本发明涉及一种生理学上可接受的组合物，其包含酵母菌。本发明进一步涉及一种用于制备该组合物的方法。本发明进一步涉及该组合物用作药物，用作营养保健品(nutraceutical，营养食品)、特殊医学用途食品、药妆品和功能性食品的食品添加剂或功能性成分，以及用作动物营养中功能性成分的饲料添加剂，用作局部应用的成分。特别地，根据本发明的组合物适合维持和改善肠道健康，用于治疗医学障碍(medical disorder)。在一个优选的实施方式中，该障碍由促炎标志物定义。在一个优选的实施方式中，该障碍是胃肠障碍(gastro-intestinal disorder，胃肠紊乱，胃肠疾病)。根据本发明的医学障碍的治疗可以是预防性治疗或对患有所述障碍的个体的治疗。
背景技术：
1、益生菌是活的微生物，当以足够量施用时，可为宿主带来健康益处。几个世纪以来，早在意识到微生物对健康的潜在益处之前，人类就已经从食品中的微生物(例如发酵奶和酸奶中的微生物)受益。现代含益生菌的营养素和药物是早期发酵食品的直接衍生物。迄今为止，最常见的益生菌来自细菌乳杆菌(lactobacillus)属和双歧杆菌(bifidobacterium)属，但酵母菌也越来越被认为是有效的益生菌生物。
2、一些国际指南推荐使用酵母菌类(yeast-based，基于酵母菌的)益生菌来治疗诸如腹泻等急性胃肠道障碍或诸如炎症性肠病(ibd)和肠易激综合征(ibs)等慢性病症。这些酵母菌的益生菌活性被认为是多因素的，并且包括改善肠道屏障功能、病原体竞争性排斥、抗菌肽的产生、免疫调节、微生物群的调节和营养作用。与细菌益生菌相比，酵母菌类益生菌具有许多优势，如更好地承受胃到达肠道的极端环境，并且对抗生素不敏感，从而在抗生素治疗期间提供产生益生菌作用的可能性。多种酵母菌物种已证明具有益生菌作用。多种酵母菌被建议充当益生菌，如属于chrysonilia、德巴利酵母属(debaromyces)、有孢汉逊酵母属(hanseniaspora)、克鲁维酵母属(kluyveromyces)、lachanencea、梅奇酵母属(metschnikowia)、毕赤酵母属(pichia)、啤酒酵母属(saccharomyces)、有孢圆酵母属(torulaspora)和亚罗酵母属(yarrowia)的一些菌株(ogunremi et al.,2015.j applmicrobiol 117:797-808；sugiharto et al.,2018.j adv vet 5(3):332-342；agarbatiet al.,2020.foods 9(3):287；dufosséet al.,2021.j fungi 7(3):177)。
3、为了解决对可以对特定病理或功能障碍或对身体和精神一般健康状况两者产生预防性和/或治疗性健康有益影响的新型微生物菌株的需求，us2010/303778提供了一种特定的酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)菌株(保藏于国家微生物培养物保藏中心(collection nationalede cultures de microorganismes)，编号cncm i-3856)和一种特定的布拉氏酵母变种(saccharomyces var.boulardii)酵母菌株(保藏于国家微生物培养物保藏中心，编号cncm i-3799)。所述酵母菌可以例如用于治疗肠道障碍的组合物中。
4、持续需要提供医学障碍的替代治疗可能性，特别是胃肠道障碍，如腹泻、ibd或ibs，或其中炎症因子发挥作用的障碍，如类风湿性关节炎、骨关节炎、局部皮炎、牛皮癣、过敏或肥胖。还持续需要提供适合改善肠道健康或改善胃肠功能的替代产品。具体而言，一个目的是提供一种组合物，与已知的益生菌组合物相比，该组合物适合于提供改善的肠道屏障功能保护或抗炎作用，该组合物包含诸如上文讨论的现有技术中所述的酵母菌。可以解决的一个或多个进一步的目的将从下面的描述中得出。
技术实现思路
1、我们现已发现，一个或多个所述目的通过提供一种包含至少三种不同酵母菌的特定组合物来实现。
