本发明涉及分析检测，具体公开了一种盐酸苄丝肼中杂质的检测方法。
背景技术：
1、盐酸苄丝肼化学名为2-[(2，3，4-三羟基苯基)甲基]酰肼-dl-丝氨酸盐酸盐，结构式如下：
2、
3、盐酸苄丝肼是一种芳香族氨基酸的外周多巴脱羧酶抑制剂，通常与左旋多巴联合使用，可抑制左旋多巴在外周转换为多巴胺，从而使进入脑内的左旋多巴的量增多，有效地改善帕金森病症状。
4、现有工艺生产盐酸苄丝肼原料一般会使用2,3,4-三羟基苯甲醛作为起始物料之一，有可能会在最终成品中产生残留或降解生成。2,3,4-三羟基苯甲醛的结构式如下：
5、
6、目前，对于2,3,4-三羟基苯甲醛的检测方法多是采用单一的色谱法。但是，色谱法检测灵敏度有限，且更侧重于利用不同杂质的分离，专属性较差。因此，研发一种专用于检测2,3,4-三羟基苯甲醛的方法对于控制盐酸苄丝肼的质量具有重要意义。
技术实现思路
1、针对现有技术中采用单一的色谱法检测2,3,4-三羟基苯甲醛的灵敏度有限，专属性差的问题，本发明提供了一种盐酸苄丝肼中杂质的检测方法。
2、为达到上述发明目的，本发明提供了如下的技术方案。
3、本发明第一方面提供了一种盐酸苄丝肼中杂质的检测方法，所述杂质为2,3,4-三羟基苯甲醛，所述检测方法为液相色谱-质谱联用法，具体包括如下步骤：
4、步骤一、供试品溶液和对照品溶液的配制：
5、供试品溶液的配制：将盐酸苄丝肼样品溶于甲醇中，得供试品溶液；
6、对照品溶液的配制：将2,3,4-三羟基苯甲醛对照品溶于甲醇中，得对照品溶液；
7、步骤二、取对照品溶液和供试品溶液，按照下述色谱条件和质谱条件进样检测：
8、色谱条件为：色谱柱为c18色谱柱；
9、流动相a：含甲酸的水溶液；
10、流动相b：含甲酸的醇溶液；
11、洗脱方式：梯度洗脱；
12、质谱条件为：采用esi离子源，使用负离子扫描模式，mrm检测模式，气帘气体为35l/min～45l/min；碰撞气为medium；去簇电压为90v～110v；射入电压为5v～15v；射出电压为5v～15v；离子化电压为4500v～5500v；离子源气为50psi～60psi；辅助加热气为50psi～60psi；离子化温度为500℃～600℃；2,3,4-三羟基苯甲醛的定量离子为：母离子153.1m/z，子离子106.9m/z，碰撞电压为-25v～-28v；2,3,4-三羟基苯甲醛的定性离子为：母离子153.1m/z，子离子124.8m/z，碰撞电压为-20v～-24v。
13、相比于现有技术，本发明以液相色谱-质谱联用检测法对盐酸苄丝肼中杂质的杂质2,3,4-三羟基苯甲醛进行检测，由于盐酸苄丝肼中存在与2,3,4-三羟基苯甲醛类似的杂质2-氨基-3-羟基丙酰肼盐酸盐，且二者分离难度较高，因此采用单一的色谱法仅仅能提高二者分离度，而难以实现对2,3,4-三羟基苯甲醛的单一性检测。基于此，本发明提供了一种液相色谱-质谱联用检测法用于检测盐酸苄丝肼中的2,3,4-三羟基苯甲醛，该方法操作简便，专属性强，灵敏度高，准确可靠，线性关系良好，同时具有良好的精密度和耐用性，各项方法验证均能符合要求，适用于盐酸苄丝肼原料中潜在工艺2,3,4-三羟基苯甲醛的痕量检测，可作为其质量监控的依据。
14、优选的，所述色谱法中，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：
15、0-4.9min，85％流动相a，15％流动相b；
16、4.9min-5min，85％→10％流动相a，15％→90％流动相b；
17、5min-7min，10％流动相a，90％流动相b；
18、7min-7.1min，10％→85％流动相a，90％→15％流动相b；
19、7.1min-12min，85％流动相a，15％流动相b。
20、优选的，步骤一中，所述对照品溶液的浓度为9μg/ml～11μg/ml。
21、优选的，步骤一中，所述供试品溶液的浓度为1mg/ml～3mg/ml。
