，因为il
‑
11rα的表达是仅限于相对较小的细胞类型亚型，而gp130在广泛的细胞类型中表达。
[0420]
如本文所用，“il
‑
11信号传导”和“il
‑
11介导的信号传导”是指通过il
‑
11、其具有成熟il
‑
11分子的功能的片段或具有成熟il
‑
11分子的功能的包含il
‑
11/a片段的复合物，与il
‑
11的结合介导的信号传导。
[0421]
如本文所用，“il
‑
11反式信号转导”用于指由与il
‑
11rα结合的il
‑
11与gp130的结合所触发的信号转导。il
‑
11可以结合至il
‑
11rα以形成非共价复合物。gp130被膜结合，并由il
‑
11：il
‑
11rα复合物与gp130结合后发生信号的细胞表达。在一些实施方式中，所述il
‑
11rα可以是可溶性il
‑
11rα。在一些实施方式中，所述可溶性il
‑
11rα是il
‑
11rα的可溶性(分泌的)同工型(例如，缺乏跨膜结构域)。在一些实施方式中，所述可溶性il
‑
11rα是细胞膜结合的il
‑
11rα的胞外结构域的蛋白水解切割的释放产物。在一些实施方式中，所述il
‑
11rα可以是细胞膜结合的，并且通过gp130的信号传导可以是通过il
‑
11与细胞膜结合的il
‑
11rα的结合而触发，称为“il
‑
11顺式信号传导”。
[0422]
已显示il
‑
11介导的信号传导可刺激造血作用和血小板生成、刺激破骨细胞活性、刺激神经发生、抑制脂肪生成、减少促炎性细胞因子表达、调节细胞外基质(ecm)代谢，并介导胃肠道上皮细胞的正常生长控制(du和williams，同上)。
[0423]
白介素11(il
‑
11)的生理作用仍不清楚。il
‑
11与造血细胞的活化和血小板的产生有最密切的联系，但也被认为具有促炎性、抗炎性、促血管生成性，并且对肿瘤形成很重要。已知tgfβ1或组织损伤可诱导il
‑
11表达(zhu，m.等，plos one 10，(2015)；yashiro，r.等，j.clin.periodontol.33，165
‑
71(2006)；obana，m.等，circulation 121，684
‑
91(2010)；tang，w等，j.biol.chem.273，5506
–
13(1998))。
[0424]
il
‑
11是tgfβ介导的信号传导的重要转录后调节剂。已证明tgfβ1刺激il
‑
11的ap
‑
1启动子区域，并且已证明tgfβ诱导的il
‑
11分泌诱导肠成肌纤维细胞中erk p42/44和p38 map激酶的活化(bamba等，am j physiol gastrointest liver physiol.(2003)(285(3)：g529
‑
38)。map激酶抑制剂能够显著降低tgfβ诱导的il
‑
11分泌，并且p38 map激酶介导的mrna稳定已被证明对tgfβ诱导的il
‑
11分泌至关重要。
[0425]
最近已证明il
‑
11介导的信号传导在多种组织的纤维化过程中起关键作用；参见例如wo2017/103108a1和schafer等，(2017)nature 552：110
‑
115，两者均以引用全文的方式并入本文。
[0426]
wo2017/103108a1(通过引用整体并入本文)报告了il
‑
11的促纤维化作用，并确立
了il
‑
11介导的信号传导拮抗剂在治疗/预防纤维化中的治疗作用。wo2017/103108a1的实施例2以及图7a和7b证明，将原代人心房纤维母细胞与重组人il
‑
11一起孵育增加了成纤维细胞对胶原的沉积，这是一种公认的纤维化过程。已显示用中和性抗il
‑
11抗体(而非同型对照抗体)进行的治疗可消除由tgfβ1刺激成纤维细胞(已知的促纤维化刺激)诱导的胶原蛋白生成。wo2017/103108a1的实施例3和图10进一步证明了中和性抗il
‑
11抗体消除人心房成纤维细胞为响应各种其他促纤维化刺激物(ang2、pdgf、et
‑
1)而产生增加的胶原蛋白的能力。wo2017/103108a1的实施例5.2和图20a
‑
20e提供了进一步的数据，其支持il
‑
11在心脏组织中的促纤维化作用。显示人心房成纤维细胞响应于人il
‑
11蛋白的治疗，显示出显著增加的细胞外基质成分(胶原蛋白、骨膜素)的产生和增加的促纤维化标记物(αsma、il
‑
6、mmp2、timp1)的表达，这与响应与促纤维化刺激物tgfβ1的治疗时增加这些因子的产生的方式相同。wo2017/103108a1的实施例5.3.1和图38a至38d同样显示人原代肝成纤维细胞响应人il
‑
11的治疗而增加了细胞外基质成分的产生和纤维化标志物的表达，以及中和性抗il
‑
11抗体消除tgfβ1刺激的纤维化作用。wo2017/103108a1的图22a至22f以及图23a和23b显示可以通过用中和性抗il
‑
11抗体治疗来抑制tgfβ1介导的纤维化，并且图24还表明与il
‑
11结合的诱饵受体分子、中和性抗il
‑
11rα抗体和编码用于反义敲低il
‑
11和il
‑
11ra基因表达的sirna的寡核苷酸同样能够抑制tgfβ1介导的成纤维细胞向成肌纤维细胞(纤维化效应细胞)的转化。wo2017/103108a1的图32a和32b提供了进一步的数据，其显示了使用诱饵il
‑
11受体抑制tgfβ1介导的纤维化反应。wo2017/103108a1的实施例5.3.3以及图21b和21c提供了体内数据，其证明il
‑
11在多种组织中是促纤维化的。用重组小鼠il
‑
11注射小鼠会导致心脏、肾、肺和肝的相对重量增加(图21b)，这与这些组织中胶原含量的增加有关(图21c)。wo2017/103108a1的实施例7.2和7.3以及图27a至27d和图28中提供了支持il
‑
11的促纤维化作用的其他体内数据。这些实验表明，il
‑
11ra敲除的小鼠免受由纤维化刺激引起的心脏和肾脏组织纤维化的侵害，这表明通过il
‑
11受体作为纤维化过程的重要介体发出信号。更进一步地，在wo2017/103108a1的图31处概述的图31a和31b报告了在小梁切除术后7天，从野生型小鼠获得的眼切片中检测到的纤维化比il
‑
11ra敲除小鼠更多。因此，wo2017/103108a1提供了来自体外和体内研究的大量数据，证明il
‑
11/il
‑
11r信号传导是广泛组织中纤维化的关键介质，并证明了il
‑
11介导的信号传导的抑制减少了纤维化，如通过分析纤维化反应的多种标志物所确定的。
[0427]
能够结合il
‑
11的抗原结合分子
[0428]
本发明提供了能够结合il
‑
11的抗原结合分子。
[0429]“抗原结合分子”是指能够与靶抗原结合的分子，包括单克隆抗体、多克隆抗体、单特异性和多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段(例如，fv、scfv、fab、scfab、f(ab’)2、fab2、双抗体、三抗体、scfv
‑
fc、微抗体、单域抗体(例如vhh)等)，只要它们显示与相关靶分子的结合即可。本文的“抗体”包括其片段和衍生物，包括合成抗体和片段。如本文所用，抗体是能够特异性结合相关靶分子(即抗体对其具有特异性的抗原)的多肽。本发明的抗体和抗原结合分子可以以分离的形式提供。
[0430]
鉴于如今与单克隆抗体技术相关的技术，可以制备针对大多数抗原的抗体。抗原结合部分可以是抗体的一部分(例如fab片段)或合成的抗体片段(例如单链fv片段[scfv])。可以通过已知技术制备用来选择抗原的合适的单克隆抗体，例如在“单克隆抗体：
技术手册”，h zola(crc出版社，1988)和“单克隆杂交瘤抗体：“技术与应用”，j g r hurrell(crc出版社，1982年)中公开的那些。neuberger等人(1988，第8届国际生物技术研讨会第2部分，792
‑
799)讨论了嵌合抗体。
[0431]
单克隆抗体(mab)可用于本发明的方法，并且是特异性靶向抗原上的单个表位的同源抗体群。
[0432]
也可以使用/提供抗体的抗原结合片段，例如fab和fab2片段，因为它们可以是基因工程抗体和抗体片段。抗体的可变重(v
h
)结构域和可变轻(v
l
)结构域参与抗原识别，这是在早期蛋白酶消化实验中首先被认识到的事实。通过啮齿动物抗体的“人源化”对此进一步的进行了确认。啮齿动物来源的可变结构域可以与人源恒定结构域融合，使得所得抗体保留啮齿动物亲本抗体的抗原特异性(morrison等(1984)proc.natl.acad.sd.usa 81,6851
‑
6855)。
[0433]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子是完全人抗体/抗体片段。完全人抗体/抗体片段由人核酸序列编码。完全人抗体/抗体片段不含非人氨基酸序列。
[0434]
产生完全人抗体的两种最常用技术是(i)噬菌体展示，其中人抗体基因在噬菌体展示库中表达，以及(ii)在经过工程改造以具有人抗体基因的转基因小鼠中产生抗体(如park和smolen，蛋白化学进展(2001)56：369
‑
421).简而言之，在人抗体基因噬菌体展示技术中，编码的vh和vl链的基因是通过pcr扩增和“初始”人淋巴细胞的克隆产生的，并组装成一个文库，从中可以将它们表达为二硫键连接的fab片段或单链fv(scfv)片段。将编码fab或scfv的基因融合到丝状噬菌体的表面外壳蛋白上，然后可以通过用抗原筛选文库来鉴定能够结合感兴趣靶标的fab或scfv。可以采用分子进化或亲和力成熟步骤来增强fab/scfv片段的亲和力。在转基因小鼠技术中，用抗原免疫小鼠(其内源鼠ig基因位点已被与其人同源物的同源重组替代)，并通过常规杂交瘤技术制备单克隆抗体，以产生完全人单克隆抗体。
[0435]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子是鼠抗体/抗体片段。在一些实施方式中，所述抗体/抗体片段可通过使用人初始抗体基因文库的噬菌体展示来制备。
[0436]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子是小鼠/人嵌合抗体/抗体片段(例如，包含鼠可变区和人恒定区的抗原结合分子)。在一些实施方式中，所述抗原结合分子是人源化抗体/抗体片段(例如，包含鼠cdr和人框架和恒定区的抗原结合分子)。
[0437]
小鼠/人嵌合抗原结合分子可以通过嵌合步骤从小鼠单克隆抗体制备，例如人单克隆抗体：方法和步骤，michael steinitz(编辑)，分子生物学方法1060，实验室指南，胡马纳出版社(2014)，其第8章，特别是第8章的第3节所描述的。
[0438]
人源化抗原结合分子可以通过人源化步骤从小鼠抗体制备，例如人单克隆抗体：方法和步骤，michael steinitz(编辑)，分子生物学方法1060，实验室指南，胡马纳出版社(2014)，其第7章，特别是第7章第3.1节的’抗体人源化’所描述的。
[0439]
本发明的抗原结合分子包含能够结合靶抗原的部分。在一些实施方式中，所述能够结合靶抗原的部分包含能够特异性结合靶抗原的抗体的抗体重链可变区(vh)和抗体轻链可变区(vl)。在一些实施方式中，所述能够结合靶抗原的部分包含能结合靶抗原的适体或由其组成，所述适体例如核酸适体(例如在zhou和rossi nat rev drug discov.2017 16(3):181
‑
202中综述的)。在一些实施方式中，所述能够与靶抗原结合的部分包含抗原结合
肽/多肽或由其组成，所述抗原结合肽/多肽例如肽适体、硫氧还蛋白、单体、抗运载蛋白(anticalin)、kunitz型结构域、活性多聚体(avimer)、打结素(knottin)、fynomer、atrimer、darpin、亲和体、纳米体(即单域抗体(sdab))、亲和素、犰狳重复蛋白(armrp)、obody或纤连蛋白
–
综述于例如reverdatto等，curr top med chem.2015；15(12)：1082
‑
1101，其通过引用整体并入本文(也参见例如boersma等，j biol chem(2011)286：41273
‑
85和emanuel等，mabs(2011)3：38
‑
48)。
[0440]
本发明的抗原结合分子通常包含抗原结合结构域，其包含能够特异性结合靶抗原的抗体的vh和vl。由vh和vl形成的抗原结合结构域在本文中也可以称为fv区。
[0441]
抗原结合分子可以是或可以包含抗原结合多肽或抗原结合多肽复合物。抗原结合分子可包含多于一个的多肽，它们一起形成抗原结合结构域。所述多肽可以共价或非共价结合。在一些实施方式中，所述多肽形成包含所述多肽的较大多肽的一部分(例如，包含vh和vl的scfv，或包含vh
‑
ch1和vl
‑
cl的scfab)。
[0442]
抗原结合分子可以指多于一个的多肽(例如2个、3个、4个、6个或8个多肽)的非共价或共价复合物，例如包含两个重链多肽和两个轻链多肽的igg样抗原结合分子。
[0443]
可以使用能够结合il
‑
11的单克隆抗体(mab)的序列设计和制备本发明的抗原结合分子。也可以使用/提供抗体的抗原结合区，例如单链可变片段(scfv)、fab和f(ab’)2片段。“抗原结合区”是能够结合给定抗体特异的靶标的抗体的任何片段。
[0444]
抗体通常包含六个互补决定区cdr；位于重链可变区(vh)的三个：hc
‑
cdr1、hc
‑
cdr2和hc
‑
cdr3，以及位于轻链可变区(vl)的三个：lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2和lc
‑
cdr3。六个cdr共同定义了抗体的互补位，其是抗体与靶抗原结合的部分。
[0445]
vh区和vl区包含每个cdr两侧的框架区(fr)，这些框架区为cdr提供了支架。从n端到c端，vh区包含以下结构：n端
‑
[hc
‑
fr1]
‑
[hc
‑
cdr1]
‑
[hc
‑
fr2]
‑
[hc
‑
cdr2]
‑
[hc
‑
fr3]
‑
[hc
‑
cdr3]
‑
[hc
‑
fr4]
‑
c端；并且vl区包含以下结构：n端
‑
[lc
‑
fr1]
‑
[lc
‑
cdr1]
‑
[lc
‑
fr2]
‑
[lc
‑
cdr2]
‑
[lc
‑
fr3]
‑
[lc
‑
cdr3]
‑
[lc
‑
fr4]
‑
c端。
[0446]
定义抗体cdr和fr有几种不同的规则，例如kabat等，《免疫学意义的蛋白质序列》第5版，美国国立卫生研究院公共卫生服务，马里兰州贝塞斯达(1991)，chothia等，j.mol.biol.196：901
‑
917(1987)所描述的，和vbase2，如retter等，nucl.acids res.(2005)33(增刊1)：d671
‑
d674中所描述的。根据kabat系统定义了本文所述的抗体克隆的vh区和vl区的cdr和fr。
[0447]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含能够结合il
‑
11的抗原结合分子的cdr。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含能够结合il
‑
11的抗原结合分子的fr。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含能够结合il
‑
11的抗原结合分子的cdr和fr。即，在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含能够结合il
‑
11的抗原结合分子的vh区和vl区。
[0448]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含vh区和vl区，所述vh区和vl区是或衍生自本文所述的il
‑
11结合抗体克隆的vh/vl区(例如，抗il
‑
11抗体克隆01a、01g、01i、01l、01q、01s、01t、01v、02a、02g、02i、02l、02q、02s、02t、02v、03a、03g、03i、03l、03q、03s、03t、03v、bsn
‑
3c6(包含3c6 vh 1、3c6 vh 2、3c6 vh 2.1、3c6 vh 2.2、3c6 vh 2.3、3c6 vh 2.4或3c6 vh 2.5和3c6 vl 1、3c6 vl 2、3c6 vl 1.1、3c6 vl 1.2、3c6 vl 1.3、3c6 vl 1.4、3c6 vl 2.1、3c6 vl 2.2、3c6 vl 2.3或3c6 vl 2.4)、bsn
‑
1h2、bsn
‑
7d4、bsn
‑
8h11)。
[0449]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含vl区，所述vl区包含与seq id no:7的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列，其中所述vl区包含对应于seq id no：7的91位上的半胱氨酸残基被半胱氨酸以外的氨基酸的取代。在一些实施方式中，所述半胱氨酸以外的氨基酸选自丙氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸。
[0450]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含vl区，所述vl区包含与seq id no:9的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列，其中所述vl区包含对应于seq id no：9的91位上的半胱氨酸残基被半胱氨酸以外的氨基酸的取代。在一些实施方式中，所述半胱氨酸以外的氨基酸选自丙氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸。
[0451]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含vl区，所述vl区包含与seq id no:11的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列，其中所述vl区包含对应于seq id no：11的91位上的半胱氨酸残基被半胱氨酸以外的氨基酸的取代。在一些实施方式中，所述半胱氨酸以外的氨基酸选自丙氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸。
[0452]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含与seq id no：91的氨基酸序列具有小于100％的序列同一性的vh区。在一些实施方式中，所述抗原结合分子不包含含有seq id no：91的氨基酸序列或由其组成的vh区。在一些实施方式中，所述抗原结合分子不包含含有seq id no：91的氨基酸序列或由其组成的肽/多肽。
[0453]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含与seq id no：93的氨基酸序列具有小于100％的序列同一性的vl区。在一些实施方式中，所述抗原结合分子不包含含有seq id no：93的氨基酸序列或由其组成的vl区。在一些实施方式中，所述抗原结合分子不包含含有seq id no：93的氨基酸序列或由其组成的肽/多肽。
[0454]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(1)或(2)之一的vh区：
[0455]
(1)(01x)包含以下cdr的vh区：
[0456]
具有如seq id no:36所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[0457]
具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[0458]
具有如seq id no：39所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3，
[0459]
或其变体，其中hc
‑
cdr1、hc
‑
cdr2或hc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0460]
(2)(02x、03x)一个包含以下cdr的vh区：
[0461]
具有如seq id no:37所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[0462]
具有如seq id no:38所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[0463]
具有如seq id no：40所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3，
[0464]
或其变体，其中hc
‑
cdr1、hc
‑
cdr2或hc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0465]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(3)至(5)之一的vh区：
[0466]
(3)(01x)包含以下fr的vh区：
[0467]
具有如seq id no：65所示的氨基酸序列的hc
‑
fr1
[0468]
具有如seq id no:67所示的氨基酸序列的hc
‑
fr2
[0469]
具有如seq id no:68所示的氨基酸序列的hc
‑
fr3
[0470]
具有如seq id no:70所示的氨基酸序列的hc
‑
fr4，
[0471]
或其变体，其中hc
‑
fr1、hc
‑
fr2、hc
‑
fr3，或hc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0472]
(4)(02x)包含以下fr的vh区：
[0473]
具有如seq id no：65所示的氨基酸序列的hc
‑
fr1
[0474]
具有如seq id no:67所示的氨基酸序列的hc
‑
fr2
[0475]
具有如seq id no:69所示的氨基酸序列的hc
‑
fr3
[0476]
具有如seq id no:70所示的氨基酸序列的hc
‑
fr4，
[0477]
或其变体，其中hc
‑
fr1、hc
‑
fr2、hc
‑
fr3，或hc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0478]
(5)(03x)包含以下fr的vh区：
[0479]
具有如seq id no:66所示的氨基酸序列的hc
‑
fr1
[0480]
具有如seq id no:67所示的氨基酸序列的hc
‑
fr2
[0481]
具有如seq id no:69所示的氨基酸序列的hc
‑
fr3
[0482]
具有如seq id no:70所示的氨基酸序列的hc
‑
fr4，
[0483]
或其变体，其中hc
‑
fr1、hc
‑
fr2、hc
‑
fr3，或hc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0484]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含vh区，所述vh区包含根据以上(1)或(2)的cdr和根据以上(3)至(5)之一的fr。
[0485]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(6)至(8)之一的vh区：
[0486]
(6)(01x)包含根据(1)的cdr和根据(3)的fr的vh区。
[0487]
(7)(02x)包含根据(2)的cdr和根据(4)的fr的vh区。
[0488]
(8)(03x)包含根据(2)的cdr和根据(5)的fr的vh区。
[0489]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(9)至(1)之一的vh区：
[0490]
(9)(01x)vh区，其包含与seq id no：6的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0491]
(10)(02x)vh区，其包含与seq id no：8的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0492]
(11)(03x)vh区，其包含与seq id no：10的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0493]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(12)至(38)之一的vl区：
[0494]
(12)(01x)包含以下cdr的vl区：
[0495]
具有如seq id no:41所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0496]
具有如seq id no:44所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0497]
具有如seq id no：80所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0498]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0499]
(13)(01a)包含以下cdr的vl区：
[0500]
具有如seq id no:41所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0501]
具有如seq id no:44所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0502]
具有如seq id no：48所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0503]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0504]
(14)(01g)包含以下cdr的vl区：
[0505]
具有如seq id no:41所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0506]
具有如seq id no:44所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0507]
具有如seq id no：49所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0508]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0509]
(15)(01i)包含以下cdr的vl区：
[0510]
具有如seq id no:41所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0511]
具有如seq id no:44所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0512]
具有如seq id no：50所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0513]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0514]
(16)(01l)包含以下cdr的vl区：
[0515]
具有如seq id no:41所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0516]
具有如seq id no:44所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0517]
具有如seq id no：51所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0518]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0519]
(17)(01q)包含以下cdr的vl区：
[0520]
具有如seq id no:41所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0521]
具有如seq id no:44所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0522]
具有如seq id no：52所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0523]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0524]
(18)(01s)包含以下cdr的vl区：
[0525]
具有如seq id no:41所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0526]
具有如seq id no:44所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0527]
具有如seq id no：53所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0528]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0529]
(19)(01t)包含以下cdr的vl区：
[0530]
具有如seq id no:41所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0531]
具有如seq id no:44所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0532]
具有如seq id no：54所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0533]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0534]
(20)(01v)包含以下cdr的vl区：
[0535]
具有如seq id no:41所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0536]
具有如seq id no:44所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0537]
具有如seq id no：55所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0538]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0539]
(21)(02x)包含以下cdr的vl区：
[0540]
具有如seq id no:42所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0541]
具有如seq id no:45所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0542]
具有如seq id no：81所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0543]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0544]
(22)(02a)包含以下cdr的vl区：
[0545]
具有如seq id no:42所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0546]
具有如seq id no:45所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0547]
具有如seq id no：57所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0548]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0549]
(23)(02g)包含以下cdr的vl区：
[0550]
具有如seq id no:42所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0551]
具有如seq id no:45所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0552]
具有如seq id no：58所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0553]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0554]
(24)(02i)包含以下cdr的vl区：
[0555]
具有如seq id no:42所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0556]
具有如seq id no:45所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0557]
具有如seq id no：59所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0558]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0559]
(25)(02l)包含以下cdr的vl区：
[0560]
具有如seq id no:42所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0561]
具有如seq id no:45所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0562]
具有如seq id no：60所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0563]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0564]
(26)(02q)包含以下cdr的vl区：
[0565]
具有如seq id no:42所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0566]
具有如seq id no:45所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0567]
具有如seq id no：61所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0568]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0569]
(27)(02s)包含以下cdr的vl区：
[0570]
具有如seq id no:42所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0571]
具有如seq id no:45所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0572]
具有如seq id no：62所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0573]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0574]
(28)(02t)包含以下cdr的vl区：
[0575]
具有如seq id no:42所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0576]
具有如seq id no:45所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0577]
具有如seq id no：63所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0578]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0579]
(29)(02v)包含以下cdr的vl区：
[0580]
具有如seq id no:42所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0581]
具有如seq id no:45所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0582]
具有如seq id no：64所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0583]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0584]
(30)(03x)包含以下cdr的vl区：
[0585]
具有如seq id no:43所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0586]
具有如seq id no:46所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0587]
具有如seq id no：80所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0588]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0589]
(31)(03a)包含以下cdr的vl区：
[0590]
具有如seq id no:43所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0591]
具有如seq id no:46所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0592]
具有如seq id no：48所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0593]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0594]
(32)(03g)包含以下cdr的vl区：
[0595]
具有如seq id no:43所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0596]
具有如seq id no:46所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0597]
具有如seq id no：49所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0598]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0599]
(33)(03i)包含以下cdr的vl区：
[0600]
具有如seq id no:43所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0601]
具有如seq id no:46所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0602]
具有如seq id no：50所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0603]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0604]
(34)(03l)包含以下cdr的vl区：
[0605]
具有如seq id no:43所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0606]
具有如seq id no:46所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0607]
具有如seq id no：51所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0608]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0609]
(35)(03q)包含以下cdr的vl区：
[0610]
具有如seq id no:43所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0611]
具有如seq id no:46所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0612]
具有如seq id no：52所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0613]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0614]
(36)(03s)包含以下cdr的vl区：
[0615]
具有如seq id no:43所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0616]
具有如seq id no:46所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0617]
具有如seq id no：53所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0618]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0619]
(37)(03t)包含以下cdr的vl区：
[0620]
具有如seq id no:43所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0621]
具有如seq id no:46所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0622]
具有如seq id no：54所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0623]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0624]
(38)(03v)包含以下cdr的vl区：
[0625]
具有如seq id no:43所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0626]
具有如seq id no:46所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0627]
具有如seq id no：55所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0628]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0629]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含vh区和vl区，所述vh区包含根据(2)的cdr，并且vl区包含根据(22)的cdr。
[0630]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(39)至(41)之一的vl区：
[0631]
(39)(01x)包含以下fr的vl区：
[0632]
具有如seq id no:71所示的氨基酸序列的lc
‑
fr1
[0633]
具有如seq id no：74所示的氨基酸序列的lc
‑
fr2
[0634]
具有如seq id no：76所示的氨基酸序列的lc
‑
fr3
[0635]
具有如seq id no：77所示的氨基酸序列的lc
‑
fr4，
[0636]
或其变体，其中lc
‑
fr1、lc
‑
fr2、lc
‑
fr3，或lc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0637]
(40)(02x)包含以下fr的vl区：
[0638]
具有如seq id no:72所示的氨基酸序列的lc
‑
fr1
[0639]
具有如seq id no：75所示的氨基酸序列的lc
‑
fr2
[0640]
具有如seq id no：76所示的氨基酸序列的lc
‑
fr3
[0641]
具有如seq id no：78所示的氨基酸序列的lc
‑
fr4，
[0642]
或其变体，其中lc
‑
fr1、lc
‑
fr2、lc
‑
fr3，或lc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0643]
(41)(03x)包含以下fr的vl区：
[0644]
具有如seq id no:73所示的氨基酸序列的lc
‑
fr1
[0645]
具有如seq id no：74所示的氨基酸序列的lc
‑
fr2
[0646]
具有如seq id no：76所示的氨基酸序列的lc
‑
fr3
[0647]
具有如seq id no：79所示的氨基酸序列的lc
‑
fr4，
[0648]
或其变体，其中lc
‑
fr1、lc
‑
fr2、lc
‑
fr3，或lc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0649]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含vl区，所述vl区包含根据以上(12)或(38)之一的cdr和根据以上(39)至(41)之一的fr。
[0650]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(42)至(68)之一的vl区：
[0651]
(42)(01x)包含根据(12)的cdr和根据(39)的fr的vl区。
[0652]
(43)(01a)包含根据(13)的cdr和根据(39)的fr的vl区。
[0653]
(44)(01g)包含根据(14)的cdr和根据(39)的fr的vl区。
[0654]
(45)(01i)包含根据(15)的cdr和根据(39)的fr的vl区。
[0655]
(46)(01l)包含根据(16)的cdr和根据(39)的fr的vl区。
[0656]
(47)(01q)包含根据(17)的cdr和根据(39)的fr的vl区。
[0657]
(48)(01s)包含根据(18)的cdr和根据(39)的fr的vl区。
[0658]
(49)(01t)包含根据(19)的cdr和根据(39)的fr的vl区。
[0659]
(50)(01v)包含根据(20)的cdr和根据(39)的fr的vl区。
[0660]
(51)(02x)包含根据(21)的cdr和根据(40)的fr的vl区。
[0661]
(52)(02a)包含根据(22)的cdr和根据(40)的fr的vl区。
[0662]
(53)(02g)包含根据(23)的cdr和根据(40)的fr的vl区。
[0663]
(54)(02i)包含根据(24)的cdr和根据(40)的fr的vl区。
[0664]
(55)(02l)包含根据(25)的cdr和根据(40)的fr的vl区。
[0665]
(56)(02q)包含根据(26)的cdr和根据(40)的fr的vl区。
[0666]
(57)(02s)包含根据(27)的cdr和根据(40)的fr的vl区。
[0667]
(58)(02t)包含根据(28)的cdr和根据(40)的fr的vl区。
[0668]
(59)(02v)包含根据(29)的cdr和根据(40)的fr的vl区。
[0669]
(60)(03x)包含根据(30)的cdr和根据(41)的fr的vl区。
[0670]
(61)(03a)包含根据(31)的cdr和根据(41)的fr的vl区。
[0671]
(62)(03g)包含根据(32)的cdr和根据(41)的fr的vl区。
[0672]
(63)(03i)包含根据(33)的cdr和根据(41)的fr的vl区。
[0673]
(64)(03l)包含根据(34)的cdr和根据(41)的fr的vl区。
[0674]
(65)(03q)包含根据(35)的cdr和根据(41)的fr的vl区。
[0675]
(66)(03s)包含根据(36)的cdr和根据(41)的fr的vl区。
[0676]
(67)(03t)包含根据(37)的cdr和根据(41)的fr的vl区。
[0677]
(68)(03v)包含根据(38)的cdr和根据(41)的fr的vl区。
[0678]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(69)至(95)之一的vl区：
[0679]
(69)(01x)vl区，其包含与seq id no：82的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0680]
(70)(01a)vl区，其包含与seq id no：12的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0681]
(71)(01g)vl区，其包含与seq id no：13的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0682]
(72)(01i)vl区，其包含与seq id no：14的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0683]
(73)(01l)vl区，其包含与seq id no：15的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0684]
(74)(01q)vl区，其包含与seq id no：16的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、
95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0685]
(75)(01s)vl区，其包含与seq id no：17的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0686]
(76)(01t)vl区，其包含与seq id no：18的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0687]
(77)(01v)vl区，其包含与seq id no：19的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0688]
(78)(02x)vl区，其包含与seq id no：83的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0689]
(79)(02a)vl区，其包含与seq id no：20的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0690]
(80)(02g)vl区，其包含与seq id no：21的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0691]
(81)(02i)vl区，其包含与seq id no：22的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0692]
(82)(02l)vl区，其包含与seq id no：23的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0693]
(83)(02q)vl区，其包含与seq id no：24的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0694]
(84)(02s)vl区，其包含与seq id no：25的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0695]
(85)(02t)vl区，其包含与seq id no：26的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0696]
(86)(02v)vl区，其包含与seq id no：27的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0697]
(87)(03x)vl区，其包含与seq id no：84的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、
vh 2.5)包含以下cdr的vh区：
[0710]
具有如seq id no:95所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[0711]
具有如seq id no:96所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[0712]
具有如seq id no：97所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3，
[0713]
或其变体，其中hc
‑
cdr1、hc
‑
cdr2或hc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0714]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(97)至(103)之一的vh区：
[0715]
(97)(3c6 vh 1)包含以下fr的vh区：
[0716]
具有如seq id no:104所示的氨基酸序列的hc
‑
fr1
[0717]
具有如seq id no:106所示的氨基酸序列的hc
‑
fr2
[0718]
具有如seq id no:107所示的氨基酸序列的hc
‑
fr3
[0719]
具有如seq id no:108所示的氨基酸序列的hc
‑
fr4，
[0720]
或其变体，其中hc
‑
fr1、hc
‑
fr2、hc
‑
fr3，或hc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0721]
(98)(3c6 vh 2)包含以下fr的vh区：
[0722]
具有如seq id no:105所示的氨基酸序列的hc
‑
fr1
[0723]
具有如seq id no:106所示的氨基酸序列的hc
‑
fr2
[0724]
具有如seq id no:107所示的氨基酸序列的hc
‑
fr3
[0725]
具有如seq id no:108所示的氨基酸序列的hc
‑
fr4，
[0726]
或其变体，其中hc
‑
fr1、hc
‑
fr2、hc
‑
fr3，或hc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0727]
(99)(3c6 vh 2.1)包含以下fr的vh区：
[0728]
具有如seq id no:129所示的氨基酸序列的hc
‑
fr1
