制备长脂肪链二酸衍生物的方法及其应用与流程

1.本发明涉及生物制药领域，具体地，本发明涉及制备长脂肪链二酸衍生物的方法及其应用。


背景技术：

2.长效胰岛素是按胰岛素作用时间分类，作用时间较长(24h或以上)的一类胰岛素，用于1型和2型糖尿病的治疗。通常每天只需1次注射，体内没有明显的作用高峰，主要是提供基础胰岛素。目前主流的长效胰岛素有甘精胰岛素，地特胰岛素和德谷胰岛素，后两者均通过采用长链脂肪酸修饰技术而获得。
3.虽然长脂肪链二酸衍生物可以通过蛋白修饰通用技术用于长效胰岛素药物的研发，而现有技术中，长脂肪链二酸衍生物的制备过程中，化学试剂成本高、选择性差、副产物多且难以提纯，难以实现工业放大；而适合工业化放大的方法存在产率低，反应时间长，后处理繁琐，制备成本耗费大，试剂损耗大，产生“固废”多，处理成本大的问题。
4.因此，对于长脂肪链二酸衍生物的制备方法仍需要进一步开发和改进。


技术实现要素：

5.本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明提供了一种全新的制备长脂肪链二酸衍生物的方法。
6.在本发明的第一方面，本发明提出了一种制备长脂肪链二酸衍生物的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：(1)使长脂肪链二酸发生环化反应，所述长脂肪链二酸具有式(a)所示的结构；(2)将长脂肪链二酸环化产物与苄醇反应，以便获得长脂肪链二酸一苄酯；(3)将所述长脂肪链二酸一苄酯与n
‑
羟基琥珀酰亚胺发生酯化反应，以便获得长脂肪链二酸琥珀酰亚胺苄酯；(4)将所述长脂肪链二酸琥珀酰亚胺苄酯与式(b)所示化合物进行亲核加成酰胺化反应，以便获得式(c)所示化合物；(5)将所述式(c)所示化合物再次与n
‑
羟基琥珀酰亚胺发生酯化反应，以便获得式(d)所示化合物；以及(6)将所述式(d)所示化合物进行脱苄基反应，以便获得式(e)所示化合物；
[0007][0008]
其中，x为6～32的整数；y为1～6的整数。
[0009]
根据本发明实施例的上述方法，原料廉价易得，制备成本少；产生杂质少，容易纯
化，同时反应操作简单和后处理方便，收率高，容易实现工业化；产生“固废”少，后处理成本小，环保压力低。
[0010]
根据本发明的实施例，上述方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：
[0011]
根据本发明的实施例，所述环化反应是在酸酐存在的条件进行的，优选地，所述酸酐为boc2o酸酐。发明人发现，所述环化反应在酸酐存在的条件下进行，尤其是在boc2o酸酐的条件下进行，长脂肪链二酸一苄酯的纯度显著提高。
[0012]
根据本发明的实施例，所述环化反应是在非质子极性试剂中进行的，例如，n,n
‑
二甲基甲酰胺、乙腈、丙酮和四氢呋喃中的一种或至少两种溶剂中进行的。发明人发现，非质子极性试剂，有利于催化剂的电离和由路易斯酸诱导的亲核加成环化反应的发生。
[0013]
根据本发明的实施例，所述环化反应是在无水氯化镁、六水氯化镁、氯化铁、氯化锆、dmap或浓硫酸中的一种或至少两种的催化下进行的。进而进一步提高长脂肪链二酸发生环化反应的转化率。
[0014]
发明人发现，长脂肪链二酸，如十六烷二酸的选择性较差，在反应的起始很容易形成双封端的杂质。本申请采用酸酐和上述催化剂催化先让长脂肪链二酸形成酸酐，后续再与苄醇反应得到目标产物，可有效提高反应的选择性。
[0015]
根据本发明的实施例，所述环化反应是在温度为30℃～80℃的条件下进行12～48小时。进而进一步提高了反应的转化率和降低了副产物的产生。
[0016]
根据本发明的实施例，相对于所述长脂肪链二酸，所述酸酐的用量是过量的。进而进一步提高了环化反应的转化率。
[0017]
根据本发明的实施例，所述的boc2o酸酐的摩尔用量相当于所述的长脂肪链二酸摩尔量的1.0～2.0倍。进而可保证反应的充分发生，降低长脂肪链二酸的用量，有效降低生产成本和后处理成本。
[0018]
根据本发明的实施例，无水氯化镁、六水氯化镁、氯化铁、氯化锆、dmap或浓硫酸中的一种或至少两种的摩尔用量相当于所述的长脂肪链二酸摩尔量的0.1～1.0倍。
[0019]
根据本发明的实施例，在步骤(2)中，所述反应是在非极性烃类溶剂中、在25℃～80℃的条件下进行12～48小时。
[0020]
根据本发明的实施例，所述非极性烃类溶剂为正己烷、石油醚、环己烷、正庚烷、正辛烷、甲基叔丁基醚、甲苯中的一种或至少两种。
[0021]
根据本发明的实施例，所述的苄醇的摩尔用量相当于所述的长脂肪链二酸摩尔量的1.0～3.0倍。
[0022]
在本申请的第(2)步反应中，引入苄基保护，后续直接氢气脱苄基即可，三氟乙酸的使用量很少，产生废酸水少。发明人发现，后续进行脱苄基，相比于脱叔丁基，更容易脱完全，且活性酯(hosu基团)在脱苄基过程中能保持较好的稳定性。
[0023]
根据本发明的实施例，在步骤(3)中，所述酯化反应是在四氢呋喃、乙酸乙酯和二氯甲烷中的一种或至少两种溶剂中，在
‑
10℃～20℃下反应2小时，15
‑
40℃继续反应3
‑
24小时的条件下进行的。
[0024]
根据本发明的实施例，进一步包括将长脂肪链二酸一苄酯与二环己基碳二亚胺(dcc)进行接触。进而进一步提高酯化反应转化率。羧基的dcc/hosu耦合反应起始阶段应该在适当的低温条件(
‑
10℃～20℃)下反应，防止反应过于剧烈导致放热增大而影响反应，如
杂质增多，后期稳定后可以回复到室温(15
‑
40℃)反应，时间一般在3
‑
24小时以内，超过24小时则导致活化酯(hosu基团)脱落而变回原料。
[0025]
根据本发明的实施例，所述的n
‑
羟基琥珀酰亚胺的摩尔用量相当于所述的长脂肪链二酸苄酯摩尔量的1.0～1.2倍。
[0026]
根据本发明的实施例，所述y为1、2或3。
[0027]
根据本发明的实施例，所述式(b)所示化合物为l
‑
谷氨酸
‑1‑
苄酯，结构为
[0028]
根据本发明的实施例，所述式(c)所示化合物为苄酯长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn，结构为
[0029]
根据本发明的实施例，所述式(d)所示化合物为苄基长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn,结构为
[0030]
根据本发明的实施例，所述式(e)所示化合物的结构为
[0031]
根据本发明的实施例，在步骤(4)中，所述反应是在溶剂为乙腈、n,n
‑
二甲基甲酰胺、四氢呋喃或n
‑
甲基吡咯烷酮中的一种或至少两种、温度为25℃～40℃的条件下进行6～24。
[0032]
根据本发明的实施例，所述的l
‑
谷氨酸
‑1‑
苄酯的摩尔用量相当于所述的长脂肪链二酸琥珀酰亚胺苄酯摩尔量的1.0～1.2倍。
[0033]
根据本发明的实施例，在步骤(5)中，进一步包括将苄酯长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn与二环己基碳二亚胺进行接触。
