本发明涉及一种测定磷酸哌喹有关物质的方法，属于柱色谱法测试材料。
背景技术：
1、磷酸哌喹是治疗和控制疟疾病症的代表性药物之一，用于疟疾的治疗，也可作症状抑制性预防用，尤其是用于耐氯喹虫株所致的恶性疟的治疗与预防，亦可用于治疗矽肺。
2、在合成的磷酸哌喹粗品中，其含有多种杂质(也称有关物质)，目前已知的有：7-氯-4-(1-哌嗪基)喹啉(对应于本申请中的杂质a)、7-氯-4-(4-(3-(哌嗪-1-基)丙基)哌嗪-1-基)喹啉(对应于本申请中的杂质b)、1-[4-(7-氯喹啉-4-基)哌嗪-1-基]-3-[(4-(5-氯喹啉-4-基)哌嗪-1-基]丙烷(对应于本申请中的杂质c)、7-氯-4-羟基喹啉(对应于本申请中的杂质d)、1,4-二(3-(4-(7-氯喹啉-4-基)哌嗪-1-基)丙基)哌嗪(对应于本申请中的杂质e)、7-氯-4-(4-(3-((7-氯喹啉-4-基)氧代)丙基)哌嗪-1-基)喹啉(对应于本申请中的杂质f)、n1-(7-氯喹啉-4-基)-n2-(3-(4-(7-氯喹啉-4-基)哌嗪-1-基)丙基)乙烷-1,2-二胺(对应于本申请中的杂质g)、1,4-二(7-氯喹啉-4-基)哌嗪(对应于本申请中的杂质h)、4,7-二氯喹啉(对应于本申请中的杂质i)，它们的结构分别如下述所示：
3、
4、现行的中国药典2020年版二部中磷酸哌喹有关物质只对3个已知杂质(杂质i即本申请中的杂质a、杂质ii即本申请中的杂质d、杂质iii即本申请中的杂质h)进行控制，色谱条件中，以乙腈-0.1％三氯乙酸溶液(用磷酸调节ph值至2.1±0.05)(25：75)为流动相进行等度洗脱；检测波长为317nm(杂质ii)与349nm(主成分与其他杂质)。随着人们对药品安全问题越来越关注，对药物中杂质的控制要求也将越来越严格。因此，需要对磷酸哌喹中杂质的测定方法进行改进，建立一个能够检测磷酸哌喹中可能出现的更多杂质的检测方法。
技术实现思路
1、针对现有技术中的不足，本发明要解决的技术问题是提供一种可对磷酸哌喹中可能出现的9种已知杂质进行准确控制的测定磷酸哌喹有关物质的方法。
2、为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
3、一种测定磷酸哌喹有关物质的方法，其特征是，采用高效液相色谱法测定磷酸哌喹中杂质的含量，其中，
4、所述的杂质包括下述杂质a～i中的至少一种：
5、杂质a：7-氯-4-(1-哌嗪基)喹啉；
6、杂质b：7-氯-4-(4-(3-(哌嗪-1-基)丙基)哌嗪-1-基)喹啉；
7、杂质c：1-[4-(7-氯喹啉-4-基)哌嗪-1-基]-3-[(4-(5-氯喹啉-4-基)哌嗪-1-基]丙烷；
8、杂质d：7-氯-4-羟基喹啉；
9、杂质e：1,4-二(3-(4-(7-氯喹啉-4-基)哌嗪-1-基)丙基)哌嗪；
10、杂质f：7-氯-4-(4-(3-((7-氯喹啉-4-基)氧代)丙基)哌嗪-1-基)喹啉；
11、杂质g：n1-(7-氯喹啉-4-基)-n2-(3-(4-(7-氯喹啉-4-基)哌嗪-1-基)丙基)乙烷-1,2-二胺；
12、杂质h：1,4-二(7-氯喹啉-4-基)哌嗪；
13、杂质i：4,7-二氯喹啉；
14、高效液相色谱法中的色谱条件包括：
15、色谱柱：以十八烷基键合硅胶为填充剂；
16、流动相a：0.1v/v％三氟乙酸水溶液；
17、流动相b：乙腈；
18、洗脱程序：初始流动相b体积百分数为9％，0～5min保持在9％；5～17min流动相b体积百分数从9％上升至20％；17～20min流动相b体积百分数从20％上升至25％；20～28min流动相b体积百分数从25％上升至65％。
19、本发明所述的方法可以用于测定磷酸哌喹原料药中杂质的含量，也可用于测定磷酸哌喹片中杂质的含量。同时，本发明所述方法中的色谱条件也适用于磷酸哌喹原料药或磷酸哌喹片中的磷酸哌喹含量的测定。
20、进一步的，高效液相色谱法中的色谱条件还包括检测波长为240nm；更进一步的，色谱条件还包括进样体积为15～25μl，流动相流速为1.0～2.0ml/min，色谱柱柱温为25～40℃。在优选的实施方式中，进样体积为20μl，流动相流速为1.5ml/min，色谱柱柱温为35℃。
21、作为优选，采用welch ultimate xb-c18色谱柱，或者是与其效能相当的色谱柱。
22、本发明所述测定磷酸哌喹有关物质的方法，包括采用高效液相色谱法测定磷酸哌喹中杂质含量的常规步骤，具体包括以下步骤：
23、(1)配制供试品溶液、对照溶液、系统适用性溶液；
24、(2)设置高效液相色谱条件；
25、(3)在系统适用性溶液进样后，分别精密吸取对照溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，计算待测样品中各杂质的含量。
26、上述步骤(1)中，采用现有常规方法配制供试品溶液、对照溶液和系统适用性溶液，优选如下：
27、①供试品溶液的配制：取磷酸哌喹适量，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml约含磷酸哌喹0.5mg的溶液，即得(如待测物为磷酸哌喹片，需将其先研磨成细粉再取该所得细粉适量用溶剂溶解，配制相应浓度的溶液滤过后取续滤液作为供试品溶液)。
28、②对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1.0ml，置于100ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
29、③各杂质对照品贮备液的配制：取杂质a～i对照品各约10mg，精密称定，分别置于100ml容量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质对照品贮备液。
30、④系统适用性溶液的配制：取磷酸哌喹对照品约25mg，精密称定，置50ml容量瓶中，精密量取上述各杂质对照品贮备液2.5ml加入，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。
31、上述在配制供试品溶液、对照溶液和系统适用性溶液时，涉及的溶剂均为由水、乙腈和三氟乙酸按850：150：1的体积比组成的溶液。
32、上述步骤(2)中，涉及的色谱条件如前所述。
33、上述步骤(3)中，按加校正因子的主成分自身对照法计算各杂质含量。
34、与现有技术相比，本发明以乙腈-0.1v/v％三氟乙酸水溶液为流动相对色谱柱进行梯度洗脱、配合240nm的检测波长及其他色谱条件，能够同时检测出磷酸哌喹中可能存在的9种已知杂质，且各杂质分离度好；而且本发明所述方法也用于检测磷酸哌喹的含量。
1.一种测定磷酸哌喹有关物质的方法，其特征是，采用高效液相色谱法测定磷酸哌喹中杂质的含量，其中，
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是，色谱条件还包括：检测波长为240nm。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征是，色谱条件还包括：进样体积为15～25μl，流动相流速为1.0～2.0ml/min，色谱柱柱温为25～40℃。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征是，进样体积为20μl，流动相流速为1.5ml/min，色谱柱柱温为35℃。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征是，色谱柱为welch ultimate xb-c18色谱柱。