[0729]
具有如seq id no:132所示的氨基酸序列的hc
‑
fr2
[0730]
具有如seq id no:136所示的氨基酸序列的hc
‑
fr3
[0731]
具有如seq id no:140所示的氨基酸序列的hc
‑
fr4，
[0732]
或其变体，其中hc
‑
fr1、hc
‑
fr2、hc
‑
fr3，或hc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0733]
(100)(3c6 vh 2.2)包含以下fr的vh区：
[0734]
具有如seq id no:130所示的氨基酸序列的hc
‑
fr1
[0735]
具有如seq id no:133所示的氨基酸序列的hc
‑
fr2
[0736]
具有如seq id no:137所示的氨基酸序列的hc
‑
fr3
[0737]
具有如seq id no:140所示的氨基酸序列的hc
‑
fr4，
[0738]
或其变体，其中hc
‑
fr1、hc
‑
fr2、hc
‑
fr3，或hc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0739]
(101)(3c6 vh 2.3)包含以下fr的vh区：
[0740]
具有如seq id no:130所示的氨基酸序列的hc
‑
fr1
[0741]
具有如seq id no:134所示的氨基酸序列的hc
‑
fr2
[0742]
具有如seq id no:138所示的氨基酸序列的hc
‑
fr3
[0743]
具有如seq id no:140所示的氨基酸序列的hc
‑
fr4，
[0744]
或其变体，其中hc
‑
fr1、hc
‑
fr2、hc
‑
fr3，或hc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0745]
(102)(3c6 vh 2.4)包含以下fr的vh区：
[0746]
具有如seq id no:131所示的氨基酸序列的hc
‑
fr1
[0747]
具有如seq id no:134所示的氨基酸序列的hc
‑
fr2
[0748]
具有如seq id no:139所示的氨基酸序列的hc
‑
fr3
[0749]
具有如seq id no:140所示的氨基酸序列的hc
‑
fr4，
[0750]
或其变体，其中hc
‑
fr1、hc
‑
fr2、hc
‑
fr3，或hc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0751]
(103)(3c6 vh 2.5)包含以下fr的vh区：
[0752]
具有如seq id no:131所示的氨基酸序列的hc
‑
fr1
[0753]
具有如seq id no:135所示的氨基酸序列的hc
‑
fr2
[0754]
具有如seq id no:139所示的氨基酸序列的hc
‑
fr3
[0755]
具有如seq id no:140所示的氨基酸序列的hc
‑
fr4，
[0756]
或其变体，其中hc
‑
fr1、hc
‑
fr2、hc
‑
fr3，或hc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0757]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含vh区，所述vh区包含根据以上(96)的cdr和根据以上(97)至(103)之一的fr。
[0758]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(104)至(110)之一的vh区：
[0759]
(104)(3c6 vh 1)包含根据(96)的cdr和根据(97)的fr的vh区。
[0760]
(105)(3c6 vh 2)包含根据(96)的cdr和根据(98)的fr的vh区。
[0761]
(106)(3c6 vh 2.1)包含根据(96)的cdr和根据(99)的fr的vh区。
[0762]
(107)(3c6 vh 2.2)包含根据(96)的cdr和根据(100)的fr的vh区。
[0763]
(108)(3c6 vh 2.3)包含根据(96)的cdr和根据(101)的fr的vh区。
[0764]
(109)(3c6 vh 2.4)包含根据(96)的cdr和根据(102)的fr的vh区。
[0765]
(110)(3c6 vh 2.5)包含根据(96)的cdr和根据(103)的fr的vh区。
[0766]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(111)至(117)之一的vh区：
[0767]
(111)(3c6 vh 1)vh区，其包含与seq id no：91的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0768]
(112)(3c6 vh 2)vh区，其包含与seq id no：92的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0769]
(113)(3c6 vh 2.1)vh区，其包含与seq id no：116的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0770]
(114)(3c6 vh 2.2)vh区，其包含与seq id no：117的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、
93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0771]
(115)(3c6 vh 2.3)vh区，其包含与seq id no：118的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0772]
(116)(3c6 vh 2.4)vh区，其包含与seq id no：119的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0773]
(117)(3c6 vh 2.5)vh区，其包含与seq id no：120的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0774]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(118)或(119)的vl区：
[0775]
(118)(3c6 vl 1、3c6 vl 1.1、3c6 vl 1.2、3c6 vl 1.3、3c6 vl 1.4)包含以下cdr的vl区：
[0776]
具有如seq id no:98所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0777]
具有如seq id no:99所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0778]
具有如seq id no：100所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0779]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0780]
(119)(3c6 vl 2、3c6 vl 2.1、3c6 vl 2.2、3c6 vl 2.3、3c6 vl 2.4)包含以下cdr的vl区：
[0781]
具有如seq id no:101所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0782]
具有如seq id no:102所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0783]
具有如seq id no：103所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0784]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0785]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(120)至(129)之一的vl区：
[0786]
(120)(3c6 vl 1)包含以下fr的vl区：
[0787]
具有如seq id no:109所示的氨基酸序列的lc
‑
fr1
[0788]
具有如seq id no：111所示的氨基酸序列的lc
‑
fr2
[0789]
具有如seq id no：113所示的氨基酸序列的lc
‑
fr3
[0790]
具有如seq id no：115所示的氨基酸序列的lc
‑
fr4，
[0791]
或其变体，其中lc
‑
fr1、lc
‑
fr2、lc
‑
fr3，或lc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0792]
(121)(3c6 vl 2)包含以下fr的vl区：
[0793]
具有如seq id no:110所示的氨基酸序列的lc
‑
fr1
[0794]
具有如seq id no：112所示的氨基酸序列的lc
‑
fr2
[0795]
具有如seq id no：114所示的氨基酸序列的lc
‑
fr3
[0796]
具有如seq id no：115所示的氨基酸序列的lc
‑
fr4，
[0797]
或其变体，其中lc
‑
fr1、lc
‑
fr2、lc
‑
fr3，或lc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两
个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0798]
(122)(3c6 vl 1.1)包含以下fr的vl区：
[0799]
具有如seq id no:150所示的氨基酸序列的lc
‑
fr1
[0800]
具有如seq id no：112所示的氨基酸序列的lc
‑
fr2
[0801]
具有如seq id no：153所示的氨基酸序列的lc
‑
fr3
[0802]
具有如seq id no：149所示的氨基酸序列的lc
‑
fr4，
[0803]
或其变体，其中lc
‑
fr1、lc
‑
fr2、lc
‑
fr3，或lc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0804]
(123)(3c6 vl 1.2)包含以下fr的vl区：
[0805]
具有如seq id no:151所示的氨基酸序列的lc
‑
fr1
[0806]
具有如seq id no：112所示的氨基酸序列的lc
‑
fr2
[0807]
具有如seq id no：153所示的氨基酸序列的lc
‑
fr3
[0808]
具有如seq id no：149所示的氨基酸序列的lc
‑
fr4，
[0809]
或其变体，其中lc
‑
fr1、lc
‑
fr2、lc
‑
fr3，或lc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0810]
(124)(3c6 vl 1.3)包含以下fr的vl区：
[0811]
具有如seq id no:152所示的氨基酸序列的lc
‑
fr1
[0812]
具有如seq id no：112所示的氨基酸序列的lc
‑
fr2
[0813]
具有如seq id no：154所示的氨基酸序列的lc
‑
fr3
[0814]
具有如seq id no：149所示的氨基酸序列的lc
‑
fr4，
[0815]
或其变体，其中lc
‑
fr1、lc
‑
fr2、lc
‑
fr3，或lc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0816]
(125)(3c6 vl 1.4)包含以下fr的vl区：
[0817]
具有如seq id no:152所示的氨基酸序列的lc
‑
fr1
[0818]
具有如seq id no：112所示的氨基酸序列的lc
‑
fr2
[0819]
具有如seq id no：155所示的氨基酸序列的lc
‑
fr3
[0820]
具有如seq id no：149所示的氨基酸序列的lc
‑
fr4，
[0821]
或其变体，其中lc
‑
fr1、lc
‑
fr2、lc
‑
fr3，或lc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0822]
(126)(3c6 vl 2.1)包含以下fr的vl区：
[0823]
具有如seq id no:141所示的氨基酸序列的lc
‑
fr1
[0824]
具有如seq id no：144所示的氨基酸序列的lc
‑
fr2
[0825]
具有如seq id no：146所示的氨基酸序列的lc
‑
fr3
[0826]
具有如seq id no：149所示的氨基酸序列的lc
‑
fr4，
[0827]
或其变体，其中lc
‑
fr1、lc
‑
fr2、lc
‑
fr3，或lc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0828]
(127)(3c6 vl 2.2)包含以下fr的vl区：
[0829]
具有如seq id no:141所示的氨基酸序列的lc
‑
fr1
[0830]
具有如seq id no：145所示的氨基酸序列的lc
‑
fr2
[0831]
具有如seq id no：147所示的氨基酸序列的lc
‑
fr3
[0832]
具有如seq id no：149所示的氨基酸序列的lc
‑
fr4，
[0833]
或其变体，其中lc
‑
fr1、lc
‑
fr2、lc
‑
fr3，或lc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0834]
(128)(3c6 vl 2.3)包含以下fr的vl区：
[0835]
具有如seq id no:142所示的氨基酸序列的lc
‑
fr1
[0836]
具有如seq id no：145所示的氨基酸序列的lc
‑
fr2
[0837]
具有如seq id no：148所示的氨基酸序列的lc
‑
fr3
[0838]
具有如seq id no：149所示的氨基酸序列的lc
‑
fr4，
[0839]
或其变体，其中lc
‑
fr1、lc
‑
fr2、lc
‑
fr3，或lc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0840]
(129)(3c6 vl 2.4)包含以下fr的vl区：
[0841]
具有如seq id no:143所示的氨基酸序列的lc
‑
fr1
[0842]
具有如seq id no：145所示的氨基酸序列的lc
‑
fr2
[0843]
具有如seq id no：148所示的氨基酸序列的lc
‑
fr3
[0844]
具有如seq id no：149所示的氨基酸序列的lc
‑
fr4，
[0845]
或其变体，其中lc
‑
fr1、lc
‑
fr2、lc
‑
fr3，或lc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0846]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含vl区，所述vl区包含根据以上(118)或(119)的cdr和根据以上(120)至(129)之一的fr。
[0847]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(130)至(139)之一的vl区：
[0848]
(130)(3c6 vl 1)包含根据(118)的cdr和根据(120)的fr的vl区。
[0849]
(131)(3c6 vl 2)包含根据(119)的cdr和根据(121)的fr的vl区。
[0850]
(132)(3c6 vl 1.1)包含根据(118)的cdr和根据(122)的fr的vl区。
[0851]
(133)(3c6 vl 1.2)包含根据(118)的cdr和根据(123)的fr的vl区。
[0852]
(134)(3c6 vl 1.3)包含根据(118)的cdr和根据(124)的fr的vl区。
[0853]
(135)(3c6 vl 1.4)包含根据(118)的cdr和根据(125)的fr的vl区。
[0854]
(136)(3c6 vl 2.1)包含根据(119)的cdr和根据(126)的fr的vl区。
[0855]
(137)(3c6 vl 2.2)包含根据(119)的cdr和根据(127)的fr的vl区。
[0856]
(138)(3c6 vl 2.3)包含根据(119)的cdr和根据(128)的fr的vl区。
[0857]
(139)(3c6 vl 2.4)包含根据(119)的cdr和根据(129)的fr的vl区。
[0858]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(140)至(141)之一的vl区：
[0859]
(140)(3c6 vl 1)vl区，其包含与seq id no：93的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0860]
(141)(3c6 vl 2)vl区，其包含与seq id no：94的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0861]
(142)(3c6 vl 1.1)vl区，其包含与seq id no：125的氨基酸序列具有至少70％的
序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0862]
(143)(3c6 vl 1.2)vl区，其包含与seq id no：126的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0863]
(144)(3c6 vl 1.3)vl区，其包含与seq id no：127的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0864]
(145)(3c6 vl 1.4)vl区，其包含与seq id no：128的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0865]
(146)(3c6 vl 2.1)vl区，其包含与seq id no：121的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0866]
(147)(3c6 vl 2.2)vl区，其包含与seq id no：122的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0867]
(148)(3c6 vl 2.3)vl区，其包含与seq id no：123的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0868]
(149)(3c6 vl 2.4)vl区，其包含与seq id no：124的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0869]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以上(96)至(117)中任一项的vh区，和根据以上(118)至(149)中任一项的vl区。
[0870]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(105)的vh区和根据(131)的vl区。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(112)的vh区和根据(141)的vl区。
[0871]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(107)的vh区和根据(137)的vl区。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(107)的vh区和根据(136)的vl区。
[0872]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(114)的vh区和根据(147)的vl区。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(114)的vh区和根据(146)的vl区。
[0873]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(107)的vh区和根据(138)的vl区。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(114)的vh区和根据(148)的vl区。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(107)的vh区和根据(139)的vl区。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(114)的vh区和根据(149)的vl区。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(108)的vh区和根据(137)的vl区。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(115)的vh区和根据(147)的vl区。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(108)的vh区和根据(138)的vl区。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(115)的vh区和根据(148)的vl区。
[0874]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(150)至(152)之一的vh区：
[0875]
(150)(1h2 vh)包含以下cdr的vh区：
[0876]
具有如seq id no:158所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[0877]
具有如seq id no:159所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[0878]
具有如seq id no：160所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3，
[0879]
或其变体，其中hc
‑
cdr1、hc
‑
cdr2或hc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0880]
(151)(7d4 vh)包含以下cdr的vh区：
[0881]
具有如seq id no:176所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[0882]
具有如seq id no:177所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[0883]
具有如seq id no：178所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3，
[0884]
或其变体，其中hc
‑
cdr1、hc
‑
cdr2或hc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0885]
(152)(8h11 vh)包含以下cdr的vh区：
[0886]
具有如seq id no:194所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[0887]
具有如seq id no:195所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[0888]
具有如seq id no：196所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3，
[0889]
或其变体，其中hc
‑
cdr1、hc
‑
cdr2或hc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0890]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(153)至(155)之一的vh区：
[0891]
(153)(1h2 vh)包含以下fr的vh区：
[0892]
具有如seq id no:164所示的氨基酸序列的hc
‑
fr1
[0893]
具有如seq id no:165所示的氨基酸序列的hc
‑
fr2
[0894]
具有如seq id no:166所示的氨基酸序列的hc
‑
fr3
[0895]
具有如seq id no:167所示的氨基酸序列的hc
‑
fr4，
[0896]
或其变体，其中hc
‑
fr1、hc
‑
fr2、hc
‑
fr3，或hc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0897]
(154)(7d4 vh)包含以下fr的vh区：
[0898]
具有如seq id no:182所示的氨基酸序列的hc
‑
fr1
[0899]
具有如seq id no:183所示的氨基酸序列的hc
‑
fr2
[0900]
具有如seq id no:184所示的氨基酸序列的hc
‑
fr3
[0901]
具有如seq id no:185所示的氨基酸序列的hc
‑
fr4，
[0902]
或其变体，其中hc
‑
fr1、hc
‑
fr2、hc
‑
fr3，或hc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0903]
(155)(8h11 vh)包含以下fr的vh区：
[0904]
具有如seq id no:200所示的氨基酸序列的hc
‑
fr1
[0905]
具有如seq id no:201所示的氨基酸序列的hc
‑
fr2
[0906]
具有如seq id no:202所示的氨基酸序列的hc
‑
fr3
[0907]
具有如seq id no:203所示的氨基酸序列的hc
‑
fr4，
[0908]
或其变体，其中hc
‑
fr1、hc
‑
fr2、hc
‑
fr3，或hc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0909]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含vh区，所述vh区包含根据以上(95)或(150)至(152)之一的cdr和根据以上(97)至(103)或(153)至(155)之一的fr。
[0910]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(156)至(158)之一的vh区：
[0911]
(156)(1h2 vh)包含根据(150)的cdr和根据(153)的fr的vh区。
[0912]
(157)(7d4 vh)包含根据(151)的cdr和根据(154)的fr的vh区。
[0913]
(158)(8h11 vh)包含根据(152)的cdr和根据(155)的fr的vh区。
[0914]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(159)至(161)之一的vh区：
[0915]
(159)(1h2 vh)vh区，其包含与seq id no：156的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0916]
(160)(7d4 vh)vh区，其包含与seq id no：174的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0917]
(161)(8h11 vh)vh区，其包含与seq id no：192的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0918]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(162)至(164)之一的vl区：
[0919]
(162)(1h2 vl)包含以下cdr的vl区：
[0920]
具有如seq id no:161所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0921]
具有如seq id no:162所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0922]
具有如seq id no：163所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0923]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0924]
(163)(7d4 vl)包含以下cdr的vl区：
[0925]
具有如seq id no:179所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0926]
具有如seq id no:180所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0927]
具有如seq id no：181所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0928]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0929]
(164)(8h11 vl)包含以下cdr的vl区：
[0930]
具有如seq id no:197所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0931]
具有如seq id no:198所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0932]
具有如seq id no：199所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3，
[0933]
或其变体，其中lc
‑
cdr1、lc
‑
cdr2或lc
‑
cdr3中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0934]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(165)至(167)之一的vl区：
[0935]
(165)(1h2 vl)包含以下fr的vl区：
[0936]
具有如seq id no:168所示的氨基酸序列的lc
‑
fr1
[0937]
具有如seq id no：169所示的氨基酸序列的lc
‑
fr2
[0938]
具有如seq id no：170所示的氨基酸序列的lc
‑
fr3
[0939]
具有如seq id no：170所示的氨基酸序列的lc
‑
fr4，
[0940]
或其变体，其中lc
‑
fr1、lc
‑
fr2、lc
‑
fr3，或lc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0941]
(166)(7d4 vl)包含以下fr的vl区：
[0942]
具有如seq id no:186所示的氨基酸序列的lc
‑
fr1
[0943]
具有如seq id no：187所示的氨基酸序列的lc
‑
fr2
[0944]
具有如seq id no：188所示的氨基酸序列的lc
‑
fr3
[0945]
具有如seq id no：189所示的氨基酸序列的lc
‑
fr4，
[0946]
或其变体，其中lc
‑
fr1、lc
‑
fr2、lc
‑
fr3，或lc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0947]
(167)(8h11 vl)包含以下fr的vl区：
[0948]
具有如seq id no:204所示的氨基酸序列的lc
‑
fr1
[0949]
具有如seq id no：205所示的氨基酸序列的lc
‑
fr2
[0950]
具有如seq id no：206所示的氨基酸序列的lc
‑
fr3
[0951]
具有如seq id no：207所示的氨基酸序列的lc
‑
fr4，
[0952]
或其变体，其中lc
‑
fr1、lc
‑
fr2、lc
‑
fr3，或lc
‑
fr4中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0953]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含vl区，所述vl区包含根据以上(118)、(119)或(162)至(164)之一的cdr和根据以上(120)至(129)或(165)至(167)之一的fr。
[0954]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(168)至(170)之一的vl区：
[0955]
(168)(1h2 vl)包含根据(162)的cdr和根据(165)的fr的vl区。
[0956]
(169)(7d4 vl)包含根据(163)的cdr和根据(166)的fr的vl区。
[0957]
(170)(8h11 vl)包含根据(164)的cdr和根据(167)的fr的vl区。
[0958]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据以下(171)至(173)之一的vl区：
[0959]
(171)(1h2 vl)vl区，其包含与seq id no：157的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0960]
(172)(7d4 vl)vl区，其包含与seq id no：175的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0961]
(173)(8h11 vl)vl区，其包含与seq id no：193的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0962]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(96)至(117)或(150)至(161)之一的vh区，和根据(118)至(149)或(162)至(173)之一的vl区。
[0963]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(150)的vh区和根据(162)的vl
区。
[0964]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(159)的vh区和根据(171)的vl区。
[0965]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(151)的vh区和根据(163)的vl区。
[0966]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(160)的vh区和根据(172)的vl区。
[0967]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(152)的vh区和根据(164)的vl区。
[0968]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含根据(161)的vh区和根据(173)的vl区。
[0969]
在一些实施方式中，提供了一种任选分离的抗原结合分子，其能够与il
‑
11结合，其中所述抗原结合分子包括：
[0970]
(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
[0971]
具有如seq id no:158所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[0972]
具有如seq id no:159所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[0973]
具有如seq id no:160所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[0974]
(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
[0975]
具有如seq id no:161所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0976]
具有如seq id no:162所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0977]
具有如seq id no:163所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
[0978]
在一些实施方式中，提供了一种任选分离的抗原结合分子，其能够与il
‑
11结合，其中所述抗原结合分子包括：
[0979]
(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
[0980]
具有如seq id no:176所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[0981]
具有如seq id no:177所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[0982]
具有如seq id no:178所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[0983]
(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
[0984]
具有如seq id no:179所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0985]
具有如seq id no:180所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0986]
具有如seq id no:181所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
[0987]
在一些实施方式中，提供了一种任选分离的抗原结合分子，其能够与il
‑
11结合，其中所述抗原结合分子包括：
[0988]
(i)包含以下cdr的重链可变区(vh)：
[0989]
具有如seq id no:194所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[0990]
具有如seq id no:195所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[0991]
具有如seq id no:196所示的氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[0992]
(ii)包含以下cdr的轻链可变区(vl)：
[0993]
具有如seq id no:197所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[0994]
具有如seq id no:198所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[0995]
具有如seq id no:199所示的氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
[0996]
在其中一个或多个氨基酸被另一种氨基酸取代的本发明的实施方式中，所述取代可以是保守取代，例如根据下表。在一些实施方式中，中间列中相同区块中的氨基酸被取代。在一些实施方式中，最右边一栏中相同行中的氨基酸被取代：
[0997][0998]
在一些实施方式中，取代在功能上可以是保守的。即，在一些实施方式中，与等效的未取代分子相比，取代可能不影响(或可能基本上不影响)包含取代的抗原结合分子的一种或多种功能性质(例如靶结合)。
[0999]
在一些实施方式中，相对于参照vh或vl序列的取代可以集中在所述vh或vl序列的一个或多个特定区域中。例如，对参照vh或vl序列的变化可以集中在一个或多个框架区(fr1、fr2、fr3和/或fr4)。
[1000]
抗体的抗原结合区的vh和vl区共同构成fv区。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子包含与il
‑
11结合的fv区，或由其组成。在一些实施方式中，提供了fv的vh和vl区作为通过接头区连接的单个多肽，即单链fv(scfv)。
[1001]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子包含免疫球蛋白重链恒定序列的一个或多个区域。在一些实施方式中，所述免疫球蛋白重链恒定区序列是或衍生自igg(例如igg1、igg2、igg3、igg4)、iga(例如iga1、iga2)、igd、ige或igm的重链恒定区序列。
[1002]
在一些实施方式中，所述免疫球蛋白重链恒定区序列是人免疫球蛋白g1恒定区(ighg1；uniprot：p01857
‑
1，v1；seq id no：85)。seq id no：85的第1至98位形成ch1区(seq id no：86)。seq id no：85的第99至110位在ch1和ch2区之间形成铰链区(seq id no：87)。seq id no：85的第111至223位形成ch2区(seq id no：88)。seq id no：85的第224至330位形成ch3区(seq id no：89)。
[1003]
在一些实施方式中，ch1区包含seq id no：86的序列或由其组成，或包含与seq id no:86所示的氨基酸序列具有至少60％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的序列，或由其组成。在一些实施方式中，ch1
‑
ch2铰链区包含seq id no：87的序列或由其组成，或包含与seq id no:87所示的氨基酸序列具有至少60％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的序列，或由其组成。在一些实施方式中，ch2区包含seq id no：88的序列或由其组成，或包含与seq id no:88所
示的氨基酸序列具有至少60％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的序列，或由其组成。在一些实施方式中，ch3区包含seq id no：89的序列或由其组成，或包含与seq id no:89所示的氨基酸序列具有至少60％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的序列，或由其组成。
[1004]
在一些实施方式中，所述免疫球蛋白重链恒定区序列是人免疫球蛋白g4恒定区(ighg4；uniprot：p01861，v1；seq id no：211)。seq id no：211的第1至98位形成ch1区(seq id no：212)。seq id no：211的第99至110位在ch1和ch2区之间形成铰链区(seq id no：213)。seq id no：211的第111至220位形成ch2区(seq id no：214)。seq id no：211的第221至327位形成ch3区(seq id no：215)。
[1005]
在一些实施方式中，ch1区包含seq id no：212的序列或由其组成，或包含与seq id no:212所示的氨基酸序列具有至少60％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的序列，或由其组成。在一些实施方式中，ch1
‑
ch2铰链区包含seq id no：213的序列或由其组成，或包含与seq id no:213所示的氨基酸序列具有至少60％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的序列，或由其组成。在一些实施方式中，ch2区包含seq id no：214的序列或由其组成，或包含与seq id no:214所示的氨基酸序列具有至少60％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的序列，或由其组成。在一些实施方式中，ch3区包含seq id no：215的序列或由其组成，或包含与seq id no:215所示的氨基酸序列具有至少60％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的序列，或由其组成。
[1006]
在一些实施方式中，所述免疫球蛋白重链恒定区序列是人免疫球蛋白g4恒定区(ighg4；uniprot：p01861，v1)包含赋予本发明的抗原结合分子改善的特性的氨基酸取代。在一些实施方式中，所述免疫球蛋白重链恒定区序列是包含s241p和/或l248e取代的人igg4。s241p突变是铰链稳定的，而l248e突变则进一步降低了igg4已经较低的adcc效应子功能(davies和sutton，immunol rev.2015年11月；268(1)：139
‑
159；angal等，mol immunol 1993年1月；30(1)：105
‑
8)。较低的adcc活性对于抗体的潜在皮下施用是有利的。
[1007]
在一些实施方式中，所述免疫球蛋白重链恒定区序列是人免疫球蛋白g4恒定区(ighg4；uniprot：p01861，v1)，其包含s241p取代(根据kabat系统的编号)，如seq id no：216所示。seq id no：216的第1至98位形成ch1区(seq id no：212)。seq id no：216的第99至110位在ch1和ch2区之间形成铰链区(seq id no：217)，其包含s241p取代。seq id no：216的第111至220位形成ch2区(seq id no：214)。seq id no：216的第221至327位形成ch3区(seq id no：215)。
[1008]
在一些实施方式中，ch1区包含seq id no：212的序列或由其组成，或包含与seq id no:212所示的氨基酸序列具有至少60％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的序列，或由其组成。在一些实施方式中，ch1
‑
ch2铰链区包含seq id no：217的序列或由其组成，或包含与seq id no:217所示的氨基酸序列具有至少60％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、
92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的序列，或由其组成。在一些实施方式中，ch2区包含seq id no：214的序列或由其组成，或包含与seq id no:214所示的氨基酸序列具有至少60％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的序列，或由其组成。在一些实施方式中，ch3区包含seq id no：215的序列或由其组成，或包含与seq id no:215所示的氨基酸序列具有至少60％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的序列，或由其组成。
[1009]
在一些实施方式中，所述免疫球蛋白重链恒定区序列是人免疫球蛋白g4恒定区(ighg4；uniprot：p01861，v1)，其包含s241p和l248e取代(根据kabat系统的编号)，如seq id no：218所示。seq id no：218的第1至98位形成ch1区(seq id no：212)。seq id no：218的第99至110位在ch1和ch2区之间形成铰链区(seq id no：217)，其包含s241p取代。seq id no：218的第111至220位形成ch2区(seq id no：219)，其包含l248e取代。seq id no：218的第221至327位形成ch3区(seq id no：215)。
[1010]
在一些实施方式中，ch1区包含seq id no：212的序列或由其组成，或包含与seq id no:212所示的氨基酸序列具有至少60％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的序列，或由其组成。在一些实施方式中，ch1
‑
ch2铰链区包含seq id no：217的序列或由其组成，或包含与seq id no:217所示的氨基酸序列具有至少60％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的序列，或由其组成。在一些实施方式中，ch2区包含seq id no：219的序列或由其组成，或包含与seq id no:219所示的氨基酸序列具有至少60％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的序列，或由其组成。在一些实施方式中，ch3区包含seq id no：215的序列或由其组成，或包含与seq id no:215所示的氨基酸序列具有至少60％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的序列，或由其组成。
[1011]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子包含免疫球蛋白轻链恒定区序列的一个或多个区域。在一些实施方式中，所述免疫球蛋白轻链恒定区序列是人免疫球蛋白κ恒定区(igkc；cκ；uniprot：p01834
‑
1，v2；seq id no：90)。在一些实施方式中，所述免疫球蛋白轻链恒定区序列是人免疫球蛋白λ恒定区(iglc；cλ)，例如iglc1、iglc2、iglc3、iglc6或iglc7(seq id no：231、232、233、234或235)。在一些实施方式中，cl区包含seq id no：90的序列或由其组成，或包含与seq id no:90所示的氨基酸序列具有至少60％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的序列，或由其组成。在一些实施方式中，cl区包含seq id no：231、232、233、234或235的序列或由其组成，或包含与seq id no:231、232、233、234或235所示的氨基酸序列具有至少60％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的序列，或由其组成。
[1012]
抗体的抗原结合区的vl和轻链恒定(cl)区，以及vh区和重链恒定1(ch1)区共同构成fab区。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含含有vh、ch1、vl和cl(例如cκ或cλ)的fab区。在一些实施方式中，所述fab区包含含有vh和ch1的多肽(例如vh
‑
ch1融合多肽)，和
包含vl和cl的多肽(例如vl
‑
cl融合多肽)。在一些实施方式中，所述fab区包含含有vh和cl的多肽(例如vh
‑
cl融合多肽)和含有vl和ch的多肽(例如vl
‑
ch1融合多肽)；即，在一些实施方式中，所述fab区是crossfab区。在一些实施方式中，所述fab或crossfab的vh、ch1、vl和cl区以通过接头区连接的单个多肽的形式提供，即作为单链fab(scfab)或单链crossfab(sccrossfab)。
[1013]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子包含与il
‑
11结合的fab区，或由其组成。
[1014]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子包含与il
‑
11结合的全抗体，或由其组成。如本文所用，“全抗体”是指具有与免疫球蛋白(ig)的结构基本相似的结构的抗体。例如，不同种类的免疫球蛋白及其结构被描述于schroeder和cavacini，j allergy clin immunol.(2010)125(202):s41
‑
s52，其通过引用整体并入本文。
[1015]
g型免疫球蛋白(即igg)是～150kda的糖蛋白，其包含两个重链和两个轻链。从n末端到c末端，所述重链包含vh，其后是包含三个恒定结构域(ch1、ch2和ch3)的重链恒定区，以及类似地包含vl和随后的cl的轻链。根据重链，免疫球蛋白可以分类为igg(例如igg1、igg2、igg3、igg4)、iga(例如iga1、iga2)、igd、ige或igm。轻链可以是卡帕(κ)或兰姆达(λ)。
[1016]
在一些实施方式中，本文描述的抗原结合分子包含与il
‑
11结合的igg(例如igg1、igg2、igg3、igg4)、iga(例如iga1、iga2)、igd、ige或igm，或由其组成。
[1017]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子与il
‑
11至少单价结合。结合价是指抗原结合分子中给定抗原决定簇的结合位点的数目。因此，在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含il
‑
11的至少一个结合位点。
[1018]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含多于一个的il
‑
11结合位点，例如2个、3个或4个结合位点。结合位点可以相同或不同。在一些实施方式中，所述抗原结合分子对il
‑
11是例如二价、三价或四价的。
[1019]
本发明的方面涉及多特异性抗原结合分子。“多特异性”是指所述抗原结合分子显示出与一个以上靶标的特异性结合。在一些实施方式中，所述抗原结合分子是双特异性抗原结合分子。在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含至少两个不同的抗原结合结构域(即，至少两个抗原结合结构域，例如包含不同的vh和vl)。
[1020]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子结合il
‑
11和另一靶标(例如，il
‑
11以外的抗原)，因此至少是双特异性的。术语“双特异性”是指所述抗原结合分子能够特异性结合至少两个不同的抗原决定簇。
[1021]
应当理解，根据本发明的抗原结合分子(例如，多特异性抗原结合分子)可以包含能够与所述抗原结合分子特异的靶标结合的抗原结合分子。例如，能够结合il
‑
11和il
‑
11以外的抗原的抗原结合分子可以包括：(i)能够与il
‑
11结合的抗原结合分子，以及(ii)能够与il
‑
11以外的抗原结合的抗原结合分子。
[1022]
