本公开文本涉及包含胞外区和跨膜区的细胞标签。所述细胞标签允许鉴定、检测、选择和消融经修饰以表达细胞标签的细胞。在一些实施方案中，本公开文本提供了不能信号转导的细胞标签，所述细胞标签可以在经修饰以表达嵌合抗原受体的细胞的表面上表达。
背景技术：
1、cd19 car t细胞疗法(由novartis pharmaceuticals corp.销售的由kite pharma,inc.销售的和由juno therapeutics,inc.销售的)的成功改变了治疗患有b细胞恶性肿瘤的患者的方式。事实上，这种成功正在改变医生和科学家经由细胞疗法寻求治疗癌症和其他疾病的方式。科学家使用不同的合成生物学方法用转基因转导细胞，所述转基因赋予细胞新的或增强的例如对抗癌症的能力。为了使这些疗法有效，科学家必须能够了解表达转基因的细胞的百分比(如果百分比低，则使其富集)，知道转基因细胞在体内的运输位置，并且如果疗法具有副作用则消融转基因细胞。细胞表面标记物已用于有效地满足这些标准中的全部或一些。细胞表面标记物通常由膜蛋白设计，所述膜蛋白然后被截短以使其在细胞表面上相对惰性。截短蛋白质是细胞表面标签并且通常具有被小分子或抗体结合的能力。cd19、cd20、cd34、ctla-4、egfr和her2是产生细胞表面标签的一些表面蛋白。仅来自egfr、her2、cd19的标签以及cd20和cd34的杂合标签具有上文列出的所有属性并且已进入人体临床试验。
2、虽然这些标签存在，但显然需要具有更多细胞标签。理想情况下，标签将正交于所述标签在其上使用的细胞类型以作为唯一标识符。随着细胞疗法扩展到使用除效应t细胞以外的细胞，该需求变得更加迫切。此外，随着细胞疗法中多路复用的使用增加，因此具有多种标签的需求也在增加。
3、最熟知的标签是egfrt。该标签的这个编码区粗略地为1100个碱基对长，其涵盖了很大百分比的可以有效转导的转基因的有效载荷。因此，缩小标签编码区大小的能力对于转基因有效载荷的有效递送是重要的。最后，需要更多能够促进离体纯化转基因细胞、监测转基因细胞的体内运输以及经由抗体在体内消融转基因细胞的标签。本发明解决了这些需求。
技术实现思路
1、本公开文本提供了包含细胞表面标签的重组多肽。所述标签包含胞外区、跨膜区和任选的胞内区，其中所述胞外区包含连接至跨膜结构域的il5受体α(il5ra)序列，其中所述重组多肽不能在信号转导中起作用。
1.一种包含胞外区和跨膜区的重组多肽，其中所述胞外区包含il5受体α(il5ra)胞外结构域的一部分或全部，并且所述胞外区连接至所述跨膜结构域，其中所述重组多肽不能在信号转导中起作用，并且任选地其中所述重组多肽具有降低的与il-5的结合。
2.根据权利要求1所述的重组多肽，其中所述重组多肽包含与seq id no:1的氨基酸32-123(结构域i)具有至少80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的重组多肽，其中所述重组多肽进一步包含与seq id no:1的氨基酸124-242(结构域ii)具有至少80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列。
4.根据权利要求2所述的重组多肽，其中所述重组多肽进一步包含与seq id no:1的氨基酸243-334(结构域iii)具有至少80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列。
5.根据权利要求1所述的重组多肽，其中所述胞外区包含截短il5ra胞外区，所述截短il5ra胞外区包含不多于以下的一部分或全部：
6.根据权利要求1所述的重组多肽，其中所述胞外区包含截短il5ra胞外区，所述截短il5ra胞外区包含以下的一部分或全部：seq id no:2、seq id no:60、seq id no:67、seqid no:68或seq id no:69的氨基酸序列，但不包含seq id no:1的氨基酸124-342的氨基酸序列。
7.根据权利要求1所述的重组多肽，其中所述胞外区结合贝那利珠单抗。
8.根据权利要求1所述的重组多肽，其中所述跨膜区包含与seq id no:1的氨基酸343-362具有至少80％、85％、90％、95％或100％同一性的氨基酸序列。
9.根据权利要求1所述的重组多肽，其中所述跨膜区包含与选自以下的一种氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列：seq id no:3、seq idno:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10、seq id no:11、seq id no:12、seq id no:78和seq id no:79。
10.根据权利要求1所述的重组多肽，其中所述重组多肽进一步包含胞内结构域。
11.根据权利要求10所述的重组多肽，其中所述胞内结构域包含截短il5ra胞内结构域，任选地其中所述截短il5ra胞内结构域不与janus激酶2(jak2)缔合，任选地其中所述截短il5ra胞内结构域已丧失其信号转导能力。
12.根据权利要求11所述的重组多肽，其中
13.根据权利要求10所述的重组多肽，其中所述胞内结构域的长度不超过25、30、35、40、45或50个氨基酸，并且所述胞内结构域包含seq id no:14、seq id no:80、seq id no:81、seq id no:82、seq id no:83、seq id no:84或seq id no:85的氨基酸序列。