22、优选的，所述色谱条件还包括总流速为0.55ml/min～0.65ml/min。
23、优选的，所述色谱条件还包括进样量为20μl。
24、优选的，所述色谱条件中，色谱柱的规格为250*4.6mm，填料直径为3μm。
25、优选的，所述色谱条件中，流动相a中甲酸的体积百分含量为0.08％～0.12％。
26、优选的，所述色谱条件中，流动相b为含甲酸的甲醇溶液，其中，甲酸的体积百分含量为0.08％～0.12％。
27、优选的，所述色谱柱的柱温为28℃～32℃。
28、优选的，所述质谱条件为：采用esi离子源，使用负离子扫描模式，mrm检测模式，气帘气体为40l/min；碰撞气为medium；去簇电压为100v；射入电压为5v～15v；射出电压为5v～15v；离子化电压为4500v～5500v；离子源气为50psi～60psi；辅助加热气为50psi～60psi；离子化温度为550℃；2,3,4-三羟基苯甲醛的定量离子为：母离子153.1m/z，子离子106.9m/z，碰撞电压为-27v；2,3,4-三羟基苯甲醛的定性离子为：母离子153.1m/z，子离子124.8m/z，碰撞电压为-22v。
29、综上所述，本发明提供了一种检测盐酸苄丝肼中的杂质2,3,4-三羟基苯甲醛方法。本发明提供的检测2,3,4-三羟基苯甲醛的方法具有专属性强、灵敏度高、检测快速、测试结果准确可靠等优点，同时具有良好的精密度和耐用性，各项方法验证均能符合要求，适用于盐酸苄丝肼中2,3,4-三羟基苯甲醛的定量检测。本发明有效解决了现有采用单一的色谱法检测2,3,4-三羟基苯甲醛的灵敏度有限，专属性差的问题，可作为盐酸苄丝肼质量监控的依据。
1.一种盐酸苄丝肼中杂质的检测方法，所述杂质为2,3,4-三羟基苯甲醛，其特征在于：所述检测方法为液相色谱-质谱联用法，具体包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的盐酸苄丝肼中杂质的检测方法，其特征在于：所述色谱法中，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：
3.如权利要求1所述的盐酸苄丝肼中杂质的检测方法，其特征在于：步骤一中，所述对照品溶液的浓度为9μg/ml～11μg/ml；和/或
4.如权利要求1所述的盐酸苄丝肼中杂质的检测方法，其特征在于：所述色谱条件还包括总流速为0.55ml/min～0.65ml/min。
5.如权利要求1所述的盐酸苄丝肼中杂质的检测方法，其特征在于：所述色谱条件还包括进样量为20μl。
6.如权利要求1所述的盐酸苄丝肼中杂质的检测方法，其特征在于：所述色谱条件中，色谱柱的规格为250*4.6mm，填料直径为3μm。
7.如权利要求1所述的盐酸苄丝肼中杂质的检测方法，其特征在于：所述色谱条件中，流动相a中甲酸的体积百分含量为0.08％～0.12％。
8.如权利要求1所述的盐酸苄丝肼中杂质的检测方法，其特征在于：所述色谱条件中，流动相b为含甲酸的甲醇溶液，其中，甲酸的体积百分含量为0.08％～0.12％。
9.如权利要求1所述的盐酸苄丝肼中杂质的检测方法，其特征在于：所述色谱条件中，色谱柱的柱温为28℃～32℃。
10.如权利要求1所述的盐酸苄丝肼中杂质的检测方法，其特征在于：所述质谱条件为：采用esi离子源，使用负离子扫描模式，mrm检测模式，气帘气体为40l/min；碰撞气为medium；去簇电压为100v；射入电压为5v～15v；射出电压为5v～15v；离子化电压为4500v～5500v；离子源气为50psi～60psi；辅助加热气为50psi～60psi；离子化温度为550℃；2,3,4-三羟基苯甲醛的定量离子为：母离子153.1m/z，子离子106.9m/z，碰撞电压为-27v；2,3,4-三羟基苯甲醛的定性离子为：母离子153.1m/z，子离子124.8m/z，碰撞电压为-22v。
