本发明涉及创伤敷料，具体为一种酵母重组胶原蛋白液体敷料及其制备方法和应用。
背景技术：
1、胶原蛋白液体敷料是一种用于创伤或烧伤等皮肤损伤的医疗敷料，是由含有胶原蛋白的液体或凝胶制成的，可直接涂抹在受伤部位以促进伤口愈合和皮肤再生，在生物医用材料领域的应用具有广阔的前景，但目前用作生物医用材料的胶原多从动物组织中提取，存在动物病毒安全隐患(例如：疯牛病、口蹄疫、鼠疫等)、排异反应、质量不稳定等缺点。
2、为了避免从动物组织提取有毒胶原蛋白，现有技术采用基因工程技术，将人的基因重组于宿主细胞，包括：大肠杆菌(参见范代娣等，重组e.coli工程菌高密度培养生产人源型胶原蛋白，化工学报，2002,53(7)，752-754)，酵母(参见专利cn201310033299.6，cn200610098297.5)等，以实现生产重组胶原蛋白。
3、经检索现有公开号为cn 10827312的中国专利，通过由重组胶原蛋白、氯化钠、增稠剂和去离子水复合，经灭菌制备而成。本医用水凝胶创伤敷料，属于外用凝胶敷料，具有良好的保湿、止血及粘附性能，能促进创面愈合和保护创面新生组织，减少疤痕形成，适用于溃疡、烧伤、术后伤口及擦伤等创面的治疗。
4、前述技术方案虽然使用非动物提取的重组胶原蛋白和氯化钠作为主料，避免动物胶原蛋白的隐形病毒问题，氯化钠虽然具有消炎作用，但他同时还有调节创口渗透压作用，这导致胶原蛋白难以进入伤口影响胶原蛋白修复创口，同时前述技术方案虽然公开了重组胶原蛋白，但是其所采用的仍然是现有技术中的自然发酵出的重组胶原蛋白，但是现有技术培养时会因培育环境和异种细菌问题导致菌群死亡减产。
技术实现思路
1、（一）解决的技术问题
2、针对现有技术的不足，本发明提供了一种酵母重组胶原蛋白液体敷料及其制备方法和应用，具备凝胶辅料在贴合人体创口后更快快速的被伤口吸收对其修复，培育酵母重组胶原蛋白时成品率更高等优点，解决了上述技术的问题。
3、（二）技术方案
4、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种酵母重组胶原蛋白液体敷料，所述液体敷料呈粘稠状液体，且由d胶原蛋白粉和f混合液进行混合后加入甘油和蒸馏水复合制备而成，所述d胶原蛋白粉包括以下质量份原料：
5、酵母 45%-55%
6、表达载体 40%-50%
7、抗生素抗性基因 5%-7%
8、胶原酶 3-8%
9、所述f混合液包括以下质量份原料：
10、多肽复合物 40%-55%
11、低分子玻尿酸 10%-15%
12、维生素e 3%-5%
13、水杨酸 5%-7%
14、罗汉果提取物 15%-20%
15、海藻提取物 15%-20%。
16、优选的，所述多肽复合物制备包括多肽混合物、保湿剂、抗氧化剂、西柚提取物、马齿苋提取物和金缕梅提取物，所述多肽混合物包括胜肽-1、胜肽-2、胜肽-3、胜肽-4和胜肽-5其中的两种或多种混合物。
17、一种酵母重组胶原蛋白液体敷料制备方法，包括以下步骤：
18、步骤一、准备液体敷料制取所需的工具，并将相应工具消毒后，在无菌环境常温烘烤；
19、步骤二、将d胶原蛋白粉放入容器内并加入质量比为蛋白粉二分之一的水温20-35℃的蒸馏水进行混合；
20、步骤三、f混合液调配：将质量比为40%-55%多肽复合物、10%-15%低分子玻尿酸和e3%-5%维生素加入等比例的由甘油、蒸馏水和调节剂混合而成的调节液进行混合，随后升温容器使其温度上升到60℃，并依次加入5%-7%水杨酸、15%-20%罗汉果提取物和15%-20%海藻提取物进行充分搅拌，消除团块或沉淀物即可得到f混合液；
21、步骤四、将d胶原蛋白粉向f混合液中加入，加入期间保持60℃水温，并在二者混合后持续搅拌至无沉淀物、漂浮物；
22、步骤五、混合液体温度降至30-40℃，向其中加入占据其总重量10%的卡波姆，持续搅拌至液体粘稠，得到液体敷料。
23、优选的，所述步骤二中d胶原蛋白粉的制备方法包括以下步骤：
24、s1、将酿酒酵母作为表达胶原蛋白的酵母菌株；
25、s2、酵母注入等量的含有胶原蛋白基因序列的dna分子，使其成为转基因酵母；
26、s3、将抗生素加入到培养基中以35℃恒温培养72h，培养基由30%碳源+30%氮源+10%矿盐和共同组成剩下20%的抗生素、抗菌剂缓冲剂；
27、s4、将培养完毕的酵母从培养基中取出，加入蒸馏水搅拌后使用破壁机打碎，并加入质量比3-8%的胶原酶分离胶原蛋白；
28、s5、使用 0.15微米滤膜过滤含有酵母的蒸馏水，提取出胶原蛋白，并使用冻干机冻干成粉。
29、优选的，所述步骤三中f混合液的制备方法包括以下步骤：
30、ss1、将多肽混合物放入容器并依次加入保湿剂和抗氧化剂，三者比例为3：1：1，并将混合物加入蒸馏水为基质的溶剂内进行混合溶解；
