本发明属于生物制剂的，具体涉及鲍曼不动杆菌噬菌体裂解酶lyszhshw的制备及应用。
背景技术：
1、作为不动杆菌属中最典型的最常见的临床病原菌，鲍曼不动杆菌(acinetobacterbaumannii，ab)是自然界常见的革兰氏阴性菌。最初，鲍曼不动杆菌被认为是一种低级别病原体，但现被认为是人类和动物的一种机会性病原体，原因是鲍曼不动杆菌具有高频率的自我突变能力和强大的获取和整合外源dna的能力，使其对多种抗生素和外界环境因素产生抵抗力，促进其在医院环境中流行。此外，近年来陆续出现鲍曼不动杆菌在宠物行业和畜牧养殖业中引起感染的报导。在国外，从患有尿道感染的宠物犬的尿液中分离出携带blandm-1碳青霉烯耐药基因的鲍曼不动杆菌；在国内，家禽、牛和猪的养殖业中均有因鲍曼不动杆菌而造成危害的报导。在2019年，上海某一动物园发生了一起棕熊由于鲍曼不动杆菌的感染而死亡的事件。虽然尚未检出动物源的广泛耐药的鲍曼不动杆菌，但携带碳青霉烯类耐药基因或多重耐药的鲍曼不动杆菌在兽医临床和养殖业中的流行，使得抗生素类药物的治疗效果变得十分不理想，还存在重要耐药基因向人类传播的风险。面对鲍曼不动杆菌对医院、养殖环境和兽医临床带来的潜在危害，尤其是多重耐药的鲍曼不动杆菌已经出现，迫切需要提出新的防治策略。
2、噬菌体(bacteriophage,phage)是一种能够特异性杀伤细菌等微生物的病毒总称。根据生命周期特点，可分为裂解性、温和性和假溶原性噬菌体。裂解性噬菌体因具备快速杀菌能力，常被用于噬菌体疗法。噬菌体疗法，指应用噬菌体控制或去除细菌感染。与抗生素相比，噬菌体疗法具有不破坏微生态平衡、没有不良反应，能穿透血管到达组织，甚至透过血脑屏障、对环境的影响很小等优点。然而，细菌能针对噬菌体生命周期的各个阶段产生一系列的抗性机制，出现的噬菌体抗性菌使噬菌体疗法效果降低，甚至失效。为了克服噬菌体疗法的缺点，许多新的策略被提出，如噬菌体鸡尾酒、噬菌体-抗生素联合应用和噬菌体产物应用等。其中，能破坏细菌细胞壁中肽聚糖的裂解酶(endolysin)因其特异性、作用方式、可改造潜力和缺乏抗性机制而受到科学界的广泛关注，并开发出许多成功的应用。而对于鲍曼不动杆菌噬菌体裂解酶lyszhshw，目前研究还比较少，且裂解酶是否对鲍曼不动杆菌或其他菌具有抑制作用仍缺乏相关数据。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本申请提供了一种鲍曼不动杆菌噬菌体裂解酶lyszhshw的制备及应用。
2、本发明的首要目的在于提供鲍曼不动杆菌噬菌体裂解酶lyszhshw、含有lyszhshw表达元件的载体或含有lyszhshw表达元件的表达盒或含有表达lyszhshw元件的宿主细胞在制备抑菌剂中的应用，所述lyszhshw的氨基酸序列如seq id no.1所示。
3、优选地，鲍曼不动杆菌噬菌体裂解酶lyszhshw的编码基因的核苷酸序列如seq idno.2所示。
4、优选地，所述抑菌剂的抑菌谱为鲍曼不动杆菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌。
5、优选地，本发明还提供了上述鲍曼不动杆菌噬菌体裂解酶lyszhshw的制备方法，具体包括如下步骤，本发明以表达质粒pet28a为骨架，使用pcr和酶切连接方法构建含有裂解酶lyszhshw编码基因的pet28a-lys重组质粒，转化至感受态细胞中，将验证为阳性的进行培养，诱导表达，收集菌液，提取、纯化。
6、优选地，所述pcr采用的引物为lys-f和lys-r，所述lys-f的核苷酸序列如下：cgcggatccatgattctgactaaagacg，所述lys-r的核苷酸序列如下：ccggaattcctataagctccgtagagca。
7、优选地，所述的酶切采用bamh i和ecor i双酶切。
8、优选地，所述感受态细胞为e.coli bl21(de3)。
9、本发明通过western blot方法验证裂解酶lyszhshw的表达后，对其进行表征和体内/体外抑菌应用潜力的评估。
10、与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：
11、本发明提供了鲍曼不动杆菌噬菌体裂解酶lyszhshw在抑菌方面的作用，能够抑制鲍曼不动杆菌的生长，具有杀鲍曼不动杆菌的作用，同时对大肠杆菌和铜绿假单胞菌有一定裂解作用，且对人体细胞无毒性。通过大蜡螟和小鼠大腿肌肉模型，进一步评价其在体内中的应用和安全性，为对抗鲍曼不动杆菌感染提供新的抗菌剂。
1.鲍曼不动杆菌噬菌体裂解酶lyszhshw、含有lyszhshw表达元件的载体或含有lyszhshw表达元件的表达盒或含有lyszhshw表达元件的宿主细胞在制备抑菌剂中的应用，其特征在于，所述鲍曼不动杆菌噬菌体裂解酶lyszhshw的氨基酸序列如seq id no.1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述鲍曼不动杆菌噬菌体裂解酶lyszhshw的编码基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抑菌剂的抑菌谱为鲍曼不动杆菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述鲍曼不动杆菌噬菌体裂解酶lyszhshw的制备方法主要包括如下步骤：以表达质粒pet28a为骨架，使用pcr和酶切连接方法构建含有裂解酶lyszhshw编码基因的pet28a-lys重组质粒，转化至感受态细胞中，将验证为阳性的进行培养，诱导表达，收集菌液，提取、纯化。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述pcr采用的引物为lys-f和lys-r，所述lys-f的核苷酸序列为cgcggatccatgattctgactaaagacg，所述lys-r的核苷酸序列为ccggaattcctataagctccgtagagca。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的酶切采用bamh i和ecor i双酶切。
7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述感受态细胞为e.colibl21(de3)。
