本公开涉及能够结合cd122的抗体、能够结合cd132的抗体以及双特异性结合蛋白，例如双特异性cd122/cd132结合蛋白(如，fit-ig和duobody形式)。本文公开的抗体和双特异性结合蛋白可用于治疗或预防疾病，例如t细胞功能障碍或癌症。
背景技术：
1、il-2是一种调节包括t细胞和自然杀伤(nk)细胞在内的不同免疫细胞的多效性细胞因子。已在不同细胞类型上鉴定出两种不同的il-2受体复合物：由α链(il-2rα，叉称cd25)、β链(il-2rβ，叉称cd122)和γ链(il-2rγ，叉称cd132)组成的高亲和力(kd～10pm)il-2受体复合物；由cd122和cd132组成的中等亲和力(kd～1nm)受体。高亲和力复合物在免疫抑制性调节性t细胞(treg)上组成型表达并在活化的t细胞上瞬时表达，而中等亲和力受体通常在记忆表型(mp)cd8+ t细胞和nk细胞上表达。
2、cd122和cd132的异二聚化被认为是与il-2结合后有效的信号传导所必需的。信号传导通过多种胞内途径发生，包括janus激酶(jak)-stat途径、磷酸肌醇3-激酶(pi3k)-akt途径和丝裂原活化的蛋白激酶(mapk)途径(boyman，o.&sprent，j.nat.rev.immunol.12，180-190，2012)。由于缺乏细胞质激酶激活结构域，cd25不直接参与il-2信号通路。
3、重组人il-2(rhil-2)已经被开发并批准用于治疗转移性黑色素瘤和肾细胞癌。但其临床应用受到其短半寿期和严重不良反应(包括血管渗漏综合征(vls)、高血压和肝毒性)的限制。根据krieg等(proe.natl.acad.sci.107，11906-11911，2010)的研究，血管渗漏毒性与血管和肺内皮细胞上高亲和力il-2受体复合物的表达有关，导致肺水肿。il-2诱导的肺水肿可以通过cd25的消耗在体内极大地减少。另一方面，il-2在癌症治疗中的效用可能会因il-2优先结合treg细胞上的高亲和力受体而进一步折损，所述treg细胞可以抑制肿瘤特异性效应t细胞的扩增和活化，从而减弱抗肿瘤疗效(sun，z.等人，nat.commun.10：3874，2019)。
4、已经有各种努力来工程化rhil-2变体，以避免与cd25结合并通过聚乙二醇化(pegylation)或其他等效技术延长半寿期。尽管这些工程化蛋白质中的一些具有期望的功能活性，但它们中的许多在体内免疫原性较高(verhoef，j.j.f.等人，drugdiscov.today19，1945-1952(2014))。因此，本领域仍然需要创造具有所需生物活性和安全性的il-2途径的抗肿瘤激动剂。
5、迫切需要同时结合il-2rβ(cd122)和il-2rγ(cd132)但不结合il-2ra(cd25)的双特异性抗体，从而具有il-2的活性，同时避免与il-2ra相关的干扰的双特异性抗体，因为所述的双特异性抗体将促进il-2rβ和il-2rγ偶联和下游信号传导的生物学活性与抗体分子的安全性相结合。
技术实现思路
1、本公开通过提供新型抗cd122抗体、抗cd132抗体和工程化双特异性蛋白来满足上述需求，所述工程化双特异性蛋白同时结合il-2rβ(cd122)和il-2rγ(cd132)以诱导人免疫效应细胞中的il-2r信号传导的激活，不优先激活treg，而将平衡转向效应t细胞和nk细胞的激活。
2、具体地，在一些实施方案中，本公开提供抗cd122单特异性抗体，如对cd122具有高结合效力的那些单特异性抗体。在一些实施方案中，本公开还提供结合cd132的单特异性抗体，如以高亲和力结合cd132的那些单特异性抗体。在一些实施方案中，本公开还提供了cd122/cd132双特异性结合蛋白，能够优先结合由cd122和cd132组成的中等亲和力il-2rβγ受体。在一些实施方案中，cd122/cd132双特异性结合蛋白为如pct公开号wo2015/103072中描述的串联fab(fabs-in-tandem)的免疫球蛋白(fit-ig)形式，或为如labrijn等人，proc natl acad sci u s a.(2013)110(13)：5145-50描述的duobody形式。在一些实施方案中，本文所述的双特异性多价结合蛋白可用于在结合包含cd122和cd132的复合物时刺激信号传导，优先刺激效应t细胞和/或nk细胞而非调节性t细胞的增殖，以及改善体内和/或体外的效应t细胞和/或nk细胞的抗肿瘤免疫。在一些实施方案中，本文所述的双特异性多价结合蛋白可用于减少肿瘤负荷/生长/细胞扩增。
3、在一些实施方案中，本公开还提供了制备和使用本文所述的抗cd122抗体和抗cd132抗体以及cd122/cd132双特异性结合蛋白的方法。本发明也公开了多种组合物，如可用于治疗或预防个体中与效应t细胞和/或nk细胞功能受损，和/或免疫应答下调有关的病症的方法中的组合物。
1.特异性结合cd122的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含一组六个cdr，即cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其中：
2.权利要求1的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含重链可变结构域vh和轻链可变结构域vl，其中：
3.权利要求1的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体是嵌合或人源化抗体，任选地，所述抗体是人源化抗体，