[0034]
根据本发明的实施例，在步骤(5)中，所述酯化反应是在溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丙酯中的一种或至少两种的、温度为
‑
10℃～10℃的条件进行2小时，后在温度为15℃～40℃继续反应3
‑
24小时。
[0035]
根据本发明的实施例，在步骤(6)中，所述脱苄基反应是在溶剂为丙酮、四氢呋喃中的一种或至少两种，催化剂为pd/c，温度为15～40℃的条件下进行1～5小时。发明人发现，脱苄基反应的温度过高或时间过长将会导致：1)产物脱掉活化酯(hosu基团)变为长脂肪链三酸衍生物；(2)同时也会由于hosu基团脱掉的过程中与酰胺基团处的亚胺反应产生内酰胺杂质；(3)谷氨酸片段的手性反转会导致对映异构体杂质的增多。
[0036]
在本发明的第二方面，本发明提出了一种制备降血糖蛋白药物的方法。根据本发
明的实施例，所述方法包括:采用长脂肪链二酸衍生物对蛋白进行修饰，以便获得所述降血糖蛋白药物，所述长脂肪链二酸衍生物是依据前面所述的方法获得。根据本发明实施例的方法所获得的降血糖蛋白药物，收率高、纯度高。
[0037]
根据本发明的实施例，所述降血糖蛋白药物包括选自胰岛素、glp
‑
1、胰岛素类似物和glp
‑
1类似物的至少之一。
[0038]
根据本发明的实施例，所述胰岛素类似物为德谷胰岛素。
[0039]
根据本发明的实施例，所述glp
‑
1类似物为利拉鲁肽。
[0040]
根据本发明的实施例，所述修饰为脂肪侧链修饰。
具体实施方式
[0041]
本发明在于克服现有技术的缺点和不足，提供一种制备长脂肪链二酸衍生物的方法，该方法原料试剂价廉易得、操作简便、产品相关杂质含量低、中间体纯化简单，收率高，产生“固废”少，环保压力低。所制备的长脂肪链二酸衍生物可以通过蛋白修饰通用技术用于长效胰岛素药物如德谷胰岛素、glp1类似物等药物的研发。
[0042]
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
[0043]
1)将长脂肪链二酸、boc2o酸酐、催化剂a和溶剂a制备得到长脂肪链酸酐中间体，其中boc2o酸酐稍过量，反应结束真空浓缩至干除掉未参与反应的boc2o酸酐得到固体粗品，粗品不经过提纯直接进行下一步反应；
[0044][0045]
2)往体系中加入溶剂b和苄醇置于30℃
‑
80℃中反应8
‑
24h，反应结束加入适量自来水并于室温搅拌，过滤收集沉淀，将沉淀置于单口烧瓶中并加入适量溶剂c于室温打浆，过滤收集固体沉淀，再将固体沉淀溶于适量二氯甲烷中打浆，过滤取滤液，减压蒸馏至干即可得到长脂肪链二酸苄酯；
[0046][0047]
3)将长脂肪链二酸苄酯溶解于溶剂d中，降温至
‑
10℃～20℃，加入n
‑
羟基琥珀酰亚胺和二环己基碳二亚胺，于
‑
10℃～20℃下继续反应2小时，恢复至15
‑
40℃继续反应3
‑
24小时，过滤除掉沉淀，减压蒸馏浓缩至干得固体，重结晶，用溶剂e淋洗滤饼，得到长脂肪链二酸琥珀酰亚胺苄酯；
[0048][0049]
4)将长脂肪链二酸琥珀酰亚胺苄酯与l
‑
谷氨酸
‑1‑
苄酯溶解于溶剂f中，在有机碱存在的条件下置于25℃～40℃过夜搅拌，依次用0.5
‑
2.0mol/l盐酸溶液和水，所述盐酸溶液和水的体积比为1：5～1：10，降温至
‑
10℃～10℃中搅拌析晶，过滤并用适量水洗滤饼至
中性，即可得到苄基长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn；
[0050][0051]
5)将苄基长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn溶解于溶剂c中，降温至
‑
10℃～10℃，加入n
‑
羟基琥珀酰亚胺和二环己基碳二亚胺，于
‑
10℃～10℃下继续反应2小时，恢复至15℃～40℃继续反应3
‑
24小时，过滤除掉沉淀，减压蒸馏浓缩至干得固体，重结晶，过滤，用溶剂e淋洗滤饼，得到苄基长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn；
[0052][0053]
6)将苄基长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn溶于溶剂g中，加入适量三氟乙酸和适量10％pd/c，于15～40℃进行氢化脱苄反应，反应结束过滤除掉钯碳，减压蒸馏浓缩至干得到固体粗品，加入适量溶剂g和溶剂e进行打浆，抽滤，用溶剂e淋洗滤饼，得到长脂肪链二酸衍生物。
[0054][0055]
其中，
[0056]
步骤1)中所示的溶剂a为n,n
‑
二甲基甲酰胺、乙腈、丙酮和四氢呋喃中的一种或至少两种；
[0057]
步骤1)中所示的催化剂a为无水氯化镁、六水氯化镁、氯化铁、氯化锆、dmap或浓硫酸中的一种或至少两种；
[0058]
步骤2)中溶剂b为正己烷、石油醚、环己烷、正庚烷、正辛烷、甲基叔丁基醚、甲苯等非极性烃类溶剂中的一种或至少两种；
[0059]
步骤2)中溶剂c为二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丙酯中的一种或至少两种；
[0060]
步骤3)中溶剂d为四氢呋喃、乙酸乙酯和二氯甲烷中的一种或至少两种；
[0061]
步骤3)中溶剂e为正庚烷、正己烷、环己烷、石油醚或甲基叔丁基醚中的一种或至少两种；
[0062]
步骤4)中的溶剂f为乙腈、n,n
‑
二甲基甲酰胺、四氢呋喃或n
‑
甲基吡咯烷酮中的一种或至少两种；
[0063]
步骤4)中的有机碱为三乙胺、吡啶、dmap、碳酸钾或氢氧化钾中的一种或至少两种；
[0064]
步骤6)中的溶剂g为丙酮、四氢呋喃中的一种或至少两种；
[0065]
步骤6)中的pd/c是催化剂，其中钯含量为5～15％；
[0066]
其中，
[0067]
步骤1)中所述的将长脂肪链二酸、boc2o酸酐和催化剂a反应制备的长脂肪链酸酐中间体的反应温度为30℃～80℃；反应时间为12～48小时；
[0068]
步骤2)中所述的制备的长脂肪链酸酐中间体与苄醇的反应温度为25℃～80℃；反应时间为12～48小时；
[0069]
步骤3)中所述的降温的温度为
‑
10℃～20℃；
[0070]
步骤3)中所述的恢复至15～40℃继续反应的时间为3
‑
24小时；
[0071]
步骤3)中所述的重结晶所用的溶剂为混合溶剂，其中极性溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇中一种或至少两种，非极性溶剂为正庚烷、正己烷、环己烷、甲基叔丁基醚中的一种或至少两种；
[0072]
步骤4)中所述的反应温度为25℃～40℃，反应时间为6～24小时；
[0073]
步骤4)中所述的盐酸溶液的浓度为0.5
‑
2m；
[0074]
步骤4)中所述的降温的温度为
‑
10℃～10℃，其中析晶搅拌的时间为1.0～3.0h；
[0075]
