本发明涉及生物化工，具体涉及一种丁卡因半抗原、人工抗原及丁卡因单克隆抗体的制备方法和应用。
背景技术：
1、丁卡因（tetracaine）化学名为4-(丁氨基)-苯甲酸-2-(二甲氨基)乙酯，是临床上常用的一种脂类的局麻药，具有效果快，操作简单，但同时毒性高的特点。
2、鱼类作为有感知能力的动物，在捕捞和贮运过程中，容易剧烈挣扎造成体表受伤，导致感染甚至死亡。因此，渔民或商户会适量使用一些麻醉剂让鱼暂时“睡”一会儿，以缓解鱼类的应激反应，减少贮运过程中的受伤情况，降低死亡率。目前，大部分渔用麻醉剂的使用存在广泛争议，主要原因是麻醉剂残留对人体的风险危害还没有完全明确，我国的gb31650-2019《食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》规定了利多卡因、普鲁卡因、丁卡因允许用于食品动物，但未制定残留限量，而国外除ms-222和苯佐卡因外，其他卡因类麻醉剂未被纳入允许使用范围。丁卡因在人体中主要通过肝脏中的若干酶进行代谢，可以肯定的是如果大量丁卡因在人体内累积，势必对肝细胞具有毒性，存在肝损伤的风险。
3、目前行业检测渔用麻醉剂的主要方法有高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法、气相色谱法、气相色谱-串联质谱法等，通常都需要昂贵仪器、检测成本高、并且需要专业操作人员、还有检测时间长的问题，而且样品前处理复杂繁琐，检测时间长，推广使用也受到限制，难以适应对商业水产品中丁卡因残留量的监管需求。如中国专利cn107843670 b提出一种盐酸丁卡因有关物质的测定方法，其hplc检测条件如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm×150mm，5μm)，以乙腈-水-三乙胺为流动相a，以甲醇-乙腈-水-三乙胺为流动相b，进行梯度洗脱。该方法虽然比较精确，但是需要用到专业的高效色谱仪以及接受过专业培训的操作人员，同时采样送样过程繁琐，不适合快速销售的水产品监管。
4、因此，有必要寻找普通人也能简单操作的灵敏度高、识别能力强的测定水产品中丁卡因残余的方法。
技术实现思路
1、基于此，有必要针对上述技术问题，提供一种丁卡因半抗原、人工抗原及丁卡因单克隆抗体的制备方法和应用。
2、本发明的目的在于提供一种丁卡因半抗原。
3、本发明的目的还在于提供一种丁卡因人工抗原。
4、本发明的目的还在于提供丁卡因人工抗原在制备丁卡因抗体中的应用或在检测食品、饲料中的丁卡因的应用。
5、本发明的目的还在于提供由丁卡因人工抗原制备得到的丁卡因单克隆抗体。
6、本发明的目的还在于提供由丁卡因单克隆抗体制备的丁卡因检测试剂或试剂盒。
7、本发明的目的还在于提供丁卡因单克隆抗体在下述1)~3)中任一种的应用：
8、1) 丁卡因的免疫检测；
9、2) 丁卡因的免疫层析试纸条的制备；
10、3) 丁卡因的胶体金检测试纸条的制备。
11、本发明的目的还在于提供一种丁卡因的检测方法，其以所述丁卡因人工抗原为抗原，以所述丁卡因单克隆抗体为检测抗体进行检测。
12、本发明上述目的通过以下技术方案实现：
13、本发明第一方面提出一种丁卡因半抗原，结构式如式i所示；
14、。
15、所述的丁卡因半抗原的制备方法，其包括以下步骤：
16、s1.以dmf为溶剂，丁卡因、4-溴丁酸叔丁酯和碳酸钾完全反应，萃取并合并有机相得到丁卡因中间产物粗品；
17、s2.用三氟乙酸二氯甲烷混合溶液与丁卡因中间产物粗品充分反应后去除二氯甲烷以及未反应的三氟乙酸，纯化后得到丁卡因半抗原。
18、进一步地，所述的丁卡因半抗原的制备方法中反应物丁卡因、4-溴丁酸叔丁酯和碳酸钾的摩尔比是1:1:3。