2、因此，本发明涉及一种生理学上可接受的组合物，其包含(i)选自由布拉氏酵母(s.boulardii)酵母菌(yeast)、布拉氏酵母裂解物、布拉氏酵母细胞壁组分和布拉氏酵母提取物组成的组中的至少一种组分，进一步包含(ii)选自酿酒酵母酵母菌(s.cerevisiaeyeast)、酿酒酵母裂解物、酿酒酵母细胞壁组分和酿酒酵母提取物的组中的至少一种组分，并且进一步包含(iii)选自由马克斯克鲁维酵母(k.marxianus)酵母菌、马克斯克鲁维酵母裂解物、马克斯克鲁维酵母细胞壁组分和马克斯克鲁维酵母提取物组成的组中的至少一种组分。如实施例中所示，使用包含灭活的布拉氏酵母酵母菌、灭活的酿酒酵母酵母菌和灭活的马克斯克鲁维酵母酵母菌的生理学上可接受的组合物已经实现了特别好的结果。
3、进一步地，本发明涉及所述生理学上可接受的组合物，其用作药物。
4、此外，本发明涉及所述生理学上可接受的组合物，其用于通过疗法来治疗人类或动物。
5、此外，本发明涉及根据本发明的生理学上可接受的组合物，其用于维持或改善肠道健康或胃肠功能。
6、此外，本发明涉及根据本发明的生理学上可接受的组合物，其用于治疗患有胃肠障碍的个体。优选的待治疗的胃肠障碍是与肠道屏障功能损伤相关的障碍。在特别优选的实施方式中，根据本发明的组合物用于治疗腹泻、ibd或ibs。
7、此外，本发明涉及根据本发明的生理学上可接受的组合物，其用于治疗患有由一种或多种促炎标志物(特别是选自由il-8、ip-10、mcp-1、tnfα和tnfα/il-10组成的组中的一种或多种标志物)定义的障碍的个体。关于il-10，观察到这是调节/抗炎化合物，其浓度可能降低并导致tnfα/il-10比率增加，即使tnfα本身不增加亦如此；该比率也是由一种或多种促炎标志物定义的障碍的相关标志物。
8、优选地，根据本发明待治疗的由一种或多种促炎标志物定义的障碍选自由类风湿性关节炎、骨关节炎、局部皮炎、牛皮癣、过敏和肥胖组成的组。
9、此外，本发明涉及一种生理学上可接受的组合物作为食品添加剂、饲料添加剂、人类营养中的功能性食品、动物营养中的功能性食品、营养保健品用的食品添加剂或功能性成分的用途。
10、此外，本发明涉及一种生理学上可接受的组合物作为益生菌、后生元(postbiotic)、副益生菌(paraprobiotic)、益生元、共生元(symbiotic)或益生菌替代品的用途。
11、此外，本发明涉及一种医疗器械(medical device)，其包含生理学上可接受的组合物。
12、在根据本发明的用途(非医疗或医疗)中，所述(i)布拉氏酵母、(ii)酿酒酵母和(iii)马克斯克鲁维酵母组分，并且特别是灭活的布拉氏酵母酵母菌、灭活的酿酒酵母酵母菌和灭活的马克斯克鲁维酵母酵母菌通常是所述组合物的活性成分。
13、根据本发明的(医疗)用途可以是预防性治疗(预防性)或患有待治疗的医学障碍的个体(特别是人类)的治疗。对患有医学障碍的个体的治疗可以包括治愈该医学障碍、减少痛苦、减轻或缓解与所述医学障碍相关的一种或多种症状。
14、预防性治疗的有效性可以常规地确定，例如，通过比较用根据本发明使用的组合物和参考产品(安慰剂)治疗的群组或测试动物，发病率降低。对患有该障碍的个体进行治疗的效果可以是完全治愈、症状减轻、痛苦减少等。
15、如下文实施例所示，已发现根据本发明的组合物有效改善肠道健康的一种或多种相关标志物，如减少肠道上皮细胞和免疫细胞对促炎细胞因子的生产(即表明抗炎作用)和增加跨上皮电阻(即表明肠道屏障功能的保护得到改善)。对这些标志物的影响表明了用于治疗以炎症和/或上皮完整性丧失为特征的胃肠道障碍(如腹泻、ibd或ibs)具有积极影响。此外，结果支持该组合物还有效于治疗或预防胃肠障碍，如腹泻或胃肠道感染，因为通过使用促炎刺激物模拟急性胃肠道感染或用已知诱发腹泻的细菌感染上皮细胞，如典型引起腹泻的大肠杆菌(e.coli)菌株，肠道健康的多个标志物得到改善。特别地，通过组合三种酵母菌获得了令人惊讶的效果：布拉氏酵母、酿酒酵母和马克斯克鲁维酵母。在所述实施例中，说明了如何通过这种酵母菌(以非存活形式)组合改善肠道健康的多种标志物，而单个酵母菌(以非存活形式)则无效、效果较差或甚至产生不良影响。除其它外，还说明了针对mcp-1(图2)、il-8(图3)、在tnf-α/inf-γ挑战(challenge，攻击)后的ip-10和mcp-1(图4和5)以及比率tnf-α/il-10(图7)的协同作用。此外，还说明了所述酵母菌组合如何改善肠道上皮完整性，这通过肠道细胞单层上跨上皮电阻(teer)的增加来测量(图8、9和10)。