还应当理解，根据本发明的抗原结合分子(例如，多特异性抗原结合分子)可以包含能够与所述抗原结合分子特异的靶标结合的抗原结合多肽或抗原结合多肽复合物。例如，根据本发明的抗原结合分子可以包含例如(i)能够结合il
‑
11的抗原结合多肽复合物，其包含轻链多肽(包含结构vl
‑
cl)和重链多肽(包含结构vh
‑
ch1
‑
ch2
‑
ch3)，和(ii)能够结合除il
‑
11以外的抗原的抗原结合多肽复合物，其包含轻链多肽(包含结构vl
‑
cl)和重链多
肽(包含结构vh
‑
ch1
‑
ch2
‑
ch3)。
[1023]
在一些实施方式中，较大抗原结合分子(例如，多特异性抗原结合分子)的组分抗原结合分子可以被称为例如所述较大抗原结合分子的“抗原结合结构域”或“抗原结合区”。
[1024]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含能够结合il
‑
11的抗原结合分子，以及能够结合除il
‑
11以外的抗原的抗原结合分子。在一些实施方式中，所述除il
‑
11以外的抗原是免疫细胞表面分子。在一些实施方式中，所述除il
‑
11以外的抗原是癌细胞抗原。在一些实施方式中，所述除il
‑
11以外的抗原是受体分子，例如细胞表面受体。在一些实施方式中，所述除il
‑
11以外的抗原是细胞信号传导分子，例如细胞因子、趋化因子、干扰素、白介素或淋巴因子。在一些实施方式中，所述除il
‑
11以外的抗原是生长因子或激素。
[1025]
所述癌细胞抗原是由癌细胞表达或过表达的抗原。癌细胞抗原可以是任何肽/多肽、糖蛋白、脂蛋白、聚糖、糖脂、脂质或其片段。癌细胞抗原的表达可能与癌症有关。癌细胞抗原可以由癌细胞异常表达(例如，癌细胞抗原可以异常定位表达)，或者可以由癌细胞以异常结构表达。癌细胞抗原可能能够引发免疫反应。在一些实施方式中，所述抗原在癌细胞的细胞表面表达(即，癌细胞抗原是癌细胞表面抗原)。在一些实施方式中，与本文所述的抗原结合分子结合的抗原的部分存在于癌细胞的外表面上(即，是细胞外的)。所述癌细胞抗原可以是癌症相关抗原。在一些实施方式中，所述癌症相关抗原是其表达与癌症症状的发展、进展或严重性相关的抗原。癌症相关抗原可能与癌症的原因或病理有关，或者可能由于癌症而异常表达。在一些实施方式中，癌细胞抗原是其表达被癌症细胞上调(例如，在rna和/或蛋白质水平)的抗原，例如，与可比的非癌细胞(例如源自相同组织/细胞类型的非癌细胞)的表达水平相比。在一些实施方式中，所述癌症相关抗原可以优先由癌细胞表达，而不由可比的非癌细胞(例如来自相同组织/细胞类型的非癌细胞)表达。在一些实施方式中，所述癌症相关抗原可以是突变的癌基因或突变的抑癌基因的产物。在一些实施方式中，所述癌症相关抗原可以是过度表达的细胞蛋白、由致癌病毒产生的癌症抗原、癌胚抗原，或细胞表面糖脂或糖蛋白的产物。
[1026]
免疫细胞表面分子可以是在免疫细胞中或细胞表面表达的任何肽/多肽、糖蛋白、脂蛋白、聚糖、糖脂、脂质或其片段。在一些实施方式中，所述免疫细胞表面分子中与本发明的抗原结合分子结合的部分在免疫细胞的外表面上(即，在细胞外)。所述免疫细胞表面分子可以在任何免疫细胞的细胞表面表达。在一些实施方式中，所述免疫细胞可以是造血起源的细胞，例如嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、树突状细胞、淋巴细胞或单核细胞。所述淋巴细胞可以是例如t细胞、b细胞、天然杀伤(nk)细胞、nkt细胞或先天性淋巴样细胞(ilc)，或其前体(例如，胸腺细胞或前b细胞)。在一些实施方式中，所述免疫细胞表面分子可以是共刺激分子(例如，cd28、ox40、4
‑
1bb、icos或cd27)或其配体。在一些实施方式中，所述免疫细胞表面分子可以是检查点抑制剂(例如，pd
‑
1、ctla
‑
4、lag
‑
3、tim
‑
3、tigit或btla)或其配体。
[1027]
可以以任何合适的形式提供根据本发明的多特异性抗原结合分子，例如在brinkmann和kontermann mabs(2017)9(2)：182
‑
212中描述的那些形式，其通过引用整体并入本文。合适的格式包括brinkmann和kontermann mabs(2017)9(2)：182
‑
212的图2中所示的格式：抗体缀合物，例如igg2、f(ab’)2或covx体；igg或igg样分子，例如igg、嵌合igg、κλ体常见hc；ch1/cl融合蛋白，例如scfv2
‑
ch1/cl、vhh2
‑
ch1/cl；“仅可变域”双特异性抗原结合
分子，例如串联scfv(tafv)、三抗体、双抗体(db)、dsdb、db(kih)、dart、scdb、dsfv
‑
dsfv、tandab、三头、串联dab/vhh、三价dab.vhh；非ig融合蛋白，例如scfv2‑
白蛋白、scdb
‑
白蛋白、tafv
‑
白蛋白、tafv
‑
毒素、微抗体、dnl
‑
fab2、dnl
‑
fab2‑
scfv、dnl
‑
fab2‑
igg
‑
细胞因子2、immtac(tcr
‑
scfv)；修饰的fc和ch3融合蛋白，例如scfv
‑
fc(kih)、scfv
‑
fc(ch3电荷对)、scfv
‑
fc(ew
‑
rvt)、scfv
‑
fc(ha
‑
tf)、scfv
‑
fc(seed体)、tafv
‑
fc(kih)、scfv
‑
fc(kih)
‑
fv、fab
‑
fc(kih)
‑
scfv、fab
‑
scfv
‑
fc(kih)、fab
‑
scfv
‑
fc(beat)、fab
‑
scfv
‑
fc(seed体)、dart
‑
fc、scfv
‑
ch3(kih)、trifabs；fc融合蛋白，例如双抗体、scdb
‑
fc、tafv
‑
fc、scfv
‑
fc
‑
scfv、hcab
‑
vhh、fab
‑
scfv
‑
fc、scfv4‑
ig、scfv2‑
fcab；ch3融合蛋白，例如双抗体、scdb
‑
ch3；ige/igm ch2融合蛋白，例如scfv
‑
ehd2
‑
scfv、scfvmhd2
‑
scfv；fab融合蛋白，例如fab
‑
scfv(双抗体)、fab
‑
scfv2(三抗体)、fab
‑
fv、fab
‑
dsfv、fab
‑
vhh、正交fab
‑
fab；非ig融合蛋白，例如dnl
‑
fab3、dnl
‑
fab2‑
scfv、dnl
‑
fab2‑
igg
‑
细胞因子2；不对称igg或igg样分子，例如igg(kih)、igg(kih)通用lc、zw1 igg通用lc、biclonics通用lc、crossmab、crossmab(kih)、scfab
‑
igg(kih)、fab
‑
scfab
‑
igg(kih)、正交fab igg(kih)、duetmab、ch3电荷对 ch1/cl电荷对、铰链/ch3电荷对、seed体、duobody、四合一crossmab(kih)、luz
‑
y通用lc；luz
‑
y scfab
‑
igg、fcfc*；附加的并且fc修饰的igg，例如igg(kih)
‑
fv、igg ha
‑
tf
‑
fv、igg(kih)scfab、scfab
‑
fc(kih)
‑
scfv2、scfab
‑
fc(kih)
‑
scfv、半dvd
‑
ig、dvi
‑
ig(四合一)、crossmab
‑
fab；修饰的fc和ch3融合蛋白，例如fab
‑
fc(kih)
‑
scfv、fab
‑
scfv
‑
fc(kih)、fab
‑
scfv
‑
fc(beat)、fab
‑
scfv
‑
fc
‑
seed体、trifab；附加的igg
‑
hc融合蛋白，例如igg
‑
hc、scfv、igg
‑
dab、igg
‑
tafv、igg
‑
crossfab、igg
‑
正交fab、igg
‑
(cαcβ)fab、scfv
‑
hc
‑
igg、串联fab
‑
igg(正交fab)fab
‑
igg(cαcβfab)、fab
‑
igg(cr3)、fab
‑
铰链
‑
igg(cr3)；附加的igg
‑
lc融合蛋白，例如igg
‑
scfv(lc)、scfv(lc)
‑
igg、dab
‑
igg；附加的igg
‑
hc和lc融合蛋白，例如dvd
‑
ig、tvd
‑
ig、codv
‑
ig、scfv4‑
igg、zybody；fc融合蛋白，例如fab
‑
scfv
‑
fc、scfv4‑
ig；f(ab’)2融合蛋白，例如f(ab’)2‑
scfv2；ch1/cl融合蛋白，例如scfv2‑
ch1
‑
铰链/cl；修饰的igg，例如daf(二合一igg)、dutamab、mab2；和非ig融合蛋白，例如dnl
‑
fab4‑
igg。
[1028]
技术人员能够设计和制备双特异性抗原结合分子。产生双特异性抗原结合分子的方法包括对抗原结合分子或抗体片段进行化学交联，例如通过可还原的二硫键或不可还原的硫醚键，例如segal和bast，2001.双特异性抗原结合分子的产生.current protocols in immunology.14:iv:2.13:2.13.1
–
2.13.16中所描述的，其内容通过引用并入本文。例如，n
‑
琥珀酰亚胺
‑3‑
(2
‑
吡啶二巯基)丙酸酯(spdp)可用于化学交联，例如，fab片段通过铰链区sh
‑
基团，产生二硫键连接的双特异性f(ab)2异二聚体。
[1029]
用于产生双特异性抗原结合分子的其他方法包括融合产生抗体的杂交瘤，例如：用聚乙二醇制备能够分泌双特异性抗体的四倍体细胞，例如描述于d.m.和bast，b.j.2001.双特异性抗原结合分子的产生.current protocols in immunology.14:iv:2.13:2.13.1
–
2.13.16。
[1030]
本发明所述的双特异性抗原结合分子也可以通过重组产生，通过表达例如编码抗原结合分子多肽的核酸构建体，例如描述于抗体工程：方法和步骤，第二版(胡马纳出版社，2012年)，第40章：双特异性抗原结合分子的产生：微型双功能抗体(diabodies)和串联scfv(hornig和)，或法国的，如何制备双特异性抗体，methods mol.med.2000；40:333
‑
339，两者的全部内容在此引入作为参考。例如，编码两个抗原结合
片段的轻链和重链可变结构域的dna构建体(即能够结合il
‑
11的抗原结合片段的轻链和重链可变结构域，以及能够结合另一种靶蛋白的抗原结合片段的轻链和重链可变区)，并且包括编码在抗原结合片段之间的合适的接头或二聚化结构域的序列，可以通过分子克隆技术制备。此后，可以通过在合适的宿主细胞(例如哺乳动物宿主细胞)中表达(例如体外)构建体来产生重组双特异性抗体，然后可以任选地纯化表达的重组双特异性抗体。
[1031]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子包含fc区。fc区由来自一个多肽的ch2和ch3区以及另一多肽的ch2和ch3区组成。来自两个多肽的ch2和ch3区一起构成所述fc区。
[1032]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子包含fc区，该fc区在ch2和ch3区中的一个或多个中具有修饰，以促进所述fc区的偶联。抗原结合分子的组成多肽的重组共表达和随后的偶联导致几种可能的组合。为了在重组生产中提高抗原结合分子中所需多肽组合的产率，在fc区中引入促进重链多肽所需组合的偶联的修饰是有利的。修饰可以促进例如不同多肽链的ch2和/或ch3区之间的疏水和/或静电相互作用。合适的方法描述于例如ha等，front.immnol(2016)7:394中，其通过引用整体并入本文。在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子包含fc区，该fc区包括根据以下形式之一的fc区的ch3区中的成对取代：kih、kih
s
‑
s
、ha
‑
tf、zw1、7.8.60、dd
‑
kk、ew
‑
rvt、ew
‑
rvt
s
‑
s
、seed或a107，如ha等，front.immnol(2016)7:394的表1中所示。
[1033]
多肽
[1034]
本发明还提供了抗原结合分子的多肽组成。所述多肽可以以分离的或基本上纯化的形式提供。
[1035]
本发明的抗原结合分子可以是或可以包含多肽的复合物。
[1036]
本说明书中，应理解，当多肽包含一个以上结构域或区域，多个结构域/区域优选存在于同一多肽链中。也就是说，所述包含一个以上的结构域或区域的多肽是包含所述结构域/区域的融合多肽。
[1037]
在一些实施方式中，本发明所述的多肽包含本文所述的vh，或由其组成。在一些实施方式中，本发明所述的多肽包含本文所述的vl，或由其组成。
[1038]
在一些实施方式中，所述多肽还包含一个或多个抗体重链恒定区(ch)。在一些实施方式中，所述多肽还包含一个或多个抗体轻链恒定区(cl)。在一些实施方式中，所述多肽包含免疫球蛋白(ig)的ch1、ch2区和/或ch3区。
[1039]
在一些实施方式中，所述多肽包含免疫球蛋白重链恒定区序列的一个或多个区域。在一些实施方式中，所述多肽包含如本文所述的ch1区。在一些实施方式中，所述多肽包含如本文所述的ch1
‑
ch2铰链区。在一些实施方式中，所述多肽包含如本文所述的ch2区。在一些实施方式中，所述多肽包含如本文所述的ch3区。
[1040]
在一些实施方式中，所述多肽包含ch3区，所述ch3区包含ha等，front.immnol(2016)7:394的表1中所示的任何氨基酸取代/氨基酸取代的组合，其通过上述引用并入本文。
[1041]
在一些实施方式中，所述多肽的ch2和/或ch3区包含一个或多个氨基酸取代，以促进所述多肽与另一包含ch2和/或ch3区的多肽偶联。
[1042]
在一些实施方式中，所述多肽包含免疫球蛋白轻链恒定区序列的一个或多个区域。在一些实施方式中，所述多肽包含如本文所述的cl区。
[1043]
在一些实施方式中，本发明所述的多肽包含根据以下之一的从n端到c端的结构：
[1044]
(i)vh
[1045]
(ii)vl
[1046]
(iii)vh
‑
ch1
[1047]
(iv)vl
‑
cl
[1048]
(v)vl
‑
ch1
[1049]
(vi)vh
‑
cl
[1050]
(vii)vh
‑
ch1
‑
ch2
‑
ch3
[1051]
(viii)vl
‑
cl
‑
ch2
‑
ch3
[1052]
(ix)vl
‑
ch1
‑
ch2
‑
ch3
[1053]
(x)vh
‑
cl
‑
ch2
‑
ch3
[1054]
本发明还提供了由本发明的多肽组成的抗原结合分子。在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子包含以下多肽组合之一：
[1055]
(a)vh vl
[1056]
(b)vh
‑
ch1 vl
‑
cl
[1057]
(c)vl
‑
ch1 vh
‑
cl
[1058]
(d)vh
‑
ch1
‑
ch2
‑
ch3 vl
‑
cl
[1059]
(e)vh
‑
cl
‑
ch2
‑
ch3 vl
‑
ch1
[1060]
(f)vl
‑
ch1
‑
ch2
‑
ch3 vh
‑
cl
[1061]
(g)vl
‑
cl
‑
ch2
‑
ch3 vh
‑
ch1
[1062]
(h)vh
‑
ch1
‑
ch2
‑
ch3 vl
‑
cl
‑
ch2
‑
ch3
[1063]
(i)vh
‑
cl
‑
ch2
‑
ch3 vl
‑
ch1
‑
ch2
‑
ch3
[1064]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含一种以上的上述(a)至(i)中所示的组合的多肽。举例来说，根据上述(d)，在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含两个含有结构vh
‑
ch1
‑
ch2
‑
ch3的多肽，和两个含有结构vl
‑
cl的多肽。
[1065]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子包含以下多肽组合之一：
[1066]
(j)vh(抗
‑
il
‑
11) vl(抗
‑
il
‑
11)
[1067]
(k)vh(抗
‑
il
‑
11)
‑
ch1 vl(抗
‑
il
‑
11)
‑
cl
[1068]
(l)vl(抗
‑
il
‑
11)
‑
ch1 vh(抗
‑
il
‑
11)
‑
cl
[1069]
(m)vh(抗
‑
il
‑
11)
‑
ch1
‑
ch2
‑
ch3 vl(抗
‑
il
‑
11)
‑
cl
[1070]
(n)vh(抗
‑
il
‑
11)
‑
cl
‑
ch2
‑
ch3 vl(抗
‑
il
‑
11)
‑
ch1
[1071]
(o)vl(抗
‑
il
‑
11)
‑
ch1
‑
ch2
‑
ch3 vh(抗
‑
il
‑
11)
‑
cl
[1072]
(p)vl(抗
‑
il
‑
11)
‑
cl
‑
ch2
‑
ch3 vh(抗
‑
il
‑
11)
‑
ch1
[1073]
(q)vh(抗
‑
il
‑
11)
‑
ch1
‑
ch2
‑
ch3 vl(抗
‑
il
‑
11)
‑
cl
‑
ch2
‑
ch3
[1074]
(r)vh(抗
‑
il
‑
11)
‑
cl
‑
ch2
‑
ch3 vl(抗
‑
il
‑
11)
‑
ch1
‑
ch2
‑
ch3
[1075]
其中：“vh(抗il
‑
11)”是指如本文所述的能够结合il
‑
11的抗原结合分子的vh，例如(1)至(11)、(96)至(117)或(150)至(161)中任一项所定义；“vl(抗il
‑
11)”是指如本文所述的能够结合il
‑
11的抗原结合分子的vl，例如(12)至(95)、(118)至(149)或(162)至(173)中任一项所定义。
[1076]
在一些实施方式中，所述多肽包含多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:6至35、82至84、91至94、116至128、156、157、174、175、192、193或210之一所示的氨基酸序列具有至少70％、优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[1077]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子包含一多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:220所示的氨基酸序列具有至少70％，优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子包含一多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:221所示的氨基酸序列具有至少70％，优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子包含一多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:222所示的氨基酸序列具有至少70％，优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子包含一多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:223所示的氨基酸序列具有至少70％，优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子包含一多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:224所示的氨基酸序列具有至少70％，优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子包含一多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:236所示的氨基酸序列具有至少70％，优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子包含一多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:237所示的氨基酸序列具有至少70％，优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子包含一多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:238所示的氨基酸序列具有至少70％，优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子包含一多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:239所示的氨基酸序列具有至少70％，优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子包含一多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:240所示的氨基酸序列具有至少70％，优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
[1078]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子包含一多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:225所示的氨基酸序列具有至少70％，优选地75％、
80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子包含一多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:226所示的氨基酸序列具有至少70％，优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子包含一多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:227所示的氨基酸序列具有至少70％，优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子包含一多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:228所示的氨基酸序列具有至少70％，优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子包含一多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:229所示的氨基酸序列具有至少70％，优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子包含一多肽，所述多肽包含以下氨基酸序列或由其组成：与seq id no:230所示的氨基酸序列具有至少70％，优选地75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
[1079]
接头和其他序列
[1080]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子和多肽在氨基酸序列之间包含一个或多个接头序列。可以在抗原结合分子/多肽的vh、vl、ch1
‑
ch2铰链区、ch2区和ch3区中的一个或多个的一端或两端提供接头序列。
[1081]
接头序列是本领域技术人员已知的，并且描述于例如chen等，adv drug deliv rev(2013)65(10)：1357
‑
1369，其全部内容通过引用并入本文。在一些实施方式中，接头序列可以是柔性接头序列。柔性接头序列允许通过接头序列连接的氨基酸序列的相对移动。柔性接头是本领域技术人员已知的，并且在chen等，adv drug deliv rev(2013)65(10)：1357
‑
1369中鉴定了几种。柔性接头序列通常包含高比例的甘氨酸和/或丝氨酸残基。
[1082]
在一些实施方式中，所述接头序列包含至少一个甘氨酸残基和/或至少一个丝氨酸残基。在一些实施方式中，所述接头序列由甘氨酸和丝氨酸残基组成。在一些实施方式中，所述接头序列的长度为1
‑
2个、1
‑
3个、1
‑
4个、1
‑
5个或1
‑
10个氨基酸。
[1083]
本发明的抗原结合分子和多肽可以额外包含其他氨基酸或氨基酸序列。例如，抗原结合分子和多肽包含的氨基酸序列可以促进所述抗原结合分子/多肽的表达、折叠、运输、加工、纯化或检测。例如，抗原结合分子/多肽可任选地在所述抗原结合分子/多肽的n端或c端包含编码his(例如6xhis)、myc gst、mbp、flag、ha、e或生物素标签的序列。在一些实施方式中，所述抗原结合分子/多肽包含可检测的部分，例如荧光的、发光的、可免疫检测的、放射性的、化学的、核酸或酶标记。
[1084]
本发明的抗原结合分子和多肽可以额外包含信号肽(也称为前导序列或信号序列)。信号肽通常由5
‑
30个疏水性氨基酸序列组成，形成单个α螺旋。分泌的蛋白质和在细胞表面表达的蛋白质通常包含信号肽。
[1085]
所述信号肽可以存在于所述抗原结合分子/多肽的n端，并且可以存在于新合成的抗原结合分子/多肽中。所述信号肽提供了所述抗原结合分子/多肽的有效运输和分泌。信号肽通常通过切割除去，因此不包含在表达抗原结合分子/多肽的细胞分泌的成熟抗原结合分子/多肽中。
[1086]
信号肽对于许多蛋白质而言是已知的，并且记录于诸如genbank、uniprot、swiss
‑
prot、trembl、蛋白质信息资源(protein information resource)、蛋白质信息库(protein data bank)、ensembl和interpro等数据库中，和/或可以被识别/预测，例如使用诸如signalp(petersen等，2011nature methods 8：785
‑
786)或signal
‑
blast(frank和sippl，2008bioinformatics 24：2172
‑
2176)之类的氨基酸序列分析工具。
[1087]
标签和偶联物
[1088]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子额外包含可检测部分或化学部分。
[1089]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含可检测部分，例如荧光标记、磷光标记、发光标记、免疫可检测标记(例如表位标记)、放射性标记、化学的、核酸的或酶标记。所述抗原结合分子可以被可检测部分共价或非共价标记。
[1090]
荧光标记包括例如荧光素、若丹明、别藻蓝蛋白、曙红和ndb、稀土的绿色荧光蛋白(gfp)螯合物(所述的稀土例如铕(eu)、铽(tb)和钐(sm))、四甲基若丹明、德克萨斯红、4
‑
甲基伞形酮、7
‑
氨基
‑4‑
甲基香豆素、cy3和cy5。放射性标记包括放射性同位素，例如碘
123
、碘
125
、碘
126
、碘
131
、碘
133
、溴
77
、锝
99m
、铟
111
、铟
113m
、镓
67
、镓
68
、钌
95
、钌
97
、钌
103
、钌
105
、汞
207
、汞
203
、铼
99m
、铼
101
、铼
105
、钪
47
、碲
121m
、碲
122m
、碲
125m
、铥
165
、铥
167
、铥
168
、铜
67
、氟
18
、钇
90
、钯
100
、铋
217和
锑
211
。发光标记包括放射性发光的，化学发光的(例如吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺)和生物发光的标记。免疫可检测标记包括半抗原、肽/多肽、抗体、受体和配体，例如生物素、抗生物素蛋白、链霉亲和素或洋地黄毒苷。核酸标记包括适体。酶标记包括例如过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β
‑
半乳糖苷酶和萤光素酶。
[1091]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子与化学部分缀合。所述化学部分可以是用于提供治疗效果的部分。parslow等，biomedicines.2016年9月；4(3)：14中综述了抗体
‑
药物偶联物。在一些实施方式中，所述化学部分可以是药物部分(例如细胞毒性剂)。在一些实施方式中，所述药物部分可以是化学治疗剂。在一些实施方式中，所述药物部分选自加利车霉素、dm1、dm4、单甲基奥他汀e(mmae)、单甲基奥他汀f(mmaf)、sn
‑
38、阿霉素(doxorubicin)、杜卡霉素(duocarmycin)、d6.5和pbd。
[1092]
抗原结合分子的功能特性
[1093]
本文所述的抗原结合分子可以通过参考某些功能特性来表征。在一些实施方式中，本文所述的抗原结合分子可具有以下一种或多种特性：
[1094]
a)与il
‑
11(例如人il
‑
11和/或小鼠il
‑
11)的特异性结合；
[1095]
b)以ec50小于1000ng/ml的结合亲和力与与il
‑
11(例如人il
‑
11)结合，例如通过elisa测定的；
[1096]
c)对il
‑
11和il
‑
11rα之间的相互作用的抑制；
[1097]
d)对il
‑
11和gp130之间的相互作用的抑制；
[1098]
e)对il
‑
11和il
‑
11rα:gp130受体复合物之间的相互作用的抑制；
[1099]
f)对il
‑
11:il
‑
11rα复合物和gp130之间的相互作用的抑制；
[1100]
g)对il
‑
11和il
‑
11之间的相互作用的抑制；
[1101]
h)对il
‑
11介导的信号传导的抑制；
[1102]
i)对il
‑
11与il
‑
11rα:gp130受体复合物结合介导的信号传导的抑制；
[1103]
j)对il
‑
11:il
‑
11rα复合物与gp130结合所介导的信号传导(即il
‑
11反式信号传导)的抑制；
[1104]
k)对成纤维细胞增殖的抑制；
[1105]
l)对从成纤维细胞生成肌成纤维细胞的抑制；
[1106]
m)对从成纤维细胞生成肌成纤维细胞的逆转/消退；
[1107]
n)对从星状细胞(例如肝或胰腺星状细胞)生成肌成纤维细胞的抑制；
[1108]
o)对从星形细胞(例如肝或胰腺星状细胞)生产肌成纤维细胞的逆转/消退；
[1109]
p)对成纤维细胞、星状细胞或肌成纤维细胞的迁移和/或侵袭行为的抑制(即对迁移和/或侵袭的抑制)；
[1110]
q)对器官中免疫细胞的存在的抑制；
[1111]
r)对由il
‑
11介导的病理过程的抑制；
[1112]
s)对纤维化的抑制；
[1113]
t)对纤维化的逆转/消退；
[1114]
u)对胶原、纤连蛋白、骨膜素、il
‑
6、il
‑
11、αsma(acta2)、timp1、mmp2、tnfα、ccl2中的一种或多种在成纤维细胞或星状细胞中的基因或蛋白质表达的抑制，例如在用促纤维化因子刺激后；
[1115]
v)对成纤维细胞或星状细胞产生细胞外基质的抑制；
[1116]
w)对癌细胞的增殖和/或存活的抑制；
[1117]
x)对癌症在体内的发展和进展的抑制；
[1118]
y)对肿瘤生长的抑制；
[1119]
z)对表达/包含il
‑
11的细胞或包含il
‑
11的复合物的细胞的杀伤
[1120]
此处，“抑制”是指相对于对照条件的降低、减少或减轻。例如，抗原结合分子对一过程的抑制是指在不存在抗原结合分子的情况下和/或在适当的对照抗原的存在下该过程的限度/程度的降低、减少或减轻。
[1121]
抑制在本文中也可以称为中和或拮抗作用。也就是说，能够抑制一功能或过程(例如，由il
‑
11或包含il
‑
11的复合物介导的相互作用、信号传导或其他活性)的结合il
‑
11的抗原结合分子可以说是对相关功能或过程“中和的”或“拮抗的”抗原结合分子。例如，能够抑制il
‑
11介导的信号传导的抗原结合分子可以被称为能够中和il
‑
11介导的信号传导的抗原结合分子，或者可以被称为il
‑
11介导的信号传导的拮抗剂。
[1122]
本领域技术人员能够为给定的测定方法确定合适的对照条件。例如，对照抗原结合分子可以是针对靶蛋白的抗原结合分子，已知该靶蛋白不具有参与测定中所研究的性质的作用。对照抗原结合分子可以与被分析的抗il
‑
11抗原结合分子是相同的同种型，例如具有相同的恒定区。
[1123]
本文所述的抗原结合分子优选显示出对il
‑
11的特异性结合。如本文所用，“特异性结合”是指对抗原具有选择性的结合，并且可以与对非靶标抗原的非特异性结合区分开。特异性结合靶分子的抗原结合分子优选以比其结合其他非靶分子更高的亲和力和/或更长
的持续时间结合靶分子。在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子与il
‑
11的结合亲和力可以高于与il
‑
6细胞因子家族的一个或多个成员的结合亲和力。在一些实施方式中，相比于与il
‑
6、白血病抑制因子(lif)、制瘤素m(osm)、心肌营养素
‑
1(ct
‑
1)、睫状神经营养因子(cntf)和心肌营养因子样细胞因子(clc)中的一种或多种，本发明的抗原结合分子可以以更高的亲和力与il
‑
11结合。
[1124]
在实施方式中，通过破坏il
‑
11介导的顺式信号传导而不破坏il
‑
11介导的反式信号传导来实现，例如通过抑制涉及膜结合il
‑
11rα的gp130介导的顺式复合物，可以实现对il
‑
11介导的信号传导的抑制。在实施方式中，通过破坏il
‑
11介导的反式信号传导而不破坏il
‑
11介导的顺式信号传导，实现对il
‑
11介导的信号传导的抑制，即通过抑制gp130介导的反式信号复合物(例如与可溶性il
‑
11rα结合的il
‑
11或与可溶性il
‑
6r结合的il
‑
6)，实现对il
‑
11介导的信号传导的抑制。在实施方式中，通过破坏il
‑
11介导的顺式信号传导和il
‑
11介导的反式信号传导，来实现对il
‑
11介导的信号传导的抑制。
[1125]
给定多肽与给定分子特异性结合的能力可以通过本领域已知的方法测定，例如通过elisa、表面等离子体共振(spr；参见例如hearty等，methods mol biol(2012)907：411
‑
442)、生物层干涉测量法(参见例如lad等，(2015)j biomol screen 20(4)：498
‑
507)、流式细胞术，或通过放射性标记的抗原结合测定(ria)酶联免疫吸附测定。通过这种分析，可以对与给定分子的结合进行测量和定量。在一些实施方式中，所述结合可以是在给定测定中检测到的反应。
[1126]
在一些实施方式中，抗原结合分子与非靶分子的结合程度小于抗原结合分子与靶分子的约10％，其通过例如elisa、spr、生物层干涉测量法或通过ria测定。或者，结合特异性可以反映为结合亲和力，其中抗原结合分子与il
‑
11结合的解离常数(k
d
)至少比所述抗原结合分子与非靶分子结合的k
d
大0.1个数量级(即0.1
×
10
n
，其中n是代表数量级的整数)。这可以任选地为至少0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5或2.0中的一个。
[1127]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子显示出与人il
‑
11的结合。在一些实施方式中，所述抗原结合分子显示出与小鼠il
‑
11的结合。在一些实施方式中，所述抗原结合分子显示出与人il
‑
11和小鼠il
‑
11的结合。即，在一些实施方式中，所述抗原结合分子对人il
‑
11和小鼠il
‑
11具有交叉反应性。在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子显示与非人灵长类动物的il
‑
11的交叉反应性。
[1128]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子以5μm或更小的k
d
与il
‑
11结合，优选为≤1μm、≤500nm、≤100nm、≤75nm、≤50nm、≤40nm、≤30nm、≤20nm、≤15nm、≤12.5nm、≤10nm、≤9nm、≤8nm、≤7nm、≤6nm、≤5nm、≤4nm、≤3nm、≤2nm、≤1nm或≤500pm之一。
[1129]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子以ec50＝1000ng/ml或更低的亲和力与il
‑
11结合(例如通过elisa确定)，优选≤900ng/ml、≤800ng/ml、≤700ng/ml、≤600ng/ml、≤500ng/ml、≤400ng/ml、≤300ng/ml、≤200ng/ml、≤100ng/ml、≤90ng/ml、≤80ng/ml、≤70ng/ml、≤60ng/ml、≤50ng/ml、≤40ng/ml、≤30ng/ml、≤20ng/ml、≤15ng/ml、≤10ng/ml、≤7.5ng/ml、≤5ng/ml、≤2.5ng/ml或≤1ng/ml之一。
[1130]
抗原结合分子对il
‑
11的结合亲和力可以通过elisa测定体外分析。合适的测定法在本领域中是众所周知的，并且可以由技术人员进行操作，例如，如《抗体工程》第1卷(第2
版)，实验室指南，冷泉港(2010)，第五部分，第657
‑
665页中所述。例如，可以根据本文在实验实施例中描述的方法分析抗原结合分子与il
‑
11结合的亲和力。
[1131]
抗原结合分子抑制两种蛋白质之间相互作用的能力可以例如通过在存在所述抗原结合分子，或将一种或两种相互作用伴侣与所述抗原结合分子一起孵育后，分析其相互作用来确定。确定给定的抗原结合分子是否能够抑制两个相互作用伴侣之间相互作用的合适的测定法的一个例子是竞争性elisa测定法。
[1132]
能够抑制给定的相互作用(例如，il
‑
11与il
‑
11rα之间，或il
‑
11与gp130之间，或il
‑
11与il
‑
11rα:gp130之间，或il
‑
11:il
‑
11rα与gp130之间)的抗原结合分子可以通过观察相互作用伴侣之间的相互作用强度降低/减少来鉴定，所述的鉴定是在存在抗原结合分子，或将抗原结合分子与一个或两个相互作用伴侣一起孵育后，将其相互作用的水平与在不存在所述抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的相互作用水平相比。合适的分析可以体外进行，例如使用重组相互作用伴侣或使用表达相互作用伴侣的细胞。细胞对相互作用伴侣的表达可能是内源性的，也可能是通过引入细胞的核酸来表达的。为了这种测定的目的，可以将一个或两个相互作用伴侣和/或抗原结合分子进行标记或与可检测实体结合使用，以检测和/或测量相互作用的水平。
[1133]
抗原结合分子抑制两个结合伴侣之间相互作用的能力也可以通过分析这种相互作用的下游功能性结果来确定，例如通过受体信号传导。例如，il
‑
11和il
‑
11rα:gp130之间或il
‑
11:il
‑
11rα和gp130之间相互作用的下游功能性结果可能包括成纤维细胞增殖、成纤维细胞生成肌成纤维细胞，或胶原蛋白、纤连蛋白、骨膜素、il
‑
6、il
‑
11、αsma、timp1、mmp2中的一种或多种基因或蛋白质表达。
[1134]
根据本公开的成纤维细胞可以源自任何组织，包括肝、肺、肾、心脏、血管、眼、皮肤、胰腺、脾、肠(例如大肠或小肠)、脑和骨髓。在特定实施方式中，出于分析抗原结合分子的目的，所述成纤维细胞可以是心脏成纤维细胞(例如心房成纤维细胞)、皮肤成纤维细胞、肺成纤维细胞、肾成纤维细胞或肝成纤维细胞。成纤维细胞的特征在于col1a、acta2、脯氨酰4
‑
羟化酶、mas516和fsp1中的一种或多种的基因或蛋白质表达。
[1135]
基因表达可以通过本领域技术人员已知的各种方法测定，例如通过定量实时pcr(qrt
‑
pcr)或通过基于报道分子的方法测量mrna的水平。类似地，蛋白质表达可以通过本领域熟知的各种方法测定，例如，通过基于抗体的方法，例如通过蛋白质印迹、免疫组织化学、免疫细胞化学、流式细胞术、elisa、elispot或基于报道分子的方法。
[1136]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子可以抑制一种或多种纤维化标志物的蛋白表达，例如胶原、纤连蛋白、骨膜素、il
‑
6、il
‑
11、αsma、timp1、mmp2中的一种或多种的蛋白质表达。
[1137]
抗原结合分子抑制il
‑
11与il
‑
11rα:gp130之间相互作用的能力可以例如通过用tgfβ1刺激成纤维细胞、在抗原结合分子存在下孵育细胞，并在一段确定的时间后分析具有αsma阳性表型的细胞数量的比例来分析。在这样的例子中，与阳性对照条件相比观察到具有αsma阳性表型的细胞比例更低，可以鉴定出il
‑
11和il
‑
11rα:gp130之间相互作用的抑制，其中阳性对照条件中，在不存在所述抗原结合分子的情况下(或在合适的对照抗原结合分子的存在下)，或在合适的对照抗原结合分子的存在下用tgfβ1处理细胞。
[1138]
此类测定法也适用于分析抗原结合分子抑制il
‑
11介导的信号传导的能力。
[1139]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够将il
‑
11和il
‑
11rα之间的相互作用抑制至不存在本发明抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的il
‑
11和il
‑
rα的相互作用水平的小于100％，例如99％以下、95％以下、90％以下、85％以下、80％以下、75％以下、70％以下、65％以下、60％以下、55％以下、50％以下、45％以下、40％以下、35％以下、30％以下、25％以下、20％以下、15％以下、10％以下、5％以下，或1％以下之一。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够将il
‑
11和il
‑
11rα之间的相互作用抑制至不存在本发明抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的il
‑
11和il
‑
rα的相互作用水平的小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍之一。
[1140]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够将il
‑
11和gp130之间的相互作用抑制至不存在本发明抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的il
‑
11和gp130的相互作用水平的小于100％，例如99％以下、95％以下、90％以下、85％以下、80％以下、75％以下、70％以下、65％以下、60％以下、55％以下、50％以下、45％以下、40％以下、35％以下、30％以下、25％以下、20％以下、15％以下、10％以下、5％以下，或1％以下之一。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够将il
‑
11和gp130之间的相互作用抑制至不存在本发明抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的il
‑
11和gp130的相互作用水平的小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍之一。
[1141]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够将il
‑
11和il
‑
11rα:gp130之间的相互作用抑制至不存在本发明抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的il
‑
11和il
‑
rα:gp130的相互作用水平的小于100％，例如99％以下、95％以下、90％以下、85％以下、80％以下、75％以下、70％以下、65％以下、60％以下、55％以下、50％以下、45％以下、40％以下、35％以下、30％以下、25％以下、20％以下、15％以下、10％以下、5％以下，或1％以下之一。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够将il
‑
11和il
‑
11rα:gp130之间的相互作用抑制至不存在本发明抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的il
‑
11和il
‑
rα:gp130的相互作用水平的小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍之一。
[1142]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够将il
‑
11:il
‑
11rα复合物和gp130之间的相互作用抑制至不存在本发明抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的il
‑
11:il
‑
11rα复合物和gp130的相互作用水平的小于100％，例如99％以下、95％以下、90％以下、85％以下、80％以下、75％以下、70％以下、65％以下、60％以下、55％以下、50％以下、45％以下、40％以下、35％以下、30％以下、25％以下、20％以下、15％以下、10％以下、5％以下，或1％以下之一。在一些实施方式中，所述抗原结合分子能够将il
‑
11:il
‑
11rα复合物和gp130之间的相互作用抑制至不存在本发明抗原结合分子的情况下的il
‑
11:il
‑
11rα复合物和gp130的相互作用水平的小于1倍，例如≤0.99倍、≤
0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍之一。
[1143]
还可以使用3h
‑
胸苷掺入和/或ba/f3细胞增殖测定法分析il
‑
11介导的信号传导的抑制，例如在curtis等，blood，1997，90(11)和karpovich等，mol.hum.reprod 2003 9(2):75
‑
80之一所描述的。ba/f3细胞共表达il
‑
11rα和gp130。
[1144]
如本文所用，il
‑
11介导的信号传导和/或由il
‑
11介导的过程包括由il
‑
11的片段和包含il
‑
11或其片段的多肽复合物介导的信号传导。il
‑
11介导的信号传导可以是人il
‑
11和/或小鼠il
‑
11介导的信号传导。il
‑
11或包含il
‑
11的复合物与il
‑
11或所述复合物结合的受体结合后，可能发生il
‑
11介导的信号传导。
[1145]
在一些实施方式中，本发明所述的抗体和片段能够抑制il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的生物学活性。在一些实施方式中，所述抗原结合分子在对于结合il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的受体重要的区域与il
‑
11或包含il
‑
11复合物结合，例如gp130或il
‑
11rα，从而破坏与受体的结合和/或通过该受体的信号传导。
[1146]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子是一种或多种信号传导途径的拮抗剂，所述信号传导途径通过包含il
‑
11rα和/或gp130的受体(例如il
‑
11rα:gp130)的信号转导而被激活。在一些实施方式中，所述抗原结合分子能够抑制通过一种或多种包含il
‑
11rα和/或gp130的免疫受体复合物(例如il
‑
11rα:gp130)的信号传导。
[1147]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够将il
‑
11介导的信号传导抑制至不存在本发明抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的il
‑
11介导的信号传导水平的小于100％，例如99％以下、95％以下、90％以下、85％以下、80％以下、75％以下、70％以下、65％以下、60％以下、55％以下、50％以下、45％以下、40％以下、35％以下、30％以下、25％以下、20％以下、15％以下、10％以下、5％以下，或1％以下之一。在一些实施方式中，所述抗原结合分子能够将il
‑
11介导的信号传导减低至不存在本发明抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的il
‑
11介导的信号传导水平的小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍之一。
[1148]
在一些实施方式中，il
‑
11介导的信号传导可以是通过il
‑
11与il
‑
11rα:gp130受体的结合介导的信号传导。这种信号传导的分析可以通过用il
‑
11处理表达il
‑
11rα和gp130的细胞，或通过在表达il
‑
11rα和gp130的细胞中刺激il
‑
11的产生。
[1149]
可以确定用于抑制il
‑
11介导的信号传导的抗原结合分子的ic
50
，例如通过在人il
‑
11和il
‑
11结合剂存在下培养表达il
‑
11rα和gp130的ba/f3细胞，并测量3h
‑
胸腺嘧啶核苷在dna中的掺入。
[1150]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子在该测定中可表现出10μg/ml或更低的ic
50
，优选≤5μg/ml、≤4μg/ml、≤3.5μg/ml、≤3μg/ml、≤2μg/ml、≤1μg/ml、≤0.9μg/ml、≤0.8μg/ml、≤0.7μg/ml、≤0.6μg/ml或≤0.5μg/ml之一。
[1151]
在一些实施方式中，il
‑
11介导的信号传导可以是通过il
‑
11:il
‑
11rα复合物与gp130的结合介导的信号传导。在一些实施方式中，il
‑
11:il
‑
11rα复合物可以是可溶的，例
如il
‑
11rα的胞外结构域和il
‑
11的复合物，或可溶性il
‑
11rα同工型/片段和il
‑
11的复合物。在一些实施方式中，可溶性il
‑
11rα是il
‑
11rα的可溶性(分泌型)同工型，或者是细胞膜结合的il
‑
11rα的胞外结构域的蛋白水解切割的释放产物。由与il
‑
11rα结合的il
‑
11与gp130的结合介导的il
‑
11介导的信号传导在本文中称为“il
‑
11反式信号传导”。
[1152]
在一些实施方式中，il
‑
11:il
‑
11rα复合物可以是细胞结合的，例如细胞膜结合的il
‑
11rα和il
‑
11的复合物。可以通过用il
‑
11:il
‑
11rα复合物处理表达gp130的细胞，例如il
‑
11:il
‑
11rα复合物(例如包含通过肽接头与il
‑
11rα的胞外结构域连接的il
‑
11的重组融合蛋白(例如本文所述的超il
‑
11))，来分析通过il
‑
11:il
‑
11rα复合物与gp130的结合介导的信号传导。
[1153]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够抑制由il
‑
11:il
‑
11rα复合物与gp130的结合介导的信号传导，并且能够抑制由il
‑
11与il
‑
11rα:gp130受体的结合介导的信号传导。
[1154]
在一些实施方式中，结合剂能够将il
‑
11和il
‑
11之间的相互作用抑制至不存在所述结合剂的情况下(或在存在适当的对照结合剂的情况下)的il
‑
11和il
‑
11的相互作用水平的小于100％，例如99％以下、95％以下、90％以下、85％以下、80％以下、75％以下、70％以下、65％以下、60％以下、55％以下、50％以下、45％以下、40％以下、35％以下、30％以下、25％以下、20％以下、15％以下、10％以下、5％以下，或1％以下之一。在一些实施方式中，结合剂能够将il
‑
11和il
‑
11之间的相互作用抑制至不存在所述结合剂的情况下的il
‑
11和il
‑
11的相互作用水平的小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍之一。
[1155]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子能够抑制成纤维细胞增殖。成纤维细胞的增殖可以通过分析一段时间内的细胞分裂来确定。可以例如通过体外分析3h
‑
胸腺嘧啶脱氧核苷的掺入或通过cfse稀释测定法来分析给定成纤维细胞群的细胞分裂,例如描述于fulcher和wong，immunol cell biol(1999)77(6):559
‑
564的方法，其全部内容通过引用并入本文。增殖细胞(例如，增殖成纤维细胞)也可以通过适当的测定法对5
‑
乙炔基
‑2’‑
脱氧尿苷(edu)的掺入的分析来鉴定，例如在buck等，生物技术，2008年6月；44(7)：927
‑
9，以及sali和mitchison，pnas美国，2008年2月19日；105(7)：2415
–
2420中所描述的，两者均以引用方式全文并入本文。
[1156]
根据本公开的成纤维细胞可以源自任何组织，包括肝、肺、肾、心脏、血管、眼、皮肤、胰腺、脾、肠(例如大肠或小肠)、脑和骨髓。在特定实施方式中，出于分析抗原结合分子的目的，所述成纤维细胞可以是心脏成纤维细胞(例如心房成纤维细胞)、皮肤成纤维细胞、肺成纤维细胞、肾成纤维细胞或肝成纤维细胞。
[1157]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够将成纤维细胞增殖抑制至不存在本发明抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的成纤维细胞增殖水平的小于100％，例如99％以下、95％以下、90％以下、85％以下、80％以下、75％以下、70％以下、65％以下、60％以下、55％以下、50％以下、45％以下、40％以下、35％以下、30％以下、25％以下、20％以下、15％以下、10％以下、5％以下，或1％以下之一。在一些实施方式中，所述抗原结合分子能够将成纤维细胞增殖减低至不存在本发明抗原结合分
子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的成纤维细胞增殖水平的小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍之一。
[1158]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够抑制il
‑
11介导的病理过程，例如用促纤维化因子(例如tgfβ1)刺激后。il
‑
11介导的病理过程包括纤维化，其可以被体外、离体或体内评估。
[1159]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够抑制纤维化。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够逆转或消退纤维化。在一些实施方式中，建立了纤维化或严重的纤维化。如本文所用，抑制或阻碍纤维化是指抗原结合分子减少、抑制或预防纤维化发展的能力。在一些实施方式中，纤维化的抑制是指例如预防纤维化发展的预防作用。在一些实施方式中，纤维化的抑制是指例如一种可防止已有的早期或晚期纤维化发展或发展到更晚期的治疗效果。如本文所用，逆转纤维化/纤维化的逆转或消退纤维化/纤维化的消退是指抗原结合分子将纤维化状态从较发达的状态改善为较不发达的状态或减轻纤维化本身或其症状的严重性的能力。逆转纤维化/纤维化的逆转可能与纤维化状态的改善有关。
[1160]
