本发明属于生物，具体涉及一种猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体及其应用。
背景技术：
1、猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv)，属于动脉炎病毒属和动脉炎病毒科，包含一个长约15kb的单链正链rna。它在猪中引起繁殖障碍和呼吸困难，给猪业带来巨大的经济损失。prrsv基因组包含11个开放阅读框，编码8种结构蛋白和16种非结构蛋白(nsp)，每种都在感染、复制、致病性和病毒-宿主互作的不同步骤中具有不同的功能。prrsv感染后发生免疫抑制，可能导致先天性和获得性免疫反应效率低下，调节炎症和/或抗炎因子的表达和释放，上调免疫抑制细胞因子的表达，并允许病毒快速繁殖和引起疾病。
2、几项研究一致报告，prrsv感染会引起一种被称为″细胞因子风暴″的异常免疫反应，其中健康个体的免疫系统对病毒感染产生过量的促炎细胞因子并严重过度反应。大量促炎细胞因子的积聚可以诱发组织损伤和其他严重的炎症损害。然而，prrsv感染引起的″细胞因子风暴″的机制尚不清楚，需要进一步深入研究。
3、n6-甲基腺苷(m6a)是rna最重要的转录后修饰之一，在包括哺乳动物、植物、昆虫和病毒在内的多种物种中，其大小、结构和功能都高度保守。
技术实现思路
1、本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
2、作为本发明其中一个方面，本发明提供一种猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体，其中，所述突变体包括猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp9蛋白的第566-567位的氨基酸均突变为丙氨酸，或第571-572位的氨基酸均突变为丙氨酸，或第586-588位的氨基酸均突变为丙氨酸，或第591-595位的氨基酸均突变为丙氨酸。
3、作为本发明所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体的一种优选方案∶所述猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp9蛋白来源于高致病性prrsv毒株bb0907、prrsv株s1、低致病性prrsv毒株nt0801中的一种。
4、作为本发明所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体的一种优选方案∶所述高致病性prrsv毒株bb0907的genbank登录号为hq315835。
5、所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体，其特征在于：所述prrsv株s1的genbank登录号为dq459471。
6、作为本发明所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体的一种优选方案∶所述低致病性prrsv毒株nt0801的genbank登录号hq315836。
7、作为本发明的另一个方面，本发明还提供所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体的应用，其中：所述突变体能够用于制备猪繁殖与呼吸综合征病毒的减毒疫苗。
8、其中，所述猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体能够降低猪繁殖与呼吸综合征病毒感染引起的细胞因子风暴。
9、其中，所述猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体能够降低病毒感染期间的il-8水平和炎症反应，从而降低所述突变体的毒性。
10、其中，所述猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体通过调节fto介导的m6a水平来降低il-8水平。
11、本发明的有益效果：在本发明中，定义了m6a在prrsv rna基因组中调节宿主炎症因子的作用，并证明了细胞m6a机制可以增加病毒感染诱导的il-8表达。重要的是，本发明发现prrsv nsp9与prrsv感染的pams中增强的il-8分泌有关。通过构建靶向突变，我们注意到nsp9中的551-600氨基酸残基(aa)以及r566-567、a571-572和y586-588在prrsv感染的pams中通过抑制fto表达上调细胞m6a修饰而诱导il-8分泌中起着重要作用。综上所述，本发明的结果揭示了一种新的炎症反应机制，即通过m6a修饰对病毒感染的反应，在该机制中，与fto改变的的m6a修饰的prrsv nsp9基序增加了il-8分泌。由于prrsv感染可能会引起″细胞因子风暴″，这对于prrsv弱毒疫苗的安全性是一种不利因素，而本发明发现ry586-3a降低了il-8的分泌，因此，通过调控prrsv感染期间il-8水平和炎症反应，从而用于开发更低炎症反应、更为安全的减毒疫苗。为未来弱毒prrsv疫苗(prrsv-mlv)的改良提供了更为有利的准备工作。
1.一种猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体，其特征在于：所述突变体包括猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp9蛋白的第566-567位的氨基酸均突变为丙氨酸，或第571-572位的氨基酸均突变为丙氨酸，或第586-588位的氨基酸均突变为丙氨酸，或第591-595位的氨基酸均突变为丙氨酸。
2.根据权利要求1所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体，其特征在于：所述猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp9蛋白来源于高致病性prrsv毒株bb0907、prrsv株s1、低致病性prrsv毒株nt0801中的一种。
3.根据权利要求2所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体，其特征在于：所述高致病性prrsv毒株bb0907的genbank登录号为hq315835。
4.根据权利要求2所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体，其特征在于：所述prrsv株s1的genbank登录号为dq459471。
5.根据权利要求2所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体，其特征在于：所述低致病性prrsv毒株nt0801的genbank登录号hq315836。
6.权利要求1所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体的应用，其特征在于：所述突变体能够用于制备猪繁殖与呼吸综合征病毒的减毒疫苗。
7.权利要求6所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体的应用，其特征在于：所述猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体能够降低猪繁殖与呼吸综合征病毒感染引起的细胞因子风暴。
8.权利要求6或7所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体的应用，其特征在于：所述猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体能够降低病毒感染期间的il-8水平和炎症反应，从而降低所述突变体的毒性。
9.权利要求6或7所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体的应用，其特征在于：所述猪繁殖与呼吸综合征病毒突变体通过调节fto介导的m6a水平来降低il-8水平。
