本发明涉及宫颈癌癌前病变和癌变的检测，特别是涉及一种用于宫颈癌癌前病变和癌变检测的联检试剂盒及其制备方法和应用。
背景技术：
1、宫颈癌是全球妇女癌症中仅次于乳腺癌的第四位的癌症，位居女性生殖道恶性肿瘤的首位。相关统计显示全球每年有近50万宫颈癌新发病例，其中83%发生在发展中国家我国年新发病例13.15万，占28.8%.全世界每年约有29万人死于宫颈癌，我国约有3万人。2018年全球宫颈癌发病人数57万例，死亡人数31.1万。由于宫颈癌早期症状不明显，所以早期筛查，辅助诊断，预防和干预显得尤为重要。目前针对宫颈癌的筛查主要包括组织细胞层面和分子水平的检测方法。比如临床薄层液基细胞涂片法(tct)和阴道镜法，均需特定的仪器和专门的技术人员，结果判定也需丰富经验支撑，不适于宫颈癌的早期快速筛查。另外薄层液基细胞涂片法(tct)检测只局限于对细胞形态是否正常进行分析，不正常的细胞大部分为宫颈炎症，不等于是宫颈癌，还是需要做活检确定宫颈癌的癌前病变或癌变。
2、随着医学实验技术的发展以及对人乳头瘤病毒(hpv)和宫颈病变关系认识的加深，hpv感染的检查方法也由组织细胞水平发展到分子水平。但是hpv检测只局限于对hpv病毒的检测，hpv感染是一过性的，感染hpv病毒不等于宫颈癌，还是需要做活检确定宫颈癌的癌前病变或癌变。hpv常用的检测方法包括测序法、杂交捕获法、基因芯片法。但也需要昂贵的仪器，同时对操作者的要求较高。杂交捕获法，操作复杂耗时长，一次大概需要5h左右，且容易出现交叉反应。基因芯片法产品（如pcr-反向点杂交法、液态芯片法)缺点是不能实现实时检测，需要扩增后产物分析操作，耗时4h以上、同样操作复杂可能存在pcr产物污染，也不能满足临床宫颈癌大量筛查的需求。
技术实现思路
1、本发明的目的是针对现有技术中存在的宫颈癌前病变和癌变检测繁复，检出结果所需时间，而提供一种用于宫颈癌癌前病变和癌变检测的联检试剂盒
2、本发明的另一目的是提供一种所述联检试剂盒制备方法。
3、本发明的另一目的是提供一种所述联检试剂盒的应用。
4、为实现本发明的目的所采用的技术方案是：
5、一种用于宫颈癌癌前病变和癌变检测的联检试剂盒，至少包括具有检测以下指标的多个试纸条：e5蛋白、e6蛋白、e7蛋白和htert；
6、每个试剂条的连接垫上均包被有检测抗体-胶体金结合物，所述试剂条的检测线上包被有特异性捕获抗体，每一个试纸条上的特异性捕获抗体均不相同。
7、在上述技术方案中，所述宫颈癌癌前病变包括低度宫颈癌癌前病变和高度宫颈癌癌前病变，所述低度宫颈癌癌前病变的检出率大于96%，灵敏度大于90%，特异度大于96%，所述高度宫颈癌癌前病变的检出率大于94%，灵敏度大于89%，特异度大于95%，所述宫颈癌变联检试剂盒的检出率大于91%，灵敏度大于87%，特异度大于92%。
8、在上述技术方案中，所述e5蛋白的检出限为35ng/ml，所述e6蛋白的检出限为25ng/ml，所述e7蛋白的检出限为20ng/ml，所述htert的检出限为30ng/ml。
9、在上述技术方案中，所述试纸条上的质检线预包被羊抗鼠igg抗体。
10、在上述技术方案中，所述试纸条包括依次搭接的样品垫、连接垫、检测垫以及吸收垫。
11、在上述技术方案中，还包括样品处理试剂，所述样品处理试剂包括tris、naci、tritonx-100和bsa，所述样品处理方法为：将样品置于盛有样品处理试剂的试管中后密闭试管摇晃混匀。
12、本发明的另一方面，提供一种所述的联检试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
