一种可同时检测FCGR2A、IRF7和HIV的试剂盒的制作方法

专利2026-02-14  9


本发明hiv诊断领域,更特别地,涉及一种可同时检测fcgr2a、irf7和hiv的试剂盒。


背景技术:

1、对于hiv病毒的彻底清除是hiv治疗领域急需攻克的难题。现如今hiv的联合抗逆转录病毒疗法(combined anti-retroviral therapy,cart)尽管能够很好地抑制病毒的繁殖,却无法清除hiv潜伏感染病毒库,导致艾滋病无法被彻底治愈。近年来,部分科学家发现cd30、cd32a等分子在hiv潜伏感染的细胞中富集,表明这些分子可能是hiv潜伏感染病毒库的标志物,同时也可能成为car-t治疗的良好靶点。

2、gp120/cd32a双car-γδt疗法可以同art疗法配合实现hiv的功能性治疗。为了筛选gp120/cd32a双car-γδt疗法的适用范围和进一步探究hiv潜伏感染者中cd32a的表达机制,需要准确筛选出合适的hiv感染者用于后续的gp120/cd32a双car-γδt疗法的研究性临床试验。

3、我们对于hiv在潜伏感染病毒库中如何诱导fcgr2a的表达提出了两个猜想:hiv随机整合激活了相关启动子,从而激活fcgr2a的表达。我们之前的生信分析结果显示该启动子很可能同样激活cdc42bpa和tbc1d5的表达,而我们之前研制的试剂盒能够进行两个基因的检测。另一个猜想则是hiv具有调控转录的非结构蛋白激活了fcgr2a的表达。我们之前使用生物信息学技术分析hiv潜伏感染病毒库的转录组,结果显示hiv的非结构蛋白可能通过调控irf7及其所在的通路进而调控fcgr2a的表达,该试剂盒则应用于此猜想的验证。另外,相比于之前的试剂盒,我们在此试剂盒中加入了hiv的检测,从而确认受试者是否受到感染以及受试者的病毒载量。

4、因此,需要一种能够同时检测fcgr2a、irf7和hiv的试剂盒。


技术实现思路

1、为解决以上问题,本发明提供了一种可同时检测fcgr2a、irf7和hiv的试剂盒,包括用于检测fcgr2a的引物对i、用于检测irf7的引物对ii,以及用于检测hiv的引物对iii;其中,

2、所述引物对i包含的引物序列分别如seq id no:1和2所示;

3、所述引物对ii包含的引物序列分别如seq id no:4和5所示;

4、所述引物对iii包含的引物序列分别如seq id no:7和8所示。

5、在一个具体实施方案中,所述试剂盒为荧光定量pcr试剂盒,并且包括用于检测fcgr2a的荧光探针i、用于检测irf7的荧光探针ii,以及用于检测hiv的荧光探针iii;

6、所述荧光探针i的序列如seq id no:3所示,所述荧光探针ii的序列如seq id no:6所示,所述荧光探针iii的序列如seq id no:9所示。

7、在一个具体实施方案中,所述荧光探针i、荧光探针ii和荧光探针iii上标记的荧光基团不同。

8、在一个具体实施方案中,所述试剂盒还包括用于对内参基因进行荧光定量检测的引物对iv和荧光探针iv。

9、在一个具体实施方案中,所述内参基因为gapdh,所述引物对iv包含的引物序列分别如seq id no:10和11所示,所述荧光探针iv的序列如seq id no:12所示,并且所述荧光探针iv的荧光基团与所述荧光探针i、ii和iii均不相同。

10、在一个具体实施方案中,所述引物对i-iv中的所有引物混合溶解在引物预混液中,并且所述引物预混液中的每个引物的浓度为0.2μm。

11、在一个具体实施方案中,所述荧光探针i-iv混合溶解在探针预混液中,并且所述探针预混液中的每个探针的浓度为0.3μm。

12、在一个具体实施方案中,所述试剂盒还包括阳性对照。

13、在一个具体实施方案中,所述阳性对照组包括含有fcgr2a基因的重组质粒等核酸构建体、含有hiv基因的重组质粒等核酸构建体以及含有irf7基因的重组质粒等核酸构建体。

14、本发明的试剂盒可同时对fcgr2a、irf7和hiv基因进行荧光定量pcr检测,该试剂盒的灵敏度和特异性高,检测样本中片段的拷贝数达到10时即可获得有效的荧光信号。



技术特征:

1.一种可同时检测fcgr2a、irf7和hiv的试剂盒,其特征在于,包括用于检测fcgr2a的引物对i、用于检测irf7的引物对ii,以及用于检测hiv的引物对iii;其中,

2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒为荧光定量pcr试剂盒,并且包括用于检测fcgr2a的荧光探针i、用于检测irf7的荧光探针ii,以及用于检测hiv的荧光探针iii;

3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述荧光探针i、荧光探针ii和荧光探针iii上标记的荧光基团不同。

4.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,还包括用于对内参基因进行荧光定量检测的引物对iv和荧光探针iv。

5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述内参基因为gapdh,所述引物对iv包含的引物序列分别如seq id no:10和11所示,所述荧光探针iv的序列如seq id no:12所示,并且所述荧光探针iv的荧光基团与所述荧光探针i、i i和i i i均不相同。

6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述引物对i-iv中的所有引物混合溶解在引物预混液中,并且所述引物预混液中的每个引物的浓度为0.2μm。

7.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述荧光探针i-iv混合溶解在探针预混液中,并且所述探针预混液中的每个探针的浓度为0.3μm。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的试剂盒,其特征在于,还包括阳性对照。

9.根据权利要求8所述的试剂盒,其特征在于,所述阳性对照组包括含有fcgr2a基因的核酸构建体、含有hiv基因的核酸构建体以及含有irf7基因的核酸构建体。


技术总结
本发明涉及一种可同时检测FCGR2A、IRF7和HIV的试剂盒,包括用于检测FCGR2A的引物对I、用于检测IRF7的引物对II,以及用于检测HIV的引物对III;其中,所述引物对I包含的引物序列分别如SEQ ID NO:1和2所示;所述引物对II包含的引物序列分别如SEQ ID NO:4和5所示;所述引物对III包含的引物序列分别如SEQ ID NO:7和8所示。本发明的试剂盒可同时对FCGR2A、IRF7和HIV基因进行荧光定量PCR检测,该试剂盒的灵敏度和特异性高,检测样本中片段的拷贝数达到10时即可获得有效的荧光信号。

技术研发人员:孙健红,孟庆辉,王嘉元,许娜,廖兴华,郑鹏
受保护的技术使用者:重庆黔江武陵山生物医药联合研究院
技术研发日:
技术公布日:2024/6/26
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