本发明属于化学分析，具体涉及一种分离多巴丝肼片中三种组分并检测其含量和溶出度的方法。
背景技术：
1、多巴丝肼片主成分为左旋多巴和盐酸苄丝肼，主要降解杂质盐酸苄丝肼杂质b。左旋多巴的结构式如式ⅰ所示，盐酸苄丝肼的结构式如式ⅱ所示，盐酸苄丝肼杂质b的结构式如式ⅲ所示。
2、
3、目前暂无法定方法及文献方法可同时对多巴丝肼片中左旋多巴和盐酸苄丝肼的含量和溶出度进行测定，多巴丝肼片相关分析方法仅在chp2020二部中有收载，然而chp2020中多巴丝肼片中测定左旋多巴和盐酸苄丝肼含量的方法分析时间较长。
4、公开号为cn111812227a的发明专利公开了一种多巴丝肼复方制剂中苄丝肼杂质a的分析方法，该方法采用亲水基色谱柱，以含有庚烷磺酸钠和磷酸二氢钾，ph为1.7到9.0的水溶液作为流动相a，甲醇作为流动相b，采用阶段性梯度洗脱方法对多巴丝肼复方制剂中苄丝肼杂质a的含量进行分离测定。然而该方法仅能检测杂质a的含量，无法同时实现多巴丝肼片中左旋多巴、盐酸苄丝肼和盐酸苄丝肼杂质b的分离和含量测定，页无法同时测定左旋多巴、盐酸苄丝肼的溶出度。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种利用hplc-uv方法分离多巴丝肼片中左旋多巴、盐酸苄丝肼、盐酸苄丝肼杂质b的方法，该方法专属性强、分析时间短，为后续同时测定左旋多巴和盐酸苄丝肼的含量和溶出度提供了支持。
2、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
3、利用hplc-uv方法分离左旋多巴、盐酸苄丝肼、盐酸苄丝肼杂质b的方法，被分离的组分包括左旋多巴、盐酸苄丝肼、盐酸苄丝肼杂质b；所述左旋多巴的结构式如式ⅰ所示，所述盐酸苄丝肼的结构式如式ⅱ所示，所述盐酸苄丝肼杂质b的结构式如式ⅲ所示；所述方法为：采用辛基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以磷酸二氢钠缓冲液、甲醇和庚烷磺酸钠的混合溶液为流动相进行等度洗脱，依次将左旋多巴、盐酸苄丝肼、盐酸苄丝肼杂质b进行分离；所述流动相中磷酸二氢钠缓冲液、甲醇的体积比为72：28；所述流动相中庚烷磺酸钠和磷酸二氢钠缓冲液的物质的量浓度比为1:10；
4、
5、所述流动相中磷酸二氢钠缓冲液具体配置方式：取磷酸二氢钠二水合物3.9g和庚烷磺酸钠0.505g，加水1000ml使溶解，用磷酸调节ph值至3.5。
6、根据各组分被分离的时间快慢，可实现左旋多巴、盐酸苄丝肼和盐酸苄丝肼杂质b的定性鉴别。
7、进一步，样品为多巴丝肼片，所述多巴丝肼片中包含左旋多巴、盐酸苄丝肼、盐酸苄丝肼杂质b。
8、进一步，采用所述hplc-uv方法同时分离左旋多巴、盐酸苄丝肼和盐酸苄丝肼杂质b，分离时间为15min。
9、进一步，所述磷酸二氢钠缓冲液的浓度为0.025mol/l，ph为3.5。
10、作为优选，所述色谱柱选择inertsil c8-3，4.6mm×250mm，5μm，或效能相当的色谱柱。
11、作为优选，所述流动相流速为1.0ml/min。
12、作为优选，所述色谱柱柱温为30℃。
13、作为优选，进样器5℃。
14、作为优选，进样体积5μl。
15、本发明的目的之二在于提供一种同时测定多巴丝肼片中左旋多巴和盐酸苄丝肼的含量和溶出度的方法，该方法可在15min内或大于15min的时间实现多巴丝肼片中左旋多巴和盐酸苄丝肼的含量和溶出度测定。
16、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
17、基于目的一所述的方法同时测定多巴丝肼片中左旋多巴和盐酸苄丝肼的含量和溶出度的方法，采用目的一所述方法分离多巴丝肼片中的左旋多巴、盐酸苄丝肼和盐酸苄丝肼杂质b；分离后利用紫外检测器进行检测；设置0-4.3min检测波长为280nm，4.4-15min检测波长为220nm。
18、进一步，三种组分保留时间由短到长依次为：左旋多巴、盐酸苄丝肼和盐酸苄丝肼杂质b。
19、进一步，所述流动相中磷酸二氢钠缓冲液、甲醇的体积比为72：28，庚烷磺酸钠和磷酸二氢钠缓冲液的物质的量浓度比为1：10；所述色谱柱规格为4.6mm×250mm×5μm；所述流动相流速为1.0ml/min；所述色谱柱柱温为30℃；所述左旋多巴检测波长为280nm，所述盐酸苄丝肼和所述盐酸苄丝肼杂质b的检测波长为220nm；采用以上色谱条件进行等度洗脱和检测，并得色谱图。
20、进一步，保留时间为3.3±0.5min，判定为左旋多巴；保留时间为5.0±0.5min，判定为盐酸苄丝肼；保留时间为12.6±0.5min，判定为盐酸苄丝肼杂质b。
21、通过该保留时间可以对多巴丝肼片中三种组份进行定性检测。
22、进一步，以浓度为0.1mol/l的磷酸溶液为溶剂配制含量供试品溶液、含量对照品溶液；以0.1mol/l盐酸溶液为溶剂配制溶出度供试品溶液和溶出度对照品溶液。