13、步骤1，检测线包被：先制备特异性捕获抗体包被液，然后分别在试剂条的检测垫的检测线上分别包被所述特异性捕获抗体包被液；
14、步骤2，进行检测抗体-胶体金包被。
15、在上述技术方案中，所述制备方法还包括：步骤3，质检线包被，所述质检线上各特异性捕获抗体的包被量均为1.5mg/ml。
16、本发明的另一方面，提供一种基于所述的联检试剂盒的非诊断目的的检测方法，包括以下步骤：
17、步骤s1，样品采集及后处理；
18、步骤s2，将步骤1后处理后的样品滴加于所述联检试剂盒的加样孔中，等待15min；
19、步骤s3，观察并记录结果。
20、本发明的另一方面，提供一种所述的联检试剂盒在用于宫颈癌前病变和癌变检测的产品中的应用。
21、与现有技术相比，本发明的有益效果是：
22、1.本发明发现e5蛋白、e6蛋白、e7蛋白、htert（端粒酶组成部分）的联合检测可以有效提高宫颈癌前病变和癌变的检测的敏感性和特异性，如相对于仅检测e7蛋白，采用本发明的联检试剂盒的检出率、敏感性和特异性均有显著提高。
23、2.本发明的联检试剂盒通过e5蛋白、e6蛋白、e7蛋白和htert四项联检大大降低宫颈癌筛查的假阴性，同时减低由于hpv感染一过性导致的假阳性，联检者相辅相成可用于不同阶段的宫颈癌检查，尤其是早期筛查，大大提高对宫颈癌癌前病变和癌变的检测精准度。
24、3.采用本发明的联检试剂盒检测时间仅需15min，相对于现有技术所需时间更短，样品取样更加便捷，宫颈癌前病变且检出率高于91%，宫颈癌变检出率高于89%。提高了宫颈癌前病变和癌变检测和诊断精准度及效率。
1.一种用于宫颈癌癌前病变和癌变检测的联检试剂盒，其特征在于，至少包括具有检测以下指标的多个试纸条：e5蛋白、e6蛋白、e7蛋白和htert；
2.如权利要求1所述的用于宫颈癌癌前病变和癌变检测的联检试剂盒，其特征在于，所述宫颈癌癌前病变包括低度宫颈癌癌前病变和高度宫颈癌癌前病变，所述低度宫颈癌癌前病变的检出率大于96%，灵敏度大于90%，特异度大于96%，所述高度宫颈癌癌前病变的检出率大于94%，灵敏度大于89%，特异度大于95%，所述宫颈癌变联检试剂盒的检出率大于91%，灵敏度大于87%，特异度大于92%。
3.如权利要求1所述的用于宫颈癌癌前病变和癌变检测的联检试剂盒，其特征在于，所述e5蛋白的检出限为35ng/ml，所述e6蛋白的检出限为25ng/ml，所述e7蛋白的检出限为20ng/ml，所述htert的检出限为30ng/ml。
4.如权利要求1所述的用于宫颈癌癌前病变和癌变检测的联检试剂盒，其特征在于，所述试纸条上的质检线预包被羊抗鼠igg抗体。
5.如权利要求1所述的用于宫颈癌癌前病变和癌变检测的联检试剂盒，其特征在于，所述试纸条包括依次搭接的样品垫、连接垫、检测垫以及吸收垫。
6.如权利要求1所述的用于宫颈癌癌前病变和癌变检测的联检试剂盒，其特征在于，还包括样品处理试剂，所述样品处理试剂包括tris、naci、tritonx-100和bsa，所述样品处理方法为：将样品置于盛有样品处理试剂的试管中后密闭试管摇晃混匀。
7.一种如权利要求1-6任意一项所述的联检试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，还包括：步骤3，质检线包被，所述质检线上各特异性捕获抗体的包被量均为1.5mg/ml。
9.一种基于权利要求1-6任意一项所述的联检试剂盒的非诊断目的的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
10.一种如权利要求1-6任意一项所述的联检试剂盒在用于宫颈癌前病变和癌变检测的产品中的应用。