31、ss2、溶解后的液体使用滤膜或纸滤过滤，使用 0.45微米滤膜去除大颗粒和杂质；
32、ss3、过滤后的液体加入西柚提取物、马齿苋提取物和金缕梅提取物，三者合计占比液体的6%，每样提取物占2%，将上述材料混合并使用20khz-50khz的超声波溶解15min，获得液态的多肽复合物；
33、ss4、将10%-15%的低分子玻尿酸、3%-5%的维生素e、5%-7%的水杨酸、15%-20%的罗汉果提取物和15%-20%的海藻提取物依次加入多肽复合物中；
34、ss5、将上述材料混合并继续使用s2中滤膜过滤法过滤，而后使用s3中超声波溶解材料，得到f混合液。
35、优选的，所述多肽复合物可通过一下公式获得重量比：
36、t= 100 / (40%-55% + 10%-15% + 3%-5% + 5%-7% + 15%-20% + 15%-20%)
37、其中多肽复合物重量为t。
38、优选的，所述ss3中多肽复合物在加入提取物时还加入0.5%的聚山梨酸酯，和1%的二硫苏糖。
39、优选的，所述f混合液透射率为97-99%，肉眼观察下无悬浮杂质，且显微镜下杂质率为每100ml/0.2%。
40、优选的，所述f混合液液体流速为100ml/60min，所述f混合液水分相对湿度为65-88%，同时f混合液水分分子的摩尔分数为大于99%且小于1。
41、优选的，所述酵母重组胶原蛋白液体敷料用于治疗晒伤、烧伤和非疾病造成溃烂的表皮创口。
42、与现有技术相比，本发明提供了一种酵母重组胶原蛋白液体敷料及其制备方法和应用，具备以下有益效果：
43、1、本发明利用多肽混合物促进皮肤的修复和再生，提供抗衰老和保湿效果，配合酵母重组胶原蛋白同时对创口作用，皮肤收到晒伤时，通过涂抹辅料，利用其中的多肽可以刺激胶原蛋白的产生，再配合辅料本身的重组胶原蛋白，可以极大的提高受创伤皮肤处的愈合速度，进一步的配合水杨酸降低伤口的 ph 值，创造对细菌和病原体不利的环境，同时具有渗透力，可以穿透到伤口的深层，并对创面起到杀菌和消毒的作用，同时利用罗汉果提取物和海藻提取物中含有丰富的天然抗氧化剂，减少氧化应激引起的损伤，有助于保护伤口周围的细胞免受损害，达到了凝胶辅料在贴合人体创口后更快快速的被伤口吸收对其修复的有益效果。
44、2、本发明通过在培养转基因酵母细胞的过程中，将包含抗生素的培养基添加到细胞培养中，由于转基因酵母细胞携带了抗生素抗性基因，它们能够在存在抗生素的培养条件下存活和繁殖，而非转基因的酵母细胞则被抑制或被杀死，通过这种抗生素选择的方法，可以筛选并获得含有目标基因的转基因酵母细胞群体，从而实现对胶原蛋白的高效生产，达到了培育酵母重组胶原蛋白时成品率更高的有益效果。
1.一种酵母重组胶原蛋白液体敷料，其特征在于，所述液体敷料呈粘稠状液体，且由d胶原蛋白粉和f混合液进行混合后加入甘油和蒸馏水复合制备而成，所述d胶原蛋白粉包括以下质量份原料：
2.根据权利要求1所述的一种酵母重组胶原蛋白液体敷料制备方法，其特征在于：所述多肽复合物制备包括多肽混合物、保湿剂、抗氧化剂、西柚提取物、马齿苋提取物和金缕梅提取物，所述多肽混合物包括胜肽-1、胜肽-2、胜肽-3、胜肽-4和胜肽-5其中的两种或多种混合物。
3.根据权利要求1所述的一种酵母重组胶原蛋白液体敷料制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的一种酵母重组胶原蛋白液体敷料制备方法，其特征在于：所述步骤二中d胶原蛋白粉的制备方法包括以下步骤：
5.根据权利要求3所述的一种酵母重组胶原蛋白液体敷料制备方法，其特征在于：所述步骤三中f混合液的制备方法包括以下步骤：
6.根据权利要求1所述的一种酵母重组胶原蛋白液体敷料制备方法，其特征在于：所述多肽复合物可通过一下公式获得重量比：
7.根据权利要求5所述的一种酵母重组胶原蛋白液体敷料制备方法，其特征在于：所述ss3中多肽复合物在加入提取物时还加入0.5%的聚山梨酸酯，和1%的二硫苏糖。
8.根据权利要求4所述的一种酵母重组胶原蛋白液体敷料制备方法，其特征在于：所述f混合液透射率为97-99%，肉眼观察下无悬浮杂质，且显微镜下杂质率为每100ml/0.2%。
9.根据权利要求8所述的一种酵母重组胶原蛋白液体敷料制备方法，其特征在于：所述f混合液液体流速为100ml/60min，所述f混合液水分相对湿度为65-88%，同时f混合液水分分子的摩尔分数为大于99%且小于1。
10.根据权利要求1所述的一种酵母重组胶原蛋白液体敷料应用，其特征在于：所述酵母重组胶原蛋白液体敷料用于治疗晒伤、烧伤和非疾病造成溃烂的表皮创口。
