本公开属于细胞工程领域，尤其涉及提高病毒产量的化合物。更具体地说，本发明涉及提高aav病毒产量的化合物和使用所述化合物的方法。
背景技术：
1、aav载体是目前应用最为广泛的基因治疗载体。aav基因治疗载体目前生产通常使用转染的方式，通过转染试剂将含有目的基因片段、aav rep-cap基因及辅助病毒腺病毒基因的各质粒转染进入真核细胞内。
2、pkr信号通路是细胞免疫的重要通路之一，质粒瞬转病毒包装过程中转录生成的dsrna片段会激活pkr的磷酸化，p-pkr进而激活下游转录因子eif2a的磷酸化，降低蛋白水平的表达，影响病毒载体的产量。有文献报道，在慢病毒包装过程中添加pkr磷酸化抑制剂2-氨基嘌呤（2-ap）可提升慢病毒包装滴度（pernod g, fish r, liu jw, kruithof ek.biotechniques. 2004 apr;36(4):576-580.）。此外，在aav病毒包装中使用的辅助质粒通常含有腺病毒va rna片段，va rna可以结合pkr的rna结合域，竞争性抑制pkr信号通路的磷酸化（nayak r, pintel dj. j virol. 2007 nov;81(21):11908-16.）。然而由于上游工艺的差别，不同转染体系中引入的辅助质粒转染量不尽相同，导致难以完全达到pkr磷酸化的抑制效果，从而影响了aav的产量。
3、因此，仍需要研究对于以高产率制备aav的方法。
技术实现思路
1、本公开提供了式（i）化合物、其盐、其立体化学异构体形式、或包含以上任一种的组合物在提高细胞中病毒产量的用途，
2、
3、式（i）。
4、在一些实施方式中，式（i）化合物在细胞培养基中的浓度为50 nm-5000 nm，优选为500 nm-2000 nm。
5、在一些实施方式中，所述组合物中进一步含有组蛋白去乙酰化酶抑制剂。优选地，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂为丙酸盐、丁酸盐、丙戊酸盐中的一种或多种，更优选为丙酸钠。优选地，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂在细胞培养基中的浓度为0.1-20 mm，优选为0.5-10 mm，更优选为0.5-5 mm。
6、在一些实施方式中，所述病毒选自aav病毒。aav病毒包括重组腺相关病毒（raav）。
7、在一些实施方式中，所述细胞为贴壁或悬浮培养的hek293或由hek293进行基因编辑、改造、驯化、筛选得到的细胞株。
8、在一些实施方式中，前述一种或多种上述化合物在转染前24小时内或转染后24小时内添加至细胞中。
9、在一些实施方式中，所述病毒通过将相关质粒转染到细胞中包装制备得到，相关质粒系统可以是一个或多个包含aav rep蛋白编码区序列、aav衣壳蛋白vp1、vp2、vp3的编码区序列、目的基因的编码序列和itr序列的质粒组成的一质粒、二质粒、三质粒或多质粒腺相关病毒包装系统。
10、作为非限制性实例，本文中的raav的血清型选自由野生型aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9、aav10、aav11、aav12、aav13、aavrh.8、aavrh.10、aavrh.39、aavhsc15、aavhsc17以及基于aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9、aav10、aav11、aav12、aav13、aavrh.8、aavrh.10、aavrh.39、aavhsc15、aavhsc17改造的新型aav血清型组成的组。
11、另一方面，本公开提供了一种用于提高细胞中病毒产量的试剂盒，所述试剂盒包含式（i）化合物、其盐或其立体化学异构体形式；
12、
13、式（i）
14、以及组蛋白去乙酰化酶抑制剂。
15、在一些实施方式中，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂为丙酸盐、丁酸盐、丙戊酸盐中的一种或多种，更优选为丙酸钠。
16、另一方面，本公开提供了一种生产病毒的方法，其包括在式（i）化合物、其盐或其立体化学异构体形式的存在下，培养含有用于生产病毒的质粒系统的细胞的步骤，
17、
18、式（i）。
19、在一些实施方式中，式（i）化合物、其盐或其立体化学异构体形式在细胞培养基中的浓度为50 nm-5000 nm，优选为500 nm-2000 nm。
20、在一些实施方式中，所述细胞培养基进一步含有组蛋白去乙酰化酶抑制剂。优选地，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂为丙酸盐、丁酸盐、丙戊酸盐中的一种或多种，更优选为丙酸钠。更优选地，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂在细胞培养基中的浓度为0.1-20 mm，优选为0.5-10 mm，更优选为0.5-5 mm。
21、根据本公开，通过使aav包装过程中在含有式（i）化合物的细胞培养基中进行，可以提高抑制转染后pkr磷酸化的效果，从而显著提升aav病毒的产量。
22、进而，通过使aav包装过程在同时含有式（i）化合物和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的细胞培养基中进行，可以进一步提高aav病毒的产量。
1.式（i）化合物、其盐、其立体化学异构体形式、或包含以上任一种的组合物在提高细胞中病毒产量的用途，
2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述组合物中进一步含有组蛋白去乙酰化酶抑制剂。
3.根据权利要求2所述的用途，其中，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂为丙酸盐、丁酸盐、丙戊酸盐中的一种或多种。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中，所述病毒选自aav病毒。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中，所述细胞为贴壁或悬浮培养的hek293或由hek293进行基因编辑、改造、驯化、筛选得到的细胞株。
6.一种用于提高细胞中病毒产量的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含式（i）化合物、其盐或其立体化学异构体形式；
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其中，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂为丙酸盐、丁酸盐、丙戊酸盐中的一种或多种。
8.一种生产病毒的方法，其包括在式（i）化合物、其盐或其立体化学异构体形式的存在下，培养含有用于生产病毒的质粒系统的细胞的步骤，
9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述细胞培养基进一步含有组蛋白去乙酰化酶抑制剂；所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂为丙酸盐、丁酸盐、丙戊酸盐中的一种或多种。
10. 根据权利要求9所述的方法，其中，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂在细胞培养基中的浓度为0.1-20 mm。
