本发明属于水产养殖,具体涉及药物新应用领域,nvp-adw742在防治鲤春病毒血症病毒感染的药物中的应用。
背景技术:
1、
2、鲤春病毒血症病毒(svcv)感染导致的鲤鱼病毒血症病程快,致死率高,目前在欧洲、亚洲及北美地区均有报道,是国际上高度关注的一种鱼类病毒性传染病。鲤春病毒血症病毒宿主范围广泛,可以感染多种鲤科鱼类,因svcv感染导致的鱼死亡率高达70%以上。此外,鲤春病毒血症病毒还可以感染非鲤科鱼类如太阳鱼、狗鱼甚至对虾等。
3、鲤春病毒血症病毒属于弹状病毒科sprivivirus属,是一种单股负链rna病毒。svcv基因组全长约11kb,依次编码核蛋白n(nucleoprotein)、磷蛋白p(phosphoprotein)、基质蛋白m(matrix protein)、糖蛋白g(glycoprotein)和rna聚合酶蛋白l(rnapolymerase)5种结构蛋白,这五种结构蛋白共同构成了病毒的子弹状结构。目前,针对鲤春病毒血症病毒尚无有效的疫苗或有效的特异性治疗药物,现有的防控措施主要是进行病毒检测并对感染鱼进行隔离或扑杀。因此,研究和开发有效的抗鲤春病毒血症病毒感染的药物具有十分重要的意义。
4、nvp-adw742,化学名为5-(3-苄氧基苯基)-7-[反式-3-[(吡咯烷-1-基)甲基]环丁基]-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺。
5、nvp-adw742,别名gsk 552602a,是一种具有口服活性,选择性的igf-1r酪氨酸激酶抑制剂,且其可抑制胰岛素受体(insr),分子式为c28h31n5o,分子量为453.58,cas号为475488-23-4。现已证实nvp-adw742在肿瘤细胞中诱导多效性抗增殖/促凋亡(apoptosis),并且已有文献报道nvp-adw742(10mg/kg ip或50mg/kg口服;每日两次,共19天)能显著抑制肿瘤生长并延长小鼠存活时间。目前,尚未见将nvp-adw742应用于水生病毒防治的研究报道。
6、因此,本领域的技术人员致力于开发一种防治鲤春病毒血症病毒感染的药物。
技术实现思路
1、有鉴于现有技术的上述缺陷,本发明所要解决的技术问题是开发一种防治鲤春病毒血症病毒感染的药物。
2、为实现上述目的,本发明提供了一种nvp-adw742在制备防治鲤春病毒血症病毒感染的药物中的应用。
3、进一步地,nvp-adw742化学名为5-(3-苄氧基苯基)-7-[反式-3-[(吡咯烷-1-基)甲基]环丁基]-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺。
4、进一步地,nvp-adw742的结构式为:
5、
6、进一步地,nvp-adw742的浓度为0.15625μm、0.3125μm、0.625μm、1.25μm、2.5μm、5μm、10μm或20μm。
7、进一步地,包括nvp-adw742细胞毒性的检测方法。
8、进一步地,nvp-adw742的细胞毒性检测方法为利用cck-8细胞活性检测试剂测定nvp-adw742对co细胞的细胞活性的影响。
9、进一步地,包括nvp-adw742对细胞中鲤春病毒血症病毒基因转录水平影响的检测方法。
10、进一步地,nvp-adw742对细胞中鲤春病毒血症病毒基因转录水平影响的检测方法为:将co细胞接于细胞培养板中,加入含有nvp-adw742的培养基孵育1h,接种svcv病毒,加入含不同浓度的nvp-adw742的培养基继续培养,利用商业化的rna提取试剂盒提取总rna并反转录合成cdna;利用rt-qpcr测定病毒拷贝数。
11、进一步地,包括nvp-adw742对细胞中鲤春病毒血症病毒蛋白表达水平影响的检测方法。
12、进一步地,nvp-adw742对细胞中鲤春病毒血症病毒蛋白表达水平影响的检测方法:将co细胞接于细胞培养板中,加入含有nvp-adw742的培养基孵育1h,接种svcv病毒,加入含不同浓度的nvp-adw742的培养基,继续培养后吸去培养基,加入细胞裂解液充分裂解细胞,离心后取上清进行sds-page蛋白凝胶电泳和免疫印迹法检测svcv结构蛋白m的表达水平。
