本发明涉及中医药领域，具体是指狗肝菜多糖在制备防治对乙酰氨基酚致肝损伤中的应用。
背景技术：
1、药物性肝损伤，是我国非感染性肝病的第二大病种，是欧美国家急性肝衰竭的首要病因。药物性肝损伤主要分为固有型肝损伤和非特异质型肝损伤。固有型药物性肝损伤在临床前安全研究中是无法被预测到的，而大多数药物引起的非特异质型肝毒性在临床前研究中就会被发现从而不会被应用到临床，但其中一个例外就是对乙酰氨基酚(扑热息痛，acetaminophen)，它是一种经典的剂量依赖型肝损伤药物，是目前全球最常用的解热镇痛药物，其作用缓慢而持久，刺激性小、极少有过敏反应等优点，该药在治疗剂量之内是安全的，但大剂量、长期服用过程中，常可导致严重的肝坏死。在美国对乙酰氨基酚是导致50％左右急性肝衰竭发生的元凶，据报道每年约500人因此而丧命。我国目前也有过量服用对乙酰氨基酚致死的病例报道，对乙酰氨基酚所致肝损伤(acetaminophen-induced liverinjury,aili)已成为药品使用的公共安全用药问题。大量临床研究证实，部分中药、民族药及其复方具有多成分、多环节、多靶点的特性，对复杂病因的肝脏疾病(如肝纤维化、药物性肝损伤等)有一定的防治作用。
2、狗肝菜dicliptera chinensis(l.)nees.是爵床科华九头狮子草属狗肝菜的全草，具有清热、凉血、利湿、解毒、生津、利尿等功效，用于肝热目赤、眼结膜炎、痈肿疔疖、蛇犬咬伤等证，为民间药食两用的中草药，也是壮族民间常用于防治肝脏疾病的壮药。狗肝菜主要含有多糖、有机酸、氨基酸等，活性成分多糖在抗化学性肝损伤及肝纤维化具有良好保护作用，但对对乙酰氨基酚致肝损伤的研究尚属首次。
技术实现思路
1、本发明的目的是克服以上的技术缺陷，提供狗肝菜多糖在制备防治对乙酰氨基酚致肝损伤中的应用，涉及以狗肝菜dicliptera chinensis(l.)nees.全草为原料提取纯化出狗肝菜多糖，该提取物在制备防治对乙酰氨基酚致肝损伤中的应用。
2、为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：狗肝菜多糖在制备防治对乙酰氨基酚致肝损伤中的应用，所述的应用步骤如下：
3、s1、提取与纯化狗肝菜多糖：首先狗肝菜全草粗粉中对狗肝菜粗多糖进行提取，然后进行狗肝菜多糖纯化，最后对提取的狗肝菜多糖进行纯度测定；
4、s2、将狗肝菜多糖制备成药物制剂：将狗肝菜多糖加入相应辅料，制备成片剂、口服液、颗粒剂和丸剂；
5、s3、对狗肝菜多糖在制备对对乙酰氨基酚致肝损伤防治作用进行实验。
6、进一步，所述的步骤s1中狗肝菜粗多糖的提取流程为：称取干燥的狗肝菜全草粗粉1000g，加入10l石油醚回流脱脂提取2h。药渣挥尽石油醚后，沸水提取2次，每次1.5h，合并提取液，浓缩至100ml，用氯仿与正丁醇(比例4：1)多次萃取(即sevag法)，得到除去蛋白质的上清液，加95％乙醇使醇含量达到80％，于4℃冰箱中醇沉12h。抽滤，弃去上清液，滤渣依次用乙醚、无水乙醇、丙酮洗涤，即得狗肝菜粗多糖。
7、进一步，所述的步骤s1中狗肝菜多糖的纯化流程为：将狗肝菜粗多糖溶于水，将其加样到经ph＝8.0的磷酸盐缓冲液前处理的de52型树脂层析柱中，静止12h，用蒸馏水，流速以2ml/min洗脱，再经sephadex-g25凝胶层析柱，浓缩洗脱液，用蒸馏水，流速以0.5-1.0ml/min洗脱，浓缩洗脱液，再经活性炭脱除其多糖色素，真空干燥得白色粉末状狗肝菜多糖。
8、进一步，所述的步骤s1中狗肝菜多糖的纯度测定流程为：狗肝菜多糖用葡萄糖作对照品，采用苯酚一硫酸法显色，经紫外一可见分光计测定样品中的多糖纯度达95.6％。
9、进一步，所述的步骤s3中对狗肝菜多糖在制备对对乙酰氨基酚致肝损伤防治作用进行实验，实验动物为pf级km小鼠；试剂药品为谷丙转氨酶试剂盒、谷草转氨酶试剂盒、碱性磷酸酶试剂盒、丙二醛试剂盒、超氧化歧化酶试剂盒、谷胱甘肽试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒、过氧化氢酶试剂盒、肿瘤坏死因子α试剂盒、白介素6试剂盒、白介素1β试剂盒、对乙酰氨基酚试剂盒；实验仪器为auw220d型电子天平、fresco-21高速冷冻离心机、epoch型全波长酶标仪、bx43光学显微镜。
