本发明属于化学分析，具体涉及一种盐酸莫西沙星片及注射液中光降解杂质的分离和检测方法。
背景技术：
1、盐酸莫西沙星为第四代氟喹诺酮类药，具有广谱抗菌作用，通过对细菌的拓扑异构酶ⅱ和拓扑异构酶ⅳ的抑制作用阻断细菌dna复制而发挥作用，盐酸莫西沙星对光敏感，在光照条件下可能产生光降解杂质l(6-羟基莫西沙星)和m(2’-氧代莫西沙星)。光降解杂质l和m的存在对主成分的活性存在一定影响，故针对盐酸莫西沙星api、盐酸莫西沙星片和盐酸莫西沙星注射液都需要进行质量控制。
2、李林梅等人在《hplc法测定盐酸莫西沙星片中光降解杂质的含量.邵阳学院学报(自然科学版)，vol.17no.5oct.2020》一文中公开了一种hplc方法，该方法可用于测定盐酸莫西沙星片中光降解杂质m(本专利杂质m)和n(本专利杂质l)的含量。然而该方法使用的流动相中含有离子对试剂，且流动相a和b两相均为混合流动相(四丁基硫酸氢铵缓冲液:甲醇(90:10))。该方法流动相复杂，对高效液相色谱仪损耗较大。
3、公开号为cn111024831a的发明专利公开了一种高效液相色谱法分离盐酸莫西沙星及其杂质的方法，该专利以水相和有机相的混合液为流动相，其中水相为氟代有机酸的水溶液，有机相为甲醇或乙腈。然而该方法不能在一个色谱系统中实现杂质l和杂质m的同时分离和测定，且该方法柱温为45℃，柱温较高不利于对色谱柱的保护。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种利用高效液相色谱法分离盐酸莫西沙星、杂质l和杂质m的方法，该方法灵敏度高，可在37分钟内或37分钟以上时间实现三种组分的分离测定。
2、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
3、利用高效液相色谱法分离盐酸莫西沙星、杂质l和杂质m的方法，被分离的组分包括结构式如式ⅰ所示的盐酸莫西沙星、结构式如式ⅱ所示的杂质l和结构式如式ⅲ所示的杂质m；所述高效液相色谱法中，色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a为体积分数为0.2％的三乙胺溶液，所述流动相b为乙腈；通过梯度洗脱依次将杂质l、杂质m和盐酸莫西沙星进行分离；
4、
5、可以根据洗脱先后顺序对各组分进行定性。
6、进一步，采用所述方法同时分离杂质l、杂质m和盐酸莫西沙星，分离时间为37min。
7、进一步，样品为盐酸莫西沙星片和/或盐酸莫西沙星注射液；所述盐酸莫西沙星片和所述盐酸莫西沙星注射液中包含杂质l、杂质m和盐酸莫西沙星。
8、进一步，设置所述梯度洗脱程序如下：
9、0min，设置流动相a为和流动相b体积比为86-90：10-14；
10、5min，设置流动相a为和流动相b体积比为88：12；
11、15min，设置流动相a为和流动相b体积比为75：25；
12、25min，设置流动相a为和流动相b体积比为40：60；
13、30min，设置流动相a为和流动相b体积比为40：60；
14、31min，设置流动相a为和流动相b体积比为88：12；
15、37min，设置流动相a为和流动相b体积比为88：12。
16、进一步，用磷酸溶液调节流动相a的ph值为8.4-8.8。
17、作为优选，流动相a的ph值为8.6。
18、作为优选，色谱柱选择shim-pack gistc18，4.6mm×150mm，5μm，或效能相当的色谱柱。
19、进一步，所述流动相流速为1.1-1.3ml/min，优选为1.2ml/min。
20、进一步，所述色谱柱柱温为28-32℃，优选为30℃。
21、柱温30℃更有利于色谱柱的保护。
22、进一步，进样体积10μl。
23、进一步，除杂质l、杂质m外，所述方法还可有效分离盐酸莫西沙星片/注射液中的杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f、杂质h、杂质i与杂质j，各杂质结构式如下。
24、
25、本专利采用碱性条件流动相(常用色谱条件为酸性流动相)，碱性条件更能符合杂质性质，常规酸性流动相不能对杂质h和杂质l进行分离，本专利对其杂质h和l进行良好分离并能准确测定杂质m和l。
26、本发明的目的之二在于提供一种同时检测盐酸莫西沙星片和/或盐酸莫西沙星注射液中盐酸莫西沙星、杂质l和杂质m的方法。
27、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
28、同时检测盐酸莫西沙星片和/或盐酸莫西沙星注射液中盐酸莫西沙星、杂质l和杂质m的方法，采用目的一所述方法将盐酸莫西沙星片和/或盐酸莫西沙星注射液中盐酸莫西沙星、杂质l和杂质m进行分离后，用检测器进行检测；所述检测器检测波长293nm。
29、进一步，三种组分保留时间由短到长依次为杂质l、杂质m、盐酸莫西沙星。