步骤5)中所述的降温的温度为
‑
10～10℃，恢复至15℃～40℃继续反应的时间为3
‑
24h；
[0076]
步骤5)中所述的重结晶溶剂为乙醇、叔丁醇、异丙醇中的一种或至少两种；
[0077]
步骤6)中所述的反应温度为15～40℃，氢化脱苄时间为1～5小时；
[0078]
步骤6)中所述的混合溶剂打浆的时间为1～3小时。
[0079]
其中，
[0080]
步骤1)中所述的boc2o酸酐的摩尔用量相当于所述的长脂肪链二酸摩尔量的1.0～2.0倍；
[0081]
步骤1)中所述的催化剂a的摩尔用量相当于所述的长脂肪链二酸摩尔量的0.1～1.0倍；
[0082]
步骤1)中所述的溶剂a的用量按其与所述的长脂肪链二酸体积质量比8ml～20ml:1g计算；
[0083]
步骤2)中所述的苄醇的摩尔用量相当于所述的长脂肪链二酸摩尔量的1.0～3.0倍；
[0084]
步骤2)中所述的溶剂b的用量按其与所述的长脂肪链二酸体积质量比8ml～20ml:1g计算；
[0085]
步骤2)中所述的溶剂c的用量按其与所述的长脂肪链二酸体积质量比8ml～20ml:1g计算；
[0086]
步骤2)中所述的自来水的用量按其与所述的长脂肪链二酸体积质量比20ml～40ml:1g计算；
[0087]
步骤3)中所述的n
‑
羟基琥珀酰亚胺的摩尔用量相当于所述的长脂肪链二酸苄酯摩尔量的1.0～1.2倍；
[0088]
步骤3)中所述的二环己基碳二亚胺的摩尔用量相当于所述的长脂肪链二酸苄酯摩尔量的1.0～1.4倍；
[0089]
步骤3)中所述的溶剂d的用量按其与所述的长脂肪链二酸苄酯体积质量比10ml～20ml:1g计算；
[0090]
步骤3)中所述的重结晶溶剂用量按其与所述的长脂肪链二酸苄酯体积质量比10ml～20ml:1g计算，其中极性溶剂与非极性溶剂的体积比为1:1～2.0；
[0091]
步骤3)中所述的淋洗用的剂e的用量按其与所述的长脂肪链二酸苄酯体积质量比
2ml～5ml:1g计算；
[0092]
步骤4)中所述的l
‑
谷氨酸
‑1‑
苄酯的摩尔用量相当于所述的长脂肪链二酸琥珀酰亚胺苄酯摩尔量的1.0～1.2倍；
[0093]
步骤4)中所述的有机碱的摩尔用量相当于所述的长脂肪链二酸琥珀酰亚胺苄酯摩尔量的0.8～1.5倍；
[0094]
步骤4)中所述的溶剂f的用量按其与所述的长脂肪链二酸琥珀酰亚胺苄酯体积质量比6ml～20ml:1g计算；
[0095]
步骤4)中所述的盐酸溶液的用量按其与所述的长脂肪链二酸琥珀酰亚胺苄酯体积质量比9ml～15ml:1g计算；
[0096]
步骤4)中所述的低温析晶时加入自来水的用量按其与所述的长脂肪链二酸琥珀酰亚胺苄酯体积质量比6ml～15ml:1g计算；
[0097]
步骤5)中所述的n
‑
羟基琥珀酰亚胺摩尔用量相当于所述的苄基长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn摩尔量的1.0～1.2倍；
[0098]
步骤5)中所述的n
‑
羟基琥珀酰亚胺摩尔用量相当于所述的苄基长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn摩尔量的1.0～1.4倍；
[0099]
步骤5)中所述溶剂c的用量按其与所述的苄基长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn体积质量比8ml～20ml:1g计算；
[0100]
步骤5)中所述重结晶溶剂的用量按其与所述的苄基长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn体积质量比10ml～20ml:1g计算；
[0101]
步骤5)中所述淋洗用的溶剂e的用量按其与所述的苄基长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn体积质量比2ml～5ml:1g计算；
[0102]
步骤6)中所述的10％pd/c的用量相当于所述的苄基长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn质量的5％～15％计算；
[0103]
步骤6)中所述的三氟乙酸的用量相当于所述的苄基长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn质量的0.05％～1.0％计算；
[0104]
步骤6)中所述溶剂g的用量按其与所述的苄基长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn体积质量比15ml～25ml:1g计算；
[0105]
步骤6)中所述的用于打浆用的混合溶剂(溶剂g和溶剂e)的用量按其与所述的苄基长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn体积质量比15ml～25ml:1g计算，其中溶剂g与溶剂e的体积比为1:2.0～4.0；
[0106]
经统计，步骤(2)中长脂肪链二酸苄酯收率35
‑
45％，纯度95
‑
98％；步骤(3)长脂肪链二酸琥珀酰亚胺苄酯收率80
‑
95％，纯度95
‑
99％；步骤(4)苄基长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn收率95
‑
99％，纯度95
‑
97％；步骤(5)苄基长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn收率80
‑
95％，纯度95
‑
99％；步骤(6)长脂肪链二酸衍生物收率90
‑
98％，纯度95
‑
99％。
[0107]
用于制备的德谷胰岛素api收率55
‑
68％，纯度99
‑
99.80％。
[0108]
下面将结合具体实施例对本发明进行进一步解释说明。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0109]
实施例1
[0110]
十六烷二酸一苄酯的合成(a)
[0111][0112]
将十六烷二酸(10.0g，34.91mmol)、无水氯化镁(0.34g，3.57mmol)、boc2o酸酐(7.62g，34.91mmol)和100ml四氢呋喃加入250ml单口烧瓶中置于40℃搅拌反应24h，反应结束减压蒸馏除去未参与反应的boc2o酸酐和反应溶剂，得到十六烷酸酐固体粗品，加入苄醇(9.44g，87.36mmol)和70ml四氢呋喃，置于40℃中搅拌反应24h，往体系中加入350ml自来水，于室温下搅拌反应0.5小时析出固体，过滤收集沉淀，加入180ml正辛烷，置室温下打浆1.0h，过滤，20ml正辛烷淋洗湿品，得到湿品，湿品中加入180ml二氯甲烷，室温打浆1.0h，过滤收集滤液，置于35℃中真空浓缩至干得到固体，置于40℃真空干燥至恒重，得到十六烷二酸一苄酯白色固体5.26g，收率40％，hplc检测纯度96.81％。
[0113]
十六烷酸酐固体粗品ms测试：esi
‑
ms m/z：269.2[m h]

