复方鲜竹沥液中乙醇残留量的检测方法与流程

1.本发明属于药学领域，涉及一种药物中乙醇残留量的检测方法。


背景技术：

2.复方鲜竹沥液处方由鲜竹沥、鱼腥草、生半夏、生姜、枇杷叶、桔梗、薄荷素油七味药组成。具有清热化痰，止咳之功效。临床用于痰热咳嗽，痰黄粘稠。
3.方中鲜竹沥性味甘寒，具有清热豁痰之功，为君药。鱼腥草清热解毒，助鲜竹沥清解热毒之功；半夏、枇杷叶、桔梗燥湿化痰，润肺止咳为臣药。生姜为佐药，降气和胃。薄荷辛凉，透散热邪为使。诸药同用，共奏清热化痰止咳之功。
4.本品现行标准收载于《中国药典》2015年版一部，现行标准中【制法】项下引入了乙醇进行醇沉，但均进行了溶剂回收且至无醇味，为了考察不同企业乙醇是否回收完全，且在《中国药典》2015年版四部通则0861残留溶剂测定法中规定乙醇为第三类溶剂，应符合乙醇残留限度要求，故采用气相色谱法对乙醇残留量进行检测。
5.为此，本发明对于复方鲜竹沥中乙醇残留量的检测方法进行深入的研究。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于提供一种复方鲜竹沥液中乙醇残留量的检测方法。该方法具有灵敏度高、稳定性好、专属性好、精密度高等特点。
7.复方鲜竹沥液为现有产品，可以在市场上购买到，也可以通过已知方法制备得到。
8.本发明通过气相色谱法测定复方鲜竹沥液中乙醇残留量。
9.本发明所述的复方鲜竹沥液中乙醇残留量的检测方法，包括以下步骤：
10.对照品溶液的制备：
11.取无水乙醇对照品适量，精密称定，加水制成溶液，作为对照品溶液，
12.供试品溶液的制备：
13.精密量取复方鲜竹沥液，置于顶空瓶中，密封瓶口，即得，
14.测定法：
15.分别取对照品溶液与供试品溶液，顶空进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中乙醇残留量，
16.色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇为固定相，采用弹性石英毛细管柱；柱温为程序升温：初始温度30
‑
50℃，维持1
‑
3分钟，至50
‑
80℃，再升温至180
‑
220℃；检测器(fid)温度为220℃；载气为氮气，流速为1
‑
4ml/min；顶空分流进样。
17.其中，对照品溶液的制备：
18.取无水乙醇对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液，精密量取2ml，置20ml顶空瓶中，密封瓶口，即得。
19.其中，供试品溶液的制备：
20.精密量取本品2ml，置20ml顶空瓶中，密封瓶口，即得。
21.其中，色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇为固定相，采用弹性石英毛细管柱db
‑
waxetr；柱温为程序升温：初始温度40℃，维持2分钟，以每分钟3℃的速率升温至65℃，再以每分钟25℃的速率升温至200℃，维持3分钟；进样口温度为200℃；检测器温度为220℃；载气为氮气，流速为2.0ml/min；顶空分流进样。
22.优选的，本发明所述的检测方法，包括以下步骤：
23.对照品溶液的制备：
24.取无水乙醇对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液，精密量取2ml，置20ml顶空瓶中，密封瓶口，即得，
25.供试品溶液的制备：
26.精密量取本品2ml，置20ml顶空瓶中，密封瓶口，即得，
27.测定法：
28.分别取对照品溶液与供试品溶液，顶空进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中乙醇残留量，
29.色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇为固定相，采用弹性石英毛细管柱db
‑
waxetr(柱长为30m,内径为0.32mm,膜厚度为1.0μm)；柱温为程序升温：初始温度40℃，维持2分钟，以每分钟3℃的速率升温至65℃，再以每分钟25℃的速率升温至200℃，维持3分钟；进样口温度为200℃；检测器温度为220℃；载气为氮气，流速为2.0ml/min；顶空分流进样，分流比为20:1，顶空瓶平衡温度为85℃，平衡时间为20分钟，理论板数按无水乙醇峰计算应不低于10000。