在本文的实验实施例中，通过下述方法分析纤维化的抑制、逆转或消退：例如通过使用operetta高含量成像系统测量acta2
ve
细胞的数量或百分比、通过评估羟脯氨酸含量来测量细胞或器官胶原含量、通过蛋白质印迹测量erk激活/磷酸化、通过定量pcr测量炎症标志物(例如tnfα和ccl2)或纤维化标志物(例如tgfβ1、αsma(acta2)、timp1、col1a1、col1a2或col3a1)的表达水平。在诸如肝的组织中，通过例如确定甘油三酸酯含量和血清alt水平来分析纤维化的抑制、逆转或消退。
[1161]
纤维化可以是特定组织的或数个组织的，例如肝、肺、肾、心脏、血管、眼睛、皮肤、胰腺、脾脏、肠(例如大肠或小肠)、脑或骨髓。纤维化可以通过本领域技术人员众所周知的手段来测量，例如通过分析给定的一个或多个组织中纤维化的一种或多种肌成纤维细胞标志物的基因或蛋白质表达和/或一种或多种纤维化标志物的基因或蛋白质表达。
[1162]
肌成纤维细胞标志物可包括一种或多种增加的αsma、波形蛋白、帕拉丁(palladin)、咖啡碱(cofilin)或结蛋白。纤维化的标志物包括水平增加的胶原蛋白、纤连蛋白、骨膜素、il
‑
6、il
‑
11、αsma、timp1和mmp2、细胞外基质成分、肌成纤维细胞数量/比例和器官重量。
[1163]
可以在体外或体内测量纤维化的抑制/逆转/消退。例如，抗原结合分子是否能够抑制/逆转/消退给定组织中的纤维化，可以通过下述步骤进行体外分析：用促纤维化刺激物处理源自该组织的成纤维细胞，然后分析抗体是否可以降低或逆转成纤维细胞(或例如其他一些纤维化标记物)生成肌成纤维细胞。抗原结合分子是否能够抑制/逆转/消退纤维化可以在体内进行分析，例如，通过将抗原结合分子施用于一对象(例如已经暴露于促纤维化刺激的对象)，并分析组织的一种或多种纤维化标志物。
[1164]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够将纤维化抑制/逆转/消退至不存在本发明抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的纤维化水平的小于100％，例如99％以下、95％以下、90％以下、85％以下、80％以下、75％以
下、70％以下、65％以下、60％以下、55％以下、50％以下、45％以下、40％以下、35％以下、30％以下、25％以下、20％以下、15％以下、10％以下、5％以下，或1％以下之一。在一些实施方式中，所述抗原结合分子能够将纤维化降低/逆转/消退至不存在本发明抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的纤维化水平的小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍之一。
[1165]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够抑制从成纤维细胞或星状细胞(例如，肝或胰腺星状细胞)生成肌成纤维细胞，例如将成纤维细胞或星状细胞暴露于纤维化因子后。可以通过分析成纤维细胞标志物来研究由成纤维细胞或星状细胞生成的肌成纤维细胞。根据本公开的促纤维化因子可以是例如tgfβ1、il
‑
11、il
‑
13、pdgf、et
‑
1、抑瘤素m(osm)或ang2(angii)。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够通过促纤维化因子抑制成纤维细胞或星状细胞的活化。
[1166]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够促进星状细胞衰老。可以通过检测诸如p16、p21和p53的衰老标志物的表达来测量衰老。
[1167]
在一些实施方式中，抗原结合分子能够抑制成纤维细胞、星状细胞或成纤维细胞/星状细胞来源的细胞(例如肌成纤维细胞)中胶原、纤连蛋白、骨膜素、il
‑
6、il
‑
11、αsma、timp1、mmp2、tnfα、ccl2中的一种或多种的基因或蛋白表达，例如用促纤维化因子刺激后。在一些实施方式中，所述抗原结合分子能够抑制成纤维细胞或成纤维细胞来源的细胞(例如肌成纤维细胞)中的一种或多种细胞外基质组分的基因或蛋白质表达，例如用促纤维化因子刺激后。
[1168]
在本文的实验实施例中，在用tgfβ1刺激成纤维细胞之后，通过使用operetta高含量成像系统测量αsma蛋白表达水平来分析从成纤维细胞或星状细胞生成的肌成纤维细胞。
[1169]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够将从成纤维细胞或星状细胞至肌成纤维细胞的生成抑制至不存在本发明抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的从成纤维细胞或星状细胞至肌成纤维细胞的生成水平的小于100％，例如99％以下、95％以下、90％以下、85％以下、80％以下、75％以下、70％以下、65％以下、60％以下、55％以下、50％以下、45％以下、40％以下、35％以下、30％以下、25％以下、20％以下、15％以下、10％以下、5％以下，或1％以下之一。在一些实施方式中，所述抗原结合分子能够将将从成纤维细胞或星状细胞至肌成纤维细胞的生成减低至不存在本发明抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的将从成纤维细胞或星状细胞至肌成纤维细胞的生成水平的小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍之一。
[1170]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够抑制成纤维细胞、星状细胞或肌成纤维细胞中的胶原蛋白、纤连蛋白、骨膜素、il
‑
6、il
‑
11、αsma、timp1、mmp2、tnfα、ccl2中的一种或多种的基因或蛋白质表达，例如用促纤维化因子(例如tgfβ1)刺激后。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够将基因或蛋白表达抑制至不存在本发明抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的基因或蛋白表达水
invasion assay)或ecm涂覆的基质胶。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够将成纤维细胞、星形细胞或肌成纤维细胞的迁移和/或入侵抑制至不存在所述抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的迁移和/或入侵水平的小于100％，例如99％以下、95％以下、90％以下、85％以下、80％以下、75％以下、70％以下、65％以下、60％以下、55％以下、50％以下、45％以下、40％以下、35％以下、30％以下、25％以下、20％以下、15％以下、10％以下、5％以下，或1％以下之一。在一些实施方式中，所述抗原结合分子能够将迁移和/或入侵减低至不存在所述抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的迁移和/或入侵水平的小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍之一。
[1175]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够抑制器官中的免疫细胞的存在。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够减少器官中免疫细胞的数量。所述器官可以是易感于或正在遭受纤维化的器官，例如肝或肾。所述免疫细胞可以是cd45

细胞，例如cd3

cd4

t细胞、cd3

cd8

t细胞、b淋巴细胞、粒细胞和单核细胞。所述免疫细胞可以表达鼠单核细胞标志物lyc6。在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够将器官中的免疫细胞的数量减少至不存在所述抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的器官中的免疫细胞数量的小于100％，例如99％以下、95％以下、90％以下、85％以下、80％以下、75％以下、70％以下、65％以下、60％以下、55％以下、50％以下、45％以下、40％以下、35％以下、30％以下、25％以下、20％以下、15％以下、10％以下、5％以下，或1％以下之一。在一些实施方式中，所述抗原结合分子能够将将器官中的免疫细胞的数量减少至不存在所述抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的器官中的免疫细胞的数量的小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍之一。
[1176]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够抑制癌细胞的增殖和/或存活。本领域技术人员能够例如通过分析抗原结合分子对癌症细胞的作用来确定所述抗原结合分子是否能够抑制癌症细胞的增殖和/或存活。例如，可以如本文所述的通过3h胸苷掺入法或cfse稀释分析法测量细胞的增殖。可以通过用抗原结合分子处理细胞后，测定细胞存活/死亡的标志物来分析细胞存活。
[1177]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够将癌症细胞的增殖和/或存活抑制至不存在所述抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的癌症细胞的增殖和/或存活水平的小于100％，例如99％以下、95％以下、90％以下、85％以下、80％以下、75％以下、70％以下、65％以下、60％以下、55％以下、50％以下、45％以下、40％以下、35％以下、30％以下、25％以下、20％以下、15％以下、10％以下、5％以下，或1％以下之一。在一些实施方式中，所述抗原结合分子能够将癌症细胞的增殖和/或存活降低至不存在所述抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的癌症细胞的增殖和/或存活水平的小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍之一。
[1178]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子体内抑制癌症的发展和/或进展。在一些实施方式中，所述抗原结合分子引起癌细胞的杀伤，例如通过效应免疫细胞。在一些实施方式中，所述抗原结合分子导致体内癌细胞数目的减少，例如与适当的对照条件相比。在一些实施方式中，所述抗原结合分子抑制肿瘤生长，例如通过测量随时间变化的肿瘤大小/体积来确定的。
[1179]
可以分析本发明的抗原结合分子在合适的体内模型中抑制癌症发展和/或进展的能力。所述癌症可以是在病理上涉及il
‑
11介导的信号传导和/或表达/包含il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的细胞的癌症。这样的癌症包括在xu等，cancer lett.(2016)373(2)：156
‑
63和johnstone等，cytokine&growth reviews(2015)26(5)：489
‑
498中描述的那些，通过引用将两者的全部内容并入本文。
[1180]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子的施用可引起以下一种或多种：抑制对癌症的发展/进程、延迟/预防癌症的发作、减少/延缓/预防肿瘤生长、减少/延缓/预防转移、减少癌症症状的严重程度、减少癌细胞数量、减少肿瘤大小/体积，和/或存活的增加(例如无进展生存)，例如如在适当的癌症体内模型中确定的。在一些实施方式中，与单独施用的化学治疗剂相比，当本发明所述的抗原结合分子与所述化学治疗剂联合施用时(例如分开、同时或顺序地使用化学治疗剂)，本发明的抗原结合分子提供累加的效果。累加的效果可以是本文所述的任何效果，例如减少il
‑
11信号传导、抑制癌症的发展/进展，和/或抑制肿瘤生长。
[1181]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够将肿瘤生长抑制至不存在所述抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的肿瘤生长水平的小于100％，例如99％以下、95％以下、90％以下、85％以下、80％以下、75％以下、70％以下、65％以下、60％以下、55％以下、50％以下、45％以下、40％以下、35％以下、30％以下、25％以下、20％以下、15％以下、10％以下、5％以下，或1％以下之一。在一些实施方式中，所述抗原结合分子能够将肿瘤生长增殖减低至不存在所述抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的肿瘤生长水平的小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍之一。
[1182]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子能够引起表达/包含il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的细胞的杀伤。可通过抗原结合分子的效应子功能来增加对表达/包含il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的细胞的杀伤。在抗原结合分子包含fc区的实施方式中，所述抗原结合分子可通过补体依赖性细胞毒性(cdc)、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)和抗体依赖性细胞吞噬作用(adcp)中的一种或多种来杀伤表达/包含il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的细胞。
[1183]
可以通过在合适的测定法中，在抗原结合分子的存在下或在将表达/包含il
‑
11或包含il
‑
1的复合物的细胞与抗原结合分子孵育后观察表达/包含il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的细胞的杀伤水平，将其与不存在所述抗原结合分子时(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)检测到的细胞杀伤水平相比，来鉴定能够杀伤表达/包含il
‑
11或包含il
‑
1的复合物的细胞的抗原结合分子。cdc、adcc和adcp的测定是本领域技术人员均知晓的。对表达/包含il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的细胞的杀伤水平也可以通过在暴露于不同的处理
条件之后，测定表达/包含il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的细胞的存活和/或非存活细胞的数量/比例来确定。
[1184]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子能够对表达/包含il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的细胞的杀伤是在不存在所述抗原结合分子(或在适当的对照抗原结合分子存在下)的情况下的观察到的杀伤水平的超过1倍，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍。
[1185]
在一些实施方式中，本发明所述的抗原结合分子能够使表达/包含il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的细胞的数目降低至不存在所述抗原结合分子的情况下(或在存在适当的对照抗原结合分子的情况下)的表达/包含il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的细胞的数目的小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍、≤0.01倍。细胞数量和比例的确定可以例如通过使用能够检测细胞类型的抗体使用流式细胞术分析。
[1186]
在一些实施方式中，与能够结合il
‑
11的参照抗体/其抗原结合片段相比，本发明所述的抗原结合分子具有一种或多种相似或改善的特性。
[1187]
在一些实施方式中，与能够结合il
‑
11的参照抗体/其抗原结合片段相比，本发明的抗原结合分子表现出以下特性的一种或多种：
[1188]
(i)以相似或更高的特异性与il
‑
11结合(即与il
‑
11以外的il
‑
6细胞因子家族蛋白具有相似或降低的交叉反应)；
[1189]
(ii)以相似或更高的亲和力(例如通过elisa确定具有相似或更低的ec50；例如通过spr分析确定的相似或更低的k
d
)与il
‑
11(例如人il
‑
11和/或小鼠il
‑
11)结合；
[1190]
(iii)对il
‑
11和il
‑
11rα之间的相互作用的相似或更大的抑制；
[1191]
(iv)对il
‑
11和gp130之间的相互作用的相似或更大的抑制；
[1192]
(v)对il
‑
11和il
‑
11rα:gp130受体复合物之间的相互作用的相似或更大的抑制；
[1193]
(vi)对il
‑
11:il
‑
11rα复合物和gp130之间的相互作用的相似或更大的抑制；
[1194]
(vii)对il
‑
11和il
‑
11之间的相互作用的相似或更大的抑制；
[1195]
(viii)对il
‑
11介导的信号传导的相似或更大的抑制(例如，通过在适当的测定法中用elisa测定的具有相似或更低的ic50)；
[1196]
(ix)对il
‑
11与il
‑
11rα:gp130受体复合物结合介导的信号传导的相似或更大的抑制；
[1197]
(x)对il
‑
11:il
‑
11rα复合物与gp130结合所介导的信号传导(即il
‑
11反式信号传导)的相似或更大的抑制；
[1198]
(xi)对成纤维细胞增殖的相似或更大的抑制；
[1199]
(xii)对从成纤维细胞生成肌成纤维细胞的相似或更大的抑制；
[1200]
(xiii)对从成纤维细胞生成肌成纤维细胞的相似或更大的抑制逆转/消退；
[1201]
(xiv)对从星形细胞(例如肝或胰腺星形细胞)生成肌成纤维细胞的相似或更大的抑制；
[1202]
(xv)对从星形细胞(例如肝或胰腺星形细胞)生成肌成纤维细胞的相似或更大的
逆转/消退；
[1203]
(xvi)对成纤维细胞、星形细胞或肌成纤维细胞的迁移和/或侵袭行为的相似或更大的抑制(即对迁移和/或侵袭的抑制)；
[1204]
(xvii)对器官中免疫细胞的存在的相似或更大的抑制；
[1205]
(xviii)对由il
‑
11介导的病理过程的相似或更大的抑制；
[1206]
(xix)对纤维化的相似或更大的抑制；
[1207]
(xx)对纤维化的相似或更大的逆转/消退；
[1208]
(xxi)用促纤维化因子刺激后，在成纤维细胞中的胶原、纤连蛋白、骨膜素、il
‑
6、il
‑
11、αsma(acta2)、timp1、mmp2、tnfα、ccl2中的一种或多种的基因或蛋白表达的相似或更大的抑制；
[1209]
(xxii)对成纤维细胞或星状细胞产生细胞外基质的相似或更大的抑制；
[1210]
(xxiii)对癌细胞的增殖和/或存活的相似或更大的抑制；
[1211]
(xxiv)对癌症在体内的发展和进展的相似或更大的抑制；
[1212]
(xxv)对肿瘤生长的相似或更大的抑制；
[1213]
(xxvi)对表达/包含il
‑
11的细胞或包含il
‑
11的复合物的细胞的相似或更大的杀伤。
[1214]
在一些实施方式中，“更强的特异性”或“更大的亲和力”或“更大的抑制”或“更大的杀伤”分别是指在适当的测定中确定的参照抗体/其抗原结合片段所显示的能够结合il
‑
11的水平中的特异性、亲和力、抑制或杀伤水平的大于1倍，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.06倍、≥1.07倍、≥1.08倍、≥1.09倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥2.1倍、≥2.2倍、≥2.3倍、≥2.4倍、≥2.5倍、≥2.6倍、≥2.7倍、≥2.8倍、≥2.9倍、≥3倍、≥3.5倍、≥4倍、≥4.5倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍、≥10倍、≥15倍、≥20倍、≥25倍、≥30倍、≥35倍、≥40倍、≥45倍、≥50倍、≥60倍、≥70倍、≥80倍、≥90倍、≥100倍、≥200倍、≥300倍、≥400倍、≥500倍、≥600倍、≥700倍、≥800倍、≥900倍、≥1000倍。
[1215]
在一些实施方式中，“相似的特异性”或“相似的亲和力”或“相似的抑制”或“相似的杀伤”分别是指在适当的测定中确定的参照抗体/其抗原结合片段所显示的能够结合il
‑
11的水平中的特异性、亲和力、抑制或杀伤水平的≥0.2倍并且≤5倍，例如≥0.3倍并且≤4倍、≥0.4倍并且≤3倍、≥0.5倍并且≤2倍、≥0.6倍并且≤1.75倍、≥0.7倍并且≤1.5倍、≥0.75倍并且≤1.25倍、≥0.8并且≤1.2倍、≥0.85倍并且≤1.15倍、≥0.9倍并且≤1.1倍、≥0.91倍并且≤1.09倍、≥0.92倍并且≤1.08倍、≥0.93倍并且≤1.07倍、≥0.94倍并且≤1.06倍、≥0.95倍并且≤1.05倍、≥0.96倍并且≤1.04倍、≥0.97倍并且≤1.03倍、≥0.98倍并且≤1.02倍，或≥0.99倍并且≤1.01倍。
[1216]
在一些实施方式中，能够结合il
‑
11的参照抗体/抗体片段可以包含选自yu100
‑
h01、yu100
‑
g08或yu100
‑
f11的抗il
‑
11抗体克隆的cdr。在一些实施方式中，能够结合il
‑
11的参照抗体/抗体片段可以包含选自yu100
‑
h01、yu100
‑
g08或yu100
‑
f11的抗il
‑
11抗体克隆的vh和vl序列，或由其组成。
[1217]
在一些实施方式中，能够结合il
‑
11的参照抗体/抗体片段可以包含单克隆小鼠抗人il
‑
11抗体克隆#22626；货号mab218(r&d系统，明尼苏达州，美国)的cdr。在一些实施方式
中，能够结合il
‑
11的参照抗体/抗体片段可以包含单克隆小鼠抗人il
‑
11抗体克隆#22626；货号mab218(r&d系统，明尼苏达州，美国)的vh和vl序列，或由其组成。
[1218]
嵌合抗原受体(cars)
[1219]
本发明还提供了包含本发明的抗原结合分子或多肽的嵌合抗原受体(cars)。
[1220]
car是提供抗原结合和t细胞活化功能的重组受体。例如，在dotti等，immunol rev(2014)257(1)中综述了car结构和工程改造，该文献通过引用整体并入本文。car包含连接至细胞膜锚定区和信号传导区的抗原结合区。任选的铰链区可使得抗原结合区和细胞膜锚定区之间分离，并可充当柔性接头。
[1221]
本发明的car包含抗原结合区，所述抗原结合区包含本发明的抗原结合分子或由其组成，或包含本发明的多肽或由其组成。
[1222]
细胞膜锚定区位于car的抗原结合区和信号传导区之间，用于将car锚定到表达car的细胞的细胞膜上，其中抗原结合区位于细胞外空间，而信号传导区位于细胞内。在一些实施方式中，所述car包含细胞膜锚定区，其包含一氨基酸序列或由其组成，该氨基酸序列包含cd3
‑
ζ、cd4、cd8或cd28之一的跨膜区氨基酸序列，或由其衍生，或由其组成。如本文所用，由参照氨基酸序列“衍生”的区域包含与所述参照序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100之一的序列同一性的氨基酸序列。
[1223]
car的信号传导区域可激活t细胞。所述car的信号传导区域可以包含cd3
‑
ζ的细胞内结构域的氨基酸序列，其提供基于免疫受体酪氨酸的活化基序(itam)，用于表达car的t细胞的磷酸化和激活。包含其他含itam的蛋白质(例如fcγri)序列的信号区域也已在car中使用(haynes等，2001j immunol 166(1)：182
‑
187)。car的信号传导区域还可包含衍生自共刺激分子的信号传导区的共刺激序列，以促进表达car的t细胞在与靶蛋白结合后的活化。合适的共刺激分子包括cd28、ox40、4
‑
1bb、icos和cd27。在某些情况下，car被设计为可共同刺激不同的细胞内信号传导通路。例如，与cd28共刺激相关的信号传导优先激活磷脂酰肌醇3
‑
激酶(p13k)途径，而4
‑
1bb介导的信号传导则是通过tnf受体相关因子(traf)适配体蛋白。因此，car的信号传导区有时包含源自一个以上共刺激分子的信号传导区的共刺激序列。在一些实施方式中，本发明的car包含一个或多个共刺激序列，其包含以下氨基酸序列或由其组成，所述氨基酸序列包含或衍生自cd28、ox40、4
‑
1bb、icos和cd27中的一种或多种的胞内结构域的氨基酸序列，或由其组成。
[1224]
任选的铰链区可以使抗原结合结构域和跨膜结构域之间分离，并且可以充当柔性接头。铰链区可以衍生自igg1。在一些实施方式中，本发明的car包含铰链区，其包含以下氨基酸序列或由其组成，所述氨基酸序列包含或衍生自igg1的铰链区的氨基酸序列，或由其组成。
[1225]
还提供了包含本发明所述的car的细胞。本发明所述的car可以用于产生表达car的免疫细胞，例如，car
‑
t或car
‑
nk细胞。可以在体外培养过程中将car改造为免疫细胞。
[1226]
本发明的car的抗原结合区域可以以任何合适的形式提供，例如scfv、scfab等。
[1227]
核酸和载体
[1228]
本发明提供一种或多种编码本发明所述的抗原结合分子、多肽或car的核酸。
[1229]
在一些实施方式中，所述核酸是纯化的或分离的，例如来自其他核酸或天然生物
材料。在一些实施方式中，所述核酸包含dna和/或rna或由其组成。
[1230]
本发明还提供了一种或多种载体，其包含本发明所述的一种或多种核酸。
[1231]
核苷酸序列可以包含在载体中，例如表达载体。如本文所用，“载体”是用作将外源核酸转移到细胞中的媒介物的核酸分子。载体可以是用于在细胞中表达核酸的载体。此类载体可包括与编码待表达序列的核苷酸序列可操作地连接的启动子序列。载体还可包括终止密码子和表达增强子。本领域已知的任何合适的载体、启动子、增强子和终止密码子可用于本发明所述的载体中表达肽或多肽。
[1232]
术语“可操作地连接”可以包括选择的核酸序列和调节核酸序列(例如启动子和/或增强子)以这样的方式共价连接的情况，即将核酸序列的表达置于调节序列的影响或控制下(从而形成表达盒)。因此，如果调节序列能够影响核酸序列的转录，则调节序列与所选择的核酸序列可操作地连接。然后可以将得到的转录物翻译成所需的肽/多肽。
[1233]
合适的载体包括质粒、二元载体、dna载体、mrna载体、病毒载体(例如γ逆转录病毒载体(例如鼠白血病病毒(mlv)来源的载体)、慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、痘苗病毒载体和疱疹病毒载体)、基于转座子的载体和人工染色体(例如酵母人工染色体)。
[1234]
在一些实施方式中，所述载体可以是真核载体，例如包含在真核细胞中表达来自载体的蛋白质所必需的元件的载体。在一些实施方式中，所述载体可以是哺乳动物载体，例如包含巨细胞病毒(cmv)或sv40启动子以驱动蛋白质表达的载体。
[1235]
本发明所述的抗原结合分子的组成多肽可以由多种核酸中的不同核酸，或由多种载体中的不同载体编码。
[1236]
包含/表达抗原结合分子和多肽的细胞
[1237]
本发明还提供了包含或表达本发明所述的抗原结合分子、多肽或car的细胞。还提供了包含或表达本发明所述的一种或多种核酸、一种或多种载体的细胞。
[1238]
所述细胞可以是真核细胞，例如哺乳动物细胞。所述哺乳动物可以是灵长类动物(恒河猴，食蟹猴，非人类灵长类动物或人)，或非人哺乳动物(例如兔、豚鼠、大鼠、小鼠或其他啮齿动物(包括啮齿目中的任何动物)、猫、狗、猪、绵羊、山羊、牛(包括奶牛，例如奶牛，或牛科中的任何动物)、马(包括马科中的任何动物)、驴和非人类灵长类动物)。
[1239]
本发明还提供了产生包含本发明所述的一种或多种核酸或载体的细胞的方法，包括将本发明所述的一种或多种核酸、一种或多种载体的导入细胞中。在一些实施方式中，将本发明所述的分离的核酸或载体引入细胞包括转化、转染、电穿孔或转导(例如逆转录病毒转导)。
[1240]
本发明还提供了产生表达/包含本发明所述的抗原结合分子、多肽或car的细胞的方法，包括将本发明所述的一种或多种核酸、一种或多种载体的导入细胞中。在一些实施方式中，所述方法还包括在适合于细胞表达核酸或载体的条件下培养细胞。在一些实施方式中，所述方法是体外进行的。
[1241]
本发明还提供了通过本发明所述的方法获得或可获得的细胞。
[1242]
产生抗原结合分子和多肽
[1243]
本发明所述的抗原结合分子和多肽可以根据本领域技术人员已知的多肽生产方法来制备。
[1244]
多肽可以通过化学合成制备，例如液相或固相合成。例如，肽/多肽可以使用例如
chandrudu等，molecules(2013)，18：4373
‑
4388中描述的方法合成，4373
‑
4388，其全部内容通过引用并入本文。
[1245]
或者，可以通过重组表达产生抗原结合分子和多肽。适用于重组生产多肽的分子生物学技术是本领域众所周知的，例如green和sambrook,《分子克隆：实验室手册(第4版)》，冷泉港出版社，2012，以及nat methods.(2008)；5(2):135
‑
146，两者均通过引用整体并入本文。重组生产抗原结合分子的方法也描述于frenzel等，front immunol.(2013)；4:217和kunert和reinhart，appl microbiol biotechnol.(2016)100:3451
–
3461，两者均通过引用整体并入本文。
[1246]
在某些情况下，本发明的抗原结合分子由多于一个的多肽链组成。在这种情况下，所述抗原结合分子的产生可以包括多于一种多肽的转录和翻译，以及随后的多肽链偶联，以形成抗原结合分子。
[1247]
对于本发明所述的重组制备，可以使用任何适于表达多肽的细胞。所述细胞可以是原核生物的或真核生物的。在一些实施方式中，所述细胞是原核细胞，例如古细菌或细菌的细胞。在一些实施方式中，所述细菌可以是革兰氏阴性细菌，例如肠杆菌科细菌，例如大肠杆菌。在一些实施方式中，所述细胞是真核细胞，例如酵母细胞、植物细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞，例如cho、hek(例如hek293)、hela或cos细胞。在一些实施方式中，所述细胞是瞬时或稳定表达多肽的cho细胞。
[1248]
在一些情况下，所述细胞不是原核细胞，因为一些原核细胞不允许与真核细胞相同的折叠或翻译后修饰。此外，在真核生物中可能具有非常高的表达水平，并且使用适当的标签可以更容易地从真核生物中纯化蛋白质。还可以使用特定的质粒，其促进蛋白质分泌到培养基中。
[1249]
在一些实施方式中，多肽可以通过无细胞蛋白质合成(cfps)，例如通过zemella等，chembiochem(2015)16(17)：2420
‑
2431中所述的系统，其全部内容通过引用并入本文。
[1250]
制备可涉及经修饰以表达目的多肽的真核细胞的培养或发酵。所述培养或发酵可以在生物反应器中进行，所述生物反应器具有适当的营养物供应、空气/氧气和/或生长因子。通过从细胞中分配培养基/发酵液、提取蛋白质含量、分离单个蛋白质以分离分泌的多肽，可以收集分泌的蛋白质。培养、发酵和分离技术是本领域技术人员熟知的，并且描述于例如green和sambrook，分子克隆：实验室手册(第4版；如上引入作为参考)。
[1251]
生物反应器包括一个或多个可以培养细胞的容器。生物反应器中的培养可以连续进行，具有连续流入反应器的反应物和连续流出反应器的细胞。或者，所述培养可以分批进行。生物反应器监测和控制环境条件，例如ph、氧气、流入和流出的流速，以及容器内的搅拌，从而为培养的细胞提供最佳条件。
[1252]
培养表达抗原结合分子/多肽的细胞后，可以分离目标多肽。可以使用用于从本领域已知的细胞中分离蛋白质的任何合适方法。为了分离多肽，可能有必要将细胞与营养培养基分离。如果多肽是从细胞分泌的，则可以通过离心将细胞从含有分泌的目的多肽的培养基中分离出来。如果感兴趣的多肽聚集在细胞内，则蛋白质分离可包括离心以从细胞培养基中分离出细胞、用裂解缓冲液处理细胞沉淀，以及进行细胞破碎，例如通过超声处理、快速冻融或渗透裂解。
[1253]
然后可能需要从上清液或培养基中分离目标多肽，其可含有其他蛋白质和非蛋白
质组分。从上清液或培养基中分离蛋白质组分的常用方法是通过沉淀。不同溶解度的蛋白质在不同浓度的沉淀剂如硫酸铵中沉淀。例如，在低浓度的沉淀剂下，提取水溶性蛋白质。因此，通过添加不同增加的浓度的沉淀剂，可以区分不同溶解度的蛋白质。随后可以使用透析从分离的蛋白质中除去硫酸铵。
[1254]
用于区分不同蛋白质的其他方法是本领域已知的，例如离子交换色谱法和分子筛色谱法。这些可以用作沉淀的替代物，或者可以在沉淀之后进行。
[1255]
一旦从培养物中分离出目的多肽，可能需要或必须浓缩所述多肽。许多浓缩蛋白质的方法是本领域已知的，例如超滤或冷冻干燥。
[1256]
组合物
[1257]
本发明还提供了包含本文所述的抗原结合分子、多肽、car、核酸、表达载体和细胞的组合物。
[1258]
本文所述的抗原结合分子、多肽、car、核酸、表达载体和细胞可以被配制成用于临床用途的药物组合物或药物，并且可以包含药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或佐剂。所述组合物可以被配制用于局部、肠胃外、全身、腔内、静脉内、动脉内、肌肉内、鞘内、眼内、结膜内、瘤内、皮下、皮内、鞘内、口服或透皮给药途径，其可包括注射或输注。
[1259]
合适的制剂可在无菌或等渗培养基中包含抗原结合分子。药物和药物组合物可以配制成流体，包括凝胶形式。可配制流体制剂用于通过注射或输注(例如通过导管)施用于人体或动物体的选定区域。
[1260]
在一些实施方式中，将所述组合物配制成用于注射或输注的制剂，例如注入血管或肿瘤。
[1261]
根据本文所述的发明，还提供了用于生产药学上有用的组合物的方法，这种生产方法可以包括选自以下的一个或多个步骤：产生本文所述的抗原结合分子、多肽、car、核酸(或其多种)、表达载体(或其多种)或细胞；分离本文所述的抗原结合分子、多肽、car、核酸(或其多种)、表达载体(或其多种)或细胞；和/或将本文所述的抗原结合分子、多肽、car、核酸(或其多种)、表达载体(或其多种)或细胞与药学上可接受的载体、佐剂、赋形剂或稀释剂混合。
[1262]
例如，本文描述的本发明的另一方面涉及配制或生产用于治疗疾病/病症(例如癌症)的药物或药物组合物的方法，所述方法包括通过将如本文所述的抗原结合分子、多肽、car、核酸(或其多种)、表达载体(或其多种)或细胞与药学上可接受的载体、佐剂、赋形剂或稀释剂混合来配制药物组合物或药物。
[1263]
治疗性和预防性应用
[1264]
本文描述的抗原结合分子、多肽、car、核酸、表达载体、细胞和组合物可用于治疗性和预防性方法。
[1265]
本发明还提供了用于治疗性或预防性方法的如本文所述的抗原结合分子、多肽、car、核酸(或其多种)、表达载体(或其多种)、细胞或组合物。还提供了本文所述的抗原结合分子、多肽、car、核酸(或其多种)、表达载体(或其多种)、细胞或组合物在制备用于治疗或预防疾病或疾病或病症的药物中的用途。还提供了一种治疗或预防疾病或病症的方法，其包括向对象施用治疗或预防有效量的本文所述的抗原结合分子、多肽、car、核酸(或其多种)、表达载体(或其多种)、细胞或组合物。
[1266]
所述方法可以有效地减少疾病/病症的发展或进展、减轻疾病/病症的症状，或减少疾病/病症的病理。所述方法可以有效地预防疾病/病症的进展，例如预防疾病/病症的进展、防止其恶化，或减慢其发展速度。在一些实施方式中，所述方法可以引起疾病/症状的改善，例如，减少疾病/症状的症状，或减少疾病/症状的严重性/活性的一些其他相关因素。在一些实施方式中，所述方法可在较晚阶段(例如慢性阶段或转移)预防疾病/病症的发展。在一些实施方式中，所述方法可以有效逆转或消退疾病/病症，例如疾病/病症的病理学可以从较晚的发展阶段被逆转为较早的发展阶段。在一些实施方式中，所述方法可以有效地逆转或消退疾病/病症的症状或与疾病/病症的严重性/活性相关的一些其他症状。在一些实施方式中，所述方法可以有效地将疾病/病症逆转/消退至与在没有所述疾病/病症的对象中观察到的状态相似的状态。
[1267]
应当理解，本发明的内容可以用于治疗/预防将从il
‑
11介导的信号传导水平的降低(即，抑制或拮抗)，或表达il
‑
11的细胞数量和/或活性的降低获得治疗或预防益处的任何疾病/病症。
[1268]
例如，所述疾病/病症可以是其中在病理学上涉及il
‑
11介导的信号传导的疾病/病症，例如其中il
‑
11介导的信号水平升高与疾病/病症的发作、发展或进展和/或所述疾病/病症的一种或多种症状的严重程度正相关的疾病/病症，或者il
‑
11介导的信号传导水平升高是所述疾病/病症发作、发展或进展的危险因素。
[1269]
例如，所述疾病/病症可以是其中在病理学上涉及表达il
‑
11的细胞的疾病/病症，例如其中表达il
‑
11的细胞数量/比例升高与疾病/病症的发作、发展或进展和/或所述疾病/病症的一种或多种症状的严重程度正相关的疾病/病症，或者表达il
‑
11的细胞数量/比例升高是所述疾病/病症发作、发展或进展的危险因素。
[1270]
在一些实施方式中，根据本发明的待治疗/预防的疾病/病症是特征在于与在没有所述疾病/病状的情况下il
‑
11介导的信号传导/其相关物(例如在该疾病/病状的症状得以显现的器官/组织中)水平相比，il
‑
11介导的信号传导或其相关物水平增加的疾病/病症。
[1271]
在一些实施方式中，根据本发明的待治疗/预防的疾病/病状是特征在于与例如在没有所述疾病/病症的情况下表达il
‑
11的细胞的数量/比例/活性相比，表达il
‑
11的细胞的数量/比例/活性增加的疾病/病症。
[1272]
在一些实施方式中，可以基于对il
‑
11介导的信号传导或其相关物水平的增加，和/或表达il
‑
11的细胞的数量/比例/活性的增加的检测，来选择如本文所述的治疗/预防对象，例如在外围或受所述疾病/病症影响的器官/组织中(例如在表现出疾病/病症的症状的器官/组织中)。所述疾病/病症可能会影响任何组织、器官或器官系统。在一些实施方式中，所述疾病/病症可以影响几种组织/器官/器官系统。
[1273]
在一些实施方式中，可基于确定对象具有il
‑
11介导的信号传导或其相关物水平的增加，和/或表达il
‑
11的细胞数量/比例/活性的增加(例如在外周或在器官/组织中，相对于在健康对象中il
‑
11介导的信号传导/相关物的水平或者表达il
‑
11的细胞数量/比例/活性)，来选择本发明所述的治疗/预防的对象。
[1274]
本发明的抗原结合分子优选能够结合并抑制il
‑
11和含有il
‑
11的分子/复合物(例如il
‑
11:il
‑
11rα复合物)的生物学活性。因此，本发明的抗原结合分子可用于治疗或预防其中il
‑
11与疾病/病症的病理学有关的疾病和病症。即，发现本发明的抗原结合分子可
用于治疗或预防与il
‑
11介导的信号传导有关的疾病和病症。
[1275]
在一些实施方式中，所述疾病/病症可以与il
‑
11、il
‑
11rα和/或gp130基因或蛋白质表达增加有关，例如与对照(即未患病)状态相比。在一些实施方式中，与对照状态相比，所述疾病/病症可以与il
‑
11介导的信号传导水平升高有关。在一些实施方式中，与对照状态相比，所述疾病/病症可以与通过erk和/或stat3途径的信号传导水平升高相关。在一些实施方式中，可以在所述疾病/病症的效应细胞中观察到il
‑
11、il
‑
11rα和/或gp130的表达/活性增加，和/或il
‑
11介导的信号传导水平升高。在一些实施方式中，可以在除了所述效应细胞以外的细胞中观察到il
‑
11、il
‑
11rα和/或gp130的表达/活性增加，和/或il
‑
11介导的信号传导水平升高。
[1276]
可以测量通过erk的信号传导，例如使用erk磷酸化检测方法，例如《检测指南》中所述的检测方法：phospho
‑
erk分析，kim e.garbison、beverly a.heinz、mary e.lajiness、jeffrey r.weidner和g.sitta sittampalam，礼来公司(eli lilly&company)、sittampalam gs、coussens np、nelson h等，贝塞斯达(md)编辑：礼来公司和国家转化科学促进中心；2004。可以测量通过stat3的信号传导，例如使用stat3磷酸化的检测方法，例如phospho
‑
stat3(tyr705)细胞检测试剂盒(cisbio检测)。
[1277]
在一些实施方式中，所述治疗所针对的疾病/病症中il
‑
11介导的信号传导的减少是治疗性的。在一些实施方式中，所述治疗所针对的疾病/病症与过量erk和/或stat3信号传导相关。在一些实施方式中，所述治疗所针对的疾病/病症与成纤维细胞过度增殖或过度活化相关，或与肌成纤维细胞过量相关。
[1278]
在一些实施方式中，所述治疗可以旨在通过减少肌成纤维细胞或αsma阳性成纤维细胞的数量或比例来预防或治疗疾病/病症。
[1279]
在一些实施方式中，所述疾病/病症可以是纤维化、纤维化的症状或以纤维化为特征的疾病/病症。如本文所用，“纤维化”是指由于细胞外基质组分(例如胶原蛋白)过量沉积而形成的过量纤维结缔组织。纤维结缔组织的特征在于具有高胶原含量的细胞外基质(ecm)。胶原可以股线或纤维的形式提供，其可以不规则地排列或对齐。纤维结缔组织的ecm也可以包括糖胺聚糖。
[1280]
如本文所用，“过量的纤维结缔组织”是指在给定位置(例如，给定组织或器官，或给定组织或器官的一部分)处的结缔组织的量大于在没有纤维化的位置(例如在正常的非病理条件下)处存在的结缔组织的量。如本文所用，“细胞外基质组分的过量沉积”是指一种或多种细胞外基质组分的沉积水平大于在没有纤维化的情况下(例如在正常的非病理条件下)的沉积水平。
[1281]
纤维化的细胞和分子机制描述于wynn，j.pathol.(2008)214(2):199
‑
210，以及wynn和ramalingam，nature medicine(2012)18：1028
‑
1040，其通过引用整体并入本文。纤维化的主要细胞效应子是肌成纤维细胞，其产生富含胶原的细胞外基质。
[1282]
为响应组织损伤，受损的细胞和白细胞产生促纤维化因子，例如tgfβ、il
‑
13和pdgf，它们激活成纤维细胞成为表达αsma的肌成纤维细胞，并将所述肌成纤维细胞募集到损伤部位。肌成纤维细胞产生大量的细胞外基质，并且是帮助伤口挛缩和闭合的重要介质。然而，在持续感染的条件下或在慢性炎症过程中，肌成纤维细胞可能过度活化和募集，从而过度产生细胞外基质成分，导致形成过量的纤维结缔组织。
[1283]
在一些实施方式中，纤维化可以由病理状况触发，例如导致促纤维化因子(例如tgfβ1)产生的病症、感染或疾病状态。在一些实施方式中，纤维化可以由身体损伤/刺激、化学损伤/刺激或环境损伤/刺激引起。手术期间可能会发生身体损伤/刺激，例如医源性原因。化学损伤/刺激可能包括药物引起的纤维化，例如长期服用博来霉素(bleomycin)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、胺碘酮(amiodarone)、普鲁卡因酰胺(procainamide)、青霉胺(penicillamine)、金(gold)和呋喃妥因等药物后(daba等，saudi med j 2004年6月；25(6)：700
‑
6)。环境损伤/刺激可能包括接触石棉纤维或二氧化硅。
[1284]
纤维化可发生在身体的许多组织中。例如，纤维化可发生在肺、肝(例如肝硬化)、肾、心脏、血管、眼睛、皮肤、胰腺、脾、肠(例如大肠或小肠)、脑和骨髓中。纤维化也可能一次在多个器官中发生。
[1285]
在本文的实施方式中，纤维化可涉及胃肠道系统的器官，例如肝、小肠、大肠或胰腺。在一些实施方式中，纤维化可涉及呼吸系统的器官，例如肺。在实施方式中，纤维化可涉及心血管系统的器官，例如心脏或血管。在一些实施方式中，纤维化可涉及皮肤。在一些实施方式中，纤维化可涉及神经系统的器官，例如大脑。在一些实施方式中，纤维化可涉及泌尿系统的器官，例如肾脏。在一些实施方式中，纤维化可涉及肌肉骨骼系统的器官，例如肌肉组织。
[1286]
在一些优选的实施方式中，纤维化是心脏或心肌纤维化、肝纤维化或肾纤维化。在一些实施方式中，心脏或心肌纤维化与心脏的肌肉系统或电特性功能失调或心脏的壁或瓣膜增厚相关。在一些实施方式中，纤维化是心脏的心房和/或心室的纤维化。治疗或预防心房或心室纤维化可能有助于降低房颤、心室纤颤或心肌梗塞的风险或发作。
[1287]
在一些优选的实施方式中，肝纤维化与慢性肝病或肝硬化有关。在一些优选的实施方式中，肾纤维化与慢性肾脏疾病有关。
[1288]
本发明的以纤维化为特征的疾病/病症包括但不限于：呼吸道疾病，例如肺纤维化、囊性纤维化、特发性肺纤维化(ipf)、进行性块状纤维化、硬皮病、闭塞性细支气管炎、赫曼斯基
‑
普德拉克(hermansky
‑
pudlak)综合征、石棉沉滞症、矽肺病、慢性肺动脉高压、艾滋病相关的肺动脉高压、结节病、肺部疾病的肿瘤基质和哮喘；慢性肝病、原发性胆汁性肝硬化(pbc)、血吸虫肝病、肝硬化、脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、早期nash、晚期nash、酒精性脂肪性肝炎、脂肪变性；胰腺疾病，例如慢性胰腺炎和胰腺纤维化；心血管疾病，例如肥厚型心肌病、扩张型心肌病(dcm)、心房纤维化、房颤、心室纤维化、心室纤颤、心肌纤维化、brugada综合征、心肌炎、心肌内膜纤维化、心肌梗塞、纤维化性血管病、致心律失常性右室心肌病(arvc)、肾小管间质和肾小球纤维化、动脉粥样硬化、静脉曲张、脑梗塞；神经系统疾病，例如神经胶质病和阿尔茨海默氏病；肌肉营养不良，例如duchenne肌肉营养不良(dmd)或贝克尔肌肉营养不良(bmd)；胃肠道疾病，例如慢性病(chron’s disease)、微观结肠炎和原发性硬化性胆管炎(psc)；皮肤病，如硬皮病、肾源性全身纤维化和角质层瘢痕；关节纤维化；杜普伊特伦(dupuytren)挛缩；纵隔纤维化；腹膜后纤维化；骨髓纤维化；佩罗尼(peyronie)氏病；粘膜囊炎；肾脏疾病(例如，肾脏纤维化、肾病综合征、阿尔波特(alport)综合征、hiv相关性肾病、多囊肾疾病、法布里(fabry)氏病、糖尿病肾病、慢性肾小球肾炎、与系统性狼疮有关的肾炎、肾间质纤维化(if))；肾脏损伤，例如急性肾损伤/肾功能衰竭；肾毒性；进行性全身性硬化症(pss)；慢性移植物抗宿主病；眼睛疾病/病症和相关
过程，例如格雷夫(grave)氏眼病、视网膜上纤维化(例如糖尿病性视网膜病(dr))、青光眼、视网膜下纤维化(例如与黄斑变性相关(例如与湿性或干性年龄相关的黄斑变性(amd)))、黄斑水肿、玻璃膜疣形成、脉络膜新生血管形成(cnv)、手术后纤维化(例如白内障手术后的后囊或青光眼小梁切除术后的小泡)、结膜纤维化、结膜下纤维化；关节炎；纤维化前肿瘤性和纤维化肿瘤性疾病；以及化学或环境(例如癌症化学疗法、农药、放射/癌症放射疗法)引起的纤维化。
[1289]
本文的早期nash是指脂肪肝疾病的脂肪变性阶段，例如nafld，其可能会桥接成肝脏发炎的nash状态。本文的晚期nash是指持续性肝脏炎症的状态，其可能包括纤维化。
[1290]
应当理解，上面列出的许多疾病/症状是相互关联的。例如，心室纤维化可在心肌梗塞后发生，并与dcm、hcm和心肌炎有关。
[1291]
在特定实施方式中，所述疾病/病症可以是肺纤维化、心房纤颤、心室纤颤、肥厚型心肌病(hcm)、扩张型心肌病(dcm)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝硬化、慢性肾病、硬皮病、系统性硬化、瘢痕疙瘩、囊性纤维化、克罗恩病、手术后纤维化或视网膜纤维化，例如与湿性年龄相关性黄斑变性(amd)有关。
[1292]
在一些实施方式中，所述方法可以有效逆转或消退纤维化。所述纤维化可以是产生的或严重的纤维化，并且可以与本文所述的任何疾病/症状相关。在一些实施方式中，所述方法可以有效地逆转或消退本文提供的任何疾病/病症。
[1293]
纤维化可直接或间接导致疾病/病症的发展和/或增加对发展的敏感性。例如，肝细胞癌(hcc)的80％以上发生在纤维化或肝硬化的肝脏中(affo等,2016，annu rev pathol.)，表明肝纤维化在肝脏恶变前环境(pme)中起着重要作用。
[1294]
因此，本发明的抗原结合分子可用于治疗和预防与纤维化有关和/或以纤维化为危险因素的疾病/病症的方法中。在一些实施方式中，与纤维化有关的疾病/疾病或以纤维化为危险因素的疾病/病症是癌症，例如肝癌(例如肝细胞癌)。
[1295]
il
‑
11也与其他疾病/病症的病理有关，因此本发明的抗体和片段也可用于治疗、预防、减轻和/或逆转或消退这些疾病/病症的症状的方法中。
[1296]
在一些实施方式中，纤维化可以与血管生成相关，例如在眼睛中。在一些实施方式中，本文所述的治疗或预防纤维化的方法、确定对象对于这种治疗/预防的适合性的方法，以及诊断/预测纤维化的方法也适用于治疗/预防/诊断/预测血管生成，反之亦然。眼睛的纤维化可能与脉络膜新生血管(cnv)有关。
[1297]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子被提供用于治疗和/或预防代谢疾病的方法。即，本发明通过抑制il
‑
11介导的信号传导来提供治疗/预防代谢性疾病的方法，例如在细胞、组织/器官/器官系统/对象中。如本文所用，“代谢性疾病”是指由异常代谢引起或以异常代谢为特征的任何疾病或症状。在本文中，“代谢”是指能量源的身体转化/加工，例如为提供营养、消耗能量和/或储存而消耗的物质。“正常代谢”可以是没有疾病的健康对象的代谢，例如没有代谢性疾病，或没有代谢性疾病的症状/相关物。
[1298]
患有代谢性疾病的对象可能显示异常代谢。患有代谢性疾病的对象可能具有异常代谢的症状/相关物。患有代谢性疾病的对象可能已经被诊断为患有代谢性疾病。对象可以满足用于诊断代谢性疾病的诊断标准。在一些实施方式中，本发明提供了用于对象中的代谢性疾病的治疗/预防方法，其中代谢性疾病具有较差的预后。
[1299]
在一些实施方式中，所述代谢性疾病影响以下一种或多种：肝脏、胰腺、心血管系统、消化系统、排泄系统、呼吸系统、肾脏系统、生殖系统、循环系统、肌肉系统、内分泌系统、外分泌系统、淋巴系统、免疫系统、神经系统和/或骨骼系统。
[1300]
在一些实施方式中，所述代谢性疾病是或包括(例如特征在于)肥胖症、2型糖尿病(t2d)、1型糖尿病(t1d)、糖尿病前期、超重、代谢综合症、妊娠相关的高血糖症(即妊娠期糖尿病)、胆汁淤积性肝病、高血糖症、高脂血症、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、消瘦、恶病质、化疗相关的体重减轻、胰腺功能不全、胰腺炎、急性胰腺炎、慢性胰腺炎、脂肪变性、非酒精性脂肪肝病(nafld)、非酒精性脂肪肝(nafl)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、脂肪营养不良、脂肪肥大、脂肪萎缩、胰岛素缺乏、胰岛素抵抗和高血糖症。在一些实施方式中，所述代谢性疾病是肥胖症或包括肥胖症。在一些实施方式中，所述代谢性疾病是或包括胆汁淤积，即胆汁从肝脏到十二指肠的流量减少。所述疾病可能是胆汁淤积性肝病(jansen等，hepatology(2017)65(2)：722
‑
738以及pollock和minuk，j gastroenterol hepatol(2017)32(7)：1303
‑
1309)，两者均通过引用整体并入)，包括例如原发性胆源性胆管炎(pbc)和原发性硬化性胆管炎(psc)。
[1301]
本发明的方面涉及治疗和/或预防在代谢中起作用的细胞/组织/器官/器官/器官系统的异常和/或功能不足。特别地，本文考虑治疗和/或预防胰腺/胰腺组织/胰腺的异常功能和/或功能不足，以及治疗和/或预防肝脏/肝组织/肝脏的异常功能和/或功能不足。
[1302]
在一些实施方式中，所述代谢性疾病是或包括消瘦。如本文所用，术语“消瘦”是指非自愿的体重减轻，其可以是渐进的和/或退化的。消瘦可定义为肌肉损失，其中脂肪损失或不损失，并且通常涉及显著的，通常是非自愿的体重损失(包括骨骼肌)，并且可能包括或可能不包括脂肪组织的损失。在某些情况下，脂肪组织消瘦可以单独发生，如脂肪营养不良疾病中所见。消瘦的特征可能是食物摄入量减少和新陈代谢异常的可变结合导致蛋白质和能量平衡为负值(fearon等，lancet oncol.(2011)12(5):489
‑
95)。消瘦会导致进行性功能障碍、生活质量受损、发病和死亡风险增加。在某些情况下，消瘦会导致虚弱(身体虚弱或精力不足)和/或贫血(血液中红细胞或血红蛋白的缺乏)。在某些情况下，常规的营养支持或迄今已尝试的治疗性干预措施无法完全逆转消瘦。体重减轻已达到患者历史稳定体重的30％时，通常会导致死亡(tisdale，nature reviews cancer，2，862
‑
871(2002))。
[1303]
以消瘦为特征的疾病/症状包括恶病质(与年龄无关的肌肉质量损失)、肌肉减少症(肌肉质量的丧失：例如，年龄相关、废弃、太空旅行或去神经支配)、厌食症(蛋白质能量营养不良)、肌肉营养不良、脂肪营养不良(例如，脂肪组织的异常或变性)、脂肪萎缩症(与面部和其他组织的皮下脂肪与年龄相关的丢失)和肌无力(在任何慢性疾病中肌肉萎缩；由fearon等，j cachexia sarcopenia muscle.2011；2:1
–
3提出。在本文中，以消瘦为特征的疾病/症状也被称为“消瘦性疾病”。在一些实施方式中，根据本公开的消瘦病症是恶病质、恶病质前期、难治性恶病质、肌肉减少症、厌食症、脂肪营养不良、脂肪萎缩和/或肌无力。在根据本文描述的各个方面的一些实施方式中，消瘦病症是恶病质、恶病质前期和/或难治性恶病质。
[1304]
由慢性疾病引起的消瘦性疾病可能包括“轻度肌肉萎缩性疾病”(表现或不表现虚弱)、“中度肌肉萎缩性疾病”(表现或不表现虚弱；有时被称为“恶病质前期”),或“严重肌肉萎缩性疾病”(有时被称为“恶病质”，通常表现为虚弱)。恶病质可以定义为从历史稳定体重
非自愿性体重减轻>5％、体重指数(bmi)<20kg/m2(65岁以下的人)或<22kg/m2(65岁以上的人)、任何程度的体重减轻>2％，或骨骼肌指数与肌肉减少症中一致的任何程度的减轻>2％。所述对象还可能显示出<10％的体脂肪和/或<35g/l的低血液白蛋白水平。这些标准也可能有助于确定人群发生消瘦性病症的“风险”(fearon等，lancet oncol.2011；12(5):489
‑
95)。
[1305]
已经提出了恶病质的三步分类法，其严重程度根据能量存储和身体蛋白质(bmi)的消耗程度以及持续的减重程度进行分类。
[1306]
1.恶病质前期
–
患者的体重减轻<5％但尚未出现严重的并发症。
[1307]
2.恶病质
–
综合征正在发展，体重减轻超过上述参数，但仍可以被治疗。
[1308]
3.难治性恶病质
–
疾病不再对治疗产生反应，或负担和风险超过了治疗益处(fearon等，同上)。通常，难治性阶段由以下所述的潜在疾病的总体阶段以及患者的状况决定。
[1309]