，与理论值相符。
[0114]
十六烷二酸一苄酯ms测试：esi
‑
ms m/z：377.2[m h]

，与理论值符合
[0115]
十六烷二酸一苄酯的合成(b)
[0116]
将十六烷二酸(10.0g，34.91mmol)、无水氯化镁(0.34g，3.57mmol)、boc2o酸酐(7.62g，34.91mmol)和100ml四氢呋喃加入250ml单口烧瓶中置于40℃搅拌反应24h，反应结束减压蒸馏除去未参与反应的boc2o酸酐和反应溶剂，得到固体粗品，加入苄醇(9.44g，87.36mmol)和70ml四氢呋喃，置于80℃中搅拌反应24h，往体系中加入350ml自来水，于室温下搅拌反应0.5小时析出固体，过滤收集沉淀，加入180ml正辛烷，置室温下打浆1.0h，过滤，20ml正辛烷淋洗湿品，得到湿品，湿品中加入180ml二氯甲烷，室温打浆1.0h，过滤收集滤液，置于35℃中真空浓缩至干得到固体，置于40℃真空干燥至恒重，得到十六烷二酸一苄酯白色固体5.00g，收率38％，hplc检测纯度97.26％。
[0117]
esi
‑
ms m/z：377.2[m h]

，与理论值符合
[0118]
十六烷二酸一苄酯的合成(c)
[0119]
将十六烷二酸(10.0g，34.91mmol)、无水氯化镁(0.34g，3.57mmol)、boc2o酸酐(6.10g，27.93mmol)和100ml四氢呋喃加入250ml单口烧瓶中置于40℃搅拌反应24h，反应结束减压蒸馏除去未参与反应的boc2o酸酐和反应溶剂，得到固体粗品，加入苄醇(9.44g，87.36mmol)和70ml四氢呋喃，置于40℃中搅拌反应24h，往体系中加入350ml自来水，于室温下搅拌反应0.5小时析出固体，过滤收集沉淀，加入180ml正辛烷，置室温下打浆1.0h，过滤，20ml正辛烷淋洗湿品，得到湿品，湿品中加入180ml二氯甲烷，室温打浆1.0h，过滤收集滤液，置于35℃中真空浓缩至干得到固体，置于40℃真空干燥至恒重，得到十六烷二酸一苄酯白色固体3.25g，收率24.71，hplc检测纯度96.50％。
[0120]
esi
‑
ms m/z：377.2[m h]

，与理论值符合
[0121]
十六烷二酸一苄酯的合成(d)
[0122]
将十六烷二酸(10.0g，34.91mmol)、无水氯化镁(0.34g，3.57mmol)、boc2o酸酐(11.42g，52.37mmol)和100ml四氢呋喃加入250ml单口烧瓶中置于40℃搅拌反应24h，反应
结束减压蒸馏除去未参与反应的boc2o酸酐和反应溶剂，得到固体粗品，加入苄醇(9.44g，87.36mmol)和70ml四氢呋喃，置于40℃中搅拌反应24h，往体系中加入350ml自来水，于室温下搅拌反应0.5小时析出固体，过滤收集沉淀，加入180ml正辛烷，置室温下打浆1.0h，过滤，20ml正辛烷淋洗湿品，得到湿品，湿品中加入180ml二氯甲烷，室温打浆1.0h，过滤收集滤液，置于35℃中真空浓缩至干得到固体，置于40℃真空干燥至恒重，得到十六烷二酸一苄酯白色固体5.70g，收率43.35％，hplc检测纯度96.30％。
[0123]
esi
‑
ms m/z：377.2[m h]

，与理论值符合
[0124]
十六烷二酸一苄酯的合成(e)
[0125]
将十六烷二酸(10.0g，34.91mmol)、无水氯化镁(0.34g，3.57mmol)、boc2o酸酐(11.42g，52.37mmol)和100ml四氢呋喃加入250ml单口烧瓶中置于40℃搅拌反应24h，反应结束减压蒸馏除去未参与反应的boc2o酸酐和反应溶剂，得到固体粗品，加入苄醇(4.15g，38.40mmol)和70ml四氢呋喃，置于40℃中搅拌反应24h，往体系中加入350ml自来水，于室温下搅拌反应0.5小时析出固体，过滤收集沉淀，加入180ml正辛烷，置室温下打浆1.0h，过滤，20ml正辛烷淋洗湿品，得到湿品，湿品中加入180ml二氯甲烷，室温打浆1.0h，过滤收集滤液，置于35℃中真空浓缩至干得到固体，置于40℃真空干燥至恒重，得到十六烷二酸一苄酯白色固体4.62g，收率35.16％，hplc检测纯度95.68％。
[0126]
esi
‑
ms m/z：377.2[m h]

，与理论值符合
[0127]
十六烷二酸一苄酯的合成(f)
[0128]
将十六烷二酸(10.0g，34.91mmol)、无水氯化镁(0.34g，3.57mmol)、boc2o酸酐(11.42g，52.37mmol)和100ml四氢呋喃加入250ml单口烧瓶中置于40℃搅拌反应24h，反应结束减压蒸馏除去未参与反应的boc2o酸酐和反应溶剂，得到固体粗品，加入苄醇(9.44g，87.36mmol)和70ml四氢呋喃，置于40℃中搅拌反应24h，真空浓缩至干得到固体，加入180ml正辛烷，置室温下打浆1.0h，过滤，20ml正辛烷淋洗湿品，得到湿品，湿品中加入180ml二氯甲烷，室温打浆1.0h，过滤收集滤液，置于35℃中真空浓缩至干得到固体，置于40℃真空干燥至恒重，得到十六烷二酸一苄酯白色固体2.61g，收率19.85％，hplc检测纯度90.15％。
[0129]
esi
‑
ms m/z：377.2[m h]

，与理论值符合
[0130]
实施例2十六烷二酸琥珀酰亚胺苄酯的合成
[0131][0132]
将十六烷二酸一苄酯(10.0g，25.56mmol)和130ml二氯甲烷加入250ml单口烧瓶中，降温至
‑
5℃，加入n
‑
羟基琥珀酰亚胺(3.24g，28.12mmol)和二环己基碳二亚胺(6.32g，30.67mmol)，于
‑
5℃下继续反应2小时，恢复至30℃继续反应16小时，过滤除掉沉淀，蒸馏浓缩至干得到固体粗品，加入60ml异丙醇和60ml正庚烷重结晶，过滤并用20ml正庚烷淋洗湿品，减压干燥至恒重，得到十六烷二酸琥珀酰亚胺苄酯白色固体11.62g，收率92.35％，hplc检测纯度为98.80％。
[0133]
esi
‑
ms m/z：474.1[m h]

，与理论值符合
[0134]
实施例3苄基十六烷二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn的合成
[0135][0136]
将十六烷二酸琥珀酰亚胺苄酯(10.0g，21.11mmol)与l
‑
谷氨酸
‑1‑
苄酯(5.26g，22.17mmol)溶解于100ml乙腈中，加入三乙胺(3.2g，31.67mmol)置于30℃搅拌12小时，反应结束加入120ml 1m盐酸溶液和90ml自来水，降温至
‑
5℃中搅拌析晶2.0小时，过滤并用适量水洗滤饼至中性，滤饼置于45℃中真空干燥至恒重，即可得到苄基十六烷二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn淡黄色固体12.09g，收率96.12％，hplc检测纯度为97.53％。
[0137]
esi
‑
ms m/z：596.4[m h]