30.本发明的方法与《中国药典》四部通则0711乙醇量测定法中收载的两种检测方法相比，使用了更适合水溶液测定的极性毛细管色谱柱，并采用气相色谱
‑
质谱联用法进行确证，且未使用内标物，具有色谱峰峰形更好，分离效果更佳，避免假阳性，且操作更简便等优点。
附图说明
31.图1、无水乙醇的标准曲线
32.图2、无水乙醇对照品gc色谱图
33.图3、供试品gc色谱图
34.图4、阴性对照gc色谱图
35.图5、乙醇对照品溶液的scan总离子流图
36.图6、乙醇对照品溶液保留时间2.921min峰质谱图
37.图7、乙醇对照品溶液的sim(43、45、31m/z)图
38.图8、供试品溶液的scan总离子流图
39.图9、供试品溶液保留时间2.921min乙醇峰质谱图
40.图10、供试品溶液的sim(43、45、31m/z)图
41.图11、阴性对照溶液的scan总离子流图
42.图12、阴性对照溶液的sim(43、45、31m/z)图
具体实施方式
43.现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
44.应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为具体公开了该范围的上限和下限以及它们之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
45.除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
46.实施例1、本发明的检测方法
47.1.仪器、药品与试剂
48.气相色谱仪：agilent 7890b气相色谱仪，fid检测器，chemstation色谱工作站；agilent 7890a
‑
5975c气相色谱
‑
质谱联用仪，agilent7697顶空进样仪；sartorius bsa 124s
‑
cw电子天平。
49.复方鲜竹沥液:生产单位a，批号为：2005004,生产单位b的28批样品，样品信息见表5。
50.阴性对照样品：取煮沸放冷的超纯水作为阴性对照溶液。
51.无水乙醇对照品：来源：永华化学科技(江苏)有限公司批号：64
‑
17
‑
5含量≥99.9％
52.试剂：水为超纯水。
53.2.气相色谱法测定复方鲜竹沥液中乙醇残留量
54.2.1色谱条件与系统适用性试验
55.以聚乙二醇为固定相，采用弹性石英毛细管柱db
‑
waxetr(柱长为30m,内径为0.32mm,膜厚度为1.0μm)；柱温为程序升温：初始温度40℃，维持2分钟，以每分钟3℃的速率升温至65℃，再以每分钟25℃的速率升温至200℃，维持3分钟；进样口温度为200℃；检测器(fid)温度为220℃；载气为氮气，流速为2.0ml/min；顶空分流进样，分流比为20:1，顶空瓶平衡温度为85℃，平衡时间为20分钟。理论板数按无水乙醇峰计算应不低于10 000。
56.2.2供试品溶液的制备
57.精密量取本品2ml，置20ml顶空瓶中，密封瓶口，即得。
58.2.3线性关系的考察及最低检出限
59.精密称取无水乙醇对照品1.0099g，置20ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；精密吸取上述溶液1ml、1ml、3ml、5ml、1ml、5ml，分别置100ml、50ml、100ml、50ml、5ml、10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。精密量取上述对照品溶液各2ml，置20ml顶空瓶中，密封瓶口，顶空进样，按正文色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线，无水乙醇回归方程为y＝849.1211x 120.0482,r2＝1.0000，结果见表1、
图1，无水乙醇在1.0089～50.4445mg之间呈良好线性。
60.信噪比(s/n)为3时，无水乙醇的最低检出限为0.00504mg；信噪比(s/n)为10时，无水乙醇的最低检出限为0.01008mg。
61.表1线性关系测定结果