代谢性疾病可能存在于急性或慢性疾病环境中。本发明的方面提供了与代谢性疾病相关的疾病/病症的治疗/预防。与代谢性疾病相关的疾病/症状包括与代谢性疾病的发作成正相关的疾病/症状。在一些实施方式中，与代谢性疾病有关的疾病/病症是可以引起/引起了/已经引起(即，可以导致、导致了或已经导致)代谢性疾病的疾病/病症。
[1310]
与代谢性疾病相关的疾病/病症还包括由代谢性疾病引起和/或加重(变得更糟的、进展的和/或复杂化的)的疾病/病症。在一些实施方式中，与代谢性疾病有关的疾病/病症可以与代谢性疾病的发作正相关，并且也可以由代谢性疾病加重。“相关”的疾病/病症可以是包括与代谢性疾病有关的病理的疾病/病症。
[1311]
在本发明的实施方式中，代谢性疾病或与代谢性疾病相关的疾病/病症可以存在于或影响任何器官/组织，例如心脏、肝脏、肾脏、脑、皮肤、肌肉系统、胃、小肠、大肠、胰腺、口、唾液腺、咽、食道、胆囊、气管、喉、膀胱、卵巢、子宫、睾丸、内分泌系统的腺体(例如垂体或甲状腺)、淋巴系统(例如脾)。
[1312]
在本发明的实施方式中，与代谢性疾病相关的疾病/病症可以是癌症、心脏病、肾病、肺病、肝病、慢性感染、神经退行性疾病、急性损伤、创伤性损伤/外伤、术后症状或老化/衰老中的一种或多种
[1313]
根据本发明的各个方面，本发明所述的治疗和/或预防代谢性疾病的方法可包括以下一种或多种：
[1314]
降低血脂水平；
[1315]
降低血糖水平；
[1316]
增加葡萄糖耐量(例如对于葡萄糖不耐受的对象)；
[1317]
增加胰岛素耐受(例如对于胰岛素抵抗的对象)；
[1318]
增强胰腺功能
[1319]
减轻体重(例如对于超重/肥胖的对象)；
[1320]
减少体脂肪量；
[1321]
增加瘦体重；
[1322]
降低空腹血糖水平；
[1323]
降低血清甘油三酯水平；
[1324]
降低血清胆固醇水平；
[1325]
增加葡萄糖耐量；
[1326]
增强胰腺功能(例如外分泌和/或内分泌功能)；
[1327]
增加胰腺组织的生长；
[1328]
再生胰腺组织；
[1329]
增加胰腺重量；
[1330]
减少胰岛细胞增生；
[1331]
降低胰高血糖素的表达；
[1332]
增加胰岛素表达；
[1333]
增加体重(例如对于患有消瘦性疾病(例如恶病质)的对象)；
[1334]
减少肝脏中il
‑
11蛋白的表达；
[1335]
减少肝脏中的erk活化；
[1336]
减少脂肪变性(例如在肝脏)；
[1337]
降低肝脏甘油三酸酯水平；
[1338]
降低血清alt水平；
[1339]
降低促炎因子(例如tnfa、ccl2、ccl5、il
‑
6、cxcl5和/或cxcl1)的表达；
[1340]
减少促纤维化因子(例如il
‑
11、timp1、acta2、tgfβ1、mmp2、timp2、mmp9、col1a2、col1a1和/或col3a1)的表达；
[1341]
降低血清tgfβ1水平；
[1342]
减少hsc的il
‑
11、acta2、mmp2、tgfβ1、pdgf、ang ii、bfgf、ccl2和/或h2o2的表达/产生；
[1343]
抑制hsc的hsc向成肌纤维细胞的转化；
[1344]
减少肝脏中肌成纤维细胞的数量/比例；
[1345]
降低肝脏羟脯氨酸水平；
[1346]
增强肝功能；
[1347]
增强受代谢性疾病影响的器官/组织的功能；
[1348]
减少肝脏损害；和
[1349]
减少肝脏中cd45 细胞的数量/比例。
[1350]
il
‑
11与多种癌症的发生和发展有关。研究表明il
‑
11对于stat3的过度激活而促进的慢性胃炎以及相关的胃癌、结肠癌、肝细胞癌和乳腺癌的肿瘤发生具有重要意义(ernst m等，j clin invest.(2008)；118：1727
–
1738)，il
‑
11可能通过触发jak
‑
stat细胞内信号传导途径促进肿瘤发生，并且还可能通过pi3k
‑
akt
‑
mtorc1途径的信号传导促进转移(xu等，cancer letters(2016)373(2)：156
‑
163)。il
‑
11通过stat3促进存活、增殖、侵袭性血管生成和转移，il
‑
11/gp130/jak/stat3信号转导轴可能会限制胃肠道肿瘤的进展，并且il
‑
11表达升高与乳腺癌患者的不良预后相关(johnstone等，cytokine&growth reviews(2015)26(5)：489
‑
498)。也已显示il
‑
11会影响乳腺癌干细胞动力学和肿瘤异质性(johnstone等，cytokine&growth reviews(2015)26(5)：489
‑
498)。最近发现，il
‑
11信号传导与肺腺癌的化学抗性有关；癌症相关的成纤维细胞上调il
‑
11，并通过激活il
‑
11/il
‑
11r/stat3抗凋亡信号通路赋予肺癌细胞化学耐药性(tao等，2016，sci rep.6；6:38408)
.il
‑
11信号传导可促进在恶变前环境(pme)和肿瘤微环境(tme)中成纤维细胞向肌成纤维细胞的转变和细胞外基质的产生。
[1351]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子被提供用于治疗/预防癌症的方法。在一些实施方式中，所述癌症可以是直接或间接导致炎症和/或纤维化的癌症。
[1352]
癌症可以是任何不需要的细胞增殖(或任何通过不需要的细胞增殖表现出来的疾病)、肿瘤或癌变，或者不希望的细胞增殖、肿瘤或癌变的风险或易感性。所述癌症可以是良性或恶性的，可以是原发性的或继发性的(转移性的)。所述肿瘤或癌变可以是细胞的任何异常生长或增殖，并且可以位于任何组织中。
[1353]
在一些实施方案中，本发明的抗原结合分子被提供以用于治疗/预防癌症的方法，例如上皮细胞癌、乳腺癌、胃肠道癌(例如食道癌、胃癌、胰腺癌、肝癌(例如hcc)、胆囊癌、结直肠癌、肛门癌、胃肠道类癌，和肺癌(例如非小细胞肺癌(nsclc)或小细胞肺癌(sclc))。在一些实施方式中，所述癌症是以急性和/或慢性炎症为危险因素的癌症。在一些实施方式中，所述癌症是特征在于以纤维化(例如，如本文所述)的疾病/病症为危险因素的癌症。
[1354]
在一些实施方式中，所述癌症可以与il
‑
11、il
‑
11rα和/或gp130基因或蛋白质表达增加有关。例如，癌症细胞与可比较的非癌细胞相比，可能具有增加的il
‑
11、il
‑
11rα和/或gp130的表达，或者其它细胞(例如非癌细胞)中的il
‑
11、il
‑
11rα和/或gp130的表达水平与在没有癌症的情况下(例如在健康对照对象中)类似细胞的表达水平相比有所增加。在一些实施方式中，与可比较的非癌细胞相比，可以确定癌症细胞具有增加的通过erk和/或stat3途径的信号传导水平。
[1355]
在一些实施方式中，所述癌症可以与il
‑
11、il
‑
11rα和/或gp130中的突变相关。在一些实施方式中，相对于在不存在突变的情况下观察到的表达/信号转导水平，这样的突变可以与基因或蛋白质表达水平升高相关，或者可以与il
‑
11/il
‑
11r信号传导水平升高相关。
[1356]
il
‑
11也与以炎症为特征的疾病/病症有关。已显示关节内注射il
‑
11引起关节发炎(wong等，cytokine(2005)29：72
‑
76)，并且已证明il
‑
11在il
‑
13介导组织炎症的部位具有促炎作用(chen等，j immunol(2005)174：2305
‑
2313)。还已经观察到在特应性皮炎的慢性皮肤损伤中il
‑
11的表达显著增加，并且已知其与支气管炎症有关(toda等，j allergy clin immunol(2003)111：875
‑
881)。il
‑
11介导的信号传导与炎症性肠病(ibd)和哮喘有关(putoczki和ernst，j leuko biol(2010)88(6)1109
‑
1117)。il
‑
11也被确定为多发性硬化症的危险因素；与对照组相比，临床孤立综合征(cis)患者的脑脊液中il
‑
11升高，复发性多发性硬化症患者复发期间il
‑
11的血清水平更高，il
‑
11可能促进cd4 t细胞分化为th17表型
–
th17细胞是多发性硬化症发病机理中的重要细胞(zhang等，oncotarget(2015)6(32)：32297
‑
32298)。
[1357]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子被提供以用于治疗/预防以炎症为特征的疾病/病症的方法。在一些实施方式中，以炎症为特征的疾病或病症可以是直接或间接导致癌症和/或纤维化的疾病/病症。以炎症为特征的疾病包括例如过敏性炎症，例如过敏性哮喘和支气管炎症、特应性皮炎、过敏性鼻炎和眼部过敏性疾病，以及自身免疫性疾病，例如多发性硬化症、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、慢性活动性肝炎、1型糖尿病、乳糜泻、格雷夫(grave)氏病、葡萄膜炎、天疱疮、牛皮癣、克罗恩(crohn)氏病、溃疡性结肠炎、炎
症性肠病、贫血和自身免疫性甲状腺炎。
[1358]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子被提供以用于治疗/预防肝毒性和以肝毒性为特征的疾病/病症的方法。如本文所用，肝毒性是指肝细胞/组织的损伤和/或死亡。肝毒性可以指对肝脏有毒性损害的状态，特别是与肝脏内肝细胞死亡有关的状态。如下文所述，可以通过检测肝毒性的一种或多种相关物来确定/诊断肝毒性。肝毒性损伤可能会引起肝毒性。如本文所用，“肝毒性损伤”是指引起肝毒性的任何处理、事件或状况。例如，肝毒性损伤可能是由化学/物理处理/经历，或气态条件引起的。在一些实施方式中，肝毒性损伤是化学的，例如药物诱导的肝损伤的情况，例如apap诱导的肝毒性。在一些实施方式中，肝毒性损伤是物理的，例如由于肝脏组织的外科手术损伤而产生肝毒性的情况，例如治疗疾病和/或进行肝移植的手术(例如，肝毒性可能有医源性原因)。在一些实施方式中，肝毒性损伤是由缺氧引起的，例如缺血或再灌注所致的(例如iri可能引起肝毒性损害)。
[1359]
肝毒性可能是化学驱动的肝损害，例如由药物、化学物质，局部缺血、再灌注、败血症或草药或饮食补充剂引起的损害或伤害。在一些实施方式中，肝毒性是指药物诱导的肝损伤(dili)。在一些实施方式中，肝毒性是指由肝毒素引起的肝损伤。肝毒素可以是酒精。肝毒性也可以称为中毒性肝炎。肝毒性可指急性和/或慢性肝毒性。
[1360]
肝毒性可能直接或间接地由酒精摄入引起，例如长期饮酒。此处提到的肝毒性可能是由于禁食、营养不良、被感染剂(例如肝炎病毒(例如甲型、乙型、丙型、丁型或戊型肝炎)、hiv)感染、癌症或药物相互作用直接或间接引起的。
[1361]
肝毒性可能与其他疾病、病症和症状有关。与肝毒性有关的病症、疾病或症状包括急性肝损伤(ali)、急性肝衰竭、急性肝病、慢性肝病、肝损害、肝炎(例如病毒性肝炎、酒精性肝炎)、肝缺血
‑
再灌注损伤(iri)(例如“热”缺血再灌注(wir))、放射诱导的肝病(rild)、药物诱导的肝损伤(dili)、自身免疫性肝损伤、胆汁淤积性肝病、hiv和癌症。
[1362]
药物诱导的肝损伤(dili)包括内在的和特发性的肝毒性，特发性的dili进一步包括变态反应和非变态反应。内在机制与剂量依赖性肝毒性有关，而特发性肝毒性与剂量无关，并且可能以不可预测的方式发生。过敏性特发性肝毒性的进一步特征是存在适应性免疫系统反应的典型症状和体征，包括发烧、皮肤反应、嗜酸性粒细胞增多、自身抗体形成，以及潜伏时间短(特别是再次暴露后)(khoury等，j clin transl hepatol.2015年6月28日；3(2)：99
–
108)。
[1363]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子可以用于对乙酰氨基酚(apap)诱导的肝毒性的诊断、治疗和预防。对乙酰氨基酚也被称为n
‑
乙酰基
‑
对氨基苯酚或扑热息痛，或商标名为泰诺(tylenol)和必理通(panadol)。对乙酰氨基酚中毒导致肝毒性，其与肝细胞外渗酶(例如天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶和丙氨酸氨基转移酶)的血清浓度升高、小叶中心变性和坏死以及库普弗(kupffer)细胞的活化相关(trepicchio wl等，toxicol pathol.2001；29(2):242
‑
9)。
[1364]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子被提供以用于治疗/预防肾损伤的方法，例如急性肾损伤(aki；急性肾衰竭)或与肾损伤有关的疾病/病症。肾损伤的特征在于肾小管上皮细胞(tec)的损伤和/或tec向上皮到间充质细胞样表型(即emt)的转变。tec向间充质细胞样表型的转变可以被表征，例如通过减少的e
‑
钙粘蛋白的表达、增加的snail的表达和/或增加的acta2的表达。肾损伤可能有任何原因，例如包括由于机械(即物理)损害或
损伤、化学损害或损伤、局部缺血或遗传易感性引起的肾损伤。原因或损害通常会导致肾功能受损，从而可能导致肾功能衰竭。机械损害或损伤可能包括对对象、对肾脏、对tec或对足细胞的物理损伤。它还可能包括管状阻塞/堵塞，例如尿路。在一些实施方式中，肾损伤是药物诱导的肾损伤或药物诱导的急性肾损伤。
[1365]
缺血性损伤可能是由于流向肾脏的血流减少而引起的，这可能是由许多因素引起的，例如血压较低(例如归因于败血症、失血或手术的低血压)，或化学试剂的作用(例如给予对象以治疗另一种疾病、病症或症状的药或药物)。由局部缺血引起的肾损伤可以是局部缺血诱导的肾损伤或局部缺血诱导的急性肾损伤。挤压损伤所致的肾损伤可能是局部缺血诱导的血管收缩性肾损伤，也可能是管状特征机械因素或循环因素的毒性作用引起的，例如肌红蛋白。
[1366]
在一些实施方式中，肾损伤(可能是aki)的特征在于，在某些情况下可包括或导致肾的小管上皮细胞(tec)的死亡，即肾小管上皮细胞。tec可能在近端或远端，其在aki中都可能受损，肾小球中的足细胞也可能受损。对tec的损伤也可能是任何类型的损伤、伤害或损害，例如如上所述，这可能是机械、化学或局部缺血损伤。tec的损伤是导致肾损伤(尤其是aki)的常见原因。tec的增殖为肾功能的恢复和修复提供了一种机制，而tec的增殖失败可导致疾病的发展和进展，例如进展至慢性肾病和肾衰竭。还可能发生足细胞前体的增殖以恢复肾小球功能，但并不像tec增殖那样好。机械损伤可能包括单侧输尿管梗阻(uuo)。
[1367]
在一些实施方式中，所述肾损伤是肾毒性，是指肾脏的毒性。肾毒性可能是某些物质对肾功能产生毒性作用的结果，因此可以被视为化学损伤或损害的结果。如同化学损伤或损害一样，肾毒性可能是给药治疗肾脏中未发生或在肾脏和一个或多个其他组织中均发生的疾病或病症的副作用。在一些实施方式中，肾毒性可以是施用给对象以预防或治疗癌症的化学治疗剂的副作用。因此，肾毒性可以是药物诱导的肾损伤或药物诱导的急性肾损伤的一种形式。在一些实施方式中，叶酸可引起肾损伤，即叶酸诱导的肾损伤。
[1368]
在一些实施方式中，所述抗原结合分子被提供以用于诊断、治疗和/或预防顺铂诱导的肾损伤。这可能包括顺铂引起的急性肾损伤或顺铂引起的肾毒性。顺铂(二氯二氨基铂；sp
‑4‑
2)
‑
二氨基二氯铂(ii))是一种化学治疗剂，广泛用于治疗各种癌症，包括头颈癌、乳腺癌、肺癌、睾丸癌、卵巢癌、脑癌和膀胱癌，并且被广泛认为会导致肾损伤和涉及肾小管损害和坏死的功能障碍(例如oh等，electrolyte blood出版社2014年12月；12(2)：55
‑
65；pa arunkumar等，asian pac j trop biomed 2012年8月2日(8)：640
‑
644)。其他基于铂的化学治疗剂也会引起肾损害。
[1369]
公认的是，患有肾损伤的对象还可能由于具有分离病因学的疾病症状或作为肾损伤的继发作用而出现肾纤维化。在一些实施方式中，被诊断、治疗或预防的肾损伤不是肾纤维化，例如肾纤维化。在一些实施方式中，所述对象没有纤维化。在一些实施方式中，tec损伤在没有纤维化的情况下发生。在一些实施方式中，纤维化独立地(例如继发性地)发生在aki上，例如由于tec再生不完全。在一些实施方式中，对象中的受损tec不是促纤维化的tec。在一些实施方式中，不发生纤维化。
[1370]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子被提供以用于治疗/预防与感染有关的疾病/病症的方法，特别是在感染直接或间接导致纤维化、癌症或炎症的情况下。与感染有关的疾病可以是由相关感染剂感染引起或加重的疾病，或者可以是以相关感染剂感染为
危险因素的疾病。
[1371]
感染可以是任何感染或传染性疾病，例如细菌、病毒、真菌或寄生虫感染。在特定的实施方式中，所述疾病/病症可以与病毒感染有关。在一些实施方式中，可能特别需要治疗慢性/持续感染，例如其中这些感染与炎症、癌症和/或纤维化有关。
[1372]
所述感染可能是慢性的、持续的、潜伏的或缓慢的，并且可能是细菌、病毒、真菌或寄生虫感染的结果。因此，可以为患有细菌、病毒或真菌感染的患者提供治疗。细菌感染的例子包括幽门螺杆菌(helicobacter pylori)感染和肺结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis)感染。病毒感染的例子包括ebv、hpv、hiv、乙肝或丙肝感染。
[1373]
所述治疗可涉及通过抑制il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的生物学活性来改善、治疗或预防与il
‑
11信号传导相关的，和/或本文所述的任何疾病/病症/病状。所述治疗可涉及通过抑制il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的生物学活性来逆转或消退疾病/病症。此类方法可包括施用本发明所述的抗体/片段/组合物以结合并抑制il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的生物学活性。在本文中，抑制il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的生物学活性可以称为“中和”。
[1374]
治疗方法可任选地包括将生物佐剂(例如白介素、细胞因子、卡介苗(bacillus comette
‑
guerin)、单磷酰脂质a等)与治疗癌症的常规疗法(例如施用治疗癌症的药物(例如化学疗法)、放射疗法，或手术)联合施用。医学治疗方法还可以涉及体内、离体和过继性免疫疗法，包括使用自体和/或异源细胞或永生化细胞系的免疫疗法。
[1375]
所述治疗可以旨在预防与过度活跃/升高的il
‑
11介导的信号传导相关的疾病/病症。因此，所述抗体、抗原结合片段和多肽可用于配制药物组合物或药物，并且可以预防性地治疗受试者以防止疾病状态的发展。这可以在疾病状态的症状发作之前进行，和/或可以施用于被认为具有更高的疾病或病症风险的对象。
[1376]
根据本公开的药剂的施用优选以“治疗有效的”或“预防有效的”的量进行，这足以显示出对对象的益处。实际施用的量以及施用的速率和时间过程将取决于所述疾病/病症的性质和严重程度以及药剂的性质。治疗的处方(例如关于剂量等的决定)由全科医生和其他医生负责，并且通常考虑待治疗的疾病/病症、个体对象的状况、递送的部位、给药方法和从业者已知的其他因素。上述技术和方案的实例可以参见雷明顿的制药科学(remington’s pharmaceutical sciences)，第20版，发表于2000年，lippincott、williams和wilkins。
[1377]
本文所述的抗原结合分子、多肽、car、核酸、表达载体、细胞和组合物优选与本领域技术人员众所周知的一种或多种其他药学上可接受的成分一起配制成药物或药物，包括但不限于药学上可接受的载体、佐剂、赋形剂、稀释剂、填充剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、稳定剂、增溶剂、表面活性剂(例如湿润剂)、掩蔽剂、着色剂、调味剂和甜味剂。如本文所用，术语“药学上可接受的”是指化合物、成分、材料、组合物、剂型等在合理的医学判断范围内，适合与所讨论对象(例如人)的组织接触，而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，且具有合理的获益/风险比。从与制剂的其他成分相容的意义上讲，每种载体、佐剂、赋形剂等也必须是“可接受的”。合适的载体、佐剂、赋形剂等可在标准药学教科书中找到，例如，《雷明顿药学》(remington’s pharmaceutical sciences)，第18版，麦克出版公司，easton，pa.，1990；和《药物赋形剂手册》，第二版，1994年。
[1378]
可以制备适合于待治疗的疾病/症状的制剂以进行给药。例如，可以配制用于局部、肠胃外、全身、静脉内、动脉内、肌内、鞘内、眼内、局部眼(例如结膜下、玻璃体内、球后、
前房内)、结膜内、皮下、口服或经皮途径的制剂给药方法，可能包括注射。本公开的试剂可以配制为流体或固体形式。可配制流体制剂用于通过注射或输注施用于人体或动物体的选定区域。可注射制剂可在无菌或等渗介质中包含所选试剂。
[1379]
所述制剂可以通过药学领域公知的任何方法制备。这样的方法包括使活性化合物与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常，通过使活性化合物与载体(例如，液体载体、细颗粒固体载体等)均匀且紧密地结合，然后如有必要使产品成型，来制备制剂。
[1380]
本发明还提供了制备药学上有用的组合物的方法，这种制备方法可包括选自以下的一个或多个步骤：分离如本文所述的抗体或抗原结合片段；和/或将分离的如本文所述的抗体或抗原结合片段与药学上可接受的载体、佐剂、赋形剂或稀释剂混合。例如，本发明的另一方面涉及配制或生产用于药物治疗方法的药物或药物组合物的方法，所述方法包括将如本文所述的抗体闳抗原结合片段与药学上可接受的载体、佐剂、赋形剂或稀释剂混合以配制药物组合物或药物。
[1381]
可以提供多剂量的所述抗原结合分子、多肽、car、核酸(或其多种)、表达载体(或其多种)、细胞或组合物。一次或多次或每次剂量可以伴随另一种治疗剂的同时或先后给药。
[1382]
多次剂量之间可以有预定的时间间隔，其可以被选择为1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30或31天，或1个月、2个月、3个月、4个月、5个月或6个月。举例来说，可以每7天、14天、21天或28天(正负3天、2天或1天)给予一次剂量。
[1383]
本文所述的抗原结合分子、多肽、car、核酸、表达载体、细胞和组合物可以单独施用或与其他治疗或预防干预联合施用。这样的其他治疗性或预防性干预可以在本发明所涵盖的治疗之前、之中和/或之后进行，并且其他治疗性或预防性干预的递送可以通过与本发明的治疗相同或不同的施用途径进行。
[1384]
在一些实施方式中，本文所述的抗原结合分子、多肽、car、核酸、表达载体、细胞和组合物的施用可以伴随有用于治疗或预防感染的试剂(例如抗生素、抗病毒、抗真菌、抗寄生虫剂)。在一些实施方式中，用本发明的抗体、抗原结合片段或组合物的治疗可以伴随有用于治疗或预防炎症的试剂(例如，非甾体抗炎药(nsaid))。在一些实施方式中，用本发明的抗体、抗原结合片段或组合物的治疗可以伴随放射疗法(即，用电离辐射，例如x射线或γ射线的治疗)和/或用于治疗或预防癌症的试剂(例如化学治疗剂)。在一些实施方式中，所述化学治疗剂是烷基化剂，例如顺铂。在一些实施方式中，本发明的抗体、抗原结合片段或组合物可以作为与免疫疗法联合治疗的一部分来施用。
[1385]
同时施用是指将药剂一起施用，例如作为含有药剂的药物组合物(即组合制剂)，或者彼此之后立即施用，并且任选地通过相同的途径施用，例如施用于同一条动脉、静脉或其他血管。在某些实施方式中，在同时施用时，可以通过不同的施用途径来施用两种或更多种药剂。在一些实施方式中，同时施用是指在同一时间或例如在1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、8小时、12小时、24小时、36小时或48小时之内施用。
[1386]
先后施用是指对一种或多种药物的施用是在施用了一种药剂后的在给定的时间间隔后进行的。尽管在一些实施方式中是这种情况，但不要求两种药剂通过相同的途径给药。所述时间间隔可以是任何时间间隔，包括小时、天、周、月或年。在一些实施方式中，先后
给药是指以至少10分钟、30分钟、1小时、6小时、8小时、12小时、24小时、36小时、48小时、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、1个月、6周、2个月、3个月、4个月、5个月或6个月之一的时间间隔分开的施用。
[1387]
检测方法
[1388]
本发明还提供了用于检测、定位或成像il
‑
11或包含il
‑
11的复合物，或表达/包含il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的细胞的方法中的本发明的制品。本文所述的抗原结合分子可以用于涉及所述抗原结合分子与il
‑
11或包含il
‑
11的复合物结合的方法中。这样的方法可以包括检测所述抗原结合分子与il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的结合复合物。
[1389]
il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的检测可用于诊断/预后在病理学上牵涉到il
‑
11介导的信号传导和/或表达/包含il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的细胞的疾病/病症的方法、识别具有发展这种疾病/状况的风险的对象，和/或在预测对象对治疗干预的反应的方法中。
[1390]
因此，还提供了一种方法，所述方法包括使含有或疑似含有il
‑
11或包含il
‑
11的复合物，或表达/含有il
‑
11或含有il
‑
11的复合物的细胞的样品与如本文所述的抗原结合分子接触，并检测抗原结合分子与il
‑
11/包含il
‑
11的复合物的复合物的形成。还提供了一种方法，所述方法包括使含有或疑似含有表达/含有il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的细胞的样品与如本文所述的抗原结合分子接触，并检测抗原结合分子与表达/含有il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的细胞的复合物的形成。
[1391]
合适的方法形式是本领域熟知的，包括免疫测定，例如夹心测定，elisa。所述方法可包括用可检测的部分(例如荧光标记、磷光标记、发光标记、免疫可检测标记、放射性标记、化学的、核酸的或酶标记)标记所述抗原结合分子，或靶标，或两者。il
‑
11的表达可以通过免疫组织化学(ihc)测定，例如通过活组织检查获得的组织样品。在一些实施方式中，所述标记可以选自：放射性核苷酸、发射正电子的放射性核素(例如用于正电子发射断层摄影(pet))、mri造影剂或荧光标记。
[1392]
检测技术是本领域技术人员公知的，并且可以选择与标记试剂相对应。由il
‑
11介导的过程的体外或体内分析可能涉及通过正电子发射断层扫描(pet)、磁共振成像(mri)或荧光成像，例如通过检测适当标记的物种。
[1393]
这种方法可以提供诊断需要检测和/或定量il
‑
11或含有il
‑
11的复合物的疾病或病症的方法的基础。这些方法可以在对象样品上体外进行，或者在对对象样品进行处理后进行。一旦收集样品，在体外诊断的方法中就不再需要对象的参与，因此所述方法可以是不在人体或动物体上实施的方法。在一些实施方式中，本发明的抗原结合分子、多肽、car、核酸、表达载体、细胞或组合物被提供以用于本文所述的任何诊断、检测或定量方法。
[1394]
此类方法可涉及检测或定量il
‑
11或包含il
‑
11的复合物，或表达il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的细胞，例如在患者样本中。在所述方法包括量化相关因素的情况下，所述方法可以进一步包括将确定的量与标准或参考值进行比较，作为诊断或预后评估的一部分。其他诊断/预后测试可以与本文描述的那些一起使用，以增强诊断或预后的准确性或确认通过使用本文描述的测试获得的结果。
[1395]
对样品中的il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的检测可用于诊断对象中的感染性疾病、自身免疫性疾病或癌症症状、诊断倾向患感染性疾病、自身免疫性疾病或癌性疾病的风险状况，或提供感染性疾病、自身免疫性疾病或癌症症状的预后(预测)。诊断或预后可能与现
有(先前诊断)的感染性、炎性或自身免疫性疾病/病症或癌症症状有关。
[1396]
当在从对象获得的样品中检测到il
‑
11或包含il
‑
11的复合物水平升高，或检测到表达/包含il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的细胞存在或数量/比例增加，可以诊断所述对象患有根据本公开的疾病/病症，或处于发展这种疾病/病症的风险中。在这样的方法中，细胞的表达或数量/比例的“增加”水平是指与合适的对照条件下检测到的水平/数量/比例(例如在可比较的样品中的水平/数量/比例，例如同种的样品，例如从同种体液、组织、器官等获得的，例如从健康对象中获得的)相比，其水平/数量/比例升高。
[1397]
当在从对象获得的样品中检测到il
‑
11或包含il
‑
11的复合物水平升高，或检测到表达/包含il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的细胞存在或数量/比例增加，所述对象可以被确定为与在可比较的样品(例如，同种的样品，例如从同种体液、组织、器官等获得的)中具有较低水平的il
‑
11或包含il
‑
11的复合物或降低的表达/包含il
‑
11或含有il
‑
11的复合物的细胞的数量/比例的对象相比，预后较差。
[1398]
因此，本发明提供了对本发明的抗原结合分子、多肽、car、核酸、表达载体、细胞或组合物进行治疗的对象进行选择/分层的方法。在一些实施方式中，基于il
‑
11或包含il
‑
11的复合物或表达il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的细胞的检测/定量(例如从一对象获得的样品中)，所述对象被选择用于本发明所述的治疗/预防，或被鉴定位能够从所述治疗/预防中获益的对象。存在于一对象样品中的il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的水平可以指示该对象可以对本发明所述的抗原结合分子或组合物的治疗有反应。样品中高水平的il
‑
11或包含il
‑
11的复合物的存在可用于选择对象进行本文所述的治疗。因此，本发明的抗原结合分子可以用于选择用il
‑
11靶向疗法治疗的对象。
[1399]
样品可以是从任何组织或体液中取得的。所述样品可包含或可源自：一定量的血液；来自个体血液的一定量血清，其可包括去除纤维蛋白凝块和血细胞后获得的血液的流体部分；组织样本或活组织检查样品；胸水；脑脊液(csf)；或从所述个体分离的细胞。在一些实施方式中，所述样品可以获自或衍生自受疾病/病症影响的一个或多个组织(例如，表现出疾病症状或参与疾病/病症的发病机理的组织)。
[1400]
本发明所述的诊断或预后方法可以在体外对获自对象的样品进行，或在对获自对象的样品进行处理之后进行。一旦收集样品，在体外诊断或预后的方法中就不再需要患者的参与，因此所述方法可以是不在人体或动物体上实施的方法。术语“体外”旨在包括培养细胞的实验，而术语“体内”旨在包括用完整多细胞生物进行的实验和/或处理。
[1401]
本发明的诊断和预后方法可以在整个疾病和/或治疗过程中的多个时间点从对象获得的样品上进行，并且可以用于监测疾病/症状随时间的发展，例如为了响应施用于对象的治疗。根据所述方法的表征结果可用于告知关于何时以及对对象施用哪种疗法的临床决策。
[1402]
对象
[1403]
根据本文描述的本发明的各方面的对象可以是任何动物或人。所述对象优选是哺乳动物，更优选是人。所述对象可以是非人哺乳动物，但更优选是人。所述对象可以是男性或女性。所述对象可以是患者。对象可能已经被诊断出患有需要治疗的疾病或症状(例如癌症)、可能疑似患有这种疾病/症状，或者可能处于发展/患有这种疾病/症状的危险中。
[1404]
所述对象/患者可能患有能够从il
‑
11介导的信号传导水平的降低或表达il
‑
11rα
或包含il
‑
11rα的复合物细胞的数量和/或活性降低(即，其抑制或拮抗)中获得治疗或预防益处的疾病/病症。所述对象/患者可患有本文所述的疾病/病症。所述对象/患者可能已经被诊断出患有本文所述的需要治疗的疾病/病症、可能疑似患有这种疾病/病症，或者可能处于发展这种疾病/病症的风险中。
[1405]
在本发明所述的实施方式中，所述对象优选是人类对象。在一些实施方式中，本文所述的用本发明的治疗或预防方法治疗的对象是患有癌症或处于患癌风险中的对象。在本发明所述的实施方式中，可以基于所述疾病/病症的某些标志物的表征，根据所述方法选择对象进行治疗。
[1406]
试剂盒
[1407]
在如本文所述的本发明的一些方面，提供了一种试剂盒。在一些实施方式中，所述试剂盒可具有至少一个容器，所述容器具有预定量的如本文所述的抗原结合分子、多肽、car、核酸(或其多种)、表达载体(或其多种)、细胞或组合物。
[1408]
在一些实施方式中，所述试剂盒可包含用于产生如本文所述的抗原结合分子、多肽、car、核酸(或其多种)、表达载体(或其多种)、细胞或组合物的材料。
[1409]
所述试剂盒可提供所述抗原结合分子、多肽、car、核酸(或其多种)、表达载体(或其多种)、细胞或组合物，以及为治疗特定疾病/病症而给予患者的说明书。
[1410]
在一些实施方式中，所述试剂盒可进一步包括具有预定量的另一种治疗剂(例如，抗感染剂或化学治疗剂)的至少一个容器。在此类实施方案中，所述试剂盒还可包含第二药物或药物组合物，使得两种药物或药物组合物可同时或分开施用，以使它们提供针对特定疾病或病症的组合治疗。还可以配制治疗剂以使其适合注射或输注到肿瘤或血液中。
[1411]
序列同一性
[1412]
如本文所用，“序列同一性”是指在比对序列并在必要时引入缺口以获得序列之间最大的序列同一性百分比后，对象序列中与参考序列中核苷酸/氨基酸残基相同的核苷酸/氨基酸残基的百分比。成对序列和多序列比对可以通过本领域技术人员已知的多种方式来实现，以达到确定两个或多个氨基酸或核酸序列之间的同一性百分比的目的，例如，使用可公开获得的计算机软件，例如clustalomega(j.，2005，bioinformatics 21，951
‑
960)、t
‑
coffee(notredame等，2000,j.mol.biol.(2000)302，205
‑
217)、kalign(lassmann和sonnhammer 2005，bmc bioinformatics，6(298))和mafft(katoh和standley 2013，molecular biology and evolution，30(4)772
–
780)软件。使用此类软件时，优选使用默认参数，例如使用间隙罚分和延伸罚分。
[1413]
序列
[1414]
[1415]
[1416]
[1417]
[1418]
[1419]
[1420]
[1421]
[1422]
[1423]
[1424]
[1425]
[1426]
[1427]
[1428][1429]
涉及本发明诸方面和实施方式的编号段落(段)：
[1430]
1.一种能够结合il
‑
1的任选分离的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：
[1431]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1432]
具有seq id no:36或37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1433]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1434]
具有seq id no:39或40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1435]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1436]
具有seq id no:41、42或43所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1437]
具有seq id no:44、45或46所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1438]
具有seq id no:80或81所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
[1439]
2.如段1所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：
[1440]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1441]
具有seq id no:36所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1442]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1443]
具有seq id no:39所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1444]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1445]
具有seq id no:41所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1446]
具有seq id no:44所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1447]
具有seq id no:80所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
[1448]
3.如段1所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：
[1449]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1450]
具有seq id no:37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1451]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1452]
具有seq id no:40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1453]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1454]
具有seq id no:42所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1455]
具有seq id no:45所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1456]
具有seq id no:81所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
[1457]
4.如段1所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：
[1458]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1459]
具有seq id no:37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1460]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1461]
具有seq id no:40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1462]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1463]
具有seq id no:43所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1464]
具有seq id no:46所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1465]
具有seq id no:80所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
[1466]
5.如段1或2所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：
[1467]
(a)
[1468]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1469]
具有seq id no:36所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1470]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1471]
具有seq id no:39所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1472]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1473]
具有seq id no:41所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1474]
具有seq id no:44所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1475]
具有seq id no:48所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
[1476]
(b)
[1477]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1478]
具有seq id no:36所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1479]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1480]
具有seq id no:39所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1481]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1482]
具有seq id no:41所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1483]
具有seq id no:44所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1484]
具有seq id no:49所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
[1485]
(c)
[1486]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1487]
具有seq id no:36所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1488]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1489]
具有seq id no:39所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1490]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1491]
具有seq id no:41所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1492]
具有seq id no:44所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1493]
具有seq id no:50所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
[1494]
(d)
[1495]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1496]
具有seq id no:36所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1497]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1498]
具有seq id no:39所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1499]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1500]
具有seq id no:41所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1501]
具有seq id no:44所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1502]
具有seq id no:51所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
[1503]
(e)
[1504]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1505]
具有seq id no:36所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1506]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1507]
具有seq id no:39所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1508]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1509]
具有seq id no:41所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1510]
具有seq id no:44所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1511]
具有seq id no:52所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
[1512]
(f)
[1513]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1514]
具有seq id no:36所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1515]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1516]
具有seq id no:39所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1517]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1518]
具有seq id no:41所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1519]
具有seq id no:44所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1520]
具有seq id no:53所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
[1521]
(g)
[1522]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1523]
具有seq id no:36所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1524]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1525]
具有seq id no:39所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1526]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1527]
具有seq id no:41所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1528]
具有seq id no:44所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1529]
具有seq id no:54所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；或
[1530]
(h)
[1531]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1532]
具有seq id no:36所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1533]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1534]
具有seq id no:39所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1535]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1536]
具有seq id no:41所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1537]
具有seq id no:44所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1538]
具有seq id no:55所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
[1539]
6.段1或段3所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：
[1540]
(a)
[1541]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1542]
具有seq id no:37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1543]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1544]
具有seq id no:40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1545]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1546]
具有seq id no:42所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1547]
具有seq id no:45所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1548]
具有seq id no:57所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
[1549]
(b)
[1550]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1551]
具有seq id no:37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1552]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1553]
具有seq id no:40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1554]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1555]
具有seq id no:42所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1556]
具有seq id no:45所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1557]
具有seq id no:58所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
[1558]
(c)
[1559]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1560]
具有seq id no:37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1561]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1562]
具有seq id no:40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1563]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1564]
具有seq id no:42所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1565]
具有seq id no:45所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1566]
具有seq id no:59所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
[1567]
(d)
[1568]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1569]
具有seq id no:37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1570]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1571]