19、进一步地，所述的丁卡因半抗原的制备方法，以dmf为溶剂，丁卡因、4-溴丁酸叔丁酯和碳酸钾在60℃反应6～8小时。
20、进一步地，所述的丁卡因半抗原的制备方法，用三氟乙酸二氯甲烷混合溶液与丁卡因中间产物粗品在常温下搅拌反应6小时。
21、进一步地，所述三氟乙酸二氯甲烷混合溶液的体积比为1：1。
22、本发明第二方面提供一种丁卡因人工抗原，其由所述的丁卡因半抗原与载体蛋白偶联后得到；所述丁卡因人工抗原的结构式如式(ii)所示，其中，protein为载体蛋白，
23、。
24、进一步地，所述载体蛋白是牛血清蛋白、鸡卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白和乳铁蛋白中的任一种。
25、本发明第三方面提供丁卡因人工抗原在制备丁卡因抗体中的应用或在检测食品、饲料中的丁卡因的应用。
26、本发明第四方面提供一种丁卡因单克隆抗体，其通过丁卡因人工抗原免疫实验动物(适龄balb/c小鼠)，经过免疫、细胞融合、筛选和体内诱生得到。
27、本发明第五方面提供由丁卡因单克隆抗体制备的丁卡因检测试剂或试剂盒。
28、本发明第六方面提供丁卡因单克隆抗体在下述1)~3)中任一种的应用：
29、1) 丁卡因的免疫检测；
30、2) 丁卡因的免疫层析试纸条的制备；
31、3) 丁卡因的胶体金检测试纸条的制备。
32、本发明第七方面提供一种丁卡因的检测方法，以所述丁卡因人工抗原为抗原，以所述丁卡因单克隆抗体为检测抗体进行检测。
33、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
34、本发明制备得到的丁卡因半抗原tci-350，其制备方法简单，将该半抗原制备得到的丁卡因人工抗原与载体蛋白偶联制备的单克隆体对丁卡因具有高灵敏度、强识别力和高特异性，半抑制浓度为1.71ng/ml，定量检测范围为0.4916~5.950ng/ml，最低检测限为0.2371 ng/ml，其对卡因类物质如苯佐卡因、利多卡因、普鲁卡因无交叉反应，抗干扰能力强；该单克隆抗体还可以应用于开发丁卡因检测试剂、试纸条等，使用人员不需要专业的仪器和长时间的操作培训就能上手，简单易操作，而且具有特异性高、灵敏度高、精确度高、准确度高等特点，非常适用于水产品的丁卡因检测。
1.一种丁卡因半抗原，其特征在于，结构式如式i所示；
2.权利要求1所述的丁卡因半抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的丁卡因半抗原的制备方法，其特征在于，所述反应物丁卡因、4-溴丁酸叔丁酯和碳酸钾的摩尔比是1:1:3；所述三氟乙酸二氯甲烷混合溶液中三氟乙酸和二氯甲烷的体积比是1:1。
4.一种丁卡因人工抗原，其特征在于，其由权利要求1所述的丁卡因半抗原与载体蛋白偶联后得到；所述丁卡因人工抗原的结构式如式(ii)所示，其中，protein为载体蛋白，
5.根据权利要求4所述的一种丁卡因人工抗原，其特征在于，所述载体蛋白是牛血清蛋白、鸡卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白和乳铁蛋白中的任一种。
6.权利要求4所述的丁卡因人工抗原在制备丁卡因抗体中的应用或检测水产品中丁卡因残留的应用。
7.由权利要求4所述的丁卡因人工抗原制备得到的丁卡因单克隆抗体。
8.由权利要求7所述丁卡因单克隆抗体制备的丁卡因检测试剂或试剂盒。
9.权利要求7所述的丁卡因单克隆抗体在下述1)~3)中任一种的应用：
10.一种丁卡因的检测方法，其特征在于，以权利要求4所述丁卡因人工抗原为抗原，以权利要求7所述丁卡因单克隆抗体为检测抗体进行检测。