，与理论值符合
[0138]
实施例4苄基十六烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn的合成
[0139][0140]
将苄基十六烷二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn(10.0g，16.79mmol)溶解于130ml二氯甲烷中，降温至
‑
5℃，加入n
‑
羟基琥珀酰亚胺(2.13g，18.47mmol)和二环己基碳二亚胺(4.15g，20.14mmol)，于
‑
5℃下继续反应2小时，恢复至30℃继续反应8小时，过滤除掉沉淀，减压蒸馏浓缩至干得固体，加入120ml无水乙醇重结晶，过滤，用20ml正庚烷淋洗滤饼，滤饼置于45℃中真空干燥至恒重，即可得到苄基十六烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn白色固体10.38g，收率89.26％，hplc检测纯度为98.35％。
[0141]
esi
‑
ms m/z：693.4[m h]

，与理论值符合
[0142]
实施例5十六烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)的合成
[0143][0144]
将苄基十六烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn(10g，14.43mmol)溶于200ml丙酮中，加入三氟乙酸(0.1g，0.8mmol)和0.8g 10％pd/c，置于30℃进行氢化脱苄反应3.0小时，反应结束过滤除掉钯碳，减压蒸馏浓缩至干得到固体粗品，加入55ml丙酮和138ml正庚烷于室温打浆2.0小时，抽滤，用30ml正庚烷淋洗滤饼，滤饼置于40℃中真空干燥至恒重，即可得到十六烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)白色固体7.05g，收率95.34％，hplc检测纯度为98.78％。
[0145]
esi
‑
ms m/z：513.3[m h]

，与理论值符合
[0146]
实施例6十六烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)在德谷胰岛素中的制备应用
[0147]
将des(b30)人胰岛素500mg溶解于10ml水中，加入三乙胺调体系ph为11.00。按照十六烷二酰基l
‑
glu(osu)：des(b30)人胰岛素摩尔比1.2：1称取十六烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)53mg，溶解于2ml nmp(n
‑
甲基吡咯烷酮)中，随后加入人胰岛素溶液中，搅拌30分钟后，通过添加6.5ml稀hcl调节体系ph为9.0的0.2m乙醇胺终止反应。hplc分析表明形成了65％的德谷胰岛素：lysb29(n
‑
ε
‑
十六烷二酰基
‑
γ
‑
谷氨酰基)脱(b30)人胰岛素，纯化后可得纯度高于99.60％的德谷胰岛素。
[0148]
esi
‑
ms m/z：1526.8[m 4h]
4
,1221.7[m 5h]
5
，1218.1[m 6h]
6
，与理论值符合
[0149]
实施例7十四烷二酸一苄酯的合成
[0150][0151]
将十四烷二酸(10.0g，38.70mmol)、无水氯化镁(0.37g，3.87mmol)、boc2o酸酐(12.67g，58.05mmol)和100ml四氢呋喃加入250ml单口烧瓶中置于40℃搅拌反应24h，反应结束减压蒸馏除去未参与反应的boc2o酸酐和反应溶剂，得到固体粗品，加入苄醇(10.46g，96.84mmol)和70ml四氢呋喃，置于40℃中搅拌反应24h，往体系中加入350ml自来水，于室温下搅拌反应0.5小时析出固体，过滤收集沉淀，加入180ml正辛烷，置室温下打浆1.0h，过滤，20ml正辛烷淋洗湿品，得到湿品，湿品中加入180ml二氯甲烷，室温打浆1.0h，过滤收集滤液，置于35℃中真空浓缩至干得到固体，置于40℃真空干燥至恒重，得到十四烷二酸一苄酯白色固体5.98g，收率44.36％，hplc检测纯度97.63％。
[0152]
esi
‑
ms m/z：349.3[m h]

，与理论值符合
[0153]
实施例8十四烷二酸琥珀酰亚胺苄酯的合成
[0154][0155]
将十四烷二酸一苄酯(10.0g，28.70mmol)和130ml二氯甲烷加入250ml单口烧瓶中，降温至
‑
5℃，加入n
‑
羟基琥珀酰亚胺(3.63g，31.57mmol)和二环己基碳二亚胺(7.10g，34.44mmol)，于
‑
5℃下继续反应2小时，恢复至30℃继续反应16小时，过滤除掉沉淀，蒸馏浓缩至干得到固体粗品，加入60ml异丙醇和60ml正庚烷重结晶，过滤并用20ml正庚烷淋洗湿品，减压干燥至恒重，得到十四烷二酸琥珀酰亚胺苄酯固体11.53g，收率90.12％，hplc检测纯度为96.75％。
[0156]
esi
‑
ms m/z：446.4[m h]

，与理论值符合
[0157]
实施例9苄基十四烷二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn的合成
[0158][0159]
将十四二酸琥珀酰亚胺苄酯(10.0g，22.44mmol)与l
‑
谷氨酸
‑1‑
苄酯(5.59g，23.56mmol)溶解于100ml乙腈中，加入三乙胺(3.41g，33.66mmol)置于30℃搅拌12小时，反应结束一次加入120ml 1m盐酸溶液和90ml自来水，降温至
‑
5℃中搅拌析晶2.0小时，过滤并用适量水洗滤饼至中性，滤饼置于45℃中真空干燥至恒重，即可得到苄基十四烷二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn淡黄色固体12.00g，收率94.23％，hplc检测纯度为96.60％。
[0160]
esi
‑
ms m/z：568.2[m h]

，与理论值符合
[0161]
实施例10苄基十四烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn的合成
[0162][0163]
将苄基十四烷二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn(10.0g，17.61mmol)溶解于130ml二氯甲烷中，降温至
‑
5℃，加入n
‑
羟基琥珀酰亚胺(2.23g，19.37mmol)和二环己基碳二亚胺(4.36g，21.13mmol)，于
‑
5℃下继续反应2小时，恢复至30℃继续反应8小时，过滤除掉沉淀，减压蒸馏浓缩至干得固体，加入120ml无水乙醇重结晶，过滤，用20ml正庚烷淋洗滤饼，滤饼置于45℃中真空干燥至恒重，即可得到苄基十四烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn白色固体10.21g，收率87.23％，hplc检测纯度为98.16％。
[0164]
esi
‑
ms m/z：665.4[m h]

，与理论值符合
[0165]
实施例11十四烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)的合成
[0166][0167]
将苄基十四烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn(10g，15.04mmol)溶于200ml丙酮中，加入三氟乙酸(0.1g，0.8mmol)和0.8g 10％pd/c，置于30℃进行氢化脱苄反应3.0小时，反应结束过滤除掉钯碳，减压蒸馏浓缩至干得到固体粗品，加入55ml丙酮和138ml正庚烷于室温打浆2.0小时，抽滤，用30ml正庚烷淋洗滤饼，滤饼置于40℃中真空干燥至恒重，即可得到十四烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)白色固体6.72g，收率92.18％，hplc检测纯度为98.12％。
[0168]
esi
‑
ms m/z：485.4[m h]