10、进一步，所述的步骤s3中对狗肝菜多糖在制备对对乙酰氨基酚致肝损伤防治作用的实验流程为：将50只小鼠随机分为正常对照组、模型组和狗肝菜多糖组(200mg/kg，400mg/kg，600mg/kg)，每组10只。除正常对照组和模型组外，各治疗组按照20ml/kg体积灌胃给药，每天按时给药一次，连续10天。
11、本发明与现有技术相比的优点在于：
12、狗肝菜多糖(dcp)对aili小鼠肝脏组织病理学有影响：经he染色观察，正常小鼠肝细胞均匀排列，胞浆丰富，肝小叶结构完整，汇管区未出现炎症浸润。模型组肝组织损伤严重，镜下见肝小叶结构被破坏，肝细胞数量减少，小叶内肝细胞出现不同程度的水肿，可见明显空泡，出现明显点灶状坏死和淤血。而dcp各用药组的肝细胞坏死程度较模型组都有明显改善，肝小叶结构基本正常，细胞索状排列较整齐，空泡数量和损伤面积明显减少，点灶状坏死偶见，正常肝细胞数量也得到逐渐增加。从he染色组织病理学检查提示dcp能够有效改善aili小鼠的肝损伤病理学变化。
13、狗肝菜多糖对肝损伤小鼠血清中alt、ast、akp和mda水平有影响，肝损伤模型组与正常对照组相比较，alt、ast、akp和mda的活性有显著性差异(p<0.05，p<0.01)。与模型组比较，狗肝菜多糖用药组均能明显的抑制alt、ast、akp和mda活性(p<0.05，p<0.01)，且成量效关系。因此可判断dcp对apap致肝损伤具有良好保护作用。
14、dcp对aili小鼠肝脏组织中sod、gsh、gsh-px和cat活性有影响，模型组与正常对照组相比较，模型组中的tnf-α、il-6和il-1β含量显著升高(p<0.05，p<0.01)；dcp给药组随剂量的增加而呈剂量依赖性的降低tnf-α、il-6和il-1β的含量，有统计学意义(p<0.05，p<0.01)；说明狗肝菜多糖能够对aili肝损伤有一定的抗炎作用效果。
1.狗肝菜多糖在制备防治对乙酰氨基酚致肝损伤中的应用，其特征在于，所述的应用步骤如下：
2.根据权利要求1所述的狗肝菜多糖在制备防治对乙酰氨基酚致肝损伤中的应用，其特征在于，所述的步骤s1中狗肝菜粗多糖的提取流程为：称取干燥的狗肝菜全草粗粉，加入石油醚回流脱脂提取，药渣挥尽石油醚后，沸水提取，合并提取液并进行浓缩，用氯仿与正丁醇多次萃取，得到除去蛋白质的上清液，加乙醇使醇含量达到80％，在冰箱中醇沉，抽滤，弃去上清液，滤渣依次用乙醚、无水乙醇、丙酮洗涤，即得狗肝菜粗多糖。
3.根据权利要求2所述的狗肝菜多糖在制备防治对乙酰氨基酚致肝损伤中的应用，其特征在于，所述的步骤s1中狗肝菜多糖的纯化流程为：将狗肝菜粗多糖溶于水，将其加样到经ph＝8.0的磷酸盐缓冲液前处理的de52型树脂层析柱中，静止，用蒸馏水洗脱，再经sephadex-g25凝胶层析柱，浓缩洗脱液，用蒸馏水洗脱，浓缩洗脱液，再经活性炭脱除其多糖色素，真空干燥得白色粉末状狗肝菜多糖。
4.根据权利要求2所述的狗肝菜多糖在制备防治对乙酰氨基酚致肝损伤中的应用，其特征在于，所述的步骤s1中狗肝菜多糖的纯度测定流程为：狗肝菜多糖用葡萄糖作对照品，采用苯酚一硫酸法显色，经紫外一可见分光计测定样品中的多糖纯度。
5.根据权利要求1所述的狗肝菜多糖在制备防治对乙酰氨基酚致肝损伤中的应用，其特征在于，所述的步骤s3中对狗肝菜多糖在制备对对乙酰氨基酚致肝损伤防治作用进行实验，实验动物为pf级km小鼠；试剂药品为谷丙转氨酶试剂盒、谷草转氨酶试剂盒、碱性磷酸酶试剂盒、丙二醛试剂盒、超氧化歧化酶试剂盒、谷胱甘肽试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒、过氧化氢酶试剂盒、肿瘤坏死因子α试剂盒、白介素6试剂盒、白介素1β试剂盒、对乙酰氨基酚试剂盒；实验仪器为auw220d型电子天平、fresco-21高速冷冻离心机、epoch型全波长酶标仪、bx43光学显微镜。
6.根据权利要求5所述的狗肝菜多糖在制备防治对乙酰氨基酚致肝损伤中的应用，其特征在于，所述的步骤s3中对狗肝菜多糖在制备对对乙酰氨基酚致肝损伤防治作用的实验流程为：将小鼠随机分为正常对照组、模型组和狗肝菜多糖组，除正常对照组和模型组外，各治疗组按照一定体积灌胃给药，每天按时给药一次，连续几天。
