本申请属于烟草内生真菌,具体的说,涉及一种具有促进烟苗生长的烟草内生真菌及其应用。
背景技术:
1、当前烟草生产中,烟农培育烟苗普遍存在过度依赖化肥的现象,大多采用n、p2o5、k2o大量元素肥料,长期过量的化肥投入导致植烟土壤生态恶化严重,如土壤板结、酸化、微生物多样性降低、土壤持续供肥能力下降,进而影响烟苗的生长,对烟叶产品质量产生影响。
2、植物内生菌(endophyte)是指在其生活史的一定阶段或全部阶段生活在健康植物各种组织和器官内部或者组织间隙中的微生物,一般包括内生细菌、内生真菌和内生放线菌。目前分离到的植物内生细菌大约有120多种,隶属于54个属,其中最为常见的为假单胞菌属(pseudomonas)、芽孢杆菌属(bacillus)、肠杆菌属(enterobacter)以及农杆菌属(agrobacterium),植物内生放线菌的研究上,较多的为弗兰克氏菌属(frankia),而对于植物内生真菌的研究,大多数是禾本科植物、药用植物、海洋植物等,但烟草方面的还较少。
3、内生菌长期生活在烟草体内,且二者共同进化,已有研究表明,烟草内生菌可以产生促生物质,帮助烟草吸收矿质营养,促进烟草生长。saito等发现梭状芽孢杆菌(clostridiumsp.)含有大量的固氮酶,可在烟草体内发挥固氮作用,为烟草提供无机氮源,进而提高烟叶的产量和品质。杨珍福等人从烟草体内分离出3株解淀粉芽孢杆菌,对烟草幼苗有一定的促进生长作用。金慧清等人表明镰刀菌菌株ycef005和棘壳孢菌菌株ycef053、ycef191、ycef193、ycef199可改善烟株的生物量和生理指标。
4、传统方法大多采用施用化肥促进烟苗生长,而烟草内生真菌是提高烟叶抗病、抗胁迫能力,改善烟叶产质量的的新途径,因此,有必要提供一种具有促进烟苗生长的烟草内生真菌。
技术实现思路
1、为了克服背景技术中存在的问题,本申请提供了一种促进烟苗生长的烟草内生真菌及烟草内生真菌菌液,为提高烟叶的产质量提供新方法。
2、为实现上述目的,本申请是通过如下技术方案实现的:
3、第一方面,本申请提供了一种烟草内生真菌,烟草内生真菌为腐皮镰刀菌(fusarium solani w-5),腐皮镰刀菌具有促进烟苗生长的作用。
4、可选的,在第一方面的一种实现方式中,腐皮镰刀菌(fusarium solani w-5)的鉴定为:采用真菌通用引物its1/its4对烟草内生真菌进行rdna its的pcr扩增,并对its pcr扩增产物进行测序,将所得序列在genbank核算序列数据库中进行blast搜索,发现测试烟草内生真菌的its区域与已报道的同源性最高,结合形态学鉴定,确定烟草内生真菌的菌种为所述腐皮镰刀菌(fusarium solani w-5);腐皮镰刀菌(fusarium solani w-5)的形态为菌落呈现白色,短绒毛状,分生孢子呈弯曲镰刀。
5、第二方面,本申请还提供了一种烟草内生真菌的制备方法,包括:
6、研磨烟叶、分割烟茎、分割粗根、研磨须根后分别铺放于第一固体培养基表面,第一固体培养基放于恒温培养箱中培养;
7、将分离得到的所有烟草内生真菌接入第二固体培养基进行纯化,经过2-3次点接纯化直到菌落单一,筛选得到烟草内生真菌,即腐皮镰刀菌(fusarium solani w-5),腐皮镰刀菌具有促进烟苗生长的作用;
8、第一固体培养基和第二固体培养基的配方均为:马铃薯浸出粉5g/l、葡萄糖20g/l、琼脂14g/l和链霉素10mg/l。
9、可选的,在第二方面的一种实现方式中,恒温培养箱的培养温度为28℃,培养时间为5-7天。
10、第三方面,本申请还提供了一种烟草内生真菌菌液的制备方法,包括:
11、将烟草内生真菌接入液体培养基,摇床培养,得到烟草内生真菌菌液;
12、其中,液体培养基的配方为:马铃薯浸出粉5g/l、葡萄糖20g/l和链霉素10mg/l;摇床培养条件为:培养温度30℃,转速220rpm,培养时间48-72h。
13、第四方面,本申请还提供了一种烟草内生真菌在烟苗生长中的应用方法,包括:
14、使用烟草内生真菌制备得到烟草内生真菌菌液,在烟苗生长过程中,使用烟草内生真菌菌液对烟苗进行浇施处理,以促进烟苗生长。
15、可选的,在第一方面的一种实现方式中,使用烟草内生真菌菌液对烟苗进行浇施处理,包括:
16、在烟苗生长出5-6片真叶时,使用烟草内生真菌菌液浇施于烟苗的地上部及根部基质土壤中。
17、可选的,在第一方面的一种实现方式中,烟苗的品种为红花大金元、云烟87、k326或云烟97。
18、本申请的有益效果:
19、本申请从烟草k326植株中分离出烟草内生真菌,该烟草内生真菌为腐皮镰刀菌(fusarium solani w-5),由该烟草内生真菌制备得到一种烟草内生真菌菌液,烟草内生真菌和烟草内生真菌菌液可显著促进烟苗生长,能促进对烟苗的生物量和农艺性状的增长,特别是能显著促进云烟87、云烟97和k326的地下部鲜重增长。
1.一种烟草内生真菌,其特征在于,所述烟草内生真菌为腐皮镰刀菌(fusariumsolani w-5),所述腐皮镰刀菌具有促进烟苗生长的作用。
2.根据权利要求1所述的烟草内生真菌,其特征在于,所述腐皮镰刀菌(fusariumsolani w-5)的鉴定为:采用真菌通用引物its1/its4对烟草内生真菌进行rdna its的pcr扩增,并对its pcr扩增产物进行测序,将所得序列在genbank核算序列数据库中进行blast搜索,发现测试烟草内生真菌的its区域与已报道的同源性最高,结合形态学鉴定,确定所述烟草内生真菌的菌种为所述腐皮镰刀菌(fusarium solani w-5);所述腐皮镰刀菌(fusarium solani w-5)的形态为菌落呈现白色,短绒毛状,分生孢子呈弯曲镰刀。
3.一种烟草内生真菌的制备方法,其特征在于,包括:
4.根据权利要求3所述烟草内生真菌,其特征在于,所述恒温培养箱的培养温度为28℃,培养时间为5-7天。
5.一种烟草内生真菌菌液的制备方法,其特征在于,包括:
6.一种烟草内生真菌在烟苗生长中的应用方法,其特征在于,包括:
7.根据权利要求6所述的应用方法,其特征在于,使用所述烟草内生真菌菌液对烟苗进行浇施处理,包括:
8.根据权利要求1-7任一项所述的应用方法,其特征在于,所述烟苗的品种为红花大金元、云烟87、k326或云烟97。