本发明属于分析化学，具体涉及一种测定泊沙康唑注射液中z3g含量的lc-ms/ms法。
背景技术：
1、泊沙康唑是最新一代的三唑类抗真菌药物，结构式如式ⅰ所示。泊沙康唑是目前为止抗菌谱最广的抗真菌药，适应症为预防侵袭性曲霉菌和念珠菌感染。目前获批上市的泊沙康唑包括口服混悬液制剂、肠溶片制剂和注射剂型。
2、杂质z3g是泊沙康唑注射液制备过程中存在的一种高风险杂质，含有警示结构，该杂质结构式如式ⅱ所示。按照ich的控制要求，该杂质限度必须控制到2.5ppm以下，然而常规的液相色谱无法满足杂质z3g的灵敏度要求，不能将该杂质控制在规定的限度以内。与此同时，泊沙康唑注射液中含有大量环糊精，环糊精对杂质z3g有强烈的基质效应，严重干扰z3g的检测，并且研究发现，本领域技术人员无法通过调整液相条件来消除环糊精的基质效应。
3、
4、薛倩等人公开了一种lc-ms/ms法，可以实现泊沙康唑中z3g的分离和测定，然而该方法涉及的泊沙康唑主体为原料药，而非注射剂，原料药里面没有环糊精，所以不存在基质效应问题。现有的资料或专利中未查询到采用lc-ms/ms(三重四极杆质谱)检测泊沙康唑注射液中杂质z3g的方法，因此，亟需一种低检测限、高灵敏度的方法来实现泊沙康唑注射液中杂质z3g的分离和测定。
技术实现思路
1、本发明的目的之一在于提供一种利用lc-ms/ms法测定杂质z3g的含量的方法，所述方法可在30分钟内实现泊沙康唑注射液中杂质z3g的含量测定。
2、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
3、利用lc-ms/ms法测定杂质z3g的含量的方法，包括以下步骤：
4、(1)样品前处理：利用萃取剂处理样品，得待测样品；
5、(2)分离：步骤(1)所得待测样品采用十八烷基硅烷键合硅胶填充剂为固定相，以乙酸铵水溶液和甲酸的混合溶液为流动相a，甲醇为流动相b进行梯度洗脱，通过梯度洗脱依次将所述泊沙康唑和所述杂质z3g进行分离；
6、(3)定量测定：采用串联四极杆质谱检测器进行检测，得色谱图；
7、所述杂质z3g的结构式如式ⅱ所示；所述萃取剂为乙腈、n,n-二甲基乙酰胺和氨水的混合溶液；
8、
9、本专利经过多次溶剂筛选发现，n,n-二甲基乙酰胺再加上氨水，可以有效使环糊精沉淀分层，乙腈可以将z3g提出，达到分离的效果；并且本发明在试验过程中发现，样品溶液必须分两次加入，才能使回收率稳定性最佳。并且需要通过液相梯度条件分离z3g和泊沙康唑，排除泊沙康唑的干扰。
10、进一步，所述样品为泊沙康唑注射液，所述泊沙康唑注射液含有所述杂质z3g。
11、进一步，所述乙腈、所述n,n-二甲基乙酰胺和所述氨水的体积比为：600：400：0.5。
12、进一步，所述待测样品分2次进样。
13、进一步，所述梯度洗脱的程序为：
14、在0.01分钟，设置流动相a的体积分数为65％-75％，流动相b的体积分数为35％-25％；
15、在1分钟，设置流动相a的体积分数为65％-75％，流动相b的体积分数为35％-25％；
16、在13分钟，设置流动相a的体积分数为5％-15％，流动相b的体积分数为95％-85％；
17、在20分钟，设置流动相a的体积分数为5％-15％，流动相b的体积分数为95％-85％；
18、在20.1分钟，设置流动相a的体积分数为65％-75％，流动相b的体积分数为35％-25％％；
19、在30分钟，设置流动相a的体积分数为65％-75％，流动相b的体积分数为35％-25％％。
20、进一步，所述待测样品包括供试品溶液、对照品溶液、灵敏度溶液和/或加标溶液。
21、进一步，所述流动相a中，所述乙酸铵水溶液的浓度为10mm，所述甲酸的质量百分数为0.1％。
22、进一步，所述流动相流速为1.0ml/min；所述色谱柱柱温为30℃；进样器温度为25±3℃；进样体积为5μl。
23、进一步，质谱条件为：选用esi离子源，mrm正离子模式；雾化气为55psi，加热辅助气为55psi，门帘气为35psi，碰撞气为9psi，喷雾电压为5000v，离子源温度为550℃；驻留时间为100msce；质谱分辨率为resolution q1:unit，resolution q3:unit。
24、进一步，用质荷比547.3→135.1作为所述杂质z3g的检测离子对。
25、进一步，配制供试品溶液，检测得到供试品溶液色谱图；配制对照品溶液，检测得到对照品溶液色谱图；按外标法以峰面积计算所述杂质z3g的含量。
