本公开文本总体上涉及结合细胞外配体并且具有il-9胞内结构域的合成细胞受体。本公开文本还提供了可用于产生此类受体的组合物和方法、编码此类受体的核酸、用所述核酸基因修饰的宿主细胞、以及用于调节基因表达、调节细胞活性和/或用于治疗多种健康状况或疾病的方法。
背景技术：
1、操纵细胞、特别是免疫细胞以分化、发展专门功能和扩大数量具有很大的临床意义。影响这些活性的许多蛋白质因子是本领域已知的，特别包括细胞因子和趋化因子。然而，这些信号传导分子对不被靶向以进行操纵的细胞也具有多效性作用，因此在靶细胞群体中选择性激活信号传导的方法是期望的。工程化免疫细胞以进行受控行为的能力是本领域感兴趣的。例如，在过继免疫疗法中，将t细胞从血液中分离，离体处理，并且重新输注到患者体内。此类t细胞已经被开发用于治疗应用，如治疗癌症、感染和自身免疫性疾病。
2、基于细胞的疗法中的一个关键挑战是工程化对天然分子作出反应同时也允许选择性操纵免疫细胞的受体的能力。一些团体已经操纵蛋白质以独立于或正交于天然蛋白质或配体的影响的方式结合经修饰的配体并且对其作出反应。此技术依赖于正交细胞因子和正交受体两者的工程化，并且依赖于天然分子不会识别正交受体的前提。与产生正交配体-受体对相关的挑战之一是找到有效防止内源性分子激活而不以其他方式损害受体的结构或激活基因转录的内在能力的突变。在替代方法中，为了调节免疫细胞中的信号传导，防止诸如pd-1的分子递送的负信号的唯一方法是向患者给予与pd-1结合的拮抗性抗体的全身性治疗。此方法的局限性在于，全身性治疗防止存在于肿瘤微环境和整个免疫系统中的t细胞失活，这在一些患者中可能导致自身免疫或全身性炎症综合征(beck等人,2006,j clinoncol 24:2283-9；blansfield等人,2005,j immunother 28:593-8；dougan等人,2009,annual review of immunology 27:83-117)。
3、这里提供的本公开文本提供了对先前尝试操纵免疫细胞时存在的问题的解决方案，并且潜在地提供了用于涉及细胞转移的治疗的改进方法。
技术实现思路
1、本公开文本总体上尤其涉及被工程化为以配体依赖性方式调节转录调控的嵌合开关受体，所述嵌合开关受体含有il-9受体的胞内结构域。这些开关受体的活性可以通过细胞外配体的存在来控制，允许在空间和时间上控制哺乳动物细胞中的特定基因表达，以及用于调节细胞活性或治疗多种健康状况，如疾病。
2、在一方面，本文提供了编码嵌合受体的重组核酸分子，所述嵌合受体包含含有内源性细胞因子受体的结合结构域的细胞外部分、含有il-9受体的胞内结构域的细胞内部分、以及连接所述细胞外部分和所述细胞内部分的跨膜结构域。
3、在一些实施方案中，所述重组核酸分子进一步包含一个或多个接头。
4、在一些实施方案中，所述内源性细胞因子受体选自il-2rb、il-2ra、il-4r、il-7ra、il-15ra和il-21ra。
5、在一些实施方案中，所述内源性细胞因子受体包含与选自seq id no:1-6的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
6、在一些实施方案中，所述跨膜结构域选自il-9、il-7ra、il-2rb和tnfr1的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包含选自seq id no:53-56的氨基酸序列。
7、在一些实施方案中，所述嵌合受体包含与选自seq id no:63-80的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
8、在一个实施方案中，所述嵌合受体包含选自seq id no:63和72的氨基酸序列。
9、在一个实施方案中，将所述重组核酸分子掺入载体中。
10、在一个实施方案中，所述重组核酸分子进一步包含信号序列。在一个实施方案中，所述信号序列包含maapalswrlpllilllplatswasa(seq id no:62)的氨基酸序列。
11、在一个实施方案中，所述重组核酸分子进一步包含2a接头。
12、在一个实施方案中，所述重组核酸分子进一步包含编码嵌合抗原受体的核酸序列。
13、另一方面提供了编码嵌合受体的重组核酸分子，所述嵌合受体包含含有内源性抑制性受体的结合结构域的细胞外部分；含有连接至box1/2共同γ链结构域的il-9受体的胞内结构域的细胞内部分；以及连接所述细胞外部分和所述细胞内部分的跨膜结构域。
14、在一些实施方案中，所述重组核酸分子进一步包含一个或多个接头。
15、在一些实施方案中，所述内源性抑制性受体选自tgf-βr1、tgf-βr2、il-10ra、fas、ctla4、lag3、tim3、pd1、ilt2、ilt3、ilt4、ilt5和vegf。
16、在一些实施方案中，所述内源性抑制性受体包含与选自seq id no:7-52的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