23、进一步，配置标准品，检测得标准样品色谱图；测试样品所得色谱图，按外标法以峰面积进行含量和溶出度计算。
24、所述标准品组份含量为已知，所述测试样品组份含量为未知。
25、检测所得的标准品色谱图可以储存于数据库中，作为智慧药厂中质量控制的图谱素材，用于帮助机器人判定其生产的产品是否合格，对不合格的产品给出可定量的改进分析建议。
26、本发明中，“多巴丝肼片”中除了含有盐酸苄丝肼和左旋多巴两种主药外，还包含其他辅料，包括甘露醇、微晶纤维素、预胶化淀粉、磷酸氢钙、乙基纤维素、多库酯钠、硬脂酸镁、红氧化铁、胶态二氧化硅以及交联聚维酮等。
27、本发明中，溶出度是指药物从片剂等固体制剂在规定溶剂中溶出的速度和程度。溶出度是片剂质量控制的一个重要指标，对难溶性的药物一般都应作溶出度的检查。
28、本发明的有益效果在于：
29、1.本发明通过筛选不同的流动相及比例、柱温等色谱条件建立一种hplc-uv方法，该方法可较快速的同时测定多巴丝肼片中主成分左旋多巴和盐酸苄丝肼的含量和溶出度，并能够使主要降解杂质盐酸苄丝肼杂质b(限度3％)不干扰两个主成分含量和溶出度的测定。
30、2.本发明提供的hplc-uv方法，采用了辛基硅烷键合硅胶为填充剂，利用各物质极性及氢健作用的强弱，流动相选择了磷酸二氢钠缓冲盐-甲醇-庚烷磺酸钠离子对的流动相体系，庚烷磺酸钠的加入对主成分和主要降解杂质分离改善明显，能够在15分钟内将左旋多巴、盐酸苄丝肼和盐酸苄丝肼杂质b很好分离，并能对左旋多巴和盐酸苄丝肼进行定量分析。该方法专属性强、分析时间短、具有较好的稳定性、良好的准确度、重复性高且操作简单可行。
1.利用hplc-uv方法分离左旋多巴、盐酸苄丝肼、盐酸苄丝肼杂质b的方法，其特征在于，被分离的组分包括左旋多巴、盐酸苄丝肼、盐酸苄丝肼杂质b；所述左旋多巴的结构式如式ⅰ所示，所述盐酸苄丝肼的结构式如式ⅱ所示，所述盐酸苄丝肼杂质b的结构式如式ⅲ所示；所述方法为：采用辛基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以磷酸二氢钠缓冲液、甲醇和庚烷磺酸钠的混合溶液为流动相进行等度洗脱，依次将左旋多巴、盐酸苄丝肼、盐酸苄丝肼杂质b进行分离；所述流动相中磷酸二氢钠缓冲液、甲醇的体积比为72：28；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，样品为多巴丝肼片，所述多巴丝肼片中包含左旋多巴、盐酸苄丝肼、盐酸苄丝肼杂质b。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用所述hplc-uv方法同时分离左旋多巴、盐酸苄丝肼和盐酸苄丝肼杂质b，分离时间为15min。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷酸二氢钠缓冲液的浓度为0.025mol/l，
5.基于权利要求1-4任一项所述的方法同时测定多巴丝肼片中左旋多巴和盐酸苄丝肼的含量和溶出度的方法，其特征在于，采用权利要求1-4任一项所述的方法分离多巴丝肼片中的左旋多巴、盐酸苄丝肼和盐酸苄丝肼杂质b；分离后利用紫外检测器进行检测；设置0-4.3min检测波长为280nm，4.4-15min检测波长为220nm。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，三种组分保留时间由短到长依次为：左旋多巴、盐酸苄丝肼和盐酸苄丝肼杂质b。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述流动相中磷酸二氢钠缓冲液、甲醇的体积比为72：28，庚烷磺酸钠和磷酸二氢钠缓冲液的物质的量浓度比为1：10；所述色谱柱规格为4.6mm×250mm×5μm；所述流动相流速为1.0ml/min；所述色谱柱柱温为30℃；所述左旋多巴检测波长为280nm，所述盐酸苄丝肼和所述盐酸苄丝肼杂质b的检测波长为220nm；采用以上色谱条件进行等度洗脱和检测，并得色谱图。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，保留时间为3.3±0.5min，判定为左旋多巴；保留时间为5.0±0.5min，判定为盐酸苄丝肼；保留时间为12.6±0.5min，判定为盐酸苄丝肼杂质b。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，以浓度为0.1mol/l的磷酸溶液为溶剂配制含量供试品溶液、含量对照品溶液；以0.1mol/l盐酸溶液为溶剂配制溶出度供试品溶液和溶出度对照品溶液。
10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，配置标准品，检测得标准样品色谱图；测试样品所得色谱图，按外标法以峰面积进行含量和溶出度计算。
