本发明属于生物，具体涉及一种脂肪间充质干细胞冻存液及其应用。
背景技术：
1、间充质干细胞是干细胞领域的一个分支，其分离与制备简单，具有多项分化潜能、且支持造血以及能够促进造血干细胞植入，还能够调节机体内免疫反应，因此备受干细胞领域关注。当前，间充质干细胞能够从脂肪、骨髓、脐带等中分离和制备间充质干细胞。其中，脂肪来源的间充质干细胞因来源以及含量丰富、易于培养、移植安全、无伦理学争议等特点，在组织工程等领域应用前景广阔。
2、液氮冷冻保存法是临床中常用的保存脂肪间充质干细胞的技术手段之一，其是利用在极低温度的条件下，细胞的新陈代谢活动几乎停滞的特性来实现细胞长期保存的目的。但是细胞在极低温度条件下，细胞和组织内的水分极易形成冰晶，可能会导致细胞脱水、蛋白质变性、细胞内部空间结构的紊乱等。如果冰晶过多，还可能导致细胞死亡。因此，冷冻保护剂的使用至关重要。目前，使用的保护剂通常含有二甲基亚砜、血清蛋白等。二甲基亚砜是一种良好的细胞冻存保护剂，但同时也是一种对细胞毒性很大的试剂，在用量上面受到很大限制。血清蛋白由于其动物来源特性，在很大程度上增加了细胞被病毒感染的可能性，且价格昂贵。鉴于上述问题，亟需对脂肪间充质干细胞冻存液的组成进行改进。
技术实现思路
1、本发明的第一目的在于提供一种脂肪间充质干细胞冻存液，成分简单，且能够使冻存复苏后脂肪间充质干细胞有良好的活率、贴壁率以及增殖能力。
2、本发明的第二目的在于提供一种脂肪间充质干细胞冻存液的应用。
3、为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
4、一种脂肪间充质干细胞冻存液，由培养基和冻存保护剂组成，所述冻存保护剂的组成为：exendin-4、索法酮、迷迭香酸、甘油，所述冻存保护剂中exendin-4、索法酮、迷迭香酸、甘油各成分的重量份比例为1:0.8~1.7:0.4~1.2:50~70。
5、进一步地，所述脂肪间充质干细胞冻存液由以下重量份数的培养基和冻存保护剂组成：培养基120~150份、冻存保护剂5~20份。
6、进一步地，所述冻存保护剂中exendin-4、索法酮、迷迭香酸、甘油各成分的重量份比例为1:1.1:0.7:62。进一步地，所述培养基为α-mem无血清培养基。
7、上述脂肪间充质干细胞冻存液的应用，包括以下步骤：将脂肪间充质干细胞与上述脂肪间充质干细胞冻存液混合，制得脂肪间充质干细胞悬液，之后程序性降温预冻存，预冻完成转移至液氮中保存。
8、进一步地，所述脂肪间充质干细胞在脂肪间充质干细胞冻存液中的密度为1~8×107个/ml。
9、进一步地，所述程序性降温预冻存的过程具体是：于2~4℃下预冻0.5~1h，-20~-25℃下预冻1.5-2.5h，然后以1-5℃/min的速率降温至-75~-80℃预冻4-5h。
10、与现有技术相比，本发明的有益效果主要在于：
11、对使用本发明冻存液冻存后的脂肪间充质干细胞的复苏活率、贴壁率以及增殖能力进行检测发现：exendin-4、索法酮、迷迭香酸能够使冻存复苏后脂肪间充质干细胞有良好的活率、贴壁率以及增殖能力。
12、本发明提供的脂肪间充质干细胞的冻存方法，步骤简洁，易于实现。
1.一种脂肪间充质干细胞冻存液，其特征在于，由培养基和冻存保护剂组成，所述冻存保护剂的组成为：exendin-4、索法酮、迷迭香酸、甘油，所述冻存保护剂中exendin-4、索法酮、迷迭香酸、甘油各成分的重量份比例为1:0.8~1.7:0.4~1.2:50~70。
2.如权利要求1所述脂肪间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述脂肪间充质干细胞冻存液由以下重量份数的培养基和冻存保护剂组成：培养基120~150份、冻存保护剂5~20份。
3.如权利要求1所述脂肪间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述冻存保护剂中exendin-4、索法酮、迷迭香酸、甘油各成分的重量份比例为1:1.1:0.7:62。
4.如权利要求1所述脂肪间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述培养基为α-mem无血清培养基。
5.如权利要求1~4任一项所述脂肪间充质干细胞冻存液的应用，其特征在于，包括以下步骤：将脂肪间充质干细胞与脂肪间充质干细胞冻存液混合，制得脂肪间充质干细胞悬液，之后程序性降温预冻存，预冻完成转移至液氮中保存。
6.如权利要求5所述脂肪间充质干细胞冻存液的应用，其特征在于，所述脂肪间充质干细胞在脂肪间充质干细胞冻存液中的密度为1~8×107个/ml。
7.如权利要求5所述脂肪间充质干细胞冻存液的应用，其特征在于，所述程序性降温预冻存的过程具体是：于2~4℃下预冻0.5~1h，-20~-25℃下预冻1.5~2.5h，然后以1~5℃/min的速率降温至-75~-80℃预冻4-5h。
