本发明涉及用于将核酸递送至淋巴管内皮细胞的脂质纳米颗粒和使用其将核酸递送至淋巴管内皮细胞的方法。
背景技术：
1、为了将核酸治疗实用化，需要有效且安全的核酸递送载体。病毒载体虽然是表达效率良好的核酸递送载体，但从安全性的观点出发，在实用上存在问题。因此，能够更安全地使用的非病毒核酸递送载体的开发正在进行，其中作为使用了离子性脂质的载体的脂质纳米颗粒是现在最常使用的非病毒核酸递送载体。
2、离子性脂质大致由胺部位和脂质部位构成，在酸性条件下质子化的胺部位与作为聚阴离子的核酸发生静电相互作用，形成脂质纳米颗粒，从而促进向细胞的摄取，将核酸向细胞内递送。
3、作为通常广泛使用的公知的离子性脂质，可举出1,2-二油酰基-3-二甲基铵丙烷(dodap)。已知的是，通过组合公知的离子性脂质与磷脂、胆固醇、peg脂质，可以形成脂质纳米颗粒，将核酸递送至细胞内(非专利文献1)。
4、专利文献1中对离子性脂质进行了描述，该离子性脂质具有将由一个或两个胺部位和一个脂质部位构成的化合物彼此用显示生物降解性的二硫键连接而成的结构。该文献中示出了该离子性脂质可以改善血中稳定性、肿瘤靶向性等体内动态，还可以通过改变胺部位周边的结构将作为脂质膜结构体的pka调整为有利于细胞内的内体脱出的值，进而还利用二硫键在细胞内被切断，从而具有使核酸从脂质膜结构体解离的效果。实际上，与公知的离子性脂质dodap相比，由于显示出高的核酸递送效率，因此可知该离子性脂质可改善核酸向细胞质内的递送效率的提高等细胞内动态。
5、专利文献2中示出了通过使用除了叔胺部位、二硫键之外还在脂质部位附近导入了芳环的离子性脂质，从而提高了与内体膜的融合能力，进而还提高了核酸向细胞质中的导入效率的脂质膜结构体。
6、已经开发了通过如上所述提高内体脱出效率、膜融合能力而改善了细胞内动态的离子性脂质，但是为了使由离子性脂质组成的脂质纳米颗粒作为核酸递送载体在体内发挥更实用的效果，需要靶向作为靶的器官、细胞的指向性。
7、二肉豆蔻酰甘油peg(dmg-peg)是广泛用于脂质纳米颗粒的peg脂质之一。将使用了其的脂质纳米颗粒给药于血中时，peg脂质在血中缓缓地从脂质纳米颗粒解离，存在于血中的载脂蛋白e(apoe)粘附至脂质纳米颗粒，由此在表达apoe的受体的肝脏中的聚集性提高(非专利文献2)。
8、作为赋予靶向肝脏以外的器官的指向性的实例，存在不使使用具有来自肉豆蔻酸的疏水性基团的dmg-peg而是使用具有来自硬脂酸的疏水性基团的二硬脂酰甘油peg(dsg-peg)作为peg脂质来提高向肿瘤的聚集性的实例(非专利文献3)。dsg-peg与dmg-peg相比在血中不易从脂质纳米颗粒解离，因此避免apoe在血中的粘附，已知在肝脏中的聚集，显示高的血中滞留性，结果在肿瘤中的聚集性提高。
9、如上所述，已知有多种改善了细胞内动态的脂质纳米颗粒、以及通过改变作为构成成分之一的peg脂质而控制静脉注射时的器官聚集性的脂质纳米颗粒。但是，能够成为创新药物靶点的器官、细胞的种类繁多，需要开发具有靶向各种器官、细胞的指向性的脂质纳米颗粒。
10、已知构成淋巴管的淋巴管内皮细胞参与淋巴的输送、免疫应答，可期待作为新的药物研发靶标，但还没有关于淋巴内的脂质纳米颗粒的动态的见解、以及以淋巴管内皮细胞作为靶标的脂质纳米颗粒的开发例。
11、现有技术文献
12、专利文献
13、专利文献1：us2014/0335157 a1
