本申请属于药学领域，具体涉及了一种枸杞子多糖肽、其制备方法及其用途。
背景技术：
1、肝纤维化(liver fibrosis)是肝脏受到慢性损伤后，损伤-修复过程异常，细胞外基质过度沉积，堆积取代受损的正常组织而形成纤维瘢痕，导致肝脏器质化病变的一个病理阶段。肝纤维化是多种慢性肝病的共同病变过程，主要由肝毒性损伤和胆汁淤积性损伤引起。肝纤维化全球发病率高，每年约有200万人死于肝病，我国的肝病患病率已上升至约30％。肝纤维化持续进展到终末期将导致肝硬化，消退的机会降低，成为致死性疾病。因此，早期干预相对可逆的肝纤维化环节具有重要意义。
2、据《神农本草经》记载，茄科植物宁夏枸杞的成熟果实枸杞子具有补肝肾之功效，并将其列为上品，临床多以枸杞子入汤剂滋补肝肾。《本草纲目》记载枸杞子“久服可坚筋骨，轻身不老，耐寒暑”。枸杞子化学成分主要包括枸杞子多糖(lycium barbarumpolysaccharides,lbps)、枸杞子多糖肽、黄酮多酚、类胡萝卜素等。lbps已被报道可以改善肝纤维化，为了进一步探索枸杞子汤剂中的其他生物大分子是否具有改善肝纤维化的作用，从而扩大枸杞子的应用，提升中药材高质量发展，有必要开发枸杞子中的新的药用成分。
技术实现思路
1、本发明用一种简单有效的提取和纯化植物多糖的工艺和方法，以宁夏产地的枸杞子为原料获得了一种混合多糖组分，并进一步纯化获得了多糖肽lbpw。药理实验表明lbpw分别通过腹腔注射和灌胃两种给药方式均可以在四氯化碳诱导的小鼠慢性肝纤维化模型中减轻肝损伤并抑制肝纤维化。因此，lbpw有望开发成为一种抗肝纤维化的糖肽类药物或者肝脏保健品。
2、因此，一方面，本发明提供了一种中性枸杞子多糖肽，其单糖包括：甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和木糖，蛋白含量在25wt％–40wt％的范围内，且其分子量在3-20kda的范围内。
3、在具体实施方式中，以枸杞子多糖肽中所含的糖总量为计算，所述枸杞子多糖肽中的阿拉伯糖含量为10-40％，木糖含量为3-15％；甘露糖含量为5-30％，葡萄糖含量为15-45％，半乳糖含量为5-35％。
4、在具体实施方式中，所述枸杞子多糖肽的单糖连接方式和比例为：
5、以末端连接和1,5-连接的阿拉伯糖，其比例分别为8-20％和10-20％；
6、以末端连接和1,4-连接的木糖，比例为1-10％和1-10％；
7、以1,4-和1,4,6-连接的甘露糖，比例分别为1-15％，1-15％；
8、以末端连接，1,4-、1,4,6-连接的葡萄糖，比例分别为：1-10％，3-20％和1-15％；
9、以1,3-和1,3,6-连接的半乳糖，比例分别为3-15％和5-20％。
10、在具体实施方式中，所述枸杞子多糖肽中蛋白主要由天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、丙氨酸和脯氨酸组成，其相对质量比为0.79:1.3:1.0:1.1:0.68。
11、在具体实施方式中，所述枸杞子多糖肽中的糖部分与蛋白部分的连接方式为o-连接。
12、在具体实施方式中，所述枸杞子糖肽的13c nmr谱中，异头碳区域内有如下信号峰：δ110.47、δ108.75、δ108.66、δ104.40、δ103.78、δ103.62、δ102.91、δ102.73、δ101.96、δ101.16、δ99.53、δ99.30、δ97.13、δ95.31、δ93.31。
13、另一方面，本发明还提供了所述枸杞子多糖肽的制备方法，其包括如下步骤：
14、(1)多糖的提取：枸杞子用沸水提取，得到提取液，对提取液进行浓缩；浓缩液加入95％的乙醇醇沉，静置过夜，离心，沉淀物冷冻冻干，得枸杞子粗多糖；
15、(2)多糖的纯化：取步骤(1)制备的枸杞子粗多糖，用水溶解，离心，上清液经deaesepharosetmfast flow阴离子交换柱以去离子水洗脱，收集去离子水的洗脱液，得到糖肽。
