本发明涉及生物，特别是涉及一种特异性结合人55型腺病毒(hadv55)的抗体或抗原结合片段及其应用。
背景技术：
1、人腺病毒属于腺病毒科，是一种无包膜的双链dna病毒。目前，已鉴定超过100种基因型，可分为7个亚群(a-g)。人55型腺病毒(hadv55)是近年来获得性肺炎的重要病原体。由于hadv55在人群中的预存免疫普遍较低，容易在人群密集的地方爆发，可致重症呼吸道疾病甚至死亡，给社会带来严重危害。因此hadv55特效药物的研发迫在眉睫。单克隆中和抗体有潜力成为防控hadv55感染的重要手段。
2、hadv55具有3个主要的衣壳蛋白：hexon、fiber、penton base。其中hexon蛋白是最丰富的衣壳蛋白，负责招募沿着微管运输病毒衣壳的细胞质蛋白。腺病毒中和抗体主要针对hexon蛋白，少部分针对fiber蛋白。
3、现有研究中，仅报道了1株对hadv7、hadv55有中和作用的单抗，以及2株对hadv7、hadv11、hadv55均有中和作用的单抗，但均识别fiber蛋白，中和能力较差，针对hadv55的中和效价(ic50)约为5～10μg/ml；最近报道了一株fiber单抗9-8-h2中和活性稍好，但ic50也仅为0.6nm。同时这些抗体序列均为鼠源抗体，需进行人源化处理，且这些单抗在动物体内效果未知。
4、因此，提供一种针对hadv55高效价、人源化程度较高、具有体内保护作用的中和单克隆抗体，在hadv55的诊断与治疗领域具有重要意义。
技术实现思路
1、针对现有抗体缺乏人源化及中和能力较差的问题，本发明提供了一种特异性结合hadv55的抗体或抗原结合片段，具有人源化程度高、中和效价高的优势，可广泛应用于对hadv55的实际诊断和治疗方案中。
2、本发明提供的技术方案之一为：一种特异性结合hadv55的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，其中重链可变区包含如seq idno:5所示的重链cdr1，如seq id no:6所示的重链cdr2和如seq id no:7所示的重链cdr3；轻链可变区包括如seq id no:8所示的轻链cdr1，如seq id no:9所示的轻链cdr2和如seqid no:10所示的轻链cdr3。本发明的特异性结合hadv55的抗体或抗原结合片段，基于猕猴实验技术平台进行反复筛选得到，具有人源化程度高、中和效价高的优势，以hadv55的hexon蛋白为作用靶点，可广泛应用于对hadv55的实际诊断和治疗方案中。
3、可以理解地，抗体每个可变区含有三个氨基酸顺序超变区，这些超变区是抗原的结合位点，与抗原决定簇结构互补，被称为抗体互补决定区(cdr)，而cdr的氨基酸序列和空间结构是决定抗体的特异性性和亲和力的关键因素，因此，在所述抗体或抗原结合片段中，选取如上所述cdr的组合，经试验证实，具有较高的亲和力和较强的特异性。
4、在本发明优选的实施方案中，所述抗原结合片段的重链可变区包括如seq id no:2所示的氨基酸序列或与seq id no:2所示的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；所述抗原结合片段的轻链可变区包括如seq id no:4所示的氨基酸序列或与seq idno:4所示的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。
5、本领域技术人员知道，在不影响该抗体或抗原结合片段空间结构和性能的基础上，对于上述重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列中非关键位点氨基酸，可以存在少量突变、缺失或插入等变化，均不影响该抗原结合片段的效能。
6、在一些实施方案中，所述的抗体或抗原结合片段选自以下一种或多种：
7、(1)全长抗体、f(ab)2、fv或scfv；
8、(2)单克隆抗体或多克隆抗体；
9、(3)双特异性抗体或多特异性抗体。
10、在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段为全长抗体，其还包括人源igg1、igg2、igg3、igg4、iga1、iga、igm、igd以及ige恒定区或其它来源不同类型抗体恒定区等及相关变体中的任意一种或至少两种的组合。
11、可以理解地，通过将上述抗原结合片段与人源igg连接，进行同源重组，实现抗体人源化表达。
12、在本发明优选的实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包括人源igg1恒定区。
13、本发明提供的技术方案之二为：一种核酸分子，所述核酸分子编码上述的抗体或抗原结合片段。
14、在一个优选的实施方案中，所述核酸分子包括分别如seq id no:1和3所示的编码上述抗体或抗原结合片段的重链可变区和轻链可变区的核苷酸序列。
15、本发明提供的技术方案之三为：一种重组表达载体，其中所述重组表达载体包括所述的核酸分子。
16、在一些实施方案中，所述重组表达载体还包括或不包括编码人源igg1恒定区的核酸分子。
17、在一些实施方案中，所述重组表达载体为病毒载体(如慢病毒、腺病毒、腺相关病毒等)、质粒(如pcmv、pcdna4to等)、dna片段、rna等的任意一种或至少两种的组合，优选为质粒。
18、在其中一个实施例中，所述重组表达载体还包括编码人源igg1恒定区的核酸分子。
19、在一个优选的实施方案中，所述重组表达载体为pcmv。