具有seq id no:40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1572]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1573]
具有seq id no:42所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1574]
具有seq id no:45所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1575]
具有seq id no:60所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
[1576]
(e)
[1577]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1578]
具有seq id no:37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1579]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1580]
具有seq id no:40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1581]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1582]
具有seq id no:42所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1583]
具有seq id no:45所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1584]
具有seq id no:61所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
[1585]
(f)
[1586]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1587]
具有seq id no:37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1588]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1589]
具有seq id no:40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1590]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1591]
具有seq id no:42所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1592]
具有seq id no:45所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1593]
具有seq id no:62所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
[1594]
(g)
[1595]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1596]
具有seq id no:37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1597]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1598]
具有seq id no:40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1599]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1600]
具有seq id no:42所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1601]
具有seq id no:45所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1602]
具有seq id no:63所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；或
[1603]
(h)
[1604]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1605]
具有seq id no:37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1606]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1607]
具有seq id no:40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1608]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1609]
具有seq id no:42所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1610]
具有seq id no:45所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1611]
具有seq id no:64所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
[1612]
7.段1或段3所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：
[1613]
(a)
[1614]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1615]
具有seq id no:37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1616]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1617]
具有seq id no:40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1618]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1619]
具有seq id no:43所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1620]
具有seq id no:46所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1621]
具有seq id no:48所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
[1622]
(b)
[1623]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1624]
具有seq id no:37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1625]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1626]
具有seq id no:40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1627]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1628]
具有seq id no:43所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1629]
具有seq id no:46所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1630]
具有seq id no:49所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
[1631]
(c)
[1632]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1633]
具有seq id no:37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1634]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1635]
具有seq id no:40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1636]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1637]
具有seq id no:43所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1638]
具有seq id no:46所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1639]
具有seq id no:50所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
[1640]
(d)
[1641]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1642]
具有seq id no:37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1643]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1644]
具有seq id no:40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1645]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1646]
具有seq id no:43所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1647]
具有seq id no:46所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1648]
具有seq id no:51所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
[1649]
(e)
[1650]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1651]
具有seq id no:37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1652]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1653]
具有seq id no:40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1654]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1655]
具有seq id no:43所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1656]
具有seq id no:46所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1657]
具有seq id no:52所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
[1658]
(f)
[1659]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1660]
具有seq id no:37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1661]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1662]
具有seq id no:40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1663]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1664]
具有seq id no:43所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1665]
具有seq id no:46所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1666]
具有seq id no:53所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；
[1667]
(g)
[1668]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1669]
具有seq id no:37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1670]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1671]
具有seq id no:40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1672]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1673]
具有seq id no:43所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1674]
具有seq id no:46所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1675]
具有seq id no:54所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；或
[1676]
(h)
[1677]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1678]
具有seq id no:37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1679]
具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1680]
具有seq id no:40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1681]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1682]
具有seq id no:43所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1683]
具有seq id no:46所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1684]
具有seq id no:55所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
[1685]
8.如段1
‑
7中任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：
[1686]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:6、8或10所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1687]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:82、83或84所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性。
[1688]
9.如段8所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：
[1689]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:6所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1690]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:82所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性。
[1691]
10.如段8所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：
[1692]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:8所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1693]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:83所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性。
[1694]
11.如段8所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：
[1695]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:10所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1696]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:84所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性。
[1697]
12.如段8或段9所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：
[1698]
(a)
[1699]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:6所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1700]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:12所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；
[1701]
(b)
[1702]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:6所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1703]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:13所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；
[1704]
(c)
[1705]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:6所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1706]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:14所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；
[1707]
(d)
[1708]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:6所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1709]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:15所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；
[1710]
(e)
[1711]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:6所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1712]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:16所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；
[1713]
(f)
[1714]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:6所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1715]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:17所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；
[1716]
(g)
[1717]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:6所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1718]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:18所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；或
[1719]
(h)
[1720]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:6所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1721]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:19所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性。
[1722]
13.如段8或段9所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：
[1723]
(a)
[1724]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:8所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1725]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:20所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；
[1726]
(b)
[1727]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:8所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1728]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:21所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；
[1729]
(c)
[1730]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:8所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1731]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:22所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；
[1732]
(d)
[1733]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:8所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1734]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:23所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；
[1735]
(e)
[1736]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:8所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1737]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:24所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；
[1738]
(f)
[1739]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:8所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1740]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:25所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；
[1741]
(g)
[1742]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:8所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1743]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:26所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；或
[1744]
(h)
[1745]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:8所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1746]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:27所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性。
[1747]
14.如段8或段11所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：
[1748]
(a)
[1749]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:10所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1750]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:28所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；
[1751]
(b)
[1752]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:10所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1753]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:29所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；
[1754]
(c)
[1755]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:10所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1756]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:30所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；
[1757]
(d)
[1758]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:10所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1759]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:31所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；
[1760]
(e)
[1761]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:10所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1762]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:32所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；
[1763]
(f)
[1764]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:10所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1765]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:33所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；
[1766]
(g)
[1767]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:10所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1768]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:34所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；或
[1769]
(h)
[1770]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:10所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1771]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:35所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性。
[1772]
15.一种能够结合il
‑
11的任选分离的抗原结合分子。其中所述抗原结合分子包含：
[1773]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1774]
具有seq id no:95所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1775]
具有seq id no:96所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1776]
具有seq id no:97所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1777]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1778]
具有seq id no:101所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1779]
具有seq id no:102所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1780]
具有seq id no:103所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
[1781]
16.如段15所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：
[1782]
(a)
[1783]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1784]
具有seq id no:95所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1785]
具有seq id no:96所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1786]
具有seq id no:97所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1787]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1788]
具有seq id no:98所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1789]
具有seq id no:99所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1790]
具有seq id no:100所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3；或
[1791]
(b)
[1792]
(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：
[1793]
具有seq id no:95所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1
[1794]
具有seq id no:96所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2
[1795]
具有seq id no:97所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和
[1796]
(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：
[1797]
具有seq id no:101所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1
[1798]
具有seq id no:102所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2
[1799]
具有seq id no:103所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3。
[1800]
17.如段15或16所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：
[1801]
vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:91、92、116、117、118、119或120所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和
[1802]
vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:93、94、121、122、123、124、125、126、127或128所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性。
[1803]
18.如段1
‑
17中任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子能够抑制il
‑
11介导的信号传导。
[1804]
19.一种任选分离的抗原结合分子，其包含(i)段1
‑
18中任一项所述的抗原结合分子，和(ii)能够结合除il
‑
11以外的抗原的抗原结合分子。
[1805]
20.如段1
‑
19中任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子能够抑制il
‑
11或包含il
‑
11的复合物与il
‑
11受体之间的相互作用。
[1806]
21.一种嵌合抗原受体(car)，其包含段1
‑
20中任一项所述的抗原结合分子。
[1807]
22.任选分离的一种核酸，或多种核酸，其编码段1
‑
20中任一项所述的抗原结合分子或段21所述的car。
[1808]
23.一种表达载体，或多种表达载体，其包含段22所述的一种核酸或多种核酸。
[1809]
24.一种细胞，其包含段1
‑
20中任一项所述的抗原结合分子、段21所述的car、段22所述的一种核酸或多种核酸或段23所述的一种表达载体或多种表达载体。
[1810]
25.一种方法，包括在适合从一种或多种核酸或一种或多种表达载体表达抗原结合分子或car的条件下培养细胞，所述细胞包含段22所述的一种核酸或多种核酸或段23所述的一种表达载体或多种表达载体。
[1811]
26.一种组合物，其包含段1
‑
20中任一项所述的抗原结合分子、段21所述的car、段22所述的一种核酸或多种核酸、段23所述的一种表达载体或多种表达载体或段24所述的细胞。
[1812]
27.段1
‑
20中任一项所述的抗原结合分子、段21所述的car、段22所述的一种核酸或多种核酸、段23所述的一种表达载体或多种表达载体、段24所述的细胞或段26所述的组合物，用于医学治疗或预防方法中。
[1813]
28.段1
‑
20中任一项所述的抗原结合分子、段21所述的car、段22所述的一种核酸或多种核酸、段23所述的一种表达载体或多种表达载体、段24所述的细胞或段26所述的组合物，用于纤维化、特征在于纤维化的疾病、癌症、炎症或特征在于炎症的疾病的治疗或预防方法中。
[1814]
29.段1
‑
20中任一项所述的抗原结合分子、段21所述的car、段22所述的一种核酸或多种核酸、段23所述的一种表达载体或多种表达载体、段24所述的细胞或段26所述的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于纤维化、特征在于纤维化的疾病、癌症、炎症或特征在于炎症的疾病的治疗或预防方法中。
[1815]
30.一种治疗或预防纤维化、特征在于纤维化的疾病、癌症、炎症或特征在于炎症的疾病的方法，包含将治疗或预防有效量的段1
‑
20中任一项所述的抗原结合分子、段21所述的car、段22所述的一种核酸或多种核酸、段23所述的一种表达载体或多种表达载体、段24所述的细胞或段26所述的组合物给予受试者。
[1816]
31.一种抑制il
‑
11介导的信号传导的方法，包括将表达il
‑
11的细胞与段1
‑
20中任一项所述的抗原结合分子接触。
[1817]
32.一种任选分离的体外复合物，其包含与il
‑
11或含il
‑
11的复合物结合的段1
‑
20中任一项所述的抗原结合分子。
[1818]
33.一种方法，包括将含有或怀疑含有il
‑
11或含il
‑
11的复合物的样品与段1
‑
20中任一项所述的抗原结合分子接触，并检测所述抗原结合分子与il
‑
11或含il
‑
11的复合物的复合物形成。
[1819]
34.一种选择受试者或对受试者分层次以供il
‑
11靶向药物治疗的方法，所述方法包括将该受试者的样品在体外与段1
‑
20中任一项所述的抗原结合分子接触并检测所述抗原结合分子与il
‑
11或含il
‑
11的复合物的复合物形成。
[1820]
35.段1
‑
20中任一项所述的抗原结合分子作为体外或体内诊断或预后试剂的用
途。
[1821]
36.一种诸部件构成的试剂盒，其包含预定量的：段1
‑
20中任一项所述的抗原结合分子、段21所述的car、段22所述的一种核酸或多种核酸、段23所述的一种表达载体或多种表达载体、段24所述的细胞或段26所述的组合物。
[1822]
***
[1823]
本发明包括所述诸方面和优选特征的组合，除了这样的组合明显是不允许的或者明确是要避免的。
[1824]
本文所用的章节标题仅是为了组织的目的，而不应理解为限制所述的主题。
[1825]
现在将借助实施例，参考附图说明本发明的诸方面和实施方式。其它方面和实施方式对于本领域技术人员是显而易见的。本文述及的所有文件通过引用纳入本文。
[1826]
除非上下文另有要求，否则在包括随附的权利要求在内的本说明书通篇中的词语“包含”及其变体，例如“包含着”和“包含有”应理解为暗示包括所述的整数或步骤或整数或步骤的组，但不排除任何其它的整数或步骤或整数或步骤的组。
[1827]
必须注意的是，除非上下文另有明确表述，否则本说明书和随附的权利要求中所用的单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数形式。本文的范围可以表示为从“大致的”一特定值，和/或到“大致的”另一特定值。在表示此类范围时，另一实施方式包括从所述一特定值和/或到所述其它特定值。类似地，当借助先行词“约”将数值表示为近似值时，应该理解该特定值构成另一实施方式。
[1828]
在本文中公开了核酸序列之处，也明确考虑其反向互补序列。
[1829]
本文所述的方法可以优选在体外进行。术语“体外”应包括利用培养中的细胞实施的过程，而术语“体内”应包括利用完整的多细胞机体进行的过程。
[1830]
附图简述
[1831]
现在将参考附图讨论说明本发明的原理的实施方式和实验。
[1832]
图1所示的表格总结了用于鉴定能够同时结合人il
‑
11和小鼠il
‑
11的人抗
‑
人il
‑
11抗体的淘选方案。
[1833]
图2所示的散点图显示了通过elisa分析测定的86种人抗il
‑
11候选抗体与人il
‑
11和小鼠il
‑
11的结合信号强度。
[1834]
图3所示的表格总结了50种人抗人il
‑
11抗体克隆。
[1835]
图4a和4b所示的条形图显示了在有人抗il
‑
11抗体存在下，用tgfβ1刺激后，与对照(未刺激的)成纤维细胞相比，通过αsma阳性细胞的百分比变化倍数确定的人抗il
‑
11抗体对人心房成纤维细胞中il
‑
11所介导信号的体外抑制作用。(4a)是一条形图，显示了与未刺激细胞(＝1)相比，αsma阳性细胞的比例变化倍数。(4b)是一条形图，显示了αsma阳性细胞(活化的成纤维细胞)的百分比。
[1836]
图5a和5b所示的条形图显示了在有人抗il
‑
11抗体存在下，用tgfβ1刺激后，与对照(未刺激的)成纤维细胞相比，通过αsma阳性细胞百分比的变化倍数确定的人抗il
‑
11抗体对(5a)小鼠心房成纤维细胞和(5b)小鼠皮肤成纤维细胞中il
‑
11所介导信号传导的体外抑制作用。
[1837]
图6所示的条形图显示了在有人抗il
‑
11抗体存在下，用高il
‑
11刺激后，与对照(未刺激的)成纤维细胞相比，通过αsma阳性细胞百分比的变化倍数确定的人抗il
‑
11抗体
对人心房成纤维细胞中高il
‑
11所介导的il
‑
11反式信号传导的体外抑制作用。
[1838]
图7所示的表格总结了56种人抗il
‑
11抗体的图4至6的倍数变化数据。编号为1到56的候选抗体对应于图3中所示的克隆名称。“行业标准品”是单克隆小鼠抗il
‑
11igg2a；克隆#22626；货号mab218；美国明尼苏达州，r&d系统公司。
[1839]
图8a和8b所示的图显示了成纤维细胞响应高il
‑
11的活化。用指定量(以ng/ml为单位)的高il
‑
11或重组il
‑
11刺激细胞，并通过分析α
‑
sma阳性细胞百分比来测量成纤维细胞的活化。(8a)和(8b)呈现了两个不同实验的结果。
[1840]
图9所示的图显示了高il
‑
11对初级成纤维细胞中il
‑
11分泌的诱导。用高il
‑
11刺激细胞，并在指定的时间点通过elisa测定细胞培养上清液中的il
‑
11rna和天然il
‑
11蛋白水平。
[1841]
图10a至10f所示的图显示了通过elisa分析测定的人抗il
‑
11抗体与人il
‑
11的结合情况。(10a)克隆yu45
‑
a3、yu45
‑
a10、yu45
‑
d11、yu45
‑
e11、yu45
‑
d12和yu33
‑
a2(igg)的elisa结果。(10b)克隆yu45
‑
g1、yu45
‑
b2、yu45
‑
a5、yu45
‑
e3、yu45
‑
f8和yu33
‑
h3(igg)的elisa结果。(10c)克隆yu45
‑
g8、yu45
‑
f9、yu45
‑
h10、yu45
‑
f2、yu45
‑
h3和yu33
‑
e3(igg)的elisa结果。(10d)克隆yu45
‑
a8、yu45
‑
b5、yu45
‑
d9、yu45
‑
g7、yu45
‑
b6和yu45
‑
f9的elisa结果。(10e)克隆yu45
‑
f5、yu46
‑
b5、yu45
‑
c1、yu46
‑
a8、yu46
‑
b6和yu45
‑
f9的elisa结果。(10f)克隆yu46
‑
e3、yu46
‑
g8、yu46
‑
d3、yu45
‑
b6、yu45
‑
c1和yu45
‑
f9的elisa结果。
[1842]
图11所示的表格总结了通过elisa分析确定的人抗il
‑
11抗体结合il
‑
11的ec
50
值。
[1843]
图12是抗体轻链改组过程的示意图。
[1844]
图13是总结了16种小鼠抗人il
‑
11抗体克隆的表格。
[1845]
图14所示的条形图显示了在有小鼠抗il
‑
11抗体存在下，用tgfβ1刺激后，与对照(未刺激的)成纤维细胞相比，由αsma阳性细胞百分比的倍数变化确定的小鼠抗il
‑
11抗体对人心房成纤维细胞中il
‑
11所介导信号传导的体外抑制作用。
[1846]
图15所示的条形图显示了在有小鼠抗il
‑
11抗体存在下，用tgfβ1刺激后，与对照(未刺激的)成纤维细胞相比，由αsma阳性细胞百分比的倍数变化确定的小鼠抗il
‑
11抗体对小鼠心房成纤维细胞中il
‑
11所介导信号传导的体外抑制作用。
[1847]
图16所示的条形图显示了在有小鼠抗il
‑
11抗体存在下，用高il
‑
11刺激后，与对照(未刺激的)成纤维细胞相比，通过细胞培养物上清液中mmp2含量的变化倍数确定的小鼠抗il
‑
11抗体对人心房成纤维细胞中高il
‑
11所介导的il
‑
11反式信号传导的体外抑制作用。
[1848]
图17所示的表格总结了16种小鼠抗il
‑
11抗体的图14至16的倍数变化数据。编号为1到16的候选抗体对应于图3中所示的克隆名称。“行业标准品”是单克隆小鼠抗il
‑
11igg2a；克隆#22626；货号mab218；美国明尼苏达州，r&d系统公司。
[1849]
图18a
‑
18h.(a
‑
b)显示了通过ique分析测定的小鼠
‑
抗
‑
il
‑
11抗体与人il
‑
11结合的表格和图。(18a)总结了实验的表格。(18b)显示了相对于对照抗
‑
flag抗体(100％)的结合强度；数字对应于图17中显示的克隆。(c
‑
e)中和tgfβ1刺激的人(18c)和小鼠(18d)成纤维细胞中，或高il
‑
11(il
‑
11:il11ra)刺激的人成纤维细胞(18e)中il
‑
11信号传导的抗体。(18f)3c3在重组il
‑
11刺激的人成纤维细胞中对纤维化反应的中和作用。(18g)3c6在高il
‑
11(il
‑
11:il11ra)刺激的人成纤维细胞中对纤维化反应的中和作用。(18h)3c6在tgfb1(左
图)或il
‑
11(右图)刺激的人hsc中对纤维化反应的中和作用。
[1850]
图19所示的表格总结了用于鉴定在轻链改组后能够结合人il
‑
11和小鼠il
‑
11的人抗
‑
人il
‑
11抗体的淘选策略。
[1851]
图20所示的散点图显示了通过elisa分析测定的轻链改组的人抗
‑
il
‑
11抗体与人il
‑
11和小鼠il
‑
11的结合信号。鉴定了与人il
‑
11和小鼠il
‑
11表现出交叉反应结合的66种抗体(黑色圆圈)。灰色圆圈显示了仅与小鼠il
‑
11表现出结合的抗体。
[1852]
图21a和21b所示的条形图(21a)和表格(21b)显示了通过elisa分析测定的独特轻链改组的人抗
‑
il
‑
11抗体与人il
‑
11和小鼠il
‑
11的结合信号。
[1853]
图22所示的条形图显示了通过elisa测定的所示轻链改组的抗il
‑
11抗体与人il
‑
11结合的以ng/ml计的ec50值。
[1854]
图23a
‑
23e所示的条形图显示了抗
‑
il
‑
11抗体对人心房成纤维细胞响应tgfβ1分泌mmp2的影响。23a和23b显示了两个独立实验的结果。在有tgfβ1(5ng/ml)存在下，有所示轻链改组的抗il
‑
11抗体存在下，或有人igg1同种型对照存在下，将细胞培养24小时。通过在没有tgfβ1存在下，有人igg1同种型对照存在下作培养来测量经培养细胞的基础mmp2分泌。水平线显示在有人igg1同种型对照抗体存在下，没有tgfβ1(neg)存在下，培养24小时的心房人成纤维细胞的基础mmp2分泌；在有5ng/ml tgfβ和人igg1同种型对照抗体(pos)的存在下培养24小时的心房人成纤维细胞的mmp2分泌。23c显示了通过监测mmp2水平评估的纤维化反应的体外中和作用。将原代人成纤维细胞与tgfb1(5ng/ml)和不同浓度的igg1形式的候选抗体孵育。评估成纤维细胞分泌到上清液中的mmp2以估算抑制百分比。23d显示了克隆yu100
‑
g08和yu100
‑
h01对纤维化反应的体外中和作用。23e显示了克隆yu100
‑
g08和yu100
‑
h01对方式il
‑
11信号传导的中和作用。
[1855]
图24所示的表格总结了与所示轻链改组的抗il
‑
11抗体克隆的功能表征有关的图22、23a和23b的结果。n.d.＝未测定。
[1856]
图25a和25b所示的图像和图形显示了在肾纤维化小鼠模型中，经不同治疗的小鼠的肾脏切片的组织学分析结果。通过腹膜内(ip)注射运载体(0.3m nahco3)中的叶酸(fa，180mg/kg)来诱导小鼠肾纤维化；对照小鼠单独给予运载体。从叶酸损伤后的第1天开始以及在实验期间，对小鼠给予同种型对照igg2(20mg/kg，每周3次，腹膜内)，抗il
‑
11抗体(20mg/kg，每周3次，腹膜内)。在叶酸诱导肾脏损害后28天将动物处死，并使用masson三色染色剂进行纤维化的组织学分析。(25a)masson三色染色肾脏切片图像。与显得较亮的健康区域相比，含有胶原蛋白的纤维化区域显得较暗。(25b)显示胶原蛋白区域的半定量分析的图表示为总肾脏区域的百分比(％)(图)。***,p<0.001与fa igg相比,anova(方差分析)。
[1857]
图26所示的图显示了肾纤维化的小鼠模型中，经不同治疗的小鼠的尿白蛋白/肌酐比值。通过腹膜内(ip)注射运载体(0.3m nahco3)中的叶酸(fa，180mg/kg)来诱导小鼠肾纤维化；对照小鼠单独给予运载体。从叶酸损伤后的第1天开始以及在实验期间，对fa处理的小鼠给予同种型对照igg2(20mg/kg，每周3次，腹膜内)或抗il
‑
11抗体(20mg/kg，每周3次，腹膜内)。将小鼠置于代谢笼中，并根据制造商的说明使用商业测定(abcam)测量尿肌酐和白蛋白。***,p<0.001与fa igg相比,anova。
[1858]
图27a至27c所示的图显示了肾纤维化的小鼠模型中，经不同治疗的小鼠的总胶原蛋白。(27a)通过腹膜内(ip)注射运载体(0.3m nahco3)中的叶酸(fa，180mg/kg)来诱导小
鼠肾纤维化；对照小鼠单独给予运载体。从实验的第1天开始，对治疗组中的小鼠给予同种型对照igg2(20mg/kg，每周3次)或以下不同剂量的中和性抗il
‑
11抗体，均为腹膜内：20mg/kg x 3/周；10mg/kg x 3/周；10mg/kg x 2/周；5mg/kg x 3/周；5mg/kg x 2/周；1mg/kg x 2/周。注射后28天处死动物，并根据制造商的方案利用quickzyme总胶原蛋白分析试剂盒(quickzyme biosciences)，通过羟脯氨酸测定分析肾脏的纤维化(微克/克(μg/g))。**,p<0.01；***,p<0.001，与fa igg相比,anova。抗il
‑
11抗体(27b)bsn
‑
3c6和(27c)yu100
‑
g08_02a对叶酸诱导的肾纤维化中肾胶原蛋白含量的剂量依赖性作用。
[1859]
图28a和28b所示的图像和图形显示了在急性肾损伤的小鼠模型中，经不同治疗的小鼠肾脏切片的组织学分析结果。(28a)通过假手术或一只输尿管的输尿管阻塞来处理小鼠。小鼠接受igg、抗il
‑
11抗体(手术第
‑
1、1、3、5天，20mg/kg)，在手术后第7天收获受伤的肾脏(uuo igg，il
‑
11)或对侧(con，对照)未受伤的肾脏(con igg，il
‑
11)。(28b)通过对实验条件不知情的肾小管萎缩或肾小管扩张病例的组织学分析来确定肾小管损伤的半定量评估(肾小管损伤评分：0，无；1，最小；2，轻度；3，中度；4，严重)。*,p<0.05相比于uuo igg,anova。
[1860]
图29所示的图像显示了人肝脏样品的il
‑
11的elisa western印迹结果。从接受肝脏手术的患者获得的肝脏样品用于蛋白质印迹分析。gapdh印迹用作上样对照。正常人肝脏(nhl)的样品中il
‑
11蛋白水平较低，而患有纤维化肝病，包括酒精性肝病(ald)、原发性硬化性胆管炎(psc)、原发性胆汁性肝硬化(pbc)或非酒精性脂肪性肝炎(nash)的样品的il
‑
11水平较高。
[1861]
图30a至30c显示了il
‑
11和肝纤维化。(a)显示了经不同处理的人pcls分泌il
‑
11的elisa分析结果的条形图。(b)在有2ug/ml igg或抗il
‑
11抗体yu100
‑
g08_02a的存在下，il
‑