16、根据本发明的生理学组合物可以含有选自布拉氏酵母、酿酒酵母和马克斯克鲁维酵母的组中的活酵母菌细胞。然而，如实施例所示，不需要存在活酵母菌。因此，发明人进一步得出结论，所述组合物中的所述布拉氏酵母、酿酒酵母和马克斯克鲁维酵母中的一种、两种或每种也可以分别被布拉氏酵母、酿酒酵母和马克斯克鲁维酵母的酵母菌裂解物、细胞壁材料或酵母菌提取物完全或部分替代。
1.一种生理学上可接受的组合物，包含(i)选自由灭活的布拉氏酵母(s.boulardii)酵母菌、布拉氏酵母裂解物、布拉氏酵母细胞壁组分和布拉氏酵母提取物组成的组中的至少一种组分，进一步包含(ii)选自灭活的酿酒酵母(s.cerevisiae)酵母菌、酿酒酵母裂解物、酿酒酵母细胞壁组分和酿酒酵母提取物的组中的至少一种组分，并且进一步包含(iii)选自由灭活的马克斯克鲁维酵母(k.marxianus)酵母菌、马克斯克鲁维酵母裂解物、马克斯克鲁维酵母细胞壁组分和马克斯克鲁维酵母提取物组成的组中的至少一种组分。
2.根据权利要求1所述的生理学上可接受的组合物，包含灭活的布拉氏酵母酵母菌、灭活的酿酒酵母酵母菌和灭活的马克斯克鲁维酵母酵母菌。
3.根据权利要求2所述的生理学上可接受的组合物，其中，灭活的所述酵母菌中的至少一种是热杀灭的，优选地是廷德尔化的。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的生理学上可接受的组合物，其中，(灭活的)布拉氏酵母以至少106个细胞/克(基于酵母菌组分的总重量)、优选109个细胞/克(基于所述酵母菌组分的总重量)至4x1010个细胞/克(基于所述酵母菌组分的总重量)的浓度存在，其中，(灭活的)酿酒酵母以至少106个细胞/克(基于所述酵母菌组分的总重量)、优选108个细胞/克(基于所述酵母菌组分的总重量)至5x109个细胞/克(基于所述酵母菌组分的总重量)的浓度存在，并且其中，(灭活的)马克斯克鲁维酵母以至少106个细胞/克、优选106个细胞/克(基于所述酵母菌组分的总重量)至5x109个细胞/克(基于所述酵母菌组分的总重量)的浓度存在。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的生理学上可接受的组合物，其中，所述酵母菌中的至少一种是富含矿物质的酵母菌，优选地是富含锌的酵母菌，特别是富含锌的酿酒酵母。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的生理学上可接受的组合物，其中，布拉氏酵母选自由以下组成的组：布拉氏酵母cncm i-745、布拉氏酵母hansen cbs 5926、布拉氏酵母bld-3、布拉氏酵母cctccm2012116、布拉氏酵母cncm i-1079、布拉氏酵母atcc mya-796、布拉氏酵母unique28、布拉氏酵母kirkman、布拉氏酵母unisankyo、布拉氏酵母dsm 33954和布拉氏酵母cncm i-3799，其中，酿酒酵母选自由以下组成的组：酿酒酵母cncm i-3856、酿酒酵母y1529、酿酒酵母s288c和酿酒酵母ufmg 905，并且其中，马克斯克鲁维酵母选自由以下组成的组：马克斯克鲁维酵母as41、马克斯克鲁维酵母b0399、马克斯克鲁维酵母cidca 8154、马克斯克鲁维酵母cbs1553、马克斯克鲁维酵母m3、马克斯克鲁维酵母v21/012435和马克斯克鲁维酵母z17。