17、在一些实施方案中，所述跨膜结构域选自il-9、il-7ra、il-2rb和tnfr1的跨膜结构域。
18、在一些实施方案中，所述跨膜结构域选自il-9、il-7ra、il-2rb和tnfr1的跨膜结构域。
19、在一些实施方案中，所述嵌合受体包含与选自seq id no:81-203的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
20、另一方面提供了编码嵌合受体的重组核酸分子，所述嵌合受体包含含有连接至对共同γ链具有特异性的因子(agent)的内源性抑制性受体的结合结构域的细胞外部分；含有il-9受体的胞内结构域的细胞内部分；以及连接所述细胞外部分和所述细胞内部分的跨膜结构域。
21、在一些实施方案中，所述重组核酸分子进一步包含一个或多个接头。
22、在一些实施方案中，所述内源性抑制性受体选自tgf-βr1、tgf-βr2、il-10ra、fas、ctla4、lag3、tim3、pd1、ilt2、ilt3、ilt4、ilt5和vegf。
23、在一些实施方案中，所述内源性抑制性受体包含与选自seq id no:7-52的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
24、在一些实施方案中，所述跨膜结构域选自il-9、il-7ra、il-2rb和tnfr1的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包含选自seq id no:53-56的氨基酸序列。
25、在一些实施方案中，所述对共同γ链具有特异性的因子包含纳米抗体、darpin、il-2、il-4、il-7和scfv。
26、另一方面涉及一种包含本公开文本的重组核酸分子的表达载体。
27、另一方面涉及一种包含本公开文本的重组核酸或本公开文本的表达载体的重组宿主细胞。在一些实施方案中，所述重组宿主细胞是真核细胞。在一些实施方案中，所述重组宿主细胞是动物细胞。在一些实施方案中，所述重组宿主细胞是哺乳动物细胞。在一些实施方案中，所述宿主细胞是免疫细胞、神经元、上皮细胞和内皮细胞或干细胞。在一些实施方案中，所述免疫细胞是b细胞、单核细胞、自然杀伤(nk)细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、巨噬细胞、调节性t细胞、辅助性t细胞(th)、细胞毒性t细胞(tctl)或其他t细胞。
28、另一方面提供了一种包含本公开文本的重组核酸的组合物。
29、另一方面提供了一种包含本公开文本的表达载体的细胞组合物。
30、另一方面提供了一种由本公开文本的重组核酸编码的多肽。
31、另一方面提供了一种由本公开文本的一种或多种重组核酸编码的一种或多种多肽的组合物。在一个实施方案中，所述多肽包含与选自seq id no:1-6的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述多肽包含选自seq id no:53-56的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述多肽包含与选自seq id no:63-80的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
32、另一方面提供了一种能够表达由本公开文本的重组核酸编码的嵌合受体的细胞组合物。
33、另一方面提供了一种包含嵌合受体的细胞组合物，所述嵌合受体包含选自seqidno:63-203的氨基酸序列。
34、另一方面涉及一种用于调节免疫细胞的活性的方法，所述方法包括向免疫细胞施用本公开文本的重组核酸。
35、在一个实施方案中，所述免疫细胞是b细胞、单核细胞、自然杀伤(nk)细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、巨噬细胞、调节性t细胞、辅助性t细胞(th)、细胞毒性t细胞(tctl)或其他t细胞。在一个实施方案中，所述免疫细胞是t细胞。在一个实施方案中，所述t细胞是car-t细胞。
36、另一方面涉及一种治疗受试者的方法，所述方法涉及向所述受试者施用表达本公开文本的重组核酸的细胞。
37、在一些实施方案中，治疗所述受试者的癌症。
38、在一些实施方案中，治疗所述受试者的自身免疫性疾病。
39、在一些实施方案中，治疗所述受试者的感染。
40、前述
技术实现要素：
仅是说明性的，并不旨在以任何方式进行限制。除了本文所述的说明性实施方案和特征之外，根据附图和具体实施方式以及权利要求，本公开文本的其他方面、实施方案、目的和特征将变得完全清楚。
1.一种编码嵌合受体的重组核酸分子，所述嵌合受体包含：
2.根据权利要求1所述的重组核酸分子，所述重组核酸分子进一步包含一个或多个接头。
3.根据权利要求1所述的重组核酸分子，其中所述内源性细胞因子受体选自il-2rb、il-2ra、il-4r、il-7ra、il-15ra和il-21ra。