16、优选地，步骤(1)中，在进行沸水提取前，先用乙醇对枸杞子药材浸泡3-10d(比如7d)，然后风干。
17、优选地，步骤(1)中，加入15-30倍重量的水，将温度升至100℃进行沸水提取3-5h，共提取6-8次，将滤液合并浓缩，对水透析24-72h，透析袋截留分子量为1kda-10kda,浓缩，离心后，加入5-10倍于上清液体积的乙醇，离心得沉淀，经真空干燥或冷冻干燥得粗多糖lbp。
18、优选地，步骤(1)中，加入20倍重量的水，将温度升至100℃进行沸水提取4h，共提取7次，将滤液合并浓缩，对水透析48h，透析袋截留分子量为3.5kda,浓缩，离心后，加入4倍于上清液体积的乙醇，离心得沉淀，经真空干燥或冷冻干燥得粗多糖lbp。
19、优选地，步骤(2)中，取步骤(1)制备的粗多糖，加入3～6倍重量的水中溶解，离心，上清液经阴离子交换柱，以去离子水洗脱，收集去离子水的洗脱液，浓缩，离心，取上清液对水透析，冷冻干燥，得多糖肽。
20、优选地，步骤(2)中，取步骤(1)制备的粗多糖，加入5倍重量的水中溶解，离心，上清液经deae sepharose fast flow阴离子交换柱，以去离子水洗脱，收集合并去离子水的洗脱液，浓缩，离心，取上清液对水透析，冷冻干燥，得多糖肽。
21、再一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含所述枸杞子多糖肽，以及药学上可接受的辅料。
22、在具体实施方式中，所述组合物的剂型为口服或注射液剂型。所使用的的辅料可以依情况选择本领域中常用于这些制剂的辅料，而没有限制。
23、又一方面，本发明还提供了所述枸杞子多糖肽或所述药物组合物在制备用于治疗肝纤维化的药物或肝脏保健品中的用途。
24、有益效果
25、本发明从枸杞子中提取了一种新的中性多糖肽类成分，经实验验证，其对ccl4诱导的慢性肝纤维化小鼠的肝损伤和肝纤维化程度具有显著的改善和缓解作用，可被开发为用于治疗肝纤维化的药物或者肝脏保健品。
26、另外，本申请的上述多糖肽类的制备方法简单，具有很大的推广价值和市场化应用前景。
1.一种中性枸杞子多糖肽，其单糖包括：甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和木糖，蛋白含量在25wt％-40wt％的范围内，且其分子量在3-20kda的范围内。
2.根据权利要求1所述的枸杞子多糖肽，其中，以枸杞子多糖肽中所含的糖总量为计算，各种单糖的摩尔比例分别为：阿拉伯糖含量为10-40％，木糖含量为3-15％，甘露糖5-30％，葡萄糖含量为15-45％，半乳糖含量为5-35％。
3.据权利要求1所述的枸杞子多糖肽，其中，所述枸杞子多糖肽lbpw的单糖连接方式和比例为：
4.据权利要求1所述的枸杞子多糖肽，其中，所述枸杞子多糖肽中蛋白主要由天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、丙氨酸和脯氨酸组成，其相对质量比为0.79:1.3:1.0:1.1:0.68。
5.据权利要求1所述的枸杞子多糖肽，其中，所述枸杞子多糖肽中的糖部分与蛋白部分的连接方式为o-连接。
6.据权利要求1所述的枸杞子多糖肽，其中，所述枸杞子糖肽的13c nmr谱中，异头碳区域内有如下信号峰：δ110.47、δ108.75、δ108.66、δ104.40、δ103.78、δ103.62、δ102.91、δ102.73、δ101.96、δ101.16、δ99.53、δ99.30、δ97.13、δ95.31、δ93.31。
7.如权利要求1-6中任一项所述的枸杞子多糖肽的制备方法，其包括如下步骤：
8.根据权利要求7所述的方法，其中，
9.一种药物组合物，其包含如权利要求1-6中任一项所述的枸杞子多糖肽，以及药学上可接受的辅料。
10.如权利要求1-6中任一项所述的枸杞子多糖肽或如权利要求9所述的药物组合物在制备用于治疗肝纤维化的药物或肝脏保健品中的用途。