4.权利要求1的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含选自下组的vh和vl序列组合：
5.权利要求1-4中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含fc区，例如具有seq id no：70的氨基酸序列的fc区。
6.融合物或缀合物，其包含权利要求1-5中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段。
7.检测生物样品中cd122的方法，包括将所述生物样品与权利要求1-5中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段或权利要求6所述的融合物或缀合物接触。
8.特异性结合cd132的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含一组六个cdr，即cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其中：
9.权利要求8的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含重链可变结构域vh和轻链可变结构域vl，其中：
10.权利要求8的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体是嵌合或人源化抗体，任选地，所述抗体是人源化抗体。
11.权利要求8-10中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含fc区，例如，具有seq id no：70的氨基酸序列的fc区。
12.融合物或缀合物，其包含权利要求8-11中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段。
13.检测生物样品中cd132的方法，包括将生物样品与权利要求8-11中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段或权利要求12所述的融合物或缀合物接触。
14.核酸分子，其编码权利要求1-5和8-11中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段。
15.载体，其包含权利要求14的核酸分子。
16.宿主细胞，其表达编码权利要求1-5和8-11中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段的核酸分子。
17.药物组合物，其包含权利要求1-5和8-11中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段、权利要求6和12的融合物或缀合物、权利要求14的核酸分子、权利要求15的载体或权利要求16的宿主细胞。
18.特异性结合cd122和cd132的双特异性结合蛋白，其包含特异性结合cd122的第一抗原结合位点，和特异性结合cd132的第二抗原结合位点，其中：
19.权利要求18的双特异性结合蛋白，其包含第一多肽链、第二多肽链和第三多肽链，
20.权利要求18的双特异性结合蛋白，其为权利要求1-4中任一项所述的抗体与权利要求8-10中任一项所述的抗体基于fab臂交换的duobody形式，任选地具有(i)重链，其包含seq id no：10的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列，和配对轻链，其包含seq id no：11的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列，以及(ii)重链，其包含seq id no：12的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列，和配对轻链，其包含seq id no：13的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列。
21.权利要求19的双特异性结合蛋白，其中：
22.权利要求19-21中任一项所述的双特异性结合蛋白，其中所述双特异性结合蛋白具有以下一项或多项特征：
23.核酸分子，其编码权利要求19-22中任一项所述的双特异性结合蛋白。
24.载体，其包含权利要求23的核酸分子。
25.宿主细胞，其包含权利要求23的核酸分子或权利要求24的载体。
26.制备权利要求1-6和8-11中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段或权利要求19-22中任一项所述的双特异性结合蛋白的方法，其包括：
27.药物组合物，其包含权利要求19-22中任一项所述的双特异性结合蛋白、权利要求23的核酸、权利要求24的载体或权利要求25的宿主细胞。
28.治疗或预防效应t细胞和/或nk细胞的功能受损且免疫应答被下调的疾病的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的权利要求17或权利要求27的药物组合物。
29.权利要求28的方法，其中所述受试者是人。
30.权利要求28的方法，其中所述疾病是t细胞功能障碍性疾病或癌症，例如，黑色素瘤、转移性黑色素瘤、肾细胞癌、卵巢癌、肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、脑癌、头颈癌、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、宫颈癌、肝细胞癌、前列腺癌或膀胱癌。