11刺激(24h)后，人肝星状细胞转分化为成肌纤维细胞。(c)yu100
‑
g08_02a阻断内源性和外源性il
‑
11刺激的hsc中的纤维化反应。
[1862]
图31a和31b所示的图像和图形显示了在非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型中，接受不同治疗的小鼠肝脏组织的分析结果。糖尿病小鼠(db/db；瘦素受体缺陷型)在正常饲料(左，圆形符号)或nash诱导(蛋氨酸/胆碱缺陷型(mcd))饲料下维持8周。在8周nash饲料的最后3周中，在动物的子集中给予中和性抗il
‑
11抗体(20mg/kg，3x/周，腹膜内)。拍摄肝脏样品的照片(31a)并评估每毫克肝组织的胶原蛋白含量(31b)；每个符号代表一只动物。p值显示在图表上，anova方差分析。
[1863]
图32a至32d所示的条形图和图像显示了在视网膜纤维化的小鼠模型中，经不同治疗的小鼠眼镜纤维化的分析结果。小鼠(每组10只)受到激光诱导的视网膜损伤(每个视网膜4次灼伤)，并在第1、7、14和21天眼内给予0.5μg抗il
‑
11抗体或igg对照抗体。在第28天收集眼镜作组织学分析。通过masson三色染色测量灼伤部位的纤维化面积。(32a)条形图显示了对照(igg)或抗
‑
il11(il11)治疗的小鼠中纤维化区域的定量结果。(32b)代表性图像显示了对照抗体治疗的眼睛(igg，上图)或抗
‑
il11治疗的眼睛(il11，下图)中纤维化区域的染色情况。(32c)用eylea igg对照或eylea bsn
‑
3c6联合疗法治疗小鼠。条形图显示了对照、低抗
‑
il
‑
11或高抗
‑
il
‑
11治疗中纤维化区域的定量结果。(32d)条形图显示了在抗il
‑
11治疗(低浓度和高浓度)的玻璃体内注射(ivt)前后，脉络膜的新血管生成中渗漏倍数变化的区域。
[1864]
图33a至33c所示的示意图、图像和条形图与皮肤纤维化的小鼠模型中接受不同治疗的小鼠的皮肤纤维化分析有关。(33a)不同治疗组的实验程序的示意图。第1组和第2组用博来霉素(blm)和抗
‑
il
‑
11抗体(第1组)或igg对照抗体(第2组)治疗。第3组仅注射运载体(pbs)，并且不发生纤维化。(33b)所示图像显示了在距注射部位等距处的皮肤切片的masson三色染色。皮肤的厚度用黑条表示。(33c)所示条形图显示了对真皮厚度的分析结果(不知治疗组)。在每个样品的40个视野中，从上皮层的底部到真皮白色脂肪组织层的顶部测得平均真皮厚度。每个点表示一只动物。使用不成对的双尾t检验计算p值。
[1865]
图34所示的图像显示了在心脏纤维化的小鼠模型中，接受不同治疗的小鼠中心脏纤维化的组织学分析结果。对小鼠(c57b16，雄性，8
‑
12周龄)施以诱导纤维化的横向主动脉缩窄(tac)或假手术。tac处理的动物接受对照抗体(20mg/kg，3x/周，腹膜内)或中和性抗
‑
il
‑
11抗体(20mg/kg，3x/周，腹膜内)。两周后，收获心脏，并用masson三色染色剂评估纤维化程度。
[1866]
图35a至35j所示的传感图和表格显示了通过单循环动力学分析的不同抗体克隆与il
‑
11的结合亲和力的结果。35a至35i显示yu100
‑
g08(35a)、02a(35b)、02g(35c)、02i(35d)、02l(35e)、02q(35f)、02s(35g)、02t(35h)和02v(35i)的结合情况。35j总结了所测定的不同克隆的结合情况的动力学特性。
[1867]
图36a至36j所示的传感图和表格显示了通过单循环动力学分析的不同抗体克隆与il
‑
11的结合亲和力的结果。36a至36i显示yu100
‑
h01(36a)、01a(36b)、01g(36c)、01i(36d)、01l(36e)、01q(36f)、01s(36g)、01t(36h)和01v(36i)的结合情况。36j总结了所测定的不同克隆的结合情况的动力学特性。
[1868]
图37a至37i所示的图显示了不同抗体克隆对il
‑
11介导信号传导的抑制作用，这是通过对tgfβ1刺激后人心房成纤维细胞产生mmp2的抑制作用进行体外分析而确定的。37a至37i显示克隆yu100
‑
h01(37a)、01a(37b)、01g(37c)、01i(37d)、01l(37e)、01q(37f)、01s(37g)、01t(37h)和01v(37i)所得的结果。
[1869]
图38a至38m.抑制il
‑
11信号传导的分析。(a
‑
i)所示的图显示了不同抗体克隆对il
‑
11介导信号传导的抑制作用，这是通过对tgfβ1刺激后人心房成纤维细胞产生mmp2的抑制作用进行体外分析而确定的。38a至38i显示克隆yu100
‑
g08(38a)、02a(38b)、02g(38c)、02i(38d)、02l(38e)、02q(38f)、02s(38g)、02t(38h)和02v(38i)所得的结果。(j
‑
m)利用猕猴真皮成纤维细胞，测试il
‑
11抗体yu100
‑
g08_02a(人)和3c6(小鼠)的种间反应性：(j)acta阳性细胞％，(k)分泌胶原蛋白，(l)骨膜素，(m)胶原蛋白浓度。
[1870]
图39a至39h所示的图显示了小鼠nash模型中，抗
‑
il
‑
11抗体对(39a)肝甘油三酸酯含量，(39b)肝羟脯氨酸含量，(39c，39d)促炎因子表达，(39e)血清alt水平和(39f)肝脏中磷酸化erk水平的作用。将所有测量结果与脂肪变性对照和igg对照进行比较。抗
‑
il
‑
11抗体(39g)bsn
‑
3c6和(39h)yu100
‑
g08_02a对nash模型中血清alt水平和肝羟脯氨酸含量的剂量依赖性作用。
[1871]
图40a至40d.抗
‑
il
‑
11抗体在晚期nash小鼠模型中的治疗作用。(a
‑
c)western印迹和图显示了高脂甲硫氨酸/胆碱缺乏(hfmcd)饲料或正常饲料(nc)饲料后，小鼠nash模型中抗
‑
il
‑
11抗体对erk激活(40a)，肝脏羟脯氨酸含量(40b)和血清alt水平(40c)的作用。(40d)通过单次皮下注射链脲佐菌素刺激另一种nash模型，将小鼠以正常饲料饲料喂养4
周，然后以hfmcd饲料喂养7周连同(给予)抗
‑
il
‑
11抗体或igg对照。该图显示了7周后纤维化和炎症基因的rna表达。
[1872]
图41a至41d所示的代表性荧光图像和图形显示了在受到不同nash促进因子刺激时，抗
‑
il
‑
11抗体对hsc转化为成纤维细胞的作用。代表性的荧光图像显示(41a)acta2
ve
细胞的数量和(41b)产生胶原蛋白的细胞。比例尺＝200μm。(41c)处理后acta2
ve
细胞的百分比。(41d)处理后细胞中胶原蛋白的产量。
[1873]
图42所示图显示了tgfβ1
‑
和ccl2诱导的抗
‑
il
‑
11抗体或igg对照预处理的hsc的基质胶侵袭。
[1874]
图43所示图显示了在有igg或抗
‑
il
‑
11抗体存在下，无刺激、用il
‑
11刺激或用tgfβ1刺激下，抗
‑
il
‑
11抗体对hsc ccl2分泌的作用。
[1875]
图44a至44d.抗
‑
il
‑
11治疗对肝纤维化的逆转作用。(44a)指示总肝胶原蛋白含量的肝羟脯氨酸含量，(44b)hsc中的acta2表达。(44c)tgfβ1或pdgf刺激的acta2
ve hsc的百分比。(44d)tgfβ1或pdgf刺激hsc后的mmp2浓度。
[1876]
图45a至45h.抗
‑
il
‑
11治疗在早期nash中的作用。(45a)代表性的全肝图像。(45b)蛋白质印迹，显示了用抗
‑
il
‑
11抗体或igg对照治疗后，hfmcd饲料的小鼠的erk活化情况。(45c)用抗
‑
il
‑
11抗体或igg对照治疗后，hfmcd饲料的小鼠中的甘油三酸酯含量。(45d)接受抗
‑
il
‑
11治疗或igg对照的小鼠肝脏的代表性masson三色染色图像。(45e)用抗
‑
il
‑
11抗体或igg对照治疗后。hfmcd饲料的小鼠的血清alt水平。(45f)用抗
‑
il
‑
11抗体或igg对照治疗后，正常饲料饲料的小鼠和hfmcd饲料的小鼠的促纤维化和促炎基因z评分的差异表达热图。(45g)促炎基因的rna表达。(45h)促纤维化基因的rna表达。
[1877]
图46a至46d.il
‑
11对肺成纤维细胞激活、迁移和侵袭的作用。(46a)来自ipf患者和健康供体(对照)的肺组织连续切片中il
‑
11和acta2的代表性免疫染色图像。比例尺，50μm。(46b)il
‑
11处理的成纤维细胞上清液中的总分泌胶原蛋白。il
‑
11诱导的野生型小鼠肺成纤维细胞的(46c)跨孔(transwell)迁移和(46d)基质胶侵袭指数。比例尺为150μm。
[1878]
图47a至47b所示图像显示了(47a)人和(47b)小鼠il
‑
11与抗
‑
il
‑
11抗体bsn
‑
3c6的结合动力学。显示了平衡结合常数。
[1879]
图48a至48e.抗
‑
il
‑
11治疗对肺纤维化的作用。(48a)所示热图显示了在有抗
‑
il
‑
11抗体或igg对照存在下，经多种促纤维化刺激处理的小鼠肺成纤维细胞中acta2 ve细胞和col1α1免疫染色的免疫荧光定量测定(强度/面积)。(48b)用抗
‑
il
‑
11抗体或igg对照处理的tgfβ1分化的人肺成纤维细胞的acta2 ve细胞，col1α1免疫染色(强度/面积)和胶原蛋白分泌的定量测定。(48c)在有抗
‑
il
‑
11抗体存在下，对tgfβ1刺激的原代人肺成纤维细胞的mmp2的抑制作用。(48d)在有抗
‑
il
‑
11抗体存在下，对tgfβ1刺激的原代小鼠肺成纤维细胞的mmp2的抑制作用。(48e)抗
‑
il
‑
11抗体对小鼠肺成纤维细胞的迁移和侵袭的作用。
[1880]
图49a至49e.il
‑
11治疗在博莱霉素(blm)诱导的早期肺纤维化小鼠模型中的作用。用抗
‑
il
‑
11抗体或igg对照治疗小鼠。(49a)肺切片的代表性masson三色染色图像。比例尺，100μm。(49b)所示图像显示了指数化的肺/体重和肺羟脯氨酸含量。(49c)密度测定法分析肺匀浆物中col3a1、纤连蛋白和il
‑
11蛋白水平的蛋白质印迹。(49d)肺裂解物中col1a1、col1a2、col3a1、fn1、mmp2和timp1的mrna表达。(49e)肺匀浆物中erk和stat3的磷酸化状态及总水平的蛋白质印迹。
[1881]
图50a至50d.il
‑
11治疗在博莱霉素(blm)诱导的已有肺纤维化小鼠模型中的作用。(50a)肺切片的代表性masson三色染色图像。比例尺，100μm。(50b)所示的图像显示了指数化的肺/体重和肺羟脯氨酸含量。(50c)肺匀浆物中col3a1、纤连蛋白和il
‑
11蛋白水平的蛋白质印迹。(50d)肺匀浆物中erk和stat3的磷酸化状态及总水平的蛋白质印迹。
[1882]
图51a至51c.il
‑
11抗体治疗对癌症的作用。(51a)3c6防止hcc小鼠侧腹模型中的肿瘤生长。(51b)在成纤维细胞中表达il
‑
11的骨髓纤维化小鼠模型中，3c6防止il
‑
11诱导的脾肿大。(51c)在肺癌(a549)小鼠模型中，3c6与顺铂化疗联用对肿瘤体积的抑制作用具有加和作用。方差分析连同tukey事后校正用于多次测试。顺铂 igg与顺铂 3c6：**，p<0.01；***，p＜0.001。组规模：不接受治疗，n＝5；顺铂 igg，n＝10；顺铂 3c6，n＝10。
[1883]
图52.il
‑
11在胰腺纤维化中的作用。小鼠每天注射100μg/kg的重组小鼠il
‑
11或生理盐水，持续21天。使用量热羟脯氨酸测定法评估胰腺的胶原蛋白含量。
[1884]
图53a至53c所示图像显示了用(53a)yu100
‑
g08_02a或(53b)3c6治疗在消瘦相关的体重减轻模型(model of wasting
‑
related weight loss)中对体重和食物消耗的影响。喂食hfmcd饲料的小鼠每周两次用0.5、1、5或10mg/kg抗
‑
il
‑
11抗体治疗。对照组小鼠喂食正常饲料(nc)，或hffmd饲料并用igg同种型对照治疗。(53c)叶酸诱导的肾损伤后，抗
‑
il
‑
11抗体对小鼠体重的作用。
[1885]
图54a和54b.人源化3c6克隆vh 2.2/vl 2.1；vh 2.2/vl 2.2；vh 2.2/vl2.3；vh 2.2/vl 2.4；vh 2.3/vl 2.2；和vh 2.3/vl 2.3可以阻断il
‑
11信号传导并抑制(a)原代人心房成纤维细胞和(b)人hsc中的mmp2(纤维蛋白)生成的能力。
[1886]
图55a至55c.yu100
‑
g08_02a(igg1)和yu100
‑
g08_02a(igg4)体外阻断人hsc中(55a)内源性il
‑
11信号传导、(55b)外源性il
‑
11信号传导和(55c)il
‑
11反式信号传导的能力。评估成纤维细胞分泌到上清液中的mmp2以估算抑制百分比。
[1887]
图56a和56b.比较yu100
‑
g08_02a(igg1)和yu100
‑
g08_02a(igg4)在体内nash模型中逆转肝损伤和纤维化的能力。给予饲料4周和抗体治疗3周后，评估血清alt水平(56a)和肝胶原蛋白含量(hpa分析；56b)。
实施例
[1888]
在以下实施例中，发明人描述了抗
‑
il
‑
11抗体的产生以及抗体的功能表征。
[1889]
实施例1:人抗
‑
人il
‑
11抗体
[1890]
通过噬菌体展示开发了全人抗
‑
人il
‑
11抗体。
[1891]
重组人il
‑
11(货号z03108
‑
1)和重组鼠il
‑
11(货号z03052
‑
1)购自genscript(美国新泽西州)。重组人il
‑
11在cho细胞中表达为fc标记形式和无标记形式。无标记的鼠il
‑
11在hek293细胞中表达。
[1892]
通过使用原代成纤维细胞培养物的体外分析证实了重组人il
‑
11和小鼠il
‑
11的il
‑
11生物活性。
[1893]
根据标准方法，通过重组人il
‑
11和鼠il
‑
11分子的生物素化还制备了重组的生物素化人il
‑
11和鼠il
‑
11。
[1894]
基于图1所示的16种不同的淘选策略，通过利用生物素化和非生物素化的重组人和鼠il
‑
11的淘选，利用人天然文库(library)的噬菌体展示，鉴定了能够结合人il
‑
11和鼠il
‑
11的抗体(即交叉反应抗体)。
[1895]
噬菌体展示确定了175个scfv结合物，为“第一批命中”。来自这175个scfv的cdr序列的序列分析鉴定出86个独特的scfv。
[1896]
通过在大肠杆菌中重组表达产生可溶性scfv，通过elisa分析其结合人il
‑
11和鼠il
‑
11的能力。简而言之，将各抗原包被到elisa板的孔中，以1:2的稀释度添加含有各scfv的细胞培养上清液，并检测结合情况。
[1897]
与人il
‑
11和鼠il
‑
11结合的elisa分析结果如图2所示。该分析表明：
[1898]
·
8个仅能够结合人il
‑
11的scfv；
[1899]
·
6个仅能够结合鼠il
‑
11的scfv；
[1900]
·
32个仅表现出与人/鼠il
‑
11弱结合，并且信噪比高的scfv，和；
[1901]
·
40个与人il
‑
11和鼠il
‑
11具有交叉反应性的scfv。
[1902]
从这86个scfv中，选择了56个候选物用于进一步的功能表征。为了进一步分析，在大肠杆菌中将scfv克隆为scfv
‑
fc形式。
[1903]
抗体克隆命名示于图3。
[1904]
将抗体的vh和vl序列克隆入表达载体，以便产生scfv
‑
fc(人igg1)抗体。这些载体在无血清培养基中培养的哺乳动物细胞中瞬时表达，并通过a蛋白纯化分离。
[1905]
实施例2:人抗
‑
人il
‑
11抗体的功能表征
[1906]
在体外测定中分析了实施例1中所述抗体的以下能力：
[1907]
(i)抑制人il
‑
11
‑
介导的信号传导，(ii)抑制小鼠il
‑
11
‑
介导的信号传导，和(iii)抑制通过与il
‑
11ra形成复合物的il
‑
11所致il
‑
11反式信号传导。通过elisa还分析了抗体对人il
‑
11的亲和力。
[1908]
2.1抑制人il
‑
11
‑
介导的信号传导的能力
[1909]
为了研究中和人il
‑
11
‑
介导的信号传导的能力，在有或没有抗
‑
il
‑
11抗体存在下，在有tgfβ1(5ng/ml)存在下，在96孔板的孔中将心房人成纤维细胞培养24小时。tgfβ1促进il
‑
11的表达，进而驱动静态成纤维细胞向活化的αsma阳性成纤维细胞的转变。先前已证明中和性il
‑
11防止tgfβ1诱导的向活化的αsma阳性成纤维细胞的转变。
[1910]
利用operetta高内涵成像系统(operetta high
‑
content imaging system)，以自动化的高通量方式分析了αsma的表达。
[1911]
在24小时培养期结束时，在非刺激的培养物中有约29.7％(＝1)的成纤维细胞是αsma阳性，活化的成纤维细胞，而在没有抗il
‑
11抗体存在下，用tgfβ1刺激的培养物中有约52％(＝1.81)的成纤维细胞是αsma阳性。
[1912]
将抗
‑
il
‑
11抗体(2μg/ml)添加到用tgfβ1刺激的成纤维细胞培养物中，并在24小时培养期结束时测定αsma阳性成纤维细胞的百分比。基于在未用tgfβ1刺激的成纤维细胞培养物中观察到的αsma阳性成纤维细胞的百分比，标准化这些百分比。
[1913]
实验结果示于图4a、4b和7中。证明了其中的28种抗体能够中和人il
‑
11介导的信号传导。
[1914]
在实验中还分析了商业单克隆小鼠抗il
‑
11抗体(单克隆小鼠igg2a；克隆#22626；货号mab218；r&d系统公司，明尼苏达州，美国)抑制人il
‑
11所致信号传导的能力。发现该抗体能够将活化的成纤维细胞的百分比降低至28.3％(＝0.99)。
[1915]
与市售可得的小鼠抗il
‑
11抗体(行业标准品)相比，几种克隆中和人il
‑
11所致信号传导的程度更高：yu45
‑
c11/a10(#6)、yu45
‑
g1(#11)、yu45
‑
e3(#16)、yu45
‑
f8(#18)、yu45
‑
f9(#21)、yu45
‑
h10(#22)、yu45
‑
f2(#24)、yu45
‑
h3(#25)、yu45
‑
g7(#33)、yu45
‑
b6(#36)、yu45
‑
c1(#42)、yu46
‑
b6(#47)、yu46
‑
e3(#50)、yu46
‑
g8(#54)和yu46
‑
d3(#56)。
[1916]
2.2抑制小鼠il
‑
11
‑
介导的信号传导的能力
[1917]
按照与上文第2.1节中所述相同的方法，还研究了人抗体抑制小鼠il
‑
11
‑
介导的信号传导的能力，但使用小鼠心房成纤维细胞而非人心房成纤维细胞。
[1918]
培养24小时后，培养物中的约31.8％(＝1)的未刺激细胞是活化的成纤维细胞。与未刺激的培养物相比，tgfβ1刺激导致活化的成纤维细胞百分比增加了约2倍(68.8％＝2.16)。
[1919]
实验结果示于图5a、5b和7中。证明这些抗体能够中和小鼠il
‑
11介导的信号传导。还分析了单克隆小鼠igg2a克隆#22626，货号mab218抗
‑
il
‑
11抗体抑制小鼠所致il
‑
11信号传导的能力。发现该抗体能够将活化的成纤维细胞的百分比降低至39.4％(＝1.24)。
[1920]
与市售可得的小鼠抗
‑
il
‑
11抗体(行业标准品)相比，几种克隆中和小鼠心房成纤维细胞中il
‑
11所致信号传导的程度更高：yu33
‑
b4/yu45
‑
g2/a3(#3)、yu45
‑
h11/d12(#9)、yu45
‑
g1(#11)、yu45
‑
d2/h2/c7/f3/c9/e1/e9/c10/g3/h9/c5/a2/a5(#14)、yu45
‑
b3(#15)、yu45
‑
f8(#18)、yu45
‑
h10(#22)、yu46
‑
a10(#23)、yu45
‑
a8/c6(#27)、yu45
‑
d9/d3(#31)、yu45
‑
b6(#36)、yu45
‑
c1(#42)、yu46
‑
a8(#45)、yu46
‑
c1(#48)、yu46
‑
h8(#52)、yu46
‑
g8(#54)和yu46
‑
d3(#56)。
[1921]
还利用小鼠皮肤成纤维细胞研究了人抗体抑制小鼠il
‑
11
‑
介导的信号传导的能力。
[1922]
实验结果示于图7。证明该抗体能够中和小鼠il
‑
11介导的信号传导。
[1923]
与市售可得的小鼠抗
‑
il
‑
11抗体(行业标准品)相比，几种克隆中和小鼠皮肤成纤维细胞中il
‑
11所致信号传导的程度更高：yu45
‑
b6(#36)、yu45
‑
c1(#42)和yu46
‑
h8(#52)。
[1924]
2.3抑制与il
‑
11ra形成复合物的il
‑
11所致的il
‑
11反式信号传导的能力
[1925]
反式信号传导被认为是il
‑
6信号传导的主要方面，其中il
‑
6和可溶性il
‑
6rα的复合物可以激活表达gp130但缺乏il
‑
6受体的细胞(hunter和jones,2015nature immunology 16,448
‑
457)。
[1926]
最近有人提出il
‑
11和可溶性il
‑
11ra的复合物所致的反式信号转导对于il
‑
11生物学特性也很重要(lokau等人，cell reports(2016)14，1761
‑
1773)。使用il
‑
11和il
‑
11rα的重组融合蛋白(如pflanz等，febs lett(1999)450：117
‑
122中所述)，筛选抗il
‑
11抗体抑制il
‑
11：il
‑
11rα复合物介导的反式信号转导的能力。
[1927]
重要的是，能够抑制il
‑
11:il
‑
11rα复合物所致经典的il
‑
11介导信号传导和il
‑
11反式信号传导的抗体能够抑制il
‑
11/il
‑
11r信号传导的所有已知模式。
[1928]
il
‑
11:il
‑
11rα融合蛋白(以下称为高il
‑
11)由与il
‑
11连接的il
‑
11受体α(il
‑
11rα)的胞外域组成。本实施例中使用的il
‑
11:il
‑
11rα融合蛋白具有seq id no:4所示氨基酸序列。
[1929]
相比于重组il
‑
11蛋白，发现高il
‑
11是更有效的人成纤维细胞激活剂。简而言之，在两个独立的实验中，在有不同量的高il
‑
11(0.008ng/ml、0.04ng/ml、0.2ng/ml、1ng/ml和
5ng/ml)，或从商业来源获得的5ng/ml重组人il
‑
11存在下，无刺激培养人成纤维细胞(基线)，并通过测定本文所述的αsma阳性细胞百分比来分析成纤维细胞活化。结果示于图8a和8b。高
‑
il
‑
11以剂量依赖性方式激活成纤维细胞，并且是比il
‑
11更有效的激活剂。
[1930]
如下所述制备il
‑
11:il
‑
11rα融合蛋白：
[1931]
·
将编码il
‑
11:il
‑
11rα融合蛋白的dna克隆入ptt5载体，并在无血清的freestyle
tm 293表达培养基(赛默飞世尔科技公司)中转染入293
‑
6e细胞。
[1932]
·
37℃，5％co2下，将细胞保持在定轨振荡器(vwr科学公司)上的锥形瓶(康宁公司)中。
[1933]
·
在第6天收集细胞培养上清液用于纯化。
[1934]
·
将细胞培养上清液加载到亲和纯化柱上。
[1935]
·
用适当的缓冲液洗涤和洗脱后，合并洗脱的级分，将缓冲液交换为最终制剂缓冲液。
[1936]
·
通过sds
‑
page和蛋白质印迹分析纯化的il
‑
11:il
‑
11rα融合蛋白，以确认分子量和纯度。
[1937]
如通过elisa确定的，体外培养并用高il
‑
11刺激的成纤维细胞显示上调il
‑
11蛋白表达(图9)。令人感兴趣的是，未检测到响应于高il
‑
11刺激的il
‑
11rna水平升高。与tgfβ1在rna和蛋白水平上都增加il
‑
11表达不同，高il
‑
11似乎仅在转录后在蛋白水平上调il
‑
11表达。
[1938]
研究了人抗体抑制由高il
‑
11介导的信号转导的能力。
[1939]
在有中和性抗
‑
il
‑
11抗体或同型对照抗体存在下，将3个个体的人心房成纤维细胞与高il
‑
11(0.2ng/ml)孵育24小时。孵育后，对细胞进行αsma染色以确定成肌纤维细胞的部分。
[1940]
培养24小时后，培养物中约26.5％(＝1)的未刺激细胞是活化的成纤维细胞。与未刺激的培养物相比，高il
‑
11刺激导致活化的成纤维细胞百分比增加了约2倍(56.4％＝2.13)。
[1941]
实验结果示于图6和7。证明抗体能够中和高il
‑
11介导的信号传导(即il
‑
11反式信号传导)。
[1942]
还分析了单克隆小鼠igg2a克隆#22626，货号mab218抗
‑
il
‑
11抗体的抑制高il
‑
11所致信号转导的能力。发现该抗体能够将活化的成纤维细胞的百分比降低至33.8％(＝1.28)。
[1943]
相比于市售可得的小鼠抗
‑
il
‑
11抗体(行业标准品)，克隆yu33
‑
b4/yu45
‑
g2/a3(#3)中和高il
‑
11所致il
‑
11反式信号转导的程度更高。
[1944]
上文描述的实验程序的结果鉴定到具有功能特性的抗体克隆，这些功能特性与能够抑制il
‑
11/il
‑
11
‑
r信号传导的抗体的临床前和临床开发有关。
[1945]
克隆yu33
‑
b4/yu45
‑
g2/a3(#3)、yu45
‑
e3(#16)、yu45
‑
f2(#24)、yu45
‑
f5(#39)、yu46
‑
a8(#45)和yu46
‑
g8(#54)被鉴定为特别有前途的候选物，显示出抑制人和小鼠il
‑
11所致信号转导的良好能力，以及il
‑
11反式信号转导的良好抑制作用。
[1946]
2.4对人il
‑
11的抗体亲和力的分析
[1947]
通过elisa测定法分析人抗
‑
人il
‑
11抗体与人il
‑
11结合的亲和力。
[1948]
重组人il
‑
11从genscript获得，辣根过氧化物酶(hrp)偶联的抗人igg(fc特异性)抗体从sigma获得。康宁96孔elisa板购自sigma。pierce 3,3’,5,5
’‑
四甲基联苯胺(tmb)elisa底物试剂盒购自生命技术公司(0.4g/ml tmb溶液，柠檬酸缓冲液中0.02％的过氧化氢)。牛血清白蛋白和硫酸获自sigma。洗涤缓冲液在磷酸缓冲盐水(pbs
‑
t)中包含0.05％tween
‑
20。如实施例1中所述产生scfv
‑
fc抗体。纯化的小鼠和人igg对照购自生命技术公司。使用tecan infinite 200pro nanoquant来测量吸光度。
[1949]
如hornbeck等人(2015)curr protoc immunol 110，2.1.1
‑
23所述进行criss
‑
交叉稀释分析，以确定包被抗原、一抗和二抗的最佳浓度。
[1950]
如先前所述，进行间接elisa来评估50％有效浓度(ec
50
)下的一级scfv
‑
fc抗体的结合亲和力(unverdorben等.,(2016)mabs 8,120
‑
128)。4℃下，将elisa平板用1μg/ml重组人il
‑
11包被过夜，并用pbs配制的2％bsa封闭其余结合位点。将scfv
‑
fc抗体在pbs配制的1％bsa中稀释，滴定以获得800、200、50、12.5、3.125、0.78、0.195和0.049ng/ml的工作浓度，并在室温下一式两份孵育2小时。用15.625ng/ml的hrp偶联的抗人igg(fc特异性)抗体进行抗原
‑
抗体结合的检测。与检测抗体孵育2小时后，添加100μl的tmb底物15分钟，并用100μl的2m h2so4终止显色反应。在450nm处测量吸光度读数，570nm为参比波长校正。用graphpad prism软件对数据进行拟合，抗体浓度进行对数转换，然后使用不对称(五参数)对数剂量响应曲线进行非线性回归分析，以确定各ec50值。
[1951]
实施上述相同的材料和程序，以确定与鼠单克隆抗
‑
il
‑
11抗体的结合亲和力，除了使用hrp偶联的抗
‑
小鼠igg(h&l)而非hrp偶联的抗
‑
人igg。
[1952]
实施上述相同的材料和程序，以确定人单克隆抗
‑
il
‑
11抗体和鼠单克隆抗
‑
il
‑
11抗体与从genscript获得的重组鼠il
‑
11的结合亲和力。
[1953]
elisa分析的结果示于图10a至10f，用于确定抗体的ec
50
值，如图11所示。
[1954]
2.5抑制各种组织中人il
‑
11介导的信号传导的能力
[1955]
基本如第2.1和2.3节所述，研究了抗体在各种不同组织获得的成纤维细胞中中和il
‑
11
‑
介导的信号传导和反式信号传导的能力，除了将源自肝脏、肺、肾、眼、皮肤、胰腺、脾、肠、脑和骨髓的人成纤维细胞，而非心房人成纤维细胞用于实验。
[1956]
已证明抗il
‑
11抗体能够中和源自各种不同组织的成纤维细胞中的信号传导，这是通过观察到与没有抗体存在下的培养物相比，在24小时培养末期，有抗il
‑
11抗体存在下的αsma
‑
阳性成纤维细胞比例相对降低来确定的。
[1957]
实施例3:人抗
‑
人il
‑
11抗体的轻链改组
[1958]
通过轻链改组对人il
‑
11抗体作亲和力成熟，以获得对il
‑
11的亲和力提高的抗体。
[1959]
链改组以提高抗体亲和力是抗体技术领域熟知的技术，其详细描述于通过引用纳入本文的marks,“通过链改组的抗体亲和力成熟”(antibody affinity maturation by chain shuffling)，《抗体工程改造方法和策略》(antibody engineering methods and protocols),humana出版社(2004)第248卷,第327
‑
343页。具体地说，轻链改组详细描述于其3.1和3.2节。
[1960]
人抗
‑
人il
‑
11抗体的重链可变区与所有轻链可变区伴侣组合以鉴定对il
‑
11具有高亲和力的新vl/vh组合。
[1961]
轻链改组的示意图示于图12。简言之，将编码抗体的vh结构域的核酸克隆入包含所有vl链的噬菌体展示载体，并通过elisa分析包含新vh/vl组合的scfv与人il
‑
11的结合情况。
[1962]
随后分析具有显示与il
‑
11最强结合的vh/vl组合的scfv对鼠il
‑
11的交叉反应性。
[1963]
然后将该scfv的vh/vl序列克隆入表达载体以便产生scfv
‑
fc(人igg1)抗体，所述载体在无血清培养基中培养的哺乳动物细胞中瞬时表达，并通过a蛋白纯化得以分离。
[1964]
实施例4：小鼠单克隆抗
‑
人il
‑
11抗体
[1965]
如下所述还产生了抗人il
‑
11蛋白的小鼠单克隆抗体。
[1966]
将编码人il
‑
11氨基酸(序列)的cdna克隆入表达质粒(aldevron gmbh，弗莱堡，德国)。
[1967]
利用手持式颗粒轰击装置(“基因枪”)，通过皮内施用dna包被的金颗粒对小鼠进行免疫。经过一系列免疫接种后，从小鼠收集血清样品，并用流式细胞仪测试已用人il
‑
11表达质粒瞬时转染的hek细胞(利用可识别添加到il
‑
11蛋白n端的标签的抗
‑
标签抗体证实人il
‑
11在瞬时转染的hek细胞的细胞表面表达)。
[1968]
从小鼠分离产抗体的细胞，并根据标准程序将其与小鼠骨髓瘤细胞(ag8)融合。
[1969]
通过流式细胞术筛选与表达il
‑
11的hek细胞结合的能力来鉴定产生il
‑
11特异性抗体的杂交瘤。
[1970]
利用rna保护剂(rnalater，货号am7020，赛默飞世尔科技公司)制备阳性杂交瘤细胞的细胞沉淀物，并进一步处理以供抗体可变结构域的测序。
[1971]
总共制备了16种小鼠单克隆抗人il
‑
11抗体(图13)。测定的克隆bsn
‑
3c6的vh和vl序列示于seq id no:91至94。测定的克隆bsn
‑
1h2的vh和vl序列示于seq id no:156和157。测定的克隆bsn
‑
7d4的vh和vl序列示于seq id no:174和175。测定的克隆bsn
‑
8h11的vh和vl序列示于seq id no:192和193。
[1972]
实施例5：小鼠单克隆抗
‑
人il
‑
11抗体的功能表征
[1973]
5.1抑制人il
‑
11介导的信号传导的能力
[1974]
采用与以上实施例2.1中所述相同的试验研究了鼠单克隆抗
‑
人il
‑
11抗体抑制人il
‑
11介导的信号传导的能力。
[1975]
实验的结果示于图14和17。证明抗体能够中和人il
‑
11介导的信号传导。
[1976]
在实验中还分析了商业单克隆小鼠抗il
‑
11抗体(单克隆小鼠igg2a；克隆#22626；货号mab218；r&d系统公司，明尼苏达州，美国)抑制人il
‑
11所致信号传导的能力。发现该抗体能够将活化的成纤维细胞百分比降低至0.89倍。
[1977]
相比于市售可得的小鼠抗il
‑
11抗体(行业标准品)，发现克隆a7(bsn
‑
3c11)中和人il
‑
11所致信号传导的程度更高。
[1978]
5.2抑制小鼠il
‑
11介导的信号传导的能力
[1979]
使用与以上实施例2.2中所述相同的测定来研究鼠单克隆抗人il
‑
11抗体抑制鼠il
‑
11介导的信号传导的能力，但使用小鼠心房成纤维细胞而非小鼠皮肤成纤维细胞。
[1980]
实验的结果示于图15和17。证明该抗体能够中和鼠il
‑
11介导的信号传导。
[1981]
在实验中还分析了商业单克隆小鼠抗il
‑
11抗体(单克隆小鼠igg2a；克隆#22626；
货号mab218；r&d系统公司，明尼苏达州，美国)抑制人il
‑
11所致信号传导的能力。发现该抗体能够将活化的成纤维细胞百分比降低至43.0％(＝1.44)。
[1982]
与市售可得的小鼠抗
‑
il
‑
11抗体(行业标准品)相比，这些克隆中的几个中和鼠il
‑
11所致信号传导的程度更高：a3(bsn
‑
2e1)、a5(bsn
‑
2g6)和a6(bsn
‑
3c6)。
[1983]
9.3小鼠抗
‑
il
‑
11抗体抑制与il
‑
11ra形成复合物的il
‑
11所致il
‑
11反式信号传导的能力
[1984]
研究了小鼠抗
‑
il
‑
11抗体抑制高il
‑
11介导的信号传导的能力。
[1985]
在有抗
‑
il
‑
11抗体(2μg/ml)或同型对照抗体存在下，将人心房成纤维细胞与超级il
‑
11(0.2ng/ml)孵育24小时。孵育后，分析细胞培养上清液中的mmp2。与未刺激的培养物相比，用超级il
‑
11刺激会导致mmp2分泌增加。
[1986]
实验结果示于图16和17。发现小鼠抗
‑
il
‑
11抗体能够中和超级il
‑
11介导的信号转导(即il
‑
11反式信号转导)，并且发现市售可得的单克隆小鼠抗
‑
il
‑
11抗体相比(单克隆小鼠igg2a；克隆#22626；货号mab218；r&d系统公司,明尼苏达州,美国)，以下几种抑制反式信号传导的程度更高：bsn
‑
2g6(a5)、bsn
‑
3c6(a6)、bsn
‑
5b8(a9)和bsn
‑
7d4(a12)。
[1987]
将克隆bsn
‑
3c6(a6)确定为特别有希望的候选对象以供进一步开发(图17中突出显示)，其显示出抑制人il
‑
11和小鼠il
‑
11介导的信号转导的良好能力，以及对il
‑
11反式信号传导的良好抑制。
[1988]
5.4筛选小鼠抗
‑
il
‑
11抗体结合il
‑
11的能力
[1989]
将产生抗人il
‑
11抗体的小鼠杂交瘤亚克隆，并通过“混合测量”ique试验分析亚克隆杂交瘤的细胞培养上清液的(i)与人il
‑
11结合的能力，以及(ii)与il
‑
11以外的抗原的交叉反应性。
[1990]
简言之，将标记的对照细胞(在细胞表面不表达il
‑
11)和在其表面表达人il
‑
11的未标记靶细胞(在用编码flag标记的人il
‑
11的质粒瞬时转染后)与细胞培养上清液(包含小鼠抗il
‑
11抗体)和二级检测抗体(荧光标记的抗
‑
小鼠igg抗体)混合。
[1991]
然后利用htfc筛选系统(ique)分析细胞的两种标记(即细胞标记和二抗上的标记)。在表达il
‑
11的未标记细胞上检测到二抗表明小鼠抗
‑
il
‑
11抗体与il
‑
11结合的能力。在标记的对照细胞上检测到二抗表明小鼠抗
‑
il
‑
11抗体与il
‑
11以外的靶标有交叉反应。
[1992]
作为阳性对照条件，将标记和未标记细胞与作为一抗的小鼠抗flag标签抗体一起孵育。
[1993]
结果示于图18a和18b。大多数亚克隆的杂交瘤表达的抗体能够与人il
‑
11结合，并能高度特异性地识别该靶标。
[1994]
克隆bsn
‑
2g6、bsn
‑
5b8和bsn
‑
7f9与不表达il
‑
11的细胞表现出一定结合，因此可能与il
‑
11以外的靶标具有交叉反应性。发现亚克隆bsn
‑
3c11产生的抗体不与人il
‑
11结合。
[1995]
16种抗体中有13种显示出与il
‑
11结合的信号强于阳性对照抗标签抗体对标签的信号，表明这些抗体以高亲和力与il
‑
11结合。
[1996]
用最大剂量的tgfb1(5ng/ml)刺激人成纤维细胞，tgfb1是心房成纤维细胞中il
‑
11表达的最强刺激剂。这通常会导致24小时后上清液中的il
‑
11浓度约为500pg/ml
–
1ng/ml，这也取决于原代心房成纤维细胞的基因型。该方法的优势在于，它可以确保在生理相关
的最大生产水平下抑制正确折叠的内源性生产的il
‑
11。在该测定中，中和了il
‑
11直接作用于成纤维细胞的纤维化相关的自分泌活性。tgfb1刺激il
‑
11的表达，随后驱动静止的成纤维细胞向活化的(acta2阳性)成纤维细胞的转变。中和性il
‑
11抗体抑制这种转变。因此，在我们的体外筛选中，降低tgfb1刺激后的活化成纤维细胞百分比的抗体可被视为中和剂和抗纤维化剂。
[1997]
图18c显示了中和il
‑
11信号传导的抗体。监测人成纤维细胞活化以鉴定中和克隆。100％抑制表示未刺激的成纤维细胞的肌成纤维细胞(acta2 ve)水平，0％对应于完全活化的成纤维细胞和最大数量的成纤维细胞。
[1998]
在小鼠成纤维细胞中重复实验。结果示于图18d。
[1999]
还测试了抗体抑制人成纤维细胞利用超级il
‑
11(il
‑
11:il11ra)活化作反式信号传导的能力。特异性结合il
‑
11的抗体与il
‑
11:il11ra
‑
刺激的原代成纤维细胞温育。监测人成纤维细胞活化以鉴定中和克隆。100％抑制表示未刺激成纤维细胞的水平，0％表示完全活化的成纤维细胞。
[2000]
图18e显示了中和il
‑
11反式信号传导的抗体。
[2001]
测定在人重组il
‑
11(2ng/ml，24h)刺激的原代人心房成纤维细胞中克隆3c6的ic50值。通过测量上清液中mmp2和timp1浓度来确定纤维化反应。使用200pg/ml的超级il
‑
11进行了类似的实验24小时，以评估反式信号传导的阻断情况。评估成纤维细胞分泌到上清液中的蛋白质以估计抑制百分比。
[2002]
图18f和18g显示了两种情况下对纤维化反应的中和作用。
[2003]
使用与tgfb1(5ng/ml)或il
‑
11(2ng/ml)温育的人肝星状细胞(hsc)重复该实验，并测定成纤维细胞分泌到上清液中的mmp2，以评估抑制百分比。图18h显示了在tgfb1(左)或il
‑
11(右)刺激的hsc中3c6对纤维化反应的中和作用。
[2004]
实施例6：嵌合和人源化形式的小鼠抗
‑
人il
‑
11抗体
[2005]
按照标准方法制备实施例4的小鼠单克隆抗
‑
人il
‑
11抗体的小鼠/人嵌合和人源化形式。
[2006]
6.1小鼠/人嵌合抗体
[2007]
如《人单克隆抗体：方法和策略》(human monoclonal antibodies:methods and protocols),michael steinitz(编),“分子生物学方法”1060,springer实验室指南,humana press(2014),其中第8章所述，从小鼠单克隆抗
‑
人il
‑
11抗体制备小鼠/人嵌合抗体。
[2008]
简言之，测定编码产生小鼠抗
‑
人il
‑
11抗体的杂交瘤的vh和vl的dna序列，并与编码人免疫球蛋白恒定区的dna序列组合，以产生小鼠/人嵌合抗体序列，从而在哺乳动物细胞中表达嵌合小鼠/人抗体。
[2009]
6.2人源化抗体
[2010]
如《人单克隆抗体：方法和策略》,michael steinitz(编),“分子生物学方法”1060,springer实验室指南,humana press(2014),其中第7章，特别是第7章3.1节“抗体人源化”所述，由小鼠单克隆抗人il
‑
11抗体制备人源化抗体。
[2011]
还设计了人源化形式的bsn
‑
3c6序列，这些序列示于seq id no:116至128。
[2012]
简言之，测定编码产生小鼠抗
‑
人il
‑
11抗体的杂交瘤的vh和vl的dna序列，并插入
编码人抗体可变区、框架区和免疫球蛋白恒定区的dna序列，以产生人源化抗体序列，从而在哺乳动物细胞中表达人源化抗体。
[2013]
将原代人心房成纤维细胞与tgfb1(5ng/ml)和各种浓度的人源化3c6克隆温育：vh 2.2/vl 2.1；vh 2.2/vl 2.2；vh 2.2/vl 2.3；vh 2.2/vl 2.4；vh 2.3/vl 2.2；和vh 2.3/vl 2.3。
[2014]
名称重链轻链vh 2.2/vl 2.1seq id no:117seq id no:121vh 2.2/vl 2.2seq id no:117seq id no:122vh 2.2/vl 2.3seq id no:117seq id no:123vh 2.2/vl 2.4seq id no:117seq id no:124vh 2.3/vl 2.2seq id no:118seq id no:122vh 2.3/vl 2.3seq id no:118seq id no:123
[2015]
将原代人心房成纤维细胞与tgfb1(5ng/ml)和各种浓度的人源化3c6克隆温育。
[2016]
评估了人心房成纤维细胞分泌到上清液中的mmp2，以估计抑制百分比。
[2017]
图54a显示了抗体结合il
‑
11并阻断内源性产生的il
‑
11的相互作用。il
‑
11信号传导被中和，从而抑制了纤维蛋白的产生。
[2018]
利用人hsc和克隆vh 2.2/vl 2.1、vh 2.2/vl 2.2、vh 2.2/vl 2.3和vh 2.2/vl 2.4重复该实验。
[2019]
图54b显示了抗体结合il
‑
11并阻断内源性产生的il
‑
11的相互作用。il
‑
11信号传导被中和，从而抑制了纤维蛋白的产生。
[2020]
实施例7：抗
‑
il
‑
11抗体的进一步生化分析
[2021]
本文所述的抗体作进一步的生化分析。
[2022]
通过biacore、生物层干涉法(bli)和微尺度热泳(mst)分析来分析抗体，以测定与人il
‑
11和小鼠il
‑
11结合的亲和力。
[2023]
如rich等.,anal biochem.2008年2月1日；373(1):112
‑
20中所述，通过表面等离子体共振(spr)分析作抗体亲和力的biacore测定。
[2024]
如concepcion等.,comb chem high throughput screen.2009年9月；12(8):791
‑
800中所述，进行抗体亲和力的生物层干涉法分析。
[2025]
如jerabek
‑
willemsen等.,assay drug dev technol.2011年8月；9(4):342
‑
353中所述，进行抗体亲和力的微尺度热泳分析。
[2026]
如iacob等.,j pharm sci.2013年12月；102(12):4315
‑
4329中所述，通过大小排阻层析(sec)分析抗体的凝聚情况。
[2027]
如haverick等.,mabs.2014年7月
‑
8月；6(4):852
‑
8中所述，通过疏水相互作用层析(hic)分析抗体的疏水性。
[2028]
如menzen和friess,j pharm sci.2013年2月；102(2):415
‑
28中所述，通过差示扫描荧光法(differential scanning fluorimetry，dsf)分析抗体的解链温度(melting temperature)。
[2029]
实施例8：利用抗
‑
il
‑
11抗体抑制体内纤维化
[2030]
在各种不同组织的纤维化体内小鼠模型中证明了抗
‑
人il
‑
11抗体的治疗效用。实
验中使用的小鼠是野生型(即，il
‑
11ra / )小鼠。
[2031]
8.1心脏纤维化
[2032]
植入一泵，用angii(2mg/kg/天)处理小鼠28天。
[2033]
通过静脉内注射将中和性抗
‑
il
‑
11抗体或对照抗体给予不同组的小鼠。实验结束时，利用基于量热羟脯氨酸的测定试剂盒评估小鼠心房中的胶原蛋白含量，并通过qpcr分析标记物或纤维化col1a2、αsma(acta2)和纤连蛋白(fn1)的rna表达水平。
[2034]
与用对照抗体治疗的小鼠相比，纤维化标志物的表达降低证明用中和性抗
‑
il
‑
11抗体治疗的小鼠在心脏组织中的纤维化反应降低。
[2035]
8.2肾脏纤维化
[2036]
建立肾脏纤维化的小鼠模型，其中通过腹膜内注射载体(0.3m nahco3)配制的叶酸(180mg/kg)来诱导纤维化；对照小鼠仅给予载体。
[2037]
通过静脉内注射将中和性抗
‑
il
‑
11抗体或对照抗体给予不同组的小鼠。在第28天取出肾脏，称重，然后用10％中性缓冲的福尔马林固定以供masson三色和sirius染色，或作速冻以供胶原蛋白测定、rna和蛋白质研究。
[2038]
使用trizol试剂(英杰公司)和凯杰tissuelyzer方法从速冻肾脏中提取总rna，然后进行rneasy柱(凯杰公司)纯化。按照制造商的说明，使用iscripttm cdna合成试剂盒制备cdna，其中每个反应均包含1μg的总rna。利用steponeplus
tm
(应用生物系统公司)，采用taqman(应用生物系统公司)或快速sybr绿(凯杰公司)技术在40个循环中对一式三份样品进行定量rt
‑
pcr基因表达分析。根据gapdh mrna表达水平标准化表达数据，并使用2
‑
δδct方法计算倍数变化。通过在浓度为50mg/ml的6m hcl中加热(95℃，20小时)对速冻肾脏进行酸水解。按照制造商的说明，使用quickzyme总胶原蛋白分析试剂盒(快酶生物科学公司)，基于羟脯氨酸的比色检测定量测定水解物中的总胶原蛋白含量。
[2039]
与用对照抗体治疗的小鼠相比，纤维化标志物的表达降低证明用中和性抗
‑
il
‑
11抗体治疗的小鼠在肾组织中的纤维化反应降低。
[2040]
8.3肺纤维化
[2041]
在第0天通过气管内施用博来霉素来处理小鼠，以在肺中建立纤维化反应(肺纤维化)。
[2042]
通过静脉内注射将中和性抗
‑
il
‑
11抗体或对照抗体给予不同组的小鼠。在第21天处死小鼠，并分析其纤维化标记物的差异。
[2043]
与用对照抗体治疗的小鼠相比，纤维化标志物的表达降低证明用中和性抗
‑
il
‑
11抗体治疗的小鼠在肺组织中的纤维化反应降低。
[2044]
8.4皮肤纤维化
[2045]
在第0天通过皮下注射博来霉素来处理小鼠，以在皮肤中建立纤维化反应。
[2046]
通过静脉内注射将中和性抗
‑
il
‑
11抗体或对照抗体给予不同组的小鼠。在第21天处死小鼠，并分析其纤维化标记物的差异。
[2047]
与用对照抗体治疗的小鼠相比，纤维化标志物的表达降低证明用中和性抗
‑
il
‑
11抗体治疗的小鼠在皮肤组织中的纤维化反应降低。
[2048]
8.5眼纤维化
[2049]
为分析眼睛的纤维化，在第0天对il
‑
11ra
‑
/
‑
小鼠和il
‑
11ra / 小鼠进行小梁切
除术(滤过手术)，以启动眼睛的伤口愈合反应。业已证明这种青光眼滤过手术的小鼠模型是评估眼睛伤口愈合反应的有效模型(khaw等.2001,curr opin ophthalmol 12,143
‑
148；seet等.2011,mol.med.17,557
‑
567)并且成功显示纤维化调节剂的体内有益作用(mead等.2003,invest.ophthalmol.vis.sci.44,3394
‑
3401；wong等.2003invest.ophthalmol.vis.sci.44,1097
‑
1103；wong等.2005,invest.ophthalmol.vis.sci.46,2018
‑
2022)。
[2050]
简言之，将结膜解剖以露出下面的巩膜，然后使用30号针头经巩膜切开进入眼睛前房的切口。产生的瘘管可使房水进入结膜内和结膜下。然后通过10
‑
0(0.2米)ethilon黑色单丝尼龙巩膜缝合线固定并封闭角膜缘结膜。在程序结束时滴入夫西地酸软膏。通过腹膜内注射0.1ml氯胺酮/甲苯噻嗪混合物，以及在每只眼镜局部应用1滴1％的可卡因，在麻醉下进行该手术。手术后滴入夫西地酸软膏，以防感染。使用70％丙醇灭菌的手术剪刀、镊子和无菌针头进行手术。
[2051]
将缝合的结膜下方积聚的液体作为结膜泡进行观察。在手术后第7天对小鼠实施安乐死以供分析。对于定性免疫组学分析，通过摘除术摘除小鼠的眼睛，然后切片。采用天狼猩红/偏振光技术来评估胶原纤维的成熟度(等.1984,acta morphol hung 32,47
‑
55)；橘红色表示成熟的胶原蛋白，黄色/绿色表示新形成的不成熟胶原蛋白。
[2052]
通过静脉内注射将中和性抗
‑
il
‑
11抗体或对照抗体施用于不同组的小鼠，并监测眼组织中的纤维化。
[2053]
与用对照抗体治疗的小鼠相比，纤维化标志物的表达降低证明用中和性抗
‑
il
‑
11抗体治疗的小鼠的眼组织中的纤维化反应降低。
[2054]
8.6其它组织
[2055]
还在其它组织(如肝、肾、肠)的纤维化小鼠模型中，也在与多器官(即系统性)纤维化相关的模型中分析了中和性抗
‑
il
‑
11抗体对纤维化的治疗效果。
[2056]
测量纤维化反应并在用中和性抗
‑
il
‑
11抗体治疗的小鼠和用对照抗体治疗的小鼠之间比较。与用对照抗体治疗的小鼠相比，纤维化标志物的表达降低证明用中和性抗il
‑
11抗体治疗的小鼠的纤维化反应降低。
[2057]
实施例9：利用抗
‑
il
‑
11抗体在体内治疗癌症
[2058]
在癌症的小鼠模型中分析了用中和性抗
‑
il
‑
11抗体治疗对癌症的作用。
[2059]
在小鼠中建立了乳腺癌、肺癌和胃肠癌症的模型，通过给予中和性抗
‑
il
‑
11抗体或对照抗体来治疗小鼠，并监测癌症的发生/发展。
[2060]
与用对照抗体治疗的小鼠相比，癌症症状减轻和/或存活增加证明中和性抗il
‑
11抗体具有抗癌作用。
[2061]
评估了抗
‑
il
‑
11抗体对肿瘤生长的作用。
[2062]
研究了许多不同的癌症模型。
[2063]
将肝癌细胞(hcc)植入小鼠(侧腹模型)，并在植入后3周内监测肿瘤体积。用3c6或igg对照抗体治疗小鼠。监测肿瘤大小。
[2064]
图51a显示，在单用抗
‑
il
‑
11抗体治疗期间，发现肿瘤大小显著减小，表明在肝癌中抑制il
‑
11信号传导的治疗作用。
[2065]
建立显示成纤维细胞中il
‑
11过表达的小鼠模型，由于成纤维细胞分泌il
‑
11，该模型出现严重的整体器官纤维化。脾脏大小在3周内增加了2倍，并显示出深刻且易于测量
的il
‑
11相关变化，可能是由骨髓纤维化(一种骨髓癌)驱动的。在骨髓纤维化模型中，3c6抗体防止在成纤维细胞中表达il
‑
11的转基因小鼠的il
‑
11诱导脾肿大，如图51b所示。
[2066]
在肺癌模型中评估抗
‑
il
‑
11抗体3c6联合顺铂化疗的作用。
[2067]
用a549肿瘤细胞(5
×
106；第0天)皮下接种小鼠。小鼠或不治疗，或用顺铂(6mg/kg，每周两次)加igg抗体(10mg/kg x 2/week，ip)或3c6(10mg/kg x 2/week，ip)治疗5周。每周两次测量肿瘤体积。
[2068]
结果示于图51c。与顺铂化疗联用时，抗
‑
il
‑
11治疗可提供抑制肿瘤体积的累加效果。
[2069]
实施例10：利用抗
‑
il
‑
11抗体治疗amd
[2070]
在湿性年龄相关性黄斑变性(amd)中研究了用中和性抗
‑
il
‑
11抗体治疗的效果。
[2071]
向患有湿性amd的受试者施用中和性抗
‑
il
‑
11抗体。在某些治疗条件下，除抗
‑
il
‑
11抗体治疗外，受试者还接受vegf拮抗剂治疗(例如兰尼单抗、贝伐单抗、培加他尼、博鲁齐珠单抗(brolucizumab)或阿帕西普)、pdgf拮抗剂治疗(例如沛乐拉尼(pegpleranib))，或者激光凝固治疗。
[2072]
与未用抗
‑
il
‑
11抗体治疗的受试者相比，在用抗
‑
il
‑
11抗体治疗的受试者中观察到湿amd病理学特征的降低和/或湿amd症状的改善。
[2073]
实施例11：轻链改组的抗体
[2074]
如图12所示，进行轻链改组。
[2075]
利用以下il
‑
11结合性抗体克隆的重链作轻链改组：yu45
‑
e03、yu45
‑
f02、yu45
‑
f05、yu45
‑
g02、yu46
‑
a08、yu46
‑
g08。
[2076]
pcr扩增重链的可变区，并将所得扩增子合并，克隆入噬菌粒载体(噬菌粒)，所述噬菌粒载体各自包含特定的vl链，并代表原始λ和κ轻链文库集合。含有vh和vl的噬菌粒用于产生新的抗体噬菌体文库，该文库用于选择在严格条件下(即抗原限制、大量洗涤步骤)表现出与il
‑
11结合的克隆。
[2077]
基于图19所示的淘选策略，利用生物素化和非生物素化的重组人和鼠il
‑
11作淘选，通过噬菌体展示来鉴定能够结合人il
‑
11和鼠il
‑
11的抗体(即交叉反应抗体)。
[2078]
分析确定了66种交叉反应抗体(图20)。序列分析鉴定出64个独特的抗体克隆。
[2079]
在elisa测定中分析了64个抗体克隆与人il
‑
11和鼠il
‑
11的结合信号。结果示于图21a和21b。
[2080]
实施例12：轻链改组抗体的功能表征
[2081]
分析了54种轻链改组抗体结合il
‑
11和抑制il
‑
11介导的信号传导的能力。
[2082]
12.1与人il
‑
11的结合
[2083]
根据标准方法，通过elisa分析轻链改组的抗
‑
il
‑
11抗体以测定与人il
‑
11结合的ec50。简言之，用重组人il
‑
11(100ng/孔)包被微量滴定板的孔，加入连续稀释的包含诸克隆的vh和vl结构域的scfv
‑
fc，并利用多克隆抗体检测系统检测抗体结合情况。
[2084]
elisa分析的结果用于计算轻链改组的抗体克隆的ec50值(ng/ml)，如图22所示。
[2085]
12.2抑制人il
‑
11介导的信号传导的能力
[2086]
为了研究轻链改组的抗体克隆中和人il
‑
11
‑
介导的信号传导的能力，在有tgfβ1(5ng/ml)存在下，在有最终浓度为2mg/ml的scfv
‑
人igg1
‑
fc形式的抗il
‑
11抗体存在下，或
dab过氧化物酶底物(载体实验室公司)作为发色原，利用immpress hrp抗兔igg聚合物检测试剂盒(载体实验室公司)目测观察一抗染色。然后用mayer苏木精(默克公司)复染切片。
[2100]
图25a和25b显示发现用抗
‑
il11抗体治疗的小鼠的胶原蛋白染色显著减少，表明抗
‑
il
‑
11抗体治疗抑制了肾纤维化。
[2101]
图26显示用抗
‑
il11抗体治疗显著降低尿白蛋白/肌酸的比率，表明在用抗
‑
il
‑
11抗体治疗的小鼠中肾脏损伤的水平降低。
[2102]
图27a显示用抗
‑
il
‑
11抗体治疗以剂量依赖性方式抑制叶酸诱导的肾纤维化。
[2103]
评估不同浓度(0.5、1、5和10mg/kg)下，抗
‑
il
‑
11抗体bsn
‑
3c6和yu100
‑
g08 02a减轻叶酸诱导的肾纤维化的能力。igg(10mg/kg)用作对照。叶酸处理前一天开始抗体注射，每两周一次。叶酸诱导损伤后三周将动物处死，采用hpa测定评估肾脏胶原蛋白含量。图27b和27c显示，发现抗
‑
il
‑
11治疗以剂量依赖性方式降低叶酸诱导的肾纤维化中的肾脏胶原蛋白含量。
[2104]
