本发明涉及分子生物，特别涉及一种抑制hsa_circ_0099132表达的shrna及其应用。
背景技术：
1、环状rna(circrna)在1976年首次被发现，是一类特殊的非编码rna分子，其与线性rna的最大不同在于结构呈缺乏自由末端的闭环状，因此与其他类型的rna相比，环状rna对核酸外切酶和rna酶具有一定抵抗力，使之更稳定，进化上更保守。而目前对环状rna的研究显示，其通过与mirna结合的海绵作用以及与rna结合蛋白的相互作用等参与癌症的发展机制。因此，环状rna在成为癌症生物标志物方面具有巨大的潜力。研究表明，circrna参与肿瘤的发生发展、肿瘤干性、药物抵抗等，是肿瘤治疗的新方法和新靶点。
2、短发夹rna(shrna)是一种常用的敲低(降低靶基因表达)工具，通过载体将其表达序列转入细胞内，并可进一步整合至基因组中，实现shrna的稳定表达，并可加工成sirna，从而持续抑制基因表达；其也可通过与目标mrna互补结合序列特异性地实现靶mrna降解。但是针对circrna设计shrna的难度较大，其靶点序列必须跨越环化位点，可供选择的靶点序列十分有限。
3、hsa_circ_0099132被发现在结直肠癌组织中高表达，使用shrna敲低hsa_circ_0099132将会为结直肠癌的治疗提供一种有益的途径。
技术实现思路
1、为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种抑制hsa_circ_0099132表达的shrna及其应用。本发明通过大量筛选和实验工作得到抑制hsa_circ_0099132表达的shrna。
2、本发明的目的通过下述技术方案实现：
3、本发明提供一种抑制hsa_circ_0099132表达的shrna，所述shrna的靶点序列为5'-gcaaaagctcagagggttatc-3'(seq id no：2)；
4、本发明中“靶点序列”是指靶基因与shrna的基因所共有的序列；因为该“靶点序列”，shrna或其加工得到的sirna产物得以特异性识别靶基因的mrna。
5、进一步的，表达该shrna的正义链序列如seq id no：5所示。
6、一种双链寡核苷酸，其正义链序列如seq id no：5所示，反义链序列如seq id no：6所示。
7、一种抑制hsa_circ_0099132表达的shrna表达载体，包括表达上述shrna的dna序列。
8、进一步的，所述shrna表达载体是将表达上述shrna的dna序列插入至plent-u6-gfp-puro载体得到的重组载体；
9、进一步的，所述表达上述shrna的dna序列为上述双链寡核苷酸。
10、一种抑制hsa_circ_0099132表达的shrna表达载体的构建方法，包括如下步骤：
11、(1)合成寡核苷酸：将序列如seq id no：5和seq id no：6的引物先进行变性，再进行退火，得到双链寡核苷酸；
12、(2)对plent-u6-gfp-puro载体进行bamhi与mlui双酶切，得到2个片段，回收较大片段；
13、(3)将步骤(1)所得双链寡核苷酸和步骤(2)所得较大片段使用t4连接酶连接，得到抑制hsa_circ_0099132表达的shrna表达载体。
14、进一步的，步骤(1)的变性程序为：煮沸5min；
15、进一步的，步骤(2)的退火程序为：72℃15min，自然冷却至室温，约30min。
16、一种重组慢病毒，所述重组慢病毒采用上述重组载体与包装质粒共转染细胞制备得到。
17、一种重组细菌，包含上述shrna表达载体。
18、上述shrna、shrna表达载体在制备降低结直肠癌细胞中hsa_circ_0099132表达水平的试剂盒中的应用。
19、一种hsa_circ_0099132的抑制剂，所述抑制剂为上述shrna、shrna表达载体中的至少一种。
20、上述shrna、shrna表达载体、重组慢病毒或上述hsa_circ_0099132的抑制剂在制备治疗结直肠癌的药物中的应用。
21、进一步的，上述shrna、shrna表达载体、重组慢病毒或上述hsa_circ_0099132的抑制剂在制备抑制结直肠癌肿瘤生长的药物中的应用。
22、进一步的，上述shrna、shrna表达载体、重组慢病毒或上述hsa_circ_0099132的抑制剂在制备抑制结直肠癌细胞中hsa_circ_0099132表达水平的药物中的应用。
23、本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
24、本发明的shrna及其载体能高效抑制hsa_circ_0099132的表达，抑制结直肠癌细胞的增殖速率，并显著抑制小鼠体内肿瘤的生长，为结直肠癌治疗开辟新的方向。
1.一种抑制hsa_circ_0099132表达的shrna，其特征在于：所述shrna的靶点序列为5'-gcaaaagctcagagggttatc-3'，seq id no：2。
2.根据权利要求1所述的shrna，其特征在于：表达该shrna的正义链序列如seq id no：5所示。
3.一种双链寡核苷酸，其特征在于：其正义链序列如seq id no：5所示，反义链序列如seq id no：6所示。
4.一种抑制hsa_circ_0099132表达的shrna表达载体，其特征在于：所述载体包括表达权利要求1或2所述的shrna的dna序列。
5.根据权利要求4所述的shrna表达载体，其特征在于：所述载体是将表达权利要求1或2所述的shrna的dna序列插入至plent-u6-gfp-puro载体得到的重组载体。
6.根据权利要求4或5所述的shrna表达载体，其特征在于：所述表达权利要求1或2所述的shrna的dna序列为权利要求3所述的双链寡核苷酸。
7.权利要求1或2所述的shrna相关的生物材料，其特征在于：为下述生物材料中的任意一种或多种组合：
8.权利要求1～2任一项所述的shrna、权利要求4～6任一项所述的shrna表达载体在制备降低结直肠癌细胞中hsa_circ_0099132表达水平的试剂盒中的应用。
9.一种hsa_circ_0099132的抑制剂，其特征在于：所述抑制剂为权利要求1～2任一项所述的shrna和权利要求4～6任一项所述的shrna表达载体中的至少一种。
10.权利要求1～2任一项所述的shrna、权利要求4～6任一项所述的shrna表达载体、权利要求7所述的生物材料或权利要求9所述的hsa_circ_0099132的抑制剂的应用，其特征在于：为下述应用中的任意一种或多种组合：