，与理论值符合
[0169]
实施例12十四烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)在胰岛素类似物中的制备应用
[0170]
将des(b30)人胰岛素500mg溶解于10ml水中，加入三乙胺调体系ph为11.00。按照十四烷二酰基l
‑
glu(osu)：des(b30)人胰岛素摩尔比1.2：1称取十四烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)50.96mg于2ml nmp(n
‑
甲基吡咯烷酮)中，随后加入人胰岛素溶液中，30分钟后，通过添加6.5ml稀hcl调节体系ph为9.0的0.2m乙醇胺终止反应。hplc分析表明形成了68％的德谷胰岛素：lysb29(n
‑
ε
‑
十四烷二酰基
‑
γ
‑
谷氨酰基)脱(b30)人胰岛素，纯化后可得纯度高于99.60％的胰岛素类似物。
[0171]
esi
‑
ms m/z：1519.8[m 4h]
4
,1216.1[m 5h]
5
，1013.2[m 6h]
6
，与理论值符合
[0172]
实施例13十八烷二酸一苄酯的合成
[0173][0174]
将十八烷二酸(10.0g，31.80mmol)、无水氯化镁(0.30g，3.18mmol)、boc2o酸酐(10.41g，47.70mmol)和100ml四氢呋喃加入250ml单口烧瓶中置于40℃搅拌反应24h，反应结束减压蒸馏除去未参与反应的boc2o酸酐和反应溶剂，得到固体粗品，加入苄醇(8.59g，79.50mmol)和70ml四氢呋喃，置于40℃中搅拌反应24h，往体系中加入350ml自来水，于室温
下搅拌反应0.5小时析出固体，过滤收集沉淀，加入180ml正辛烷，置室温下打浆1.0h，过滤，20ml正辛烷淋洗湿品，得到湿品，湿品中加入180ml二氯甲烷，室温打浆1.0h，过滤收集滤液，置于35℃中真空浓缩至干得到固体，置于40℃真空干燥至恒重，得到十八烷二酸一苄酯白色固体4.91g，收率38.13％，hplc检测纯度97.43％。
[0175]
esi
‑
ms m/z：405.3[m h]

，与理论值符合
[0176]
实施例14十八烷二酸琥珀酰亚胺苄酯的合成
[0177][0178]
将十八烷二酸一苄酯(10.0g，24.72mmol)和130ml二氯甲烷加入250ml单口烧瓶中，降温至
‑
5℃，加入n
‑
羟基琥珀酰亚胺(3.13g，27.19mmol)和二环己基碳二亚胺(6.12g，29.66mmol)，于
‑
5℃下继续反应2小时，恢复至30℃继续反应16小时，过滤除掉沉淀，蒸馏浓缩至干得到固体粗品，加入60ml异丙醇和60ml正庚烷重结晶，过滤并用20ml正庚烷淋洗湿品，减压干燥至恒重，得到十八烷二酸琥珀酰亚胺苄酯固体11.28g，收率91.00％，hplc检测纯度为98.10％。
[0179]
esi
‑
ms m/z：502.3[m h]

，与理论值符合
[0180]
实施例15苄基十八烷二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn的合成
[0181][0182]
将十八二酸琥珀酰亚胺苄酯(10.0g，19.93mmol)与l
‑
谷氨酸
‑1‑
苄酯(4.97g，20.93mmol)溶解于100ml乙腈中，加入三乙胺(3.03g，29.90mmol)置于30℃搅拌12小时，反应结束一次加入120ml 1m盐酸溶液和90ml自来水，降温至
‑
5℃中搅拌析晶2.0小时，过滤并用适量水洗滤饼至中性，滤饼置于45℃中真空干燥至恒重，即可得到苄基十八烷二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn淡黄色固体12.00g，收率96.52％，hplc检测纯度为95.62％。
[0183]
esi
‑
ms m/z：624.6[m h]

，与理论值符合
[0184]
实施例16苄基十八烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn的合成
[0185][0186]
将苄基十八烷二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn(10.0g，16.03mmol)溶解于130ml二氯甲烷中，降温至
‑
5℃，加入n
‑
羟基琥珀酰亚胺(2.03g，17.63mmol)和二环己基碳二亚胺(3.97g，19.24mmol)，于
‑
5℃下继续反应2小时，恢复至30℃继续反应8小时，过滤除掉沉淀，减压蒸馏浓缩至干得固体，加入120ml无水乙醇重结晶，过滤，用20ml正庚烷淋洗滤饼，滤饼置于45℃中真空干燥至恒重，即可得到苄基十八烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn白色固体9.59g，收率83.00％，hplc检测纯度为97.85％。
[0187]
esi
‑
ms m/z：721.2[m h] ，与理论值符合
[0188]
实施例17十八烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)的合成
[0189][0190]
将苄基十八烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn(10g，13.87mmol)溶于200ml丙酮中，加入三氟乙酸(0.1g，0.8mmol)和0.8g 10％pd/c，置于30℃进行氢化脱苄反应3.0小时，反应结束过滤除掉钯碳，减压蒸馏浓缩至干得到固体粗品，加入55ml丙酮和138ml正庚烷于室温打浆2.0小时，抽滤，用30ml正庚烷淋洗滤饼，滤饼置于40℃中真空干燥至恒重，即可得到十八烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)白色固体7.16g，收率95.48％，hplc检测纯度为97.83％。
[0191]
esi
‑
ms m/z：541.5[m h]

，与理论值符合
[0192]
实施例18十八烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)在胰岛素类似物中的制备应用
[0193]
将des(b30)人胰岛素500mg溶解于10ml水中，加入三乙胺调体系ph为11.00。按照十八烷二酰基l
‑
glu(osu)：des(b30)人胰岛素摩尔比1.2：1称取十八烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)56.87mg于2ml nmp(n
‑
甲基吡咯烷酮)中，随后加入人胰岛素溶液中，30分钟后，通过添加6.5ml稀hcl调节体系ph为9.0的0.2m乙醇胺终止反应。hplc分析表明形成了66％的德谷胰岛素：lysb29(n
‑
ε
‑
十八烷二酰基
‑
γ
‑
谷氨酰基)脱(b30)人胰岛素，纯化后可得纯度高于99.60％的胰岛素类似物
[0194]
esi
‑
ms m/z：1533.6[m 4h]
4
,1227.1[m 5h]
5
，1022.7[m 6h]
6
，与理论值符合
[0195]
实施例19二十烷二酸一苄酯的合成
[0196][0197]
将二十烷二酸(10.0g，29.20mmol)、无水氯化镁(0.27g，2.92mmol)、boc2o酸酐(9.56g，43.80mmol)和100ml四氢呋喃加入250ml单口烧瓶中置于40℃搅拌反应24h，反应结束减压蒸馏除去未参与反应的boc2o酸酐和反应溶剂，得到固体粗品，加入苄醇(7.89g，73mmol)和70ml四氢呋喃，置于40℃中搅拌反应24h，往体系中加入350ml自来水，于室温下搅拌反应0.5小时析出固体，过滤收集沉淀，加入180ml正辛烷，置室温下打浆1.0h，过滤，20ml正辛烷淋洗湿品，得到湿品，湿品中加入180ml二氯甲烷，室温打浆1.0h，过滤收集滤液，置于35℃中真空浓缩至干得到固体，置于40℃真空干燥至恒重，得到二十烷二酸一苄酯白色固体4.36g，收率34.53％，hplc检测纯度97.23％。
[0198]
esi
‑
ms m/z：433.2[m h]