14、专利文献2：wo 2019/188867 a1
15、非专利文献
16、非专利文献1：biomaterials,29(24-25):3477-3496(2008)
17、非专利文献2：j.control.release,235:236-244(2016)
18、非专利文献3：j.control.release,200:97-105(2015)
技术实现思路
1、发明要解决的课题
2、本发明的课题在于提供能够有效地将核酸递送至淋巴管内皮细胞的脂质纳米颗粒，以及提供使用该脂质纳米颗粒将核酸递送至淋巴管内皮细胞的方法。
3、用于解决课题的手段
4、本发明人等鉴于上述课题进行了深入研究，结果发现，使用具有适于内体脱出的pka且在细胞内的还原性环境下特异性分解的离子性脂质、以及特定的比率的下式(2)所示的二肉豆蔻酰甘油peg制造的脂质纳米颗粒可以将核酸有效地递送至淋巴管内皮细胞。基于该见解的本发明如下所述。
5、[1]脂质纳米颗粒，其含有：
6、式(1)所示的离子性脂质、
7、胆固醇、和
8、式(2)所示的二肉豆蔻酰甘油peg；
9、[化1]
10、
11、式(1)中，
12、r1a和r1b各自独立地表示碳原子数1～6的亚烷基，
13、xa和xb各自独立地为碳原子数为1～6且叔氨基的数目为1的非环状的烷基叔氨基、或碳原子数为2～5且叔氨基的数目为1～2的环状的亚烷基叔氨基，
14、r2a和r2b各自独立地表示碳原子数8以下的亚烷基或氧二亚烷基，ya和yb各自独立地表示酯键、酰胺键、氨基甲酸酯键、醚键或脲键，
15、za和zb各自独立地表示衍生自碳原子数为3～16、具有至少一个芳环、且任选具有杂原子的芳香族化合物的2价基团，以及
16、r3a和r3b各自独立地表示来自具有羟基的脂溶性维生素与琥珀酸酐或戊二酸酐的反应物的残基、或来自具有羟基的甾醇衍生物与琥珀酸酐或戊二酸酐的反应物的残基、或碳原子数12～22的脂肪族烃基；
17、ch2(or6)-ch(or7)-ch2(or8)(2)
18、式(2)中，
19、r6、r7和r8的两个表示肉豆蔻酰基，剩余的一个表示经由数均分子量为1,000～3,000的聚乙二醇链连接的碳原子数1～6的烷基；
20、其中，式(2)所示的二肉豆蔻酰甘油peg的量相对于式(1)所示的离子性脂质和胆固醇的总计为3mol％以上，以及
21、该脂质纳米颗粒用于将核酸递送至淋巴管内皮细胞。
22、[2]根据前述[1]所述的脂质纳米颗粒，其中，构成脂质纳米颗粒的脂质包含式(1)所示的离子性脂质、胆固醇、和式(2)所示的二肉豆蔻酰甘油peg。
23、[3]根据前述[1]或[2]所述的脂质纳米颗粒，其中，式(1)所示的离子性脂质是下式所示的离子性脂质，
24、[化2]
25、
26、[4]将核酸递送至淋巴管内皮细胞的方法，其包括向对象皮下给药内封有核酸的前述[1]～[3]中任一项所述的脂质纳米颗粒。
27、发明效果
28、本发明的脂质纳米颗粒可以将核酸有效地递送至淋巴管内皮细胞。
1.脂质纳米颗粒，其含有：
2.根据权利要求1所述的脂质纳米颗粒，其中，构成脂质纳米颗粒的脂质包含式(1)所示的离子性脂质、胆固醇和式(2)所示的二肉豆蔻酰甘油peg。
3.根据权利要求1或2所述的脂质纳米颗粒，其中，式(1)所示的离子性脂质是下式所示的离子性脂质，
4.将核酸递送至淋巴管内皮细胞的方法，其包括向对象皮下给药内封有核酸的权利要求1～3中任一项所述的脂质纳米颗粒。