13、进一步地,包括nvp-adw742对鲤春病毒血症病毒感染后鱼体组织中病毒基因转录水平影响的检测方法。
14、在本发明的另一较佳实施方式1中,详细说明不同浓度nvp-adw742的细胞毒性检测过程;
15、在本发明的另一较佳实施方式2中,详细说明nvp-adw742对细胞中鲤春病毒血症病毒n基因转录水平的影响的实验过程;
16、在本发明的另一较佳实施方式3中,详细说明nvp-adw742对细胞中鲤春病毒血症病毒蛋白表达水平的影响的实验过程;
17、在本发明的另一较佳实施方式4中,详细说明nvp-adw742对细胞中鲤春病毒血症病毒g基因转录水平的影响的实验过程。
18、本发明有益的技术效果如下:
19、本实发明通过一系列的试验验证,表明本发明的nvp-adw742在安全浓度内可有效抑制鲤春病毒血症病毒的感染。鲤春病毒血症病毒感染会引起细胞中胰岛素受体的表达增加,因此发明人探索了胰岛素受体抑制剂nvp-adw742对鲤春病毒血症病毒感染的影响。本发明为鲤鱼病毒病的防控提供了一种有效措施,可应用于鱼类相关疾病的防治,降低鲤鱼养殖过程中因病毒性疾病导致的经济损失,具有广阔的应用前景。
20、以下将结合附图对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明,以充分地了解本发明的目的、特征和效果。
1.nvp-adw742在制备防治鲤春病毒血症病毒感染的药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述nvp-adw742化学名为5-(3-苄氧基苯基)-7-[反式-3-[(吡咯烷-1-基)甲基]环丁基]-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺。
3.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述nvp-adw742的浓度为0.15625μm、0.3125μm、0.625μm、1.25μm、2.5μm、5μm、10μm或20μm。
4.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述应用包括所述nvp-adw742细胞毒性的检测方法。
5.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述nvp-adw742的细胞毒性检测方法为利用cck-8细胞活性检测试剂测定所述nvp-adw742对co细胞的细胞活性的影响。
6.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述应用包括所述nvp-adw742对细胞中鲤春病毒血症病毒基因转录水平影响的检测方法。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于,所述nvp-adw742对细胞中鲤春病毒血症病毒基因转录水平影响的检测方法为:将所述co细胞接于细胞培养板中,加入含有nvp-adw742的培养基孵育1h,接种svcv病毒,加入含不同浓度的nvp-adw742的培养基继续培养,利用商业化的rna提取试剂盒提取总rna并反转录合成cdna;利用rt-qpcr测定病毒拷贝数。
8.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述应用包括所述nvp-adw742对细胞中鲤春病毒血症病毒蛋白表达水平影响的检测方法。
9.如权利要求8所述的应用,其特征在于,所述nvp-adw742对细胞中鲤春病毒血症病毒蛋白表达水平影响的检测方法:将co细胞接于细胞培养板中,加入含有nvp-adw742的培养基孵育1h,接种svcv病毒,加入含不同浓度的nvp-adw742的培养基继续培养。吸去所述培养基,加入细胞裂解液充分裂解细胞,离心后取上清进行sds-page蛋白凝胶电泳和免疫印迹法检测svcv结构蛋白m的表达水平。
10.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述应用包括所述nvp-adw742对鲤春病毒血症病毒感染后鱼体组织中病毒基因转录水平影响的检测方法。