4.根据权利要求1或2中任一项所述的重组核酸分子，其中所述内源性细胞因子受体包含与选自seq id no:1-6的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的重组核酸分子，其中所述跨膜结构域选自il-9、il-7ra、il-2rb和tnfr1的跨膜结构域。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的重组核酸分子，其中所述跨膜结构域包含选自seq id no:53-56的氨基酸序列。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的重组核酸分子，其中所述嵌合受体包含与选自seq id no:63-80的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
8.根据权利要求1至5中任一项所述的重组核酸分子，其中所述嵌合受体包含选自seqidno:63和72的氨基酸序列。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的重组核酸分子，其中将所述重组核酸分子掺入载体中。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的重组核酸分子，所述重组核酸分子进一步包含信号序列。
11.根据权利要求10所述的重组核酸分子，其中所述信号序列包含maapalswrlpllilllplatswasa(seq id no:62)的氨基酸序列。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的重组核酸分子，所述重组核酸分子进一步包含2a接头。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的重组核酸分子，所述重组核酸分子进一步包含编码嵌合抗原受体的核酸序列。
14.一种表达载体，所述表达载体包含根据权利要求1-13中任一项所述的重组核酸分子。
15.一种重组宿主细胞，所述重组宿主细胞包含根据权利要求1-13所述的重组核酸或根据权利要求14所述的表达载体。
16.根据权利要求15所述的重组细胞，其中所述重组细胞是真核细胞。
17.根据权利要求15-16所述的重组细胞，其中所述真核细胞是动物细胞。
18.根据权利要求15-17所述的重组细胞，其中所述动物细胞是哺乳动物细胞。
19.根据权利要求15-18所述的重组细胞，其中所述哺乳动物细胞是免疫细胞、神经元、上皮细胞和内皮细胞或干细胞。
20.根据权利要求19所述的重组细胞，其中所述重组细胞是免疫细胞或树突细胞。
21.根据权利要求20所述的重组细胞，其中所述免疫细胞是b细胞、单核细胞、自然杀伤(nk)细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、巨噬细胞、调节性t细胞、辅助性t细胞(th)、细胞毒性t细胞(tctl)或其他t细胞。
22.一种组合物，所述组合物包含根据权利要求1-13中任一项所述的重组核酸。
23.一种细胞组合物，所述细胞组合物包含根据权利要求14所述的表达载体。
24.一种多肽，所述多肽由根据权利要求1-13中任一项所述的重组核酸编码。
25.一种由一种或多种根据权利要求1-13中任一项所述的重组核酸编码的一种或多种多肽的组合物。
26.根据权利要求24所述的多肽，其中所述多肽包含与选自seq id no:1-6的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
27.根据权利要求24所述的多肽，其中所述多肽包含选自seq id no:53-56的氨基酸序列。
28.根据权利要求24所述的多肽，其中所述多肽包含与选自seq id no:63-80的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
29.一种细胞组合物，所述细胞组合物能够表达由根据权利要求1-13中任一项所述的重组核酸编码的嵌合受体。
30.一种细胞组合物，所述细胞组合物包含嵌合受体，所述嵌合受体包含选自seq idno:63-203的氨基酸序列。
31.一种用于调节免疫细胞的活性的方法，所述方法包括：
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述免疫细胞免疫细胞是b细胞、单核细胞、自然杀伤(nk)细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、巨噬细胞、调节性t细胞、辅助性t细胞(th)、细胞毒性t细胞(tctl)或其他t细胞。
33.根据权利要求31所述的方法，其中所述免疫细胞是t细胞。
34.根据权利要求31所述的方法，其中所述t细胞是car-t细胞。
35.一种治疗受试者的方法，所述方法包括：
36.根据权利要求35所述的方法，其中治疗所述受试者的癌症。
37.根据权利要求35所述的方法，其中治疗所述受试者的自身免疫性疾病。
38.根据权利要求35所述的方法，其中治疗所述受试者的感染。