，与理论值符合
[0199]
实施例20二十烷二酸琥珀酰亚胺苄酯的合成
[0200][0201]
将二十烷二酸一苄酯(10.0g，23.11mmol)和130ml二氯甲烷加入250ml单口烧瓶
中，降温至
‑
5℃，加入n
‑
羟基琥珀酰亚胺(2.93g，25.42mmol)和二环己基碳二亚胺(5.72g，27.73mmol)，于
‑
5℃下继续反应2小时，恢复至30℃继续反应16小时，过滤除掉沉淀，蒸馏浓缩至干得到固体粗品，加入60ml异丙醇和60ml正庚烷重结晶，过滤并用20ml正庚烷淋洗湿品，减压干燥至恒重，得到二十烷二酸酸琥珀酰亚胺苄酯固体11.03g，收率90.18％，hplc检测纯度为98.78％。
[0202]
esi
‑
ms m/z：530.6[m h]

，与理论值符合
[0203]
实施例21苄基二十烷二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn的合成
[0204][0205]
将二十烷二酸琥珀酰亚胺苄酯(10.0g，18.88mmol)与l
‑
谷氨酸
‑1‑
苄酯(4.70g，19.82mmol)溶解于100ml乙腈中，加入三乙胺(2.87g，28.32mmol)置于30℃搅拌12小时，反应结束一次加入120ml 1m盐酸溶液和90ml自来水，降温至
‑
5℃中搅拌析晶2.0小时，过滤并用适量水洗滤饼至中性，滤饼置于45℃中真空干燥至恒重，即可得到苄基二十烷二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn淡黄色固体12.31g，收率97.00％，hplc检测纯度为96.03％。
[0206]
esi
‑
ms m/z：651.7[m h]

，与理论值符合
[0207]
实施例22苄基二十烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn的合成
[0208][0209]
将苄基二十烷二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn(10.0g，15.34mmol)溶解于130ml二氯甲烷中，降温至
‑
5℃，加入n
‑
羟基琥珀酰亚胺(1.94g，16.84mmol)和二环己基碳二亚胺(3.80g，18.41mmol)，于
‑
5℃下继续反应2小时，恢复至30℃继续反应8小时，过滤除掉沉淀，减压蒸馏浓缩至干得固体，加入120ml无水乙醇重结晶，过滤，用20ml正庚烷淋洗滤饼，滤饼置于45℃中真空干燥至恒重，即可得到苄基二十烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn白色固体9.77g，收率85.00％，hplc检测纯度为98.20％。
[0210]
esi
‑
ms m/z：721.2[m h]

，与理论值符合
[0211]
实施例23二十烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)的合成
[0212][0213]
将苄基二十烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn(10g，13.35mmol)溶于200ml丙酮中，加入三氟乙酸(0.1g，0.8mmol)和0.8g 10％pd/c，置于30℃进行氢化脱苄反应3.0小时，反应结束过滤除掉钯碳，减压蒸馏浓缩至干得到固体粗品，加入55ml丙酮和138ml正庚烷于室温打浆2.0小时，抽滤，用30ml正庚烷淋洗滤饼，滤饼置于40℃中真空干燥至恒重，即可得到十八烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)白色固体7.40g，收率97.50％，hplc检测纯度为98.80％。
[0214]
esi
‑
ms m/z：568.4[m h]

，与理论值符合
[0215]
实施例24二十烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)在胰岛素类似物中的制备应用
[0216]
将des(b30)人胰岛素500mg溶解于10ml水中，加入三乙胺调体系ph为11.00。按照十八烷二酰基l
‑
glu(osu)：des(b30)人胰岛素摩尔比1.2：1称取十八烷二酰基
‑
l
‑
glu(osu)59.81mg于2ml nmp(n
‑
甲基吡咯烷酮)中，随后加入人胰岛素溶液中，30分钟后，通过添加6.5ml稀hcl调节体系ph为9.0的0.2m乙醇胺终止反应。hplc分析表明形成了65％的德谷胰岛素：lysb29(n
‑
ε
‑
二十烷二酰基
‑
γ
‑
谷氨酰基)脱(b30)人胰岛素，纯化后可得纯度高于99.60％的胰岛素类似物
[0217]
esi
‑
ms m/z：1540.9[m 4h]
4
,1232.6[m 5h]
5
，1027.3[m 6h]
6
，与理论值符合
[0218]
对比例1十六烷二酸一苄酯的合成
[0219]
将十六烷二酸(10.0g，34.91mmol)、无水氯化镁(0.34g，3.57mmol)、苄醇(9.44g，87.36mmol)和100ml四氢呋喃加入250ml单口烧瓶中置于40℃搅拌反应24h，往体系中加入350ml自来水，于室温下搅拌反应0.5小时析出固体，过滤收集沉淀，加入180ml正辛烷，置室温下打浆1.0h，过滤，20ml正辛烷淋洗湿品，得到湿品，湿品中加入180ml二氯甲烷，室温打浆1.0h，过滤收集滤液，置于35℃中真空浓缩至干得到极少量固体，置于40℃真空干燥至恒重，得到十六烷二酸一苄酯白色固体0.01g，收率0.08％，hplc检测纯度89.12％。
[0220]
esi
‑
ms m/z：377.2[m h]