7.根据权利要求6所述的生理学上可接受的组合物，其中，布拉氏酵母为布拉氏酵母dsm 33954；其中，酿酒酵母为酿酒酵母s288c或酿酒酵母y1529；并且其中，马克斯克鲁维酵母为马克斯克鲁维酵母v21/012435。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的生理学上可接受的组合物，其中，基于总酵母菌组分，所述组合物的基于布拉氏酵母的级分为0.05-99.95wt.％，优选5-95wt.％，特别是15-50wt.％；其中，基于总酵母菌组分，所述组合物的基于酿酒酵母的级分为0.05-90wt.％，优选10-90wt.％，更优选10-80wt.％，特别是15-50wt.％；并且其中，基于总酵母菌组分，所述组合物的基于马克斯克鲁维酵母的级分为0.05-99.95wt.％，优选5-95wt.％，特别是15-50wt.％，条件是：三种级分的总量为100wt.％或更少。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的生理学上可接受的组合物，包含：基于所述组合物的总微生物材料，15-50wt.％的灭活的布拉氏酵母细胞；基于所述组合物的总微生物材料，15-50wt.％的灭活的酿酒酵母细胞；以及基于所述组合物的总微生物材料，15-50wt.％的灭活的马克斯克鲁维酵母细胞，条件是：三种级分的总量为100wt.％或更少。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的生理学上可接受的组合物，其中，所述组合物是药物产品、营养保健产品或药妆产品。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的生理学上可接受的组合物，其中，所述组合物是营养产品，优选地是选自由以下组成的组的产品：乳制品、婴儿配方奶粉、基于水果的产品、谷类制品、零食、蔬菜饮料、冰沙和等渗饮料。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的生理学上可接受的组合物，其中，所述组合物是口服补液盐。
13.根据前述权利要求中任一项所述的生理学上可接受的组合物，用于在通过疗法治疗人类或动物中使用。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的生理学上可接受的组合物，用于在维持或改善个体的肠道健康或胃肠功能中使用。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的生理学上可接受的组合物，用于在治疗胃肠障碍中使用。
16.根据权利要求15所述的用于使用的生理学上可接受的组合物，其中，所述胃肠障碍涉及肠道屏障功能的损伤。
17.根据权利要求14、15或16所述的用于使用的生理学上可接受的组合物，其中，胃肠障碍选自由腹泻、炎症性肠病和肠易激综合征组成的组。
18.根据权利要求17所述的用于使用的生理学上可接受的组合物，其中，所述胃肠障碍是细菌诱导的腹泻。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的生理学上可接受的组合物，用于在治疗由促炎标志物定义的障碍中使用，所述由促炎标志物定义的障碍诸如类风湿性关节炎、骨关节炎、局部皮炎、牛皮癣、过敏或肥胖。
20.根据权利要求13-19中任一项所述的用于使用的生理学上可接受的组合物，其中，所述组合物待被施用至胃肠道中，优选口服施用，或其中，所述组合物待被局部施用。
21.根据权利要求13-20中任一项所述的用于使用的生理学上可接受的组合物，其中，所述组合物用于在治疗人类中使用。
22.根据权利要求1-12中任一项所述的生理学上可接受的组合物作为食品添加剂、饲料添加剂、人类营养中的功能性食品、动物营养中的功能性食品、用于营养保健品的食品添加剂或功能性成分的用途。
23.根据权利要求1-12中任一项所述的生理学上可接受的组合物作为益生菌、后生元、副益生菌、益生元、共生元或益生菌替代品的用途。
24.一种医疗器械，包含根据权利要求1-12中任一项所述的生理学上可接受的组合物。
25.根据权利要求24所述的医疗器械，其中，所述器械选自贴剂和膏药的组。
26.保藏号为dsm 33954的布拉氏酵母酵母菌(保藏于dsmz，德国微生物和细胞培养物保藏中心)。