30、进一步，所述流动相a为ph为8.6、体积分数为0.2％的三乙胺溶液，所述流动相b为乙腈；所述色谱柱规格为4.6mm×150mm×5μm，所述流动相流速为1.2ml/min；所述色谱柱柱温为30℃；所述检测器检测波长293nm；
31、按如下洗脱程序进行线性梯度洗脱并得到色谱图：
32、0min，设置流动相a为和流动相b体积比为88：12；
33、5min，设置流动相a为和流动相b体积比为88：12；
34、15min，设置流动相a为和流动相b体积比为75：25；
35、25min，设置流动相a为和流动相b体积比为40：60；
36、30min，设置流动相a为和流动相b体积比为40：60；
37、31min，设置流动相a为和流动相b体积比为88：12；
38、37min，设置流动相a为和流动相b体积比为88：12。
39、进一步，保留时间在10.0±0.5min，判定为杂质l；保留时间在12.6±0.5min，判定为杂质m；保留时间为15.5±0.5min，判定为盐酸莫西沙星。
40、可根据保留时间对各组分进行定性。
41、进一步，以磷酸、无水亚硫酸钠和水的混合溶液为稀释剂配制待测样品。
42、进一步，配置标准品，得标准样品色谱图；测试样品所得色谱图，按外标法以峰面积进行含量计算。
43、所述标准品为已知组份含量，所述测试样品组份含量为未知。
44、所得的标准样品色谱图储存于数据库中，作为智慧药厂中质量控制的图谱素材，用于帮助机器人判定其生产的产品是否合格，对不合格的产品给出可定量的改进分析建议。
45、进一步，所述杂质l的检测限浓度为0.014％，定量限浓度为0.05％；所述杂质m的检测限浓度为0.013％，定量限浓度为0.04％
46、本发明的有益效果在于：
47、杂质l和杂质m为文献报道的降解杂质，制剂有研究的必要性；然而现有盐酸莫西沙星原料药及制剂中有关物质检测色谱条件均不适用于杂质l和杂质m的检测；本发明建立的分离和测定方法，流动相简便，方便配制，并且未加入离子对试剂，对高效液相色谱仪的损耗减少，实际应用更广泛。检测灵敏度也较高，满足对杂质l和杂质m的检测要求。
1.利用高效液相色谱法分离盐酸莫西沙星、杂质l和杂质m的方法，其特征在于，被分离的组分包括结构式如式ⅰ所示的盐酸莫西沙星、结构式如式ⅱ所示的杂质l和结构式如式ⅲ所示的杂质m；所述高效液相色谱法中，色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a为体积分数为0.2％的三乙胺溶液，所述流动相b为乙腈；通过梯度洗脱依次将杂质l、杂质m和盐酸莫西沙星进行分离；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，样品为盐酸莫西沙星片和/或盐酸莫西沙星注射液；所述盐酸莫西沙星片和所述盐酸莫西沙星注射液中包含杂质l、杂质m和盐酸莫西沙星。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，设置所述梯度洗脱程序如下：
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，用磷酸溶液调节流动相a的ph值为8.4-8.8。
5.同时检测盐酸莫西沙星片和/或盐酸莫西沙星注射液中盐酸莫西沙星、杂质l和杂质m的方法，其特征在于，采用权利要求1-4任一项所述方法将盐酸莫西沙星片和/或盐酸莫西沙星注射液中盐酸莫西沙星、杂质l和杂质m进行分离后，用检测器进行检测；所述检测器检测波长293nm。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，三种组分保留时间由短到长依次为杂质l、杂质m、盐酸莫西沙星。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述流动相a为ph为8.6、体积分数为0.2％的三乙胺溶液，所述流动相b为乙腈；所述色谱柱规格为4.6mm×150mm×5μm，所述流动相流速为1.2ml/min；所述色谱柱柱温为30℃；所述检测器检测波长293nm；
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，保留时间在10.0±0.5min，判定为杂质l；保留时间在12.6±0.5min，判定为杂质m；保留时间为15.5±0.5min，判定为盐酸莫西沙星。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，以磷酸、无水亚硫酸钠和水的混合溶液为稀释剂配制待测样品。
10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，配置标准品，得标准样品色谱图；测试样品所得色谱图，按外标法以峰面积进行含量计算。