在另一实验中，通过单侧输尿管梗阻(uuo)诱导急性肾损伤的小鼠模型。简言之，通过假手术或一条输尿管的输尿管阻塞处理小鼠。小鼠接受igg、抗
‑
il
‑
11抗体克隆bsn
‑
3c6(20mg/kg；在手术第
‑
1、1、3、5天)，并于术后第7天收获受伤的肾脏('uuo')或对侧未损伤的肾脏(con)。
[2105]
通过对实验条件不知情的病例，肾小管萎缩或肾小管扩张进行组织学分析来对肾小管损伤进行半定量评估(肾小管损伤评分：0，无；1，最低；2，轻度；3，中度；4，重度)。
[2106]
图28a和28b显示，在急性肾损伤的小鼠模型中，用抗
‑
il
‑
11抗体治疗减少了肾小管损伤。
[2107]
实施例14：il
‑
11和肝脏纤维化
[2108]
通过蛋白质印迹证实在匹配的人肝脏样品中，健康和患病肝脏中il
‑
11的蛋白表达。制备相配的冷冻肝样品以供蛋白质印迹，并使用r&d系统公司的人il
‑
11抗体单克隆小鼠igg2a克隆号22626(货号mab218)确定il11的水平。生成了薄膜图像。
[2109]
结果示于图29。与正常健康的肝脏相比，在大多数患病组织中检测到il
‑
11的表达增加。
[2110]
为测定il
‑
11表达是否随疾病而改变，使用r&d系统公司的人il
‑
11duoset15板试剂盒(货号dy218)，对精确切割肝脏切片(precision cut liver slices，pcls)的培养物进行elisa。
[2111]
休息24小时后，切下人pcls并与培养基处理一起温育以使其适应培养基板。样品仅用培养基(对照)、含lps的培养基，促纤维蛋白原诱导性tgfβ1的组合或促纤维蛋白原诱导性tgfβ1和tgfβ1抑制剂alk5的组合进行处理。
[2112]
结果示于图30a。促纤维化刺激诱导il
‑
11蛋白表达上调，并且发现alk5抑制剂抑制tgfβ1受体信号转导，从而将il
‑
11蛋白的表达降低至对照水平。
[2113]
肝星状细胞(hsc)是肝脏中成纤维细胞的前体。评估了bsn
‑
3c6和yu100
‑
g08_02a阻断hsc向成肌纤维细胞转变的能力，这通过将hsc与tgfβ1(24h)和中和抗体(2ug/ml)孵育时acta2
ve
细胞的减少来表示。
[2114]
图30b显示了在tgfβ1刺激il
‑
11后，两种抗
‑
il
‑
11抗体均抑制了hsc向成纤维细胞的转分化。
[2115]
通过测量il
‑
11刺激的hsc中mmp2浓度来确定yu100
‑
g08_02a的ic50。将原代人hsc与tgfb1(5ng/ml)(左图)或il
‑
11(2ng/ml)(右图)和不同浓度的抗体一起温育。评估成纤维细胞分泌到上清液中的mmp2以估算抑制百分比。
[2116]
图30c显示yu100
‑
g08_02a中和了hsc中的纤维化反应。
[2117]
14.1在nash的临床前模型中利用抗
‑
il
‑
11抗体抑制肝脏纤维化
[2118]
非酒精性脂肪性肝炎(nash)是一种常见肝病，其特征是从炎症发展为纤维化，最终导致肝衰竭。
[2119]
糖尿病小鼠(db/db；瘦素受体缺陷型)用正常饲料或nash诱导(甲硫氨酸/胆碱缺陷型(mcd))饲料维持8周。为测试中和性抗il11抗体的功效，在8周nash饲料的最后3周给予抗
‑
il
‑
11抗体克隆bsn
‑
3c6(20mg/kg，3x/周，腹膜内)(图31a，下图)。在安乐死时评估总体肝脏组织学特征，并通过羟脯氨酸测定法分析肝脏的胶原蛋白含量。
[2120]
结果示于图31a和31b。与未治疗的nash饲料动物相比，抗
‑
il
‑
11抗体治疗的nash饲料动物的肝脏形态和质地的部分恢复证明，抗
‑
il
‑
11抗体治疗对il
‑
11介导的信号传导的抑制作用改善了非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型的肝组织学情况(图31a)。与未治疗的nash饲料动物相比，还发现抗
‑
il
‑
11抗体治疗的nash饲料小鼠的肝脏胶原蛋白含量降低(图31b)。
[2121]
在利用糖尿病小鼠的相同nash模型中，以正常饲料(nc)喂养动物12周，以达到肝脂肪变性阶段。然后用mcd饲料喂养小鼠8周以诱导nash。对于那8周，每周两次给小鼠施用20mg/kg抗
‑
il
‑
11抗体bsn
‑
3c6或igg对照。
[2122]
利用甘油三酯比色测定试剂盒(10010303，开曼公司)进行肝甘油三酯(tg)测量。使用快酶总胶原蛋白分析试剂盒(快酶生物科学公司)测量肝脏中总羟脯氨酸含量。使用丙氨酸转氨酶活性测定试剂盒(ab105134，艾博抗公司)测量丙氨酸转氨酶(alt)的血清水平。为了定量测定促炎因子的表达，使用trizol(英杰公司)从速冻肝组织中提取总rna，然后进行rneasy柱(凯杰公司)纯化。根据制造商的说明，使用iscript
tm cdna合成试剂盒(伯乐公司)合成cdna。利用steponeplus
tm
(应用生物系统公司)，采用taqman(应用生物系统公司)或快速sybr绿(凯杰公司)技术在40个循环中对一式两份样品进行基因表达分析。表达数据相对于gapdh mrna表达作标准化，并使用2
‑
δδct方法计算倍数变化。通过蛋白质印迹法测量肝脏中的总erk和磷酸化erk水平。将所有测量结果与肝脂肪变性对照进行比较。
[2123]
结果示于图39a至39f。发现抗
‑
il
‑
11 3c6治疗可降低肝脏甘油三酯含量(39a)、肝脏羟脯氨酸含量(39b)、肝脏促炎因子表达(39c、39d)、alt血清水平(39e)和磷酸化erk水平(39f)。
[2124]
因此，与对照相比，发现抗
‑
il
‑
11治疗可减少晚期nash的肝脂肪变性、纤维化和炎症。
[2125]
利用nash(hfmcd)饲料诱导肝损伤和纤维化4周后，在nash模型中评估不同浓度的抗
‑
il
‑
11抗体bsn
‑
3c6和yu100
‑
g08_02a(0.5、1、5和10mg/kg)的作用。在nash饲料一周后(此时已有建立和稳定的脂肪性肝炎，alt水平约为800u/l(与正常饲料相比增加了40倍))，动物每两周开始接受igg对照抗体或enx108a，持续四周。以正常饲料和igg(10mg/kg)喂养的小鼠用作对照。如上所述测量血清alt水平和肝胶原蛋白含量。
[2126]
结果示于图39g和39h。发现抗
‑
il
‑
11疗法对纤维化指标，血清alt水平和肝胶原蛋
白含量具有剂量依赖性的改善作用。
[2127]
在单独的实验中，给五周龄雄性c57bl/6n小鼠喂食补充了60kcal％脂肪的mcd饲料(a06071302，研究饲料公司)(hfmcd饲料)以诱导nash。对照小鼠饲以正常食物(nc，特色饲料公司)。喂食hfmcd饲料6周后，每两周一次给予抗
‑
il
‑
11抗体bsn
‑
3c6(10mg/kg)，持续4周。在第10周收集肝和血清，并分析erk活化、肝羟脯氨酸含量和血清alt水平，如前所述测量。
[2128]
结果示于图40a至40c。发现抗
‑
il
‑
11抗体消除了erk激活(40a)，并抑制了肝纤维化的进展(40b)和血清alt水平(40c)。fc：倍数变化。
[2129]
在晚期nash的另一模型中研究了抗
‑
il
‑
11疗法。给2日龄的c57bl/6小鼠皮下注射200μg链脲佐菌素，并以正常饲料喂养4周。然后给小鼠换成hfmcd饲料，共7周；然后利用hfmcd饲料与10mg/kg抗
‑
il
‑
11抗体bsn
‑
3c6或igg对照治疗，每周3次，后续7周。测量纤维化和炎症基因的rna表达：col1a1、col1a2、col1a3、timp1、tgfβ1、mmp2、tnfα、ccl2和ccl5。
[2130]
结果示于图40d。发现抗
‑
il
‑
11疗法强烈抑制指示纤维化和炎症的基因表达。
[2131]
因此，抗
‑
il
‑
11疗法抑制肝纤维化和肝损伤。
[2132]
14.2使用抗
‑
il
‑
11抗体抑制成肌纤维细胞活化
[2133]
肝星状细胞(hsc)在nash的发病机理中起重要作用。促纤维化刺激，例如tgfβ1，pdgf和促炎因子可以激活hsc并将其转化为与成纤维细胞来源的成肌纤维细胞具有共同特征的肝成肌纤维细胞。
[2134]
在有或没有抗
‑
il
‑
11抗体存在下，用nash促进因子处理hsc，以研究hsc向成肌纤维细胞的转化。
[2135]
将hsc以每孔5x103个细胞的密度接种在96孔板中，并在有igg对照或抗
‑
il
‑
11抗体克隆bsn
‑
3c6存在下，用tgfβ1(5ng ml
‑1)、pdgf(20ng ml
‑1)、angii(100nm)、bfgf(10ng ml
‑1)或ccl2(5ng ml
‑1)处理24小时。然后利用4％多聚甲醛(pfa，28908，赛默飞世尔科技公司)中固定细胞，用0.1％triton x
‑
100(西格玛公司)作透化处理，并用pbs配制的0.5％bsa和0.1％吐温
‑
20封闭非特异性位点。将细胞与一抗(1:500)温育过夜(4℃)，然后与适当的alexafluor 488二抗(1:1000)温育。根据制造商的方案，利用click
‑
it edu标记试剂盒(c10350，赛默飞世尔科技公司)掺入edu
‑
alexa fluor 488。在封闭溶液中用1μg ml
‑1dapi(d1306，赛默飞世尔科技公司)复染细胞。利用operetta高内涵成像系统1483(珀金埃尔默公司)，从一式两份的孔中为各条件成像，每孔最少7个视野。利用harmony v3.5.2(珀金埃尔默公司)定量测定acta2
ve
细胞。利用columbus 2.7.1(珀金埃尔默公司)测量胶原蛋白i的单位面积荧光强度(根据细胞数作标准化)。
[2136]
发现抗
‑
il
‑
11抗体治疗可阻断nash促进因子驱动的hsc向成肌纤维细胞转变。结果示于图41a至41d。代表性的荧光图像显示，抗
‑
il
‑
11抗体bsn
‑
3c6减少了acta2
ve
细胞的数量(41a)，并减少了hsc产生的胶原蛋白i(41b)，比例尺＝200μm。定量测定各种处理的acta2
ve
细胞(41c)和胶原蛋白i产量(41d)的百分比，表明较少的经处理hsc是acta2阳性或产生胶原蛋白，即抗体处理阻断刺激驱动的hsc向成肌纤维细胞转变。
[2137]
采用24孔boyden室侵袭测定(细胞生物实验室公司)评估抗
‑
il
‑
11疗法对人hsc的侵袭行为的影响。在添加刺激物之前，用抗
‑
il
‑
11抗体克隆bsn
‑
3c6或igg对照预处理hsc，15分钟。将无血清hsc培养基中相等数量的hsc一式三份接种到ecm包被的基质胶上，并使其
侵入含有0.2％fbs的hsc培养基。与侵入性刺激物pdgf(20ng ml
‑1)或ccl2(5ng ml
‑1)温育48小时后，吸出培养基并用棉签去除非侵入性细胞。用细胞染色液(细胞生物实验室公司)染色侵袭底部室的细胞，成像并在40x放大倍数下计数。
[2138]
结果示于图42。发现抗
‑
il
‑
11抗体可防止pdgf
‑
和ccl2诱导的hsc侵袭基质胶。
[2139]
14.3阻断il
‑
11信号传导抑制nash中的肝脏炎症
[2140]
除了在肝纤维化中发挥作用，hsc还通过促炎性细胞因子和趋化因子的分泌和旁分泌活性在肝炎中发挥重要作用。
[2141]
测定到il
‑
11功能丧失导致持续较低水平的炎症标志物tnfα、ccl2和ccl5。进行了一项研究以确定对体内炎症的影响是否与il
‑
11对hsc的作用有关。在有igg对照或抗
‑
il
‑
11抗体bsn
‑
3c6存在下，没有刺激物(
‑
)、有il
‑
11或有tgfβ1下，通过elisa测定hsc上清液(n＝4/组)中的ccl2：il
‑
11(5ng/ml)，tgfβ1(5ng/ml)，igg bsn
‑
3c6(2μg/ml)。
[2142]
结果示于图43。发现il
‑
11刺激hsc分泌ccl2，而抗
‑
il
‑
11抗体对il
‑
11的抑制阻断ccl2的分泌。这揭示了il
‑
11在基质免疫中的作用不明显，并表明il
‑
11中和抑制了hsc分泌的促炎因子对肝脏微环境(hepatic niche)中其它细胞的旁分泌作用。
[2143]
14.4中和il
‑
11信号传导逆转肝纤维化
[2144]
通过给小鼠喂食nash mcd饲料10周来建立严重的肝纤维化。然后将饲料换成正常饲料(nc)，每周两次用抗
‑
il
‑
11抗体bsn
‑
3c6(20mg/kg)治疗小鼠，持续6周。在实验期间以nc饲料喂养的小鼠和igg抗体用作对照。如先前所述测量肝脏羟脯氨酸含量，即总胶原蛋白含量。
[2145]
结果示于图44a。抗
‑
il
‑
11抗体治疗三周后，肝胶原蛋白含量显著逆转，六周时甚至见到更大的逆转。值得注意的是，在整个实验过程中，igg对照治疗动物的肝胶原蛋白含量保持不变。
[2146]
当转化的hsc经历衰老或回复到非活性acta2
‑
ve
细胞状态时，有利于逆转肝纤维化。图44b显示发现抗
‑
il
‑
11疗法降低acta2表达。
[2147]
为了直接检查il
‑
11信号传导是否将hsc维持在转化状态所需，将hsc用tgfβ1或pdgf刺激72小时，然后在有持续tgfβ1或pdgf刺激存在下，用抗
‑
il
‑
11抗体bsn
‑
3c6再处理24或48小时。将未刺激的hsc用作非纤维化对照。
[2148]
结果示于图44c。在il
‑
11抑制的24小时内，无论用tgfβ1还是pdgf刺激hsc，acta2
ve
细胞的百分比均会逆转至接近基线水平。胶原蛋白的分泌量也逆转至接近基线水平。
[2149]
用抗
‑
il
‑
11疗法治疗24或48小时后，测量mmp2浓度。结果示于图44d。24小时后，抗
‑
il
‑
11治疗可降低mmp2浓度，48小时后可将mmp2浓度逆转至接近基线水平。
[2150]
因此，抑制il
‑
11
‑
依赖性hsc转化导致hsc衰老/逆转和有利的基质重塑，从而导致纤维化消退。
[2151]
研究了抗
‑
il
‑
11治疗在早期nash中的作用。在nash的hfmcd饲料模型中，炎症在六周达到峰值，然后是严重的纤维化阶段。给小鼠喂食hfmcd饲料一周，然后在利用含10mg/kg抗
‑
il
‑
11抗体bsn
‑
3c6或igg对照的饲料每周两次作治疗，五周。如前所述评估erk磷酸化、甘油三酯含量和血清alt水平。室温下，将肝脏组织在10％中性福尔马林(nbf)中固定48小时，脱水，包埋在石蜡块中，切成7μm的切片。通过光学显微镜检查masson三色染色的切片，比例尺为100μm。
[2152]
结果示于图45a至45e。发现在早期脂肪性肝炎期间使用抗
‑
il
‑
11治疗抑制il
‑
11信号传导导致小鼠的肝脏脂肪变性显著降低(45a)，erk活化降低(45b)。在分子水平上，与igg对照(45d)相比，甘油三酯含量显著降低(45c)，接受抗
‑
il
‑
11治疗的小鼠的肝脏未显示脂滴。hfmcd饲料在一周后引起明显的脂肪性肝炎和肝损伤(alt>700u l
‑1)，三周的抗
‑
il
‑
11治疗后以剂量依赖性方式逆转至接近正常水平(45e)。接受抗
‑
il
‑
11治疗的小鼠在实验过程中未发生纤维化，从而再次证实与抑制il
‑
11信号传导有关的强抗纤维化作用。
[2153]
采用rna
‑
seq和qpcr评估抗
‑
il
‑
11治疗对nash小鼠模型中促纤维化和促炎性基因表达的影响。
[2154]
结果示于图45f至45h。用抗
‑
il
‑
11抗体治疗后，消除了促纤维化和促炎基因的上调。促纤维化和促炎基因z分数的差异表达热图(每百万作图读数转录物，tpm)显示，抗
‑
il
‑
11治疗产生的促纤维化和促炎基因表达与nc对照饲料小鼠(非nash)观察到的相似(45f)。在用抗
‑
il
‑
11抗体治疗的小鼠中，炎症标记物tnfα和ccl2(45g)或促纤维化标记物tgfβ1、acta2、timp1、col1a1、col1a2或col3a1(45h)均未上调。
[2155]
因此，中和il
‑
11信号传导逆转了早期nash中的肝损伤。
[2156]
总之，il
‑
11是hsc活化和转化所必需的，并且在hsc病理生物学中起着核心作用。除了抗纤维化作用，il
‑
11中和抗体还具有改善疾病的治疗效果。il
‑
11抗体可以逆转tgfβ1或pdgf下游的肝星状细胞(hsc)激活。il
‑
11信号传导的抑制可防止炎症和脂肪变性，并可在疾病晚期逆转肝纤维化和肝细胞损伤。在脂肪性肝炎期间较早给予时，抗
‑
il
‑
11治疗可阻断来自hsc的炎症信号并防止肝细胞损伤。
[2157]
实施例15：利用抗
‑
il
‑
11抗体抑制眼纤维化
[2158]
如caballero等.,exp eye res.(2009)3月；88(3):367
‑
77所述，在其中布鲁赫膜被破坏的视网膜纤维化小鼠模型中评估了抗
‑
il
‑
11抗体治疗的抗纤维化作用。
[2159]
简言之，对小鼠施以激光诱导的视网膜损伤(每个视网膜4次灼伤)，然后在第1、7、14和21天通过眼内施用抗体(0.5μg的igg对照或抗
‑
il11抗体克隆bsn
‑
3c6)进行治疗。在第28天收获眼睛以供组织学分析。在对治疗不知情的情况下，采用masson三色染色测量烧伤部位的纤维化面积。
[2160]
结果示于图32a和32b。与抗
‑
il11抗体治疗的小鼠相比，对照igg治疗的小鼠中纤维化面积显著较大。
[2161]
在单独的实验中，对小鼠(n＝10)施以激光视网膜灼伤(每只眼睛4次)，并用eylea(阿帕西普；再生元公司) igg对照或eylea bsn
‑
3c6联合治疗。受伤后四周，染色/定量测定视网膜的胶原蛋白(盲法)。
[2162]
结果示于图32c。与igg对照相比，发现抗
‑
il
‑
11治疗可减少眼睛中的纤维化面积。因此，就抗vegf疗法而言，抗
‑
il
‑
11疗法减少了纤维化反应。
[2163]
使用荧光素眼底血管造影分析评估脉络膜新血管形成(cnv)。在激光诱导布鲁赫膜破裂后第7天和28天，监测cnv病变。
[2164]
结果示于图32d。通过玻璃体内注射(ivt)抗体前后的泄漏倍数变化面积，测量结果指示了cnv的程度。抗
‑
il
‑
11疗法减少了泄漏倍数变化的面积。
[2165]
实施例16：利用抗
‑
il
‑
11抗体抑制皮肤纤维化
[2166]
在皮下注射博来霉素(blm，西格玛b2434，50μg/天)建立的皮肤纤维化小鼠模型中
分析抗
‑
il
‑
11抗体治疗的抗纤维化作用。
[2167]
简言之，用剪刀修剪小鼠背部中部的皮毛(约9cm2)，然后使用脱毛膏将毛发完全去除。在注射部位的上半部皮下注射pbs配制的浓度为0.5mg/ml的100μl博莱霉素。随后在注射部位的下半部皮下注射60μl抗
‑
il11抗体克隆bsn
‑
3c6或对照igg抗体(剂量＝15mg/kg/天)。每天进行注射，共计21天，最后一次注射后一天将动物处死，并通过组织学分析真皮厚度和胶原蛋白含量(通过masson三色染色)。图33a示出了用于不同治疗组的实验程序的示意图。
[2168]
图33b和33c显示，与对照igg治疗的小鼠相比，用中和性抗
‑
il
‑
11抗体治疗的小鼠的皮肤厚度显著降低。对于对照igg治疗的组，还可以看到胶原蛋白染色增加(图33b，中间图)。
[2169]
实施例17：利用抗
‑
il
‑
11抗体抑制心脏纤维化
[2170]
在心脏纤维化的小鼠模型中分析了抗
‑
il
‑
11抗体治疗的抗纤维化作用。
[2171]
简言之，如前所述(tarnavski,o.等.“小鼠心脏外科手术：产生人类疾病小鼠模型的综合技术及其在基因组研究中的应用”(mouse cardiac surgery:comprehensive techniques for the generation of mouse models of human diseases and their application for genomic studies).physiol.genomics 16,349
‑
360(2004))，在雄性小鼠中施以横动脉主动脉收缩术(tac)。年龄匹配的小鼠施以假手术而不作tac。利用经胸二维多普勒超声心动图(trans
‑
thoracic two
‑
dimensional doppler echocardiography)来确认压力梯度增加(>40μmm hg)，从而表明tac成功。
[2172]
tac后2周，对小鼠实施安乐死以进行组织学和分子评估。抗
‑
il
‑
11抗体克隆bsn
‑
3c6或对照igg抗体以20mg/kg的剂量每周腹膜内施用3次。两周后，收集心脏，并根据制造商的说明使用masson三色染色试剂盒(ht15，西格玛奥德里奇公司)评估纤维化程度。
[2173]
分析结果如图34所示。与用igg对照抗体治疗的小鼠相比，用中和性抗
‑
il
‑
11抗体治疗的小鼠的心外膜、心内膜和血管周区域的纤维化水平降低。
[2174]
实施例18：变体抗
‑
il
‑
11抗体克隆
[2175]
seq id no:7、9和11所示轻链可变区序列中91位的半胱氨酸残基被a、g、i、l、q、s、t或v取代。变体轻链可变区序列示于seq id no:12至35。
[2176]
hek293 ebnda细胞用编码scfv的载体转染，所述scfv对应于yu100
‑
h01、01a、01g、01i、01l、01q、01s、01t、01v、yu100
‑
g08、02a、02g、02i、02l、02q、02s、02t或02v。
[2177]
实施例19：分析变体克隆结合il
‑
11的亲和力
[2178]
利用biacore t200，通过单循环动力学分析来分析了实施例18中所述的01和02变体抗
‑
il
‑
11抗体克隆结合人il
‑
11的亲和力。
[2179]
简言之，将重组人il
‑
11固定在cm5芯片上，并将对应于不同克隆的浓度增加的纯化抗
‑
il
‑
11抗体(igg1形式)以30μl/min的流速流过芯片来进行结合，运行之间没有解离步骤。采用单个解离步骤，并使用3.8m mgcl2再生表面。
[2180]
对于yu100
‑
g08和02变体克隆，在结合中采用以下抗体浓度：3.125nm、6.25nm、12.5nm和25nm。对于yu100
‑
h01和01变体，采用以下抗体浓度：37.5nm、75nm、150nm。
[2181]
对于yu100
‑
g08和02变体，分析物注射时间是150秒；对于yu100
‑
h01和01变体，分析物注射时间是400秒。
[2182]
对于yu100
‑
g08和02变体，分析物解离时间是500秒；对于yu100
‑
h01和01变体，分析物解离时间是700秒。
[2183]
使用biacore t200评估软件v3.0分析获得的原始数据，根据1:1交互模型拟合扣除背景的数据。
[2184]
yu100
‑
g08和02变体所得结果示于图35a至35j。变体02a、02i、02l、02q和02s结合人il
‑
11的亲和力更大或在yu100
‑
g08的亲和力的两倍内。
[2185]
yu100
‑
h01和01变体所得结果示于图36a至36j。变体01a、01i、01l和01t结合人il
‑
11的亲和力更大或在yu100
‑
h01的亲和力的两倍内。
[2186]
实施例20：分析变体克隆对il
‑
11介导的信号传导的抑制作用
[2187]
在体外测定中分析实施例18所述的01和02变体抗
‑
il
‑
11抗体克隆抑制il
‑
11介导的信号传导的能力。
[2188]
在有不同浓度的scfv
‑
人igg1
‑
fc形式的yu100
‑
h01、01a、01g、01i、01l、01q、01s、01t、01v、yu100
‑
g08、02a、02g、02i、02l、02q、02s、02t or02v抗
‑
il
‑
11抗体存在下，在有tgfβ1(5ng/ml)存在下，将心房人成纤维细胞在96
‑
孔板的诸孔中培养24小时。
[2189]
然后通过elisa测量细胞培养上清液中促纤维化标记物mmp2的水平。通过在没有tgfβ1存在下进行培养来测量培养细胞的基础mmp2分泌。
[2190]
利用测定的mmp2水平来推导不同克隆抑制il
‑
11介导的信号传导的ic50值。
[2191]
yu100
‑
h01、01a、01g、01i、01l、01q、01s、01t和01v的结果示于图37a至37i。
[2192]
yu100
‑
g08、02a、02g、02i、02l、02q、02s、02t和02v的结果示于图38a至38i。
[2193]
12.3交叉物种反应性
[2194]
在有2μg/ml的igg对照、yu100
‑
g08_02a或3c6抗体存在下，用重组猕猴il
‑
11(5ng/ml)刺激猕猴皮肤成纤维细胞24小时。利用operetta高内涵成像平台定量测定胶原蛋白、acta2 ve和edu ve细胞。采用量热天狼猩红胶原蛋白测定法定量测定分泌的胶原蛋白。
[2195]
结果示于图38j至38m。两种抗体均阻断猕猴成纤维细胞中的il
‑
11信号传导。还在大鼠和猪心脏成纤维细胞中测试了3c6，发现3c6抑制这些细胞中的纤维化反应。
[2196]
实施例21：il
‑
11和肺纤维化
[2197]
特发性肺纤维化(ipf)是一种纤维化性肺病，其特征是侵袭性肺成肌纤维细胞沉积了ecm成分，例如胶原蛋白并破坏肺部完整性。
[2198]
对来自健康个体和ipf患者的肺切片进行il
‑
11和作为成肌纤维细胞标志物的α平滑肌肌动蛋白(acta2)的免疫染色。从具有ipf的肺移植患者获得人ipf组织，从iiam(197医学进展国际研究院)获得正常对照的人肺组织。将人肺组织在10％福尔马林中固定过夜，然后包埋在石蜡中。将组织切片与一抗(抗
‑
il
‑
11(pa5
‑
36544，赛默飞世尔科技公司)、抗
‑
acta2(ab7817和ab5694，艾博抗公司)温育过夜，并使用immpress hrp抗兔igg聚合物检测试剂盒(载体实验室公司)，利用immpact dab过氧化物酶底物(载体209实验室公司)作目测观察。
[2199]
结果示于图46a。发现il
‑
11在正常肺组织中低水平表达，但在ipf肺样品中连同acta2显著升高。
[2200]
研究了il
‑
11在肺成纤维细胞活化、迁移和侵袭中的作用。将鼠肺成纤维细胞与重组小鼠il
‑
11(5ng ml
‑1，24h)温育，并通过天狼猩红胶原蛋白测定法定量测定il
‑
11处理的
成纤维细胞上清液中的总分泌胶原蛋白(n＝5/组)。在细胞迁移或侵袭试验之前，将成纤维细胞在无血清dmem中培养24小时。将无血清dmem中相等数量的成纤维细胞一式两份接种到含有聚碳酸酯膜的顶端腔室中进行迁移测定，或接种到ecm包被的基质胶上进行侵袭测定。使成纤维细胞作为化学吸引剂向il
‑
11或tgfβ1迁移。为作侵袭测定，使成纤维细胞侵入含有2％fbs的dmem。37℃下温育24小时后，去除培养基并使用棉签去除非迁移性或非侵入性细胞。用细胞染色液(细胞生物实验室公司)染色迁移到底部腔室或向底部腔室侵袭的细胞。将迁移的细胞在540nm作比色定量。来自各膜的5个非重叠区域的侵袭细胞成像并在40x放大率下计数。
[2201]
结果示于图46b(分泌的胶原蛋白)、46c(迁移)和46d(侵入)。il
‑
11诱导显著的成纤维细胞活化、增殖、ecm产生、迁移和侵袭。
[2202]
因此，il
‑
11在ipf中的肺中上调，其驱动成纤维细胞向成肌纤维细胞转化并诱导纤维化。
[2203]
21.1抗
‑
il
‑
11疗法和纤维化
[2204]
如本文所述产生抗
‑
il
‑
11抗体。
[2205]
利用biacore t200系统(ge保健公司，美国)，通过表面等离振子共振(spr)测量抗il
‑
11抗体bsn
‑
3c6与人和小鼠il
‑
11的实时结合动力学特性。分别测量250s和500s的结合和解离。平衡结合常数kd由结合速率常数kd/ka之比确定。
[2206]
结果示于图47a和47b。bsn
‑
3c6与人il
‑
11结合显示k
d
为4.14nm(47a)，而bsn
‑
3c6与小鼠il
‑
11结合显示k
d
为2.38nm(47b)。
[2207]
评估抗
‑
il
‑
11抗体bsn
‑
3c6对纤维化特征的影响。
[2208]
在有bsn
‑
3c6或igg对照抗体存在下，用多种促纤维化刺激物处理小鼠肺成纤维细胞。如前所述，对细胞作acta2和col1α1(抗
‑
acta2(ab7817和ab5694，艾博抗公司)，抗col1a1(ab34710，艾博抗公司))免疫染色，并定量测定免疫荧光。利用天狼猩红胶原蛋白检测试剂盒定量测定细胞培养上清液中分泌的胶原蛋白。
[2209]
结果示于图48a。热图显示，与igg对照相比，在有抗
‑
il
‑
11抗体存在下，用多种促纤维化刺激物处理的小鼠肺成纤维细胞中acta2
ve
细胞的免疫荧光定量测定值和col1α1免疫染色(强度/面积)降低。在有抗
‑
il
‑
11抗体存在下，培养上清液中的胶原蛋白分泌减少。
[2210]
用bsn
‑
3c6或igg对照抗体(2μg ml
‑1，24h)处理tgfβ1分化的人肺成纤维细胞(5ng ml
‑1，预处理24h)。测定acta2
ve
细胞的百分比，col1α1免疫染色(强度/面积)和胶原蛋白分泌。
[2211]
结果示于图48b。发现抗
‑
il
‑
11抗体可减少预活化人肺成纤维细胞中的成纤维细胞活化、col1α1产生和胶原蛋白分泌，从而证明抗
‑
il
‑
11疗法可逆转纤维化。
[2212]
用物种特异性重组tgfβ1(5ng ml
‑1，24h)刺激原代小鼠和人成纤维细胞，并在有纯化的抗
‑
il
‑
11bsn
‑
3c6抗体(6μg ml
‑1)存在下监测分泌的mmp2水平。
[2213]
结果示于图48c(人)和48d(小鼠)。抗
‑
il
‑
11抗体通过中和下游il
‑
11自分泌循环，可有效抑制tgfβ1驱动的人和小鼠成纤维细胞中促纤维化标记物mmp2的分泌。
[2214]
研究了抗
‑
il
‑
11抗体bsn
‑
3c6对tgfβ1诱导的小鼠肺成纤维细胞迁移或侵袭的影响。在添加化学引诱物之前，用抗
‑
il
‑
11抗体bsn
‑
3c6或igg对照抗体预处理成纤维细胞15分钟。
[2215]
结果示于图48e。发现抗
‑
il
‑
11抗体同时减少迁移和侵袭。
[2216]
因此，发现抗
‑
il
‑
11抗体bsn
‑
3c6阻断成纤维细胞活化和ecm产生，并抑制多种刺激下游的成纤维细胞侵袭和迁移。还发现抗il
‑
11抗体可抑制tgfβ1刺激后ipf患者来源的肺成纤维细胞的多种纤维化表型。
[2217]
重要的是，抗
‑
il
‑
11疗法不仅能够预防或抑制纤维化，而且能够逆转已产生的tgfβ1转化的肺成肌纤维细胞群的纤维化表型(图48b)。
[2218]
21.2抗
‑
il
‑
11疗法预防肺纤维化
[2219]
在ipf小鼠模型中研究了抗
‑
il
‑
11疗法预防肺纤维化的潜力。
[2220]
使用pbs配制的新鲜标记的[
125i
]bsn
‑
3c6(4.2μci/2.5μg/100μl)，检测到抗
‑
il
‑
11抗体bsn
‑
3c6在小鼠血液中的半衰期约为9天。通过眼眶后注射施用抗体，用2％异氟烷麻醉小鼠，并在下几个时间点收集血液：下颌下出血注射后2、5、10、15、30分钟、2小时、6小时、8小时和2天。
[2221]
在施用博来霉素(blm)之前，使8
‑
10周龄的c57bl/6雌性野生型小鼠适应环境一周。在第7、9、11、14、16、18天，通过腹膜内注射给小鼠施用抗
‑
il
‑
11抗体bsn
‑
3c6(20mg kg
‑1，pbs配制)，在blm攻击后第21天收获肺。抗
‑
il
‑
11抗体或igg对照的肺切片用masson三色法染色：将切片施以bouin固定液，beibrich scarlet
‑
酸性品红，并在5％磷钼酸
‑
磷钨酸中辨别，在2.5％苯胺蓝中复染，然后在1％醋酸中再次辨别。使用快酶总胶原蛋白测定试剂盒(快酶生物科学公司)测量小鼠肺(右上叶)中的羟脯氨酸总含量。通过蛋白质印迹分析检测col3a1、纤连蛋白的蛋白表达和il
‑
11的蛋白水平以及肺匀浆物中erk和stat3的磷酸化状态及总水平，并利用ecl检测系统(皮尔斯公司)作目测观察。通过rt
‑
pcr在40个循环中定量测定肺裂解物中的mrna表达，并相对于gapdh表达标准化。taqman探针获自赛默飞世尔科技公司：(col1a1，mm00801666_g1；col1a2，mm00483888_m1；col3a1，mm01254476_m1；fn1，mm01256744_m1；mmp2，mm00439498_m1；timp1，mm01341361_m1；gapdh，mm99999915_g1)。
[2222]
结果示于图49a至49d。用抗
‑
il
‑
11抗体治疗的小鼠的肺纤维化程度较低(49a)。与用igg对照治疗的小鼠相比，用抗
‑
il
‑
11疗法治疗的小鼠的肺/体重和肺羟脯氨酸含量降低(49b)，胶原蛋白col3a1和纤连蛋白的表达降低(49c)。发现抗
‑
il
‑
11治疗降低纤维化标记rna的表达。此外，还发现抗
‑
il
‑
11抗体治疗的小鼠已经产生了促进原纤维胶原蛋白降解和纤维化消除的优先ecm重塑的rna表达特征(49d)。发现阻断il
‑
11信号传导减少非经典il
‑
11信号传导(erk激活)，而经典(stat3)信号传导未改变(49e)。
[2223]
21.3抗
‑
il
‑
11疗法逆转肺纤维化
[2224]
在blm诱导的ipf小鼠模型中研究了抗il
‑
11疗法治疗和逆转肺纤维化的潜力。
[2225]
当胶原蛋白水平稳定时，在blm治疗后的第14天(后期干预)开始向小鼠注射抗
‑
il
‑
11抗体bsn
‑
3c6(20mg kg
‑1，隔日)或igg对照。如上所述，在blm给药后第28天评估肺。
[2226]
结果示于图50a至50d。与igg对照(50a)相比，在抗
‑
il
‑
11抗体治疗的小鼠的肺中观察到纤维化消退。发现用抗
‑
il
‑
11治疗的小鼠的肺/体重和肺羟脯氨酸含量降低(50b)。抗
‑
il
‑
11治疗显著降低col3a1和纤连蛋白的蛋白水平，il
‑
11亦是如此(50c)。发现阻断il
‑
11信号传导减少非经典il
‑
11信号传导(erk激活)，而经典(stat3)信号传导不变(50d)。
[2227]
总之，使用抗
‑
il
‑
11抗体中和il
‑
11信号传导可阻断肺成纤维细胞的纤维化反应，并逆转tgfβ1转化的肌成纤维细胞活化。在il
‑
11强烈上调的ipf小鼠模型中，在bml攻击后
早期或晚期给予抗
‑
il
‑
11治疗分别导致了肺纤维化的预防或逆转。
[2228]
实施例22：il
‑
11对胰腺纤维化的作用
[2229]
每天给小鼠皮下注射100μg/kg重组小鼠il
‑
11或生理盐水，21天。然后采用量热羟脯氨酸测定法评估胰腺的胶原蛋白含量。
[2230]
结果示于图52。il
‑
11诱导胰腺中胶原蛋白的产生。因此，胰腺纤维化将受益于抗
‑
il
‑
11抗体的治疗。
[2231]
实施例23：抗
‑
il
‑
11抗体对消瘦障碍的作用
[2232]
接受hfmcd饲料的动物体重减轻并且非常不适，另请参见实施例14。抑制il
‑
11信号传导可改善hfmcd引起的体重减轻和9a7抗体对体重增益表现出剂量依赖性作用。
[2233]
如前所述，将五周龄的雄性小鼠像以hfmcd或正常饲料(nc)喂养一周，以诱导消瘦，从而使mcd小鼠体重减轻约15％。最初一周后，每周两次给小鼠腹膜内注射0.5、1、5或10mg/kg抗
‑
il
‑
11抗体yu100
‑
g08_02a或3c6。10mg/kg的igg同种型抗体用作对照。每周测量体重和食物消耗。对于食物消费，测量笼中食物漏斗中的平均食物摄入量(克/小鼠/周)(每笼n＝3只小鼠)。
[2234]
结果示于图53a和53b。发现抗
‑
il
‑
11疗法(53a)yu100
‑
g08_02a和(53b)3c6提供了体重和食物消耗的剂量依赖性增益，表明消瘦的逆转。最高剂量显示消瘦逆转效果最大。治疗过程中，喂以nc饲料的小鼠体重稳定增加，而饲喂hfmcd饲料并用igg对照治疗的小鼠的体重减轻约30％。最高剂量对食物消耗有的影响最大，而接受igg对照治疗的小鼠的食物消耗略有减少。
[2235]
急性疾病，例如创伤或败血症也可能与厌食症和恶病质相关，因此，本发明人随后在急性肾损伤小鼠模型中研究了il
‑
11
‑
介导的信号传导拮抗作用对厌食症和恶病质的影响。
[2236]
给10周龄的雄性小鼠腹膜内注射载体(0.3m nahco3)配制的叶酸(180mg/kg)来诱导肾损伤；对照小鼠仅给予载体。注射后28天处死动物。从给予叶酸前1小时开始直至处死小鼠，每3天给小鼠腹膜内注射20mg/kg的抗
‑
il
‑
11抗体或相同浓度的igg同种型对照。
[2237]
发现叶酸诱导的肾损伤导致与严重和双侧肾损伤急性期相关的厌食症/恶病质相关性快速体重减轻。与igg对照相比，在受伤时接受抗
‑
il
‑
11治疗的小鼠(n＝7/组)在受伤期间的体重恢复得更快，并且在3周后体重恢复正常或接近正常。
[2238]
如前所述，通过腹膜内注射叶酸单独诱导肾脏损伤。从肾损伤后21天起，仅用抗
‑
il
‑
11抗体或igg对照治疗小鼠。评估抗体治疗之前和之后的动物体重。未接受叶酸的健康小鼠用作对照。
[2239]
图53c显示了用抗
‑
il
‑
11抗体治疗的小鼠在开始治疗后开始恢复体重，表明在晚期疾病中可以改善消瘦相关的体重减轻。
[2240]
实施例24：抗
‑
il
‑
11抗体对代谢性疾病的作用
[2241]
在患有代谢性疾病，例如肥胖症和ii型糖尿病的小鼠中研究了抗
‑
il
‑
11抗体的作用。联用西方饮食与果糖(wdf)来建立与肥胖症、ii型糖尿病和非酒精性脂肪肝疾病(nafld)期间人的那些疾病极为相似的代谢疾病(baena等.,sci rep(2016)6:26149,machado等.,plos one(2015)10:e0127991)。从12周龄开始，给小鼠喂食西方饮食(d12079b，研究饲料公司)并补充饮用水(wdf)配制的15％重量/体积的果糖，持续16周。给
对照对象喂食普通饲料(nc，特种饲料公司)和饮用水。igg抗体用作对照。
[2242]
与饲喂wdf的对照igg治疗小鼠相比，饲喂wdf的抗
‑
il
‑
11抗体治疗的小鼠显示出体重(a)和脂肪量(b)显著降低。与用igg对照治疗的小鼠相比，在用抗
‑
il
‑
11抗体治疗的小鼠中也观察到去脂体重的增加，这表明在wdf诱导的代谢发病机理中抑制il
‑
11信号传导恢复了肌肉质量。此外，腹膜内葡萄糖耐量试验(ipgtt)结果显示，抗
‑
il
‑
11抗体治疗的小鼠的葡萄糖耐量与空腹血糖一起显著改善。
[2243]
将分析扩展到对胰腺的影响。发现与igg对照治疗的小鼠相比，喂食wdf的抗
‑
il
‑
11抗体治疗小鼠对wdf诱导的胰腺损失表现出显著的保护作用，无论是治疗8到16周(与代谢疾病相关的保护作用)还是治疗16到24周(与代谢疾病相关的逆转作用)。
[2244]
与喂食wdf的对照igg治疗的小鼠相比，喂食wdf的抗
‑
il
‑
11抗体治疗的小鼠的血清胆固醇水平显著较低，与喂食wdf的对照igg治疗的小鼠相比，血清甘油三酯水平显著较低。与喂食wdf的对照igg治疗的小鼠相比，喂食wdf的抗
‑
il
‑
11抗体治疗的小鼠的空腹血糖水平均显著较低。
[2245]
喂食wdf的接受igg治疗的小鼠中，胰腺的免疫组学研究显示胰岛中胰高血糖素和胰岛素染色增加，同时胰岛增生，这是ii型糖尿病的典型特征(bonner
‑
weir和o’brien diabetes(2008)57:2899
‑
2904)。在16到24周，抗
‑
il
‑
11抗体治疗在喂食wdf的小鼠中显著降低胰岛增生和胰高血糖素染色，并改善喂食wdf的小鼠的胰岛中胰岛素的表达，这表明拮抗il
‑
11介导的信号传导可用于改善和逆转西式饮食引起的代谢疾病。
[2246]
hfmcd模型具有早期发作的脂肪性肝炎，然后是纤维化。然而，该模型不是肥胖的或胰岛素耐受的。wdf诱导nash的模型用于测试抗
‑
il
‑
11治疗在肥胖症、胰岛素耐受和糖尿病中的作用。给小鼠喂食wdf 16周，此时它们是肥胖和胰岛素耐受的，并具有肝脂肪变性、炎症和纤维化。然后开始用抗
‑
il11抗体治疗。当靶向il
‑
11信号传导时，nash肝脏中的肝erk活化受到抑制(例如，图40a)。尽管体重增益相似，但在抗
‑
il11治疗的小鼠中观察到肝纤维化、肝脂肪变性、炎症和血清alt水平降低的逆转。这伴随着血清葡萄糖、甘油三酯和胆固醇水平的降低。中和性抗
‑
il11疗法可逆转wdf引起的nash病理学特性。
[2247]
利用hfmcd，持续10周以建立严重肝纤维化，然后给小鼠转换为正常饲料，从而模拟强有力的代谢干预，并同时开始抗
‑
il
‑
11抗体治疗。
[2248]
去除代谢刺激物后，发现erk活化缓慢消退，这通过抗体治疗得以加快。在整个实验过程中，igg治疗的动物的纤维化没有改变，这表明单独的完全代谢校正不会逆转纤维化，或者非常缓慢地逆转纤维化。相反，肝胶原蛋白含量在抗体治疗的早期显著逆转，而在后期则进一步逆转，显示出渐进和持续的作用。
[2249]
纤维化的消退与timp水平较低和mmp水平较高相关，从而促进良好的基质重塑。与此一致的是，发现抗
‑
il11抗体治疗的患有严重纤维化的小鼠迅速上调mmp2并下调timp1。当转化的hsc经历凋亡、衰老和/或恢复为非活性acta2
‑
ve状态时，逆转肝纤维化是有利的。为检查将hsc维持在转化状态是否需要il
‑
11，用tgfβ1或pdgf刺激hsc，然后抑制il
‑
11信号传导。在il
‑
11抑制的24小时内，acta2 ve细胞的百分比和胶原蛋白的分泌量被逆转至接近基线水平，尽管有持续的tgfβ1/pdgf刺激，但erk活性却大大降低。
[2250]
实施例25：抑制il
‑
11信号传导在肝毒性中的作用
[2251]
25.1抗
‑
il
‑
11疗法对肝毒性的影响
[2252]
il
‑
11直接导致肝细胞死亡并驱动肝细胞进入功能异常的部分上皮
‑
间充质细胞转化(emt)状态，已知该状态会限制肝脏的再生能力(grant rowe等.molecular and cellular biology 2011；31(12):2392
‑
2403)。发现原代人肝细胞高表达il
‑
11rα受体，发现il
‑
11刺激诱导剂量依赖性肝细胞死亡，这由生理相关剂量范围内丙氨酸氨基转移酶(alt)的逐渐增加所证实，h2o2刺激人肝细胞导致上清液中il
‑
11上调10倍。
[2253]
利用对乙酰氨基酚(apap)
‑
诱导肝损伤的小鼠模型研究抗
‑
il
‑
11治疗对肝毒性的影响。将12
‑
14周龄的雄性小鼠禁食，并在apap注射(ip，400mg/kg)之前16小时腹膜内(ip)注射10mg/kg的抗
‑
il
‑
11抗体或igg同种型对照。apap给药后24小时处死小鼠。定量测定小鼠血清和肝细胞上清液中的il
‑
11水平。将肝脏样品切下并在室温下，在10％中性福尔马林(nbf)中固定48小时，然后脱水，包埋在石蜡块中并切成7μm的切片。根据标准方案，将切片用苏木精和曙红(h&e)染色，并通过光学显微镜检查。
[2254]
发现接受抗
‑
il
‑
11抗体的小鼠的alt水平较低，即肝损害较少，并防止了apap诱导的肝质量损失，这反映了肝细胞的破坏。还发现抗体治疗的小鼠具有正常的活动性和活性，相比之下，发现对照igg治疗的小鼠是静态的/濒死的，以及身体不适的可见特征(例如竖毛，弯腰姿势)。
[2255]
在公认的，apap诱导肝损伤(药物诱导的肝损伤；dili)的转化模型中，发现通过阻断il
‑
11来抑制il
‑
11信号传导可防止肝毒性。
[2256]
通过ip注射给12
‑
14周龄的雄性小鼠服用严重的apap过量(400mg/kg)或等量的盐水，10小时后给小鼠腹膜内注射20mg/kg的拮抗剂抗
‑
il11rα抗体、同种型匹配的igg对照抗体，或未经处理。发现严重apap过量后10小时给予抗
‑
il
‑
11抗体可将总体肝脏形态恢复至未经apap处理的小鼠的。在用抗
‑
il
‑
11抗体治疗的小鼠中，肝功能也得以挽救。致命的apap过量后10小时给予il
‑
11介导的信号传导的拮抗抗体抑制剂证明可从dili相关的肝功能抑制中拯救小鼠。据信，10小时相当于人中过量后的24小时。
[2257]
实施例26：同种型选择
[2258]
以人igg1和igg4形式产生了克隆yu100
‑
g08_02a、3c6 vh2.2/vl2.2和3c6 vh2.2/vl2.1。igg4形式包含s241p l248e双重突变(kabat编号)。s241p突变是铰链稳定的，而l248e突变进一步降低了已经很低的igg4的adcc效应子功能(davies和sutton,immunol rev.2015年11月；268(1):139
‑
159；angal等.,mol immunol.1993年1月；30(1):105
‑
8)。adcc活性较低对皮下给予抗体可能是有利的。
[2259]
进行了强制降解研究以检测氧化和脱酰胺作用对yu100
‑
g08_02a抗体完整性的影响。通过微毛细管区带电泳(微
‑
cze)评估的，使用0.5％v/v h2o2进行强制氧化表明yu100
‑
g08_02a(igg4)不易受氧化作用的影响，而igg1形式的yu100
‑
g08_02a受轻微影响。两种克隆的sec
‑
hplc分析表明，氧化处理后，igg4克隆稳定，而igg1克隆似乎部分片段化为轻链和重链。用1％w/v碳酸氢铵处理抗体时，观察到yu100
‑
g08_02a(igg4)的脱酰胺作用，但这对抗体完整性没有影响。与之相比，脱酰胺后，igg1形式的yu100
‑
g08_02a显得不稳定。
[2260]
进行了稳定性研究，其中两个克隆均保存在pbs
‑
或
‑
10mm组氨酸ph 6.5、10％海藻糖、0.02％聚山梨酯80
‑
或
‑
25mm柠檬酸ph 5.5、150mm精氨酸，0.02％聚山梨酯80中。将抗体保存在
‑
20、25或45摄氏度下。在0、2、4和12周，采用uv
‑
vis、sec
‑
hplc、ce
‑
sds和ce
‑
cze评估稳定性。两种抗体表现出相似水平的稳定，并且在45摄氏度下降解略有增加。
[2261]
体外细胞分析中测试yu100
‑
g08_02a(igg1)和yu100
‑
g08_02a(igg4)。如前所述，用tgfb1(5ng/ml)、il
‑
11(2ng/ml)或高il
‑
11(200pg/ml)激活原代肝星状细胞，并与不同浓度的任一种抗体一起温育以确定ic50值。通过监测mmp2分泌到上清液中来评估体外纤维化反应的中和作用。
[2262]
图55a至55c显示两种形式的yu100
‑
g08_02a均阻断(a)内源性il
‑
11信号传导，(b)外源性il
‑
11信号传导和(c)il
‑
11反信号传导。在各情况下均抑制了纤维蛋白的产生。
[2263]
如实施例14中所述，在nash的hfmcd临床前模型中测试了两种抗体的体内性能。用hfdmd或正常饲料喂养动物4周。在喂养的最后三周，还用不同量的yu100
‑
g08_02a igg1或igg4治疗动物。喂养和抗体治疗4周后，评估血清alt水平和肝胶原蛋白含量(hpa测定)。为各抗体绘制相同的基线和igg对照动物，以方便数据解释。
[2264]
结果示于图56a和56b。两种抗体形式均能够降低血清alt水平(a)和肝胶原蛋白(b)，从而表明肝损伤和纤维化的逆转。yu100
‑
g08_02a igg4的性能略优于igg1形式。

技术特征：
1.一种能够结合il
‑
1的任选分离的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：具有seq id no:37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2具有seq id no:40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：具有seq id no:42所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1具有seq id no:45所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2具有seq id no:81所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3。2.如权利要求1所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：具有seq id no:37所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1具有seq id no:38所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2具有seq id no:40所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：具有seq id no:42所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1具有seq id no:45所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2具有seq id no:57所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3。3.如权利要求1或权利要求2所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:8所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:83所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性。4.如权利要求3所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:8所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:20所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性。5.一种能够结合il
‑
11的任选分离的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：(i)包含以下cdr的重链可变(vh)区：具有seq id no:95所示氨基酸序列的hc
‑
cdr1具有seq id no:96所示氨基酸序列的hc
‑
cdr2具有seq id no:97所示氨基酸序列的hc
‑
cdr3；和(ii)包含以下cdr的轻链可变(vl)区：具有seq id no:101所示氨基酸序列的lc
‑
cdr1具有seq id no:102所示氨基酸序列的lc
‑
cdr2具有seq id no:103所示氨基酸序列的lc
‑
cdr3。6.如权利要求5所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:92、116、117、118、119或120所示氨基酸序列
具有至少70％序列相同性；和vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:94、121、122、123、124、125、126、127或128所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性。7.如权利要求5或权利要求6所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:117所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:122所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性。8.如权利要求5或权利要求6所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：vh区，其包含的氨基酸序列与seq id no:117所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性；和vl区，其包含的氨基酸序列与seq id no:121所示氨基酸序列具有至少70％序列相同性。9.如权利要求1
‑
8中任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子能够抑制il
‑
11介导的信号传导。10.一种任选分离的抗原结合分子，其包含(i)权利要求1
‑
9中任一项所述的抗原结合分子，和(ii)能够结合除il
‑
11以外的抗原的抗原结合分子。11.如权利要求1
‑
10中任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子能够抑制il
‑
11或包含il
‑
11的复合物与il
‑
11受体之间的相互作用。12.一种嵌合抗原受体(car)，其包含权利要求1
‑
11中任一项所述的抗原结合分子。13.任选分离的一种核酸，或多种核酸，其编码权利要求1
‑
11中任一项所述的抗原结合分子或权利要求12所述的car。14.一种表达载体，或多种表达载体，其包含权利要求13所述的一种核酸或多种核酸。15.一种细胞，其包含权利要求1
‑
11中任一项所述的抗原结合分子、权利要求12所述的car、权利要求13所述的一种核酸或多种核酸或权利要求14所述的一种表达载体或多种表达载体。16.一种方法，包括在适合从一种或多种核酸或一种或多种表达载体表达抗原结合分子或car的条件下培养细胞，所述细胞包含权利要求13所述的一种核酸或多种核酸或权利要求14所述的一种表达载体或多种表达载体。17.一种组合物，其包含权利要求1
‑
11中任一项所述的抗原结合分子、权利要求12所述的car、权利要求13所述的一种核酸或多种核酸、权利要求14所述的一种表达载体或多种表达载体或权利要求15所述的细胞。18.权利要求1
‑
11中任一项所述的抗原结合分子、权利要求12所述的car、权利要求13所述的一种核酸或多种核酸、权利要求14所述的一种表达载体或多种表达载体、权利要求15所述的细胞或权利要求17所述的组合物，用于医学治疗或预防方法中。19.权利要求1
‑
11中任一项所述的抗原结合分子、权利要求12所述的car、权利要求13所述的一种核酸或多种核酸、权利要求14所述的一种表达载体或多种表达载体、权利要求15所述的细胞或权利要求17所述的组合物，用于纤维化、特征在于纤维化的疾病、癌症、炎症或特征在于炎症的疾病、肝脏毒性、特征在于肝脏毒性的疾病、代谢疾病、消瘦症、肾损
伤、肾毒性或特征在于肾毒性的疾病的治疗或预防方法中。20.一种抑制il
‑
11介导的信号传导的方法，包括将表达il
‑
11的细胞与权利要求1
‑
11中任一项所述的抗原结合分子接触。21.一种任选分离的体外复合物，其包含与il
‑
11或含il
‑
11的复合物结合的权利要求1
‑
11中任一项所述的抗原结合分子。22.一种方法，包括将含有或怀疑含有il
‑
11或含il
‑
11的复合物的样品与权利要求1
‑
11中任一项所述的抗原结合分子接触，并检测所述抗原结合分子与il
‑
11或含il
‑
11的复合物的复合物形成。23.一种选择受试者或对受试者分层以供il
‑
11靶向药物治疗的方法，所述方法包括将该受试者的样品在体外与权利要求1
‑
11中任一项所述的抗原结合分子接触并检测所述抗原结合分子与il
‑
11或含il
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11的复合物的复合物形成。24.权利要求1
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11中任一项所述的抗原结合分子作为体外或体内诊断或预后试剂的用途。25.一种诸部件构成的试剂盒，其包含预定量的：权利要求1
‑
11中任一项所述的抗原结合分子、权利要求12所述的car、权利要求13所述的一种核酸或多种核酸、权利要求14所述的一种表达载体或多种表达载体、权利要求15所述的细胞或权利要求17所述的组合物。
技术总结
提供了能够结合IL


技术研发人员：S
受保护的技术使用者：新加坡国立大学 勃林格殷格翰国际有限公司
技术研发日：2019.06.13
技术公布日：2021/6/29