[0062][0063]
2.4专属性试验
[0064]
分别精密量取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液2ml，置20ml顶空瓶中，密封瓶口，按上述条件进行测定。比较供试品溶液色谱及对照品色谱，结果阴性对照样品中其他成分对对照品峰无干扰(见图2～4)，且无水乙醇有较好的色谱分离。
[0065]
2.5精密度试验
[0066]
2.5.1进样精密度精密量取对照品溶液(5.0495mg/ml)2ml，置20ml顶空瓶中，密封瓶口，按正文中色谱条件，重复进样6次，结果见表2。
[0067]
表2对照品精密度试验结果
[0068][0069]
2.5.2重复性试验取本品六份(批号：2005004),照正文中色谱条件，依法测定，结果见表3，无水乙醇平均含量为1.5752mg/ml，rsd＝1.1％。
[0070]
表3无水乙醇重复性试验结果
[0071][0072]
2.6回收率试验
[0073]
采用加样回收试验，精密量取已知含量的本品(批号：2005004)1ml,置20ml顶空瓶中，精密添加对照品溶液(5.0495mg/ml)1ml，密封瓶口，照正文中色谱条件，依法测定，计算回收率，结果见表4。
[0074]
表4无水乙醇回收率试验结果
[0075][0076]
2.7结果分析
[0077]
参照《中国药典》2015年版四部通则0861残留溶剂测定法中规定乙醇残留限度为0.5％，对本次抽验样品进行了测定，发现其中28批样品乙醇残留量超标严重(样品信息见表5)，提示这些企业生产过程中乙醇回收不完全，生产工艺有问题，存在质量风险。为进一步验证上述试验，采用气相色谱质谱联用法对其进行进一步验证。
[0078]
表5 28批样品中乙醇残留量测定结果
[0079]
[0080][0081]
实施例2、hs
‑
gcms确证复方鲜竹沥液中的乙醇
[0082]
3.1色谱条件与系统适用性实验
[0083]
以db
‑
ffap(30m*250um*0.25um)为色谱柱，起始温度40℃，保持2分钟，以每分钟3℃升至65℃保持0.5分钟，再以25℃升至200℃保持2分钟；进样口温度250℃，以he为载气，柱流速1ml/min，分流比300:1。顶空瓶平衡温度为85℃，平衡时间为20分钟，进样体积为1.0ml。
[0084]
3.2质谱条件
[0085]
电子轰击(ei)源，电子轰击能量：70ev，离子源温度230℃，四极杆温度150℃，采集方式：5
‑
200m/z全扫描以及43、45、31m/z选择离子监测(见表6)
[0086]
表6对照品质谱检测参数
[0087][0088][0089]
3.3溶液的制备：
[0090]
对照品溶液的制备：精密称取无水乙醇适量，加水制成每1ml含5mg的溶液；精密量
取上述溶液2ml至20ml顶空瓶中，密封，即得。
[0091]
供试品溶液的制备：精密量取复方鲜竹沥液2ml至20ml顶空瓶中，密封，即得。
[0092]
阴性对照溶液的制备：精密量取煮沸放冷的超纯水2ml至20ml顶空瓶中，密封，即得。
[0093]
3.4测定法：取上述对照品溶液与供试品溶液，注入气相色谱
‑
质谱联用仪，进行气
‑
质联用分析，记录全扫描(scan)和选择离子监测(sim)谱图。
[0094]
3.5结果判断：
[0095]
乙醇的确证：通过乙醇对照品溶液的scan图三个色谱峰的nist谱库检索匹配(乙醇峰的匹配度＞95％)及sim图，乙醇对照品溶液的scan总离子流图中三个峰依次确证为氮气，乙醇和水，且乙醇峰保留时间为2.921min，如图5～7。
[0096]
结果判断：以质荷比m/z 31、43、45(乙醇)三个离子选择离子监测的供试品离子流色谱中，应同时呈现与对照品和色谱保留时间一致的色谱峰。
[0097]
样品测定：分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，按上述条件进行测定。结果，以质荷比m/z 31、43、45(乙醇)三个离子选择离子监测的供试品离子流色谱中，供试品溶液呈现与对照品色谱保留时间一致的色谱峰；而阴性对照样品中未检出乙醇，表明该实验具有一定专属性。如图8～12。
[0098]
对气相色谱检出阳性的28批样品按上述方法测定，结果全部检出并确证为乙醇，结果见表7。
