本发明属于中药现代化，尤其涉及一种人参皂苷对照品的制备方法，具体涉及一种应用高效制备液相色谱分离纯化人参皂苷rf对照品的制备方法。
背景技术：
1、人参(panax ginseng c.a.meyer)是五加科、人参属多年生草本植物，其肉质根为强壮滋补药，适用于调节血压、恢复心脏功能、神经衰弱及身体虚弱等症，还有健胃、利尿、兴奋等功效。人参皂苷(ginsenoside)被视为是人参中的主要活性成分，因而成为大家研究的目标，其具有增强机体免疫力、改善记忆与学习能力及抗癌等重大作用。
2、人参皂苷rf主要有镇痛，抗炎以及神经保护等作用，也是人参中特有的皂苷，可用来区别三七参、西洋参等其他类别的参。
3、人参皂苷rf(ginsenoside rf)分子式为c42h72o14，结构式如下：
4、
5、人参皂苷rf为人参三醇型，也是人参中主要皂苷之一，具有很好的药理活性。其无论开发成抗炎镇痛单体新药或作为质控指标，都需要高纯的单体。当前，皂苷类成分的物质基础研究和工业化提取生产，主要仍以有机溶剂提取，溶剂萃取，大孔树脂洗脱和硅胶柱层析等手段为主，存在收率低纯度差等系列问题，使皂苷组分或单体的制备和功能研究，以及相关皂苷类药物和保健产品的品质和生产工艺成本仍受到较大的限制。
6、因此亟需开发一种不使用有毒有害溶剂、操作简单方便、回收率高的高纯人参皂苷rf分离纯化制备方法。
技术实现思路
1、本发明提供了一种人参皂苷rf对照品的制备方法，该方法应用高效制备液相色谱分离纯化技术制备人参皂苷rf对照品，可解决现有方法制备过程中易引入有毒有害试剂及操作复杂、收率和纯度低、生产成本高等问题。
2、为克服现有技术中的问题，本发明提出的一种人参皂苷rf对照品的制备方法，包括如下步骤：
3、(1)以人参根(人参全参或人参须)为原料；
4、(2)所述人参根加乙醇溶液回流提取，过滤后过装填大粒径填料的反相制备色谱柱，经乙醇溶液浓度由低到高线性梯度洗脱，分析后根据馏分内容物选择性合并洗脱液，得到粗分离液；
5、(3)将粗分离液过装填小粒径填料的亲水制备色谱柱，经乙醇溶液等度洗脱，得人参皂苷rf粗品溶液；
6、(4)人参皂苷rf粗品溶液过装填小粒径填料的反相制备色谱柱进一步分离纯化，经乙醇溶液等度洗脱，得人参皂苷rf纯品溶液；
7、(5)人参皂苷rf纯品溶液浓缩并冷冻干燥，即获得人参皂苷rf对照品。
8、在本发明的一些具体实施方案中，优选地，在步骤(2)中，所述乙醇溶液为50％～75％乙醇；反相制备色谱柱填料粒径范围为30～60μm，填料基质为硅胶或高分子聚合物，填料配基的碳原子数为3-18的正链烷基中的一种；色谱柱内径为30mm～500mm，色谱柱床高度为100mm～1000mm，乙醇溶液浓度由低到高线性梯度为25％～90％乙醇，上样量20％-40％。进一步优选为：反相制备色谱柱填料粒径为30μm，40μm或60μm；色谱柱内径为50mm或100mm；色谱柱床高为200mm或250mm。
9、优选地，在步骤(3)中，亲水制备色谱柱填料的粒径范围为5～15μm，其填料特征是：极性填料，为硅胶表面键合极性基团的填料，所键合的极性基团为二醇基、酰胺、氨基、羧基、糖基或两性离子中的一种；乙醇溶液浓度范围为60％～100％乙醇。
10、优选地，步骤(4)中，反相制备色谱柱填料粒径范围为5～10μm；填料基质为硅胶，填料配基的碳原子数为3-18的正链烷基中的一种；色谱柱内径为30mm～500mm，色谱柱床高度为100mm～1000mm，乙醇溶液等度为40％～50％乙醇。
11、本发明的主要优点为：
12、1.本发明方法采用的高效制备液相色谱分离技术，通过不同粒径、不同分离选择性的色谱填料可以有效的分离目标皂苷与其它皂苷、杂质等，提高了人参皂苷rf的分离度和纯度。
13、2.本发明方法中制备过程使用的溶剂为乙醇和纯化水，无需有毒有害试剂，实现绿色化制备生产。
14、3.本发明方法整个实验操作过程简便，效率高，制备成本低廉，洗脱剂和再生剂均可回收重复利用，节约溶剂成本。
1.一种人参皂苷rf对照品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述人参皂苷rf对照品的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述乙醇溶液为50％～75％乙醇；反相制备色谱柱填料粒径范围为30～60μm，填料基质为硅胶或高分子聚合物，填料配基的碳原子数为3-18的正链烷基中的一种；色谱柱内径为30mm～500mm，色谱柱床高度为100mm～1000mm，乙醇溶液浓度由低到高线性梯度为25％～90％乙醇，上样量20％-40％。
3.根据权利要求2所述人参皂苷rf对照品的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，反相制备色谱柱填料粒径为30μm，40μm或60μm；色谱柱内径为50mm或100mm；色谱柱床高为200mm或250mm。
4.根据权利要求1所述人参皂苷rf对照品的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，亲水制备色谱柱填料粒径范围为5～15μm，所述填料是极性填料；乙醇溶液浓度范围为60％～100％乙醇。
5.根据权利要求3所述人参皂苷rf对照品的制备方法，其特征在于，所述填料为硅胶表面键合极性基团的填料，所键合的极性基团为二醇基、酰胺、氨基、羧基、糖基或两性离子中的一种。
6.根据权利要求1所述人参皂苷rf对照品的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，反相制备色谱柱填料的粒径范围为5～10μm；填料基质为硅胶，填料配基的碳原子数为3-18的正链烷基中的一种；色谱柱内径为30mm～500mm，色谱柱床高度为100mm～1000mm，乙醇溶液为40％～50％乙醇。
7.根据权利要求1所述人参皂苷rf对照品的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述人参根为人参全参或人参须。