20、本发明提供的技术方案之四为：一种转化体，在宿主细胞中转染或感染包含所述核酸分子和/或所述重组表达载体。
21、在一些实施方案中，所述宿主细胞选自哺乳动物细胞，例如hek 293细胞、293t细胞或expi 293f细胞，优选地为expi 293f细胞。
22、本发明提供的技术方案之五为：一种特异性结合hadv55的抗体或抗原结合片段的制备方法，其包含培养所述的转化体，并从培养物中获得特异性结合hadv55的抗体或抗原结合片段。
23、本发明提供的技术方案之六为：一种嵌合抗原受体，其中所述嵌合抗原受体包含所述的抗体或抗原结合片段。
24、本发明提供的技术方案之六为：一种基因修饰的细胞，其包括所述的嵌合抗原受体。
25、本发明提供的技术方案之七为：一种抗体药物偶联物，其中所述抗体药物偶联物包含细胞毒性剂或标签，以及所述的抗体或抗原结合片段。
26、本发明提供的技术方案之八为：一种药物组合物或含其的药盒，所述药物组合物或含其的药盒包含以上任一项所述的抗体或抗原结合片段、基因修饰的细胞或抗体药物偶联物，以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中的至少一种。
27、优选地，所述药物组合物或含其的药盒还含有由激素制剂、靶向小分子制剂、蛋白酶体抑制剂、成像剂、诊断剂、化疗剂、溶瘤药物、细胞毒性剂、细胞因子、共刺激分子的激活剂、抑制性分子的抑制剂以及疫苗组成的组中的一种或多种。
28、本发明提供的技术方案之九为：所述抗体或抗原结合片段、基因修饰的细胞、抗体药物偶联物或药物组合物或含其的药盒在制备预防和/或治疗hadv55引起的疾病的药物和/或检测hadv55的试剂中的应用。
29、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
30、本发明的特异性结合人55型腺病毒(hadv55)的抗原结合片段，具有人源化程度高、中和效价高的优势。包括该抗原结合片段的单克隆抗体，针对hadv55的中和ic50为0.075ng/ml(约0.5pm)，且经动物实验证实该单抗可在小鼠和树鼩体内发挥保护效果，可广泛应用于对hadv55的实际检测、诊断和治疗方案中。
1.一种特异性结合hadv55的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如seq id no:5所示的重链cdr1，如seq id no:6所示的重链cdr2和如seq id no:7所示的重链cdr3；所述轻链可变区包括如seq id no:8所示的轻链cdr1，如seq id no:9所示的轻链cdr2和如seq id no:10所示的轻链cdr3。
2.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区包括如seqid no:2所示的氨基酸序列或与seq id no:2所示的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区包括如seq id no:4所示的氨基酸序列或与seq id no:4所示的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。
3.如权利要求1或2所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段选自以下一种或多种：
4.如权利要求3所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段为全长抗体，其还包括人源igg1、igg2、igg3、igg4、iga1、iga、igm、igd以及ige恒定区等及其相关变体中的至少一种。
5.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1-4任一项所述的抗体或抗原结合片段；
6.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含权利要求5所述的核酸分子；
7.一种转化体，其特征在于，在宿主细胞中包含如权利要求6所述的重组表达载体；
8.一种制备特异性结合hadv55的抗体或抗原结合片段的方法，其特征在于，包含培养如权利要求7所述的转化体，并从培养物中获得特异性结合hadv55的抗体或抗原结合片段。
9.一种嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体包含如权利要求1～4任一项所述的抗体或抗原结合片段。
10.一种基因修饰的细胞，其特征在于，其包括如权利要求9所述的嵌合抗原受体。
11.一种抗体药物偶联物，其特征在于，所述抗体药物偶联物包含细胞毒性剂或标签，以及如权利要求1～4任一项所述的抗体或抗原结合片段。
12.一种药物组合物或含其的药盒，其特征在于，所述药物组合物或含其的药盒包含权利要求1-4任一项所述的抗体或抗原结合片段、权利要求10所述的基因修饰的细胞或权利要求11所述的抗体药物偶联物，以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中的至少一种；
13.如权利要求1-4任一项所述的抗体或抗原结合片段或权利要求10所述的基因修饰的细胞或权利要求11所述的抗体药物偶联物或如权利要求12所述的药物组合物或含其的药盒在制备预防和/或治疗hadv55引起的疾病的药物和/或检测hadv55的试剂中的应用。