，与理论值符合
[0221]
对比例2十六烷二酸一苄酯的合成
[0222]
将十六烷二酸(10.0g，34.91mmol)和无水醋酸酐(70.30g，650.56mmol)加入250ml单口烧瓶中置于100℃搅拌反应24h，反应结束后减压蒸馏浓缩至干得到淡黄色油状物，置于室温则慢慢变为淡黄色蜡状固体，加入苄醇(9.44g，87.35mmol)和100ml四氢呋喃并置于40℃中搅拌反应24h，反应结束往体系中加入350ml自来水，于室温下搅拌反应0.5小时析出固体，过滤收集沉淀，加入180ml正辛烷，置室温下打浆1.0h，过滤，20ml正辛烷淋洗湿品，得到湿品，湿品中加入180ml二氯甲烷，室温打浆1.0h，过滤收集滤液，置于35℃中真空浓缩至干得到固体，置于40℃真空干燥至恒重，得到淡黄色蜡状固体7.06g，收率53.69％，hplc检测中可见十六烷二酸一苄酯纯度仅为7.76％。
[0223]
对比例3
[0224][0225]
按照诺和诺德公司专利号wo2007104737a1中第26页第2段中preparation of hexadecandioyl
–
l
‑
glu(osu)
‑
oh中所描述制备十六烷二酸苄酯的方法进行制备：将十六烷二酸(200.0g，0.7mol)、dowex50 wx2
‑
100酸性阳离子树脂(700g)、正辛烷(3.6l)和甲酸苄酯(95g，0.7mol)，升温至91℃并将甲酸苄酯(340g，2.5mol)于9小时内逐步滴加入体系中，滴毕后91℃保持搅拌回流反应48小时，反应结束冷却至室温，过滤除掉溶剂得到固体，固体溶于3l丙酮中并升温至40℃搅拌0.5小时，过滤，用1.5l丙酮淋洗滤饼，收集滤液真空浓缩至约1.5l后过滤并用
‑
18℃丙酮淋洗得到固体湿品，溶于2l二氯甲烷并于室温搅拌0.5小时，过滤得滤液并减压蒸馏得到固体粗品，溶于900ml异丙醇中进行重结晶得到固体，真空烘干至恒重后得到固体约73g，收率27.8％。采用酸性阳离子树脂能够使得十六烷二酸选择
性地合成十六烷二酸苄酯，但是该方法中所使用的dowex50wx2
‑
100酸性阳离子树脂比较昂贵，而且使用溶剂量较大，反应时间较长，收率低，后处理操作比较麻烦，导致制备成本较大。
[0226]
对比例4
[0227][0228]
文献(takaya et al.novel acyl r
‑
pyronoids,dictyopyrone a,b,and c,fromdictyostelium cellular slime molds.j.org.chem.2000,65,985
‑
989)中描述的一种十三烷二酸苄酯(文献所描述的化合物7)的制备方法，将十三烷二酸(4.8g，19.7mmol)溶解于150ml甲醇中，于室温搅拌下滴加11ml 10％的氢氧化钾甲醇溶液并逐步形成无水的盐沉淀固体，搅拌20分钟后，将体系浓缩至干得到十三烷单羧酸钾盐，悬浮于50ml甲苯中，加入四叔丁基溴化铵(546mg，1.97mmol)和苄溴(2.57ml,21.6mmol)，回流反应6.0小时，反应结束冷却至室温，加入100ml 0.5m盐酸溶液并用乙酸乙酯萃取三次，有机相依次用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤收集滤液并减压真空浓缩，最后采用层析硅胶柱进行过柱提纯(正己烷：乙酸乙酯＝19:1,4:1和2:1)，收集淋洗液减压真空浓缩至干得到无色针状固体十三烷二酸苄酯3.42g，收率52％。该工艺方法产生杂质比较多，后处理提纯困难，难以实现工业化。
[0229]
此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是至少两个，例如两个，三个等，除非另有明确具体的限定。
[0230]
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
[0231]
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

技术特征：
1.一种制备长脂肪链二酸衍生物的方法，其特征在于，包括：(1)使长脂肪链二酸发生环化反应，所述长脂肪链二酸具有式(a)所示的结构；(2)将长脂肪链二酸环化产物与苄醇反应，以便获得长脂肪链二酸一苄酯；(3)将所述长脂肪链二酸一苄酯与n
‑
羟基琥珀酰亚胺发生酯化反应，以便获得长脂肪链二酸琥珀酰亚胺苄酯；(4)将所述长脂肪链二酸琥珀酰亚胺苄酯与式(b)所示化合物进行亲核加成酰胺化反应，以便获得式(c)所示化合物；(5)将所述式(c)所示化合物再次与n
‑
羟基琥珀酰亚胺发生酯化反应，以便获得式(d)所示化合物；以及(6)将所述式(d)所示化合物进行脱苄基反应，以便获得式(e)所示化合物；
其中，x为6～32的整数；y为1～6的整数。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述环化反应是在酸酐存在的条件进行的，优选地，所述酸酐为boc2o酸酐。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述环化反应是在非质子极性试剂中进行的；任选地，所述非质子极性试剂包括选自n,n
‑
二甲基甲酰胺、乙腈、丙酮和四氢呋喃中的一种或至少两种；优选地，所述环化反应是在无水氯化镁、六水氯化镁、氯化铁、氯化锆、dmap或浓硫酸中的一种或至少两种的催化下进行的。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述环化反应是在温度为30℃～80℃的条件下进行12～48小时。5.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，相对于所述长脂肪链二酸，所述酸酐的用量是过量的；优选地，所述的boc2o酸酐的摩尔用量相当于所述的长脂肪链二酸摩尔量的1.0～2.0倍；优选地，无水氯化镁、六水氯化镁、氯化铁、氯化锆、dmap或浓硫酸中的一种或至少两种的摩尔用量相当于所述的长脂肪链二酸摩尔量的0.1～1.0倍。
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述反应是在非极性烃类溶剂中、在25℃～80℃的条件下进行12～48小时；任选地，所述非极性烃类溶剂为正己烷、石油醚、环己烷、正庚烷、正辛烷、甲基叔丁基醚、甲苯中的一种或至少两种；优选地，所述的苄醇的摩尔用量相当于所述的长脂肪链二酸摩尔量的1.0～3.0倍。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述酯化反应是在四氢呋喃、乙酸乙酯和二氯甲烷中的一种或至少两种溶剂中，在
‑
10℃～20℃下反应2小时，15
‑
40℃继续反应3
‑
24小时的条件下进行的；任选地，进一步包括将长脂肪链二酸一苄酯与二环己基碳二亚胺进行接触；任选地，所述的n
‑
羟基琥珀酰亚胺的摩尔用量相当于所述的长脂肪链二酸苄酯摩尔量的1.0～1.2倍。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述y为1、2或3；任选地，所述式(b)所示化合物为l
‑
谷氨酸
‑1‑
苄酯，结构为任选地，所述式(c)所示化合物为苄酯长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn，结构为任选地，所述式(d)所示化合物为苄基长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu(osu)
‑
obn,结构为任选地，所述式(e)所示化合物的结构为9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述反应是在溶剂为乙腈、n,n
‑
二甲基甲酰胺、四氢呋喃或n
‑
甲基吡咯烷酮中的一种或至少两种、温度为25℃～40℃的条件下进行6～24；任选地，所述的l
‑
谷氨酸
‑1‑
苄酯的摩尔用量相当于所述的长脂肪链二酸琥珀酰亚胺苄酯摩尔量的1.0～1.2倍；任选地，在步骤(5)中，进一步包括将苄酯长脂肪链二酰基
‑
l
‑
glu
‑
obn与二环己基碳二亚胺进行接触；任选地，在步骤(5)中，所述酯化反应是在溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丙酯中的一种或至少两种的、温度为
‑
10℃～10℃的条件进行2小时，后在温度为15℃～40℃继续反应3
‑
24小时；任选地，在步骤(6)中，所述脱苄基反应是在溶剂为丙酮、四氢呋喃中的一种或至少两
种，催化剂为pd/c，温度为15～40℃的条件下进行1～5小时。10.一种制备降血糖蛋白药物的方法，其特征在于，包括:采用长脂肪链二酸衍生物对蛋白进行修饰，以便获得所述降血糖蛋白药物，所述长脂肪链二酸衍生物是依据权利要求1～9任一项所述的方法获得；任选地，所述降血糖蛋白药物包括选自胰岛素、glp
‑
1、胰岛素类似物和glp
‑
1类似物的至少之一。
技术总结
本发明提出了一种制备长脂肪链二酸衍生物的方法。该方法包括：(1)使长脂肪链二酸发生环化反应，所述长脂肪链二酸具有式(A)所示的结构；(2)将长脂肪链二酸环化产物与苄醇反应，以便获得长脂肪链二酸一苄酯；(3)将所述长脂肪链二酸一苄酯与N


技术研发人员：郑宝液 王海龙 郭林峰 杨福斌 饶万兵 叶艳影 刘玉婷 廖廷聪 王仲清 李文佳
受保护的技术使用者：广东东阳光药业有限公司
技术研发日：2021.03.18
技术公布日：2021/6/29