26、作为优选，所述流动相a为乙酸铵水溶液和甲酸的混合溶液，其中甲酸的质量百分数为0.1％；所述流动相b为甲醇；色谱柱规格为：4.6mm×250mm×5μm；流动相流速为1.0ml/min；色谱柱柱温为30℃；进样器温度为25±3℃；进样体积为5μl；按照如下程序进行线性梯度洗脱并得到色谱图：
27、在0.01分钟，设置流动相a的体积分数为70％，流动相b的体积分数为30％；
28、在1分钟，设置流动相a的体积分数为70％，流动相b的体积分数为30％；
29、在13分钟，设置流动相a的体积分数为10％，流动相b的体积分数为90％；
30、在20分钟，设置流动相a的体积分数为10％，流动相b的体积分数为90％；
31、在20.1分钟，设置流动相a的体积分数为70％，流动相b的体积分数为30％；
32、在30分钟，设置流动相a的体积分数为70％，流动相b的体积分数为30％。
33、进一步，保留时间在13.77±0.5min的为杂质z3g。
34、可以根据保留时间对杂质z3g进行定性。
35、进一步，所述杂质z3g在0.4465ng/ml～4.465ng/ml范围内，y＝88700x+220，r＝0.9994，其中y为y轴，代表峰面积，x为x轴，代表浓度，r为相关系数。
36、进一步，所述杂质z3g的检测限浓度为0.2233ng/ml，定量限浓度为0.4465ng/ml。
37、本发明的有益效果在于：
38、1.本发明采用乙腈、n,n-二甲基乙酰胺和氨水的混合溶液作溶剂，有效的解决了泊沙康唑注射液中的环糊精对杂质z3g的基质效应，n,n-二甲基乙酰胺加上氨水，可以有效使环糊精沉淀分层，乙腈将z3g提出，达到分离的效果。同时通过优化液相梯度条件分离杂质z3g和泊沙康唑，排除泊沙康唑的干扰，实现了泊沙康唑注射液杂质z3g的分离和测定；为使样品回收率和稳定性达到最佳，本发明中样品溶液采用分两次加入的方式进样，本发明的lc-ms/ms法灵敏度高、专属性强、重现性好。
1.利用lc-ms/ms法测定杂质z3g的含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样品为泊沙康唑注射液，所述泊沙康唑注射液含有所述杂质z3g。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乙腈、所述n,n-二甲基乙酰胺和所述氨水的体积比为：600：400：0.5。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序为：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，质谱条件为：选用esi离子源，mrm正离子模式；雾化气为55psi，加热辅助气为55psi，门帘气为35psi，碰撞气为9psi，喷雾电压为5000v，离子源温度为550℃；驻留时间为100msce；质谱分辨率为resolution q1:unit，resolution q3:unit。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，用质荷比547.3→135.1作为所述杂质z3g的检测离子对。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，配制供试品溶液，检测得到供试品溶液色谱图；配制对照品溶液，检测得到对照品溶液色谱图；按外标法以峰面积计算所述杂质z3g的含量。
8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述流动相a为乙酸铵水溶液和甲酸的混合溶液，其中甲酸的质量百分数为0.1％；所述流动相b为甲醇；色谱柱规格为：4.6mm×250mm×5μm；流动相流速为1.0ml/min；色谱柱柱温为30℃；进样器温度为25±3℃；进样体积为5μl；按照如下程序进行线性梯度洗脱并得到色谱图：
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，保留时间在13.77±0.5min的为杂质z3g。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述杂质z3g在0.4465ng/ml～4.465ng/ml范围内，y＝88700x+220，r＝0.9994，其中y为y轴，代表峰面积，x为x轴，代表浓度，r为相关系数。
