本发明涉及生物，尤其是涉及嘧啶吲哚衍生物um729联合烟酰胺在制备扩增造血干细胞试剂中的应用。
背景技术：
1、人类造血干细胞是一群数量极少的血液细胞，主要存在于成年人的骨髓及新生儿脐带血当中。造血干细胞移植可以在造血功能缺失的患者体内重塑完整的造血系统，是目前可治愈造血器官衰竭及恶性血液病的唯一治疗手段。根据供者造血干细胞来源器官的不同，又可分骨髓造血干细胞及脐带血造血干细胞。与骨髓造血干细胞相比，脐带血造血干细胞的免疫原性低、异体排斥反应小；移植物抗宿主病严重程度低、慢性移植物抗宿主病发生率低；再生能力和速度是前者的10-20倍，是更为理想的造血干细胞来源。然而脐带血造血干细胞数量少，对于成年人，尤其是大体重的受者，即使配型成功，细胞数量也难以满足移植的要求。因此，扩增造血干细胞尤其是脐血造血干细胞，从而使其适用于更多临床案例是移植领域关注的热点问题。
2、目前，脐血中造血干细胞含量差异大：cd34+造血干细胞(×106)：3.51±3.08(中位数：2.90，范围：0.01–33.27)(mazzoccoli et al.,2016)。因此，造血干细胞含量较少的供者脐血很难为临床所用。
技术实现思路
1、本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供嘧啶吲哚衍生物um729联合烟酰胺在制备扩增造血干细胞试剂中的应用。本发明使用嘧啶吲哚衍生物um729联合烟酰胺可以提升造血干细胞扩增数量。
2、为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
3、第一目的，本发明提供了嘧啶吲哚衍生物um729或/和烟酰胺在制备扩增造血干细胞试剂中的应用。
4、在扩增造血干细胞过程中，添加嘧啶吲哚衍生物um729和烟酰胺，在维持造血干细胞自我更新能力与多向分化潜能的基础上增加了细胞的数量，将cd34+/cd45ra-细胞从14倍扩增至26倍。
5、作为本发明所述应用的优选实施方式，所述嘧啶吲哚衍生物um729的用量为50-200nm。优选地，所述嘧啶吲哚衍生物um729的用量为300nm。
6、本发明通过减少嘧啶吲哚衍生物um729的剂量(50-200nm)，嘧啶吲哚衍生物um729为嘧啶诱导蛋白球蛋白衍生物um729，降低了单用um729潜在的剂量依赖性副作用。
7、作为本发明所述应用的优选实施方式，所述烟酰胺的用量为10-50mm。
8、第二目的，本发明提供了一种扩增造血干细胞的培养基，包括以下浓度的组分：
9、imdm培养基、50-200nm嘧啶吲哚衍生物um729、10-50mm烟酰胺、5-20％人和小鼠造血细胞的血清替代物、50-200ng/ml血小板生成素、50-200ng/ml干细胞因子、50-200ng/mlflt3配体、50-100μmβ-巯基乙醇、质量比为1:500-1:2000的环丙沙星和庆大霉素的混合物。
10、人和小鼠造血细胞的血清替代物为细胞提供营养；添加血小板生成素是为了诱导细胞自我更新和扩增；干细胞因子是为了促进细胞自我更新；flt3配体协同其他细胞因子促进干细胞增殖；β-巯基乙醇是保护细胞不被自由基破坏；加入环丙沙星和庆大霉素是预防细菌和支原体污染。
11、采用上述浓度的组分组成的培养基，可以较好的扩增造血干细胞，以提高造血干细胞的扩增数量和扩增倍数。
12、作为本发明所述培养基的优选实施方式，所述培养基包括以下浓度的组分：
13、imdm培养基、200nm嘧啶吲哚衍生物um729、10mm烟酰胺、20％人和小鼠造血细胞的血清替代物、50ng/ml血小板生成素、100ng/ml干细胞因子、100ng/ml flt3配体、100μmβ-巯基乙醇、质量比为1:1000的环丙沙星和庆大霉素的混合物。
14、第三目的，本发明提供了一种扩增造血干细胞的方法，使用上述培养基培养造血干细胞。
15、作为本发明所述方法的优选实施方式，所述培养的时间为5-21天。采用上述培养时间可以较好的达到扩增造血干细胞的目的。
16、作为本发明所述方法的优选实施方式，所述方法还添加有嘧啶吲哚衍生物um729或/和烟酰胺。
17、在扩增造血干细胞的方法中添加有嘧啶吲哚衍生物um729、烟酰胺，在维持造血干细胞自我更新能力与多向分化潜能的基础上增加了细胞的数量。
18、作为本发明所述方法的优选实施方式，所述造血干细胞的细胞浓度为2-5×105/ml。
19、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
20、本发明提供了嘧啶吲哚衍生物um729联合烟酰胺在制备扩增造血干细胞试剂中的应用，在扩增造血干细胞过程中，添加嘧啶吲哚衍生物um729和烟酰胺，在维持造血干细胞自我更新能力与多向分化潜能的基础上增加了细胞的数量，将cd34+/cd45ra-细胞从14倍扩增至26倍。本发明还提供了一种扩增造血干细胞的培养基，该培养基可以增加造血干细胞的扩增数量。本发明通过减少嘧啶吲哚衍生物um729的剂量(50-200nm)，降低了单用um729潜在的剂量依赖性副作用。
1.嘧啶吲哚衍生物um729或/和烟酰胺在制备扩增造血干细胞试剂中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述嘧啶吲哚衍生物um729的用量为50-200nm。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述烟酰胺的用量为10-50mm。
4.一种扩增造血干细胞的培养基，其特征在于，包括以下浓度的组分：
5.如权利要求4所述的培养基，其特征在于，包括以下浓度的组分：
6.一种扩增造血干细胞的方法，其特征在于，使用如权利要求4或5所述的培养基培养造血干细胞。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述培养的时间为5-21天。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法还添加有嘧啶吲哚衍生物um729或/和烟酰胺。
9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述造血干细胞的细胞浓度为2-5×105/ml。