[0099]
表7样品测定结果
[0100]
[0101][0102]
实施例3、本发明色谱柱的考察
[0103]
色谱柱的考察顶空平衡温度取样量顶空平衡时间分流比db
‑
624(30m*0.53mm*3.0μm)70℃1ml15min1:1db
‑
wax(30m*0.32mm*1.0μm)80℃2ml20min10:1db
‑
waxetr(30m*0.32mm*1.0μm)85℃3ml30min20:1
[0104]
实施例4、对比实验
[0105][0106]
实验结果显示，本发明的检测方法相对于现有方法而言，效果更好，分离度高、色谱峰形好。

技术特征：
1.复方鲜竹沥液中乙醇残留量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：对照品溶液的制备：取无水乙醇对照品适量，精密称定，加水制成溶液，作为对照品溶液，供试品溶液的制备：精密量取复方鲜竹沥液，置于顶空瓶中，密封瓶口，即得，测定法：分别取对照品溶液与供试品溶液，顶空进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中乙醇残留量，色谱条件与系统适用性试验 以聚乙二醇为固定相，采用弹性石英毛细管柱；柱温为程序升温：初始温度30
‑
50℃，维持1
‑
3分钟，至50
‑
80℃，再升温至180
‑
220℃；检测器(fid)温度为220℃；载气为氮气，流速为1
‑
4ml/min；顶空分流进样。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，对照品溶液的制备：取无水乙醇对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液，精密量取2ml，置20ml顶空瓶中，密封瓶口，即得。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，供试品溶液的制备：精密量取本品2ml，置20ml顶空瓶中，密封瓶口，即得。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，色谱条件与系统适用性试验 以聚乙二醇为固定相，采用弹性石英毛细管柱db
‑
waxetr；柱温为程序升温：初始温度40℃，维持2分钟，以每分钟3℃的速率升温至65℃，再以每分钟25℃的速率升温至200℃，维持3分钟；进样口温度为200℃；检测器温度为220℃；载气为氮气，流速为2.0ml/min；顶空分流进样。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，对照品溶液的制备：取无水乙醇对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液，精密量取2ml，置20ml顶空瓶中，密封瓶口，即得，供试品溶液的制备：精密量取本品2ml，置20ml顶空瓶中，密封瓶口，即得，测定法：分别取对照品溶液与供试品溶液，顶空进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中乙醇残留量，色谱条件与系统适用性试验 以聚乙二醇为固定相，采用弹性石英毛细管柱db
‑
waxetr(柱长为30m,内径为0.32mm,膜厚度为1.0μm)；柱温为程序升温：初始温度40℃，维持2分钟，以每分钟3℃的速率升温至65℃，再以每分钟25℃的速率升温至200℃，维持3分钟；进样口温度为200℃；检测器温度为220℃；载气为氮气，流速为2.0ml/min；顶空分流进样，分流比为20:1，顶空瓶平衡温度为85℃，平衡时间为20分钟，理论板数按无水乙醇峰计算应不低于10000。
技术总结
本发明属于药学领域，涉及一种药物中乙醇残留量的检测方法。本发明的目的在于提供一种复方鲜竹沥液中乙醇残留量的检测方法。该方法具有灵敏度高、稳定性好、专属性好、精密度高等特点。本发明通过气相色谱法测定复方鲜竹沥液中乙醇残留量。中乙醇残留量。中乙醇残留量。


技术研发人员：许妍 邬秋萍 许焰辉 詹怡伟 肖小武 洪挺 姜军华 吴燕红
受保护的技术使用者：江西九华药业有限公司
技术研发日：2021.03.23
技术公布日：2021/6/29