14.根据权利要求1所述的重组多肽，其中所述胞外结构域包含与seq id no:1的氨基酸32-123(结构域i)或氨基酸32-242(结构域i和ii)或氨基酸32-334(结构域i、ii和iii)具有至少80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列。
15.根据权利要求1所述的重组多肽，其中所述重组多肽包含与seq id no:1的氨基酸32-370(结构域i、ii和iii，跨膜结构域，和所述胞内结构域的片段)具有至少80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列。
16.根据权利要求1所述的重组多肽，其中所述重组多肽包含与seq id no:1的氨基酸32至123、或32至242、或32至334、或32至342、或32至370具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。
17.根据权利要求1所述的重组多肽，所述重组多肽进一步包含信号肽。
18.根据权利要求17所述的重组多肽，其中所述信号肽包含与seq id no:58、seq idno:15、seq id no:63、seq id no:64、seq id no:65或seq id no:66的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列。
19.根据权利要求1所述的重组多肽，所述重组多肽进一步包含在所述胞外结构域与所述跨膜结构域之间的接头。
20.根据权利要求19所述的重组多肽，其中所述接头包含与seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19、seq id no:20、seq id no:21和seq id no:22的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列。
21.根据权利要求10所述的重组多肽，其中所述胞内结构域由seq id no:14、seq idno:80、seq id no:81、seq id no:82、seq id no:83、seq id no:84、seq id no:85的氨基酸序列；或与其至少80％、85％、90％或95％相同的氨基酸序列组成。
22.根据权利要求1所述的重组多肽，其中所述重组多肽包含氨基酸序列，所述氨基酸序列：
23.根据权利要求1所述的重组多肽，所述重组多肽包含长度为至少4个氨基酸的异源区，其中所述异源区的氨基酸序列对il5ra是异源的，任选地其中所述异源区的氨基酸序列不存在于seq id no:1的人il5ra的氨基酸序列中。
24.一种核酸分子，所述核酸分子包含根据权利要求1-23中任一项所述的重组多肽的编码序列。
25.根据权利要求24所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含核苷酸序列，所述核苷酸序列：
26.根据权利要求24所述的核酸分子，所述核酸分子进一步包含嵌合抗原受体(car)的编码序列。
27.根据权利要求26所述的核酸分子，其中所述重组多肽和所述car的编码序列可操作地连接至同一启动子，使得所述两个编码序列共转录。
28.根据权利要求24所述的核酸分子，其中所述核酸分子存在于病毒载体中，任选地其中所述病毒载体是慢病毒载体或逆转录病毒载体。
29.一种细胞，所述细胞包含根据权利要求24所述的核酸分子。
30.根据权利要求29所述的细胞，其中所述细胞是人t细胞，任选地其中所述人t细胞是人treg细胞。
31.一种药物组合物，所述药物组合物包含：(i)根据权利要求29所述的细胞；和(ii)药学上可接受的载体。
32.一种药物组合物，所述药物组合物包含：(i)根据权利要求21所述的核酸分子；和(ii)药学上可接受的载体。
33.一种治疗有需要的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用根据权利要求29所述的细胞，任选地其中所述细胞源自所述患者。
34.一种治疗有需要的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用根据权利要求30所述的细胞，其中所述细胞表达对所述患者所患疾病中存在的抗原有特异性的car。
35.根据权利要求34所述的方法，所述方法进一步包括一旦已治疗所述患者，就向所述患者施用有效量的对il5ra有特异性的抗体，其中所述抗体引发针对表达所述重组多肽的细胞的细胞毒性，任选地其中所述抗体是igg1或igg2。
36.一种制备基因工程化的人细胞的方法，所述方法包括提供分离的人细胞，并且将根据权利要求24所述的核酸分子引入所述人细胞中。
37.根据权利要求36所述的方法，其中所述人细胞是人t细胞。
38.根据权利要求37所述的方法，其中所述人细胞是人treg细胞。
39.根据权利要求36所述的方法，所述方法进一步包括在所述基因工程化的人细胞的表面上表达所述重组多肽的条件下培养所述人细胞。
40.一种药物组合物，所述药物组合物包含：(i)多个根据权利要求29所述的细胞，和(ii)药学上可接受的载体。
41.一种药物组合物，所述药物组合物包含：(i)通过根据权利要求36所述的方法产生的多个所述基因工程化的人细胞，和(ii)药学上可接受的载体。
