本发明属于生物医药，具体涉及一种检测glp—1 、glp—1 类似物或glp—1 融合蛋白生物学活性的方法。
背景技术：
1、胰高血糖素样肽-1 （glp—1）为人体内的一种肠源性多肽类激素，其特异性地作用于胰岛细胞的glp—1受体，引发glp—1r介导的信号通路级联反应，从而以葡萄糖浓度依赖性的方式刺激胰岛素分泌，发挥降糖功能。为克服天然glp—1体内半衰期短的缺陷，已有众多的glp—1类似物或glp—1融合蛋白降糖药上市，以满足全球特别是国内日益增多的糖尿病患者的临床应用。
2、目前广泛采用荧光素酶报告基因法来测定glp—1、glp—1类似物或glp—1融合蛋白的生物学活性。其测定原理在于，glp—1、glp—1类似物或glp—1融合蛋白与细胞膜上glp—1受体相互作用，激活细胞内腺苷酸环化酶，导致胞内camp水平升高，进而激活细胞的荧光素酶信号通路，当加入荧光素酶检测底物时，可检测到荧光信号。通过酶标仪测定rlu值（relative light unit，相对光单位），利用软件分析实验数据，绘制剂量反应曲线，根据ec50值可计算出对应的glp—1、glp—1类似物或glp—1融合蛋白的生物学活性。
3、但是既有的荧光素酶报告基因测定法试验周期长，物料消耗多，样品用量大，致使实验费时费料。例如，专利文献cn115703766a实施例13公开了典型的金斯瑞（genscript）荧光素酶报告基因测定方法， hek293/cre-luc/glp1r细胞种板后需过夜孵育，使用的是10% fbs完全培养基。此外，根据genscript相应产品说明书（cat. no. m00562）提供的拟合曲线，推测glp—1(1-37)样品的作用浓度为1.0e-12 ~ 1.0e-6 m。
4、因此本领域亟需开发更为经济高效的方法，以节约时间成本，节省物料，和/或减少样品用量。
技术实现思路
1、本发明为了解决上述问题，提供了一种改进的检测glp—1、glp—1类似物或glp—1融合蛋白的生物学活性方法。将10% fbs完全培养基改为2% fbs分析培养基，同时将细胞种板后孵育过夜缩短为1小时。
2、通过大量的实验发现，改进后的方法能够稳定准确地得到glp—1、glp—1类似物或glp—1融合蛋白剂量效应曲线，方法专属性、相对准确度、中间精密度、耐用性良好。
3、因此，本发明提供了一种检测glp—1、glp—1类似物或glp—1融合蛋白生物学活性的方法，所述方法是基于hek293/cre-luc/glp1r细胞的荧光素酶报告基因测定法，包括用2% fbs分析培养基稀释所述细胞，种板，孵育1小时后，加入待测样品进行活性检测。
4、在一方面，本发明的方法还包括用2% fbs分析培养基来配制所述glp—1、glp—1类似物或glp—1融合蛋白的样品溶液。
5、在一方面，本发明的方法用荧光素酶检测试剂，例如市售荧光素酶报告基因检测试剂例如bio-litetmluciferase assay system、fire-lumi™ assay system或bright-glotmluciferase assay system试剂，通过酶标仪检测glp—1、glp—1类似物或glp—1融合蛋白刺激后化学发光信号rlu值。
6、在一方面，本发明方法的数据分析软件可以利用graphpad prism或其他适宜数据分析软件。
7、在一方面，本发明方法的2% fbs分析培养基是添加2% fbs的dmem培养基。
8、在一方面，本发明方法中的细胞稀释浓度为8×105cells/ml。
9、本发明的方法可用于分析glp—1、glp—1类似物或glp—1融合蛋白（例如glp—1/抗体融合蛋白、glp—1/fc融合蛋白）的活性。优选所述glp—1类似物或glp—1融合蛋白包括利拉鲁肽、司美格鲁肽、杜拉鲁肽、利司那肽、阿必鲁肽、贝那鲁肽、他司鲁肽、苏帕鲁肽、艾塞那肽、替尔泊肽以及cpx101产品。
10、优选所述glp—1类似物为利拉鲁肽。优选利拉鲁肽样品作用浓度范围为2.7e-14~ 1.6e-9 m。
11、优选所述glp—1类似物为司美格鲁肽。优选司美格鲁肽样品作用浓度范围为1.9e-14 ~ 1.9e-8 m。
12、本发明的有益效果在于，与现有技术例如通用的金斯瑞检测方法相比，节省物料fbs的同时，大大缩短试验周期，且所需样品作用浓度更低，范围约1.0e-14 ~ 1.0e-8 m。
1. 一种检测glp—1、glp—1类似物或glp—1融合蛋白生物学活性的方法，其特征在于，所述方法是基于hek293/cre-luc/glp1r细胞的荧光素酶报告基因测定法，包括用2%fbs分析培养基稀释所述细胞，种板，孵育1小时后，加入待测样品进行活性检测。
2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括用2% fbs分析培养基来配制所述glp—1、glp—1类似物或glp—1融合蛋白的样品溶液。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括使用荧光素酶检测试剂通过酶标仪检测glp—1、glp—1类似物或glp—1融合蛋白刺激后化学发光信号rlu值。
4. 如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述2% fbs分析培养基是添加2% fbs的dmem培养基。
5. 如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述细胞稀释浓度为8×105 cells/ml。
6.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述glp—1类似物或glp—1融合蛋白为利拉鲁肽、司美格鲁肽、杜拉鲁肽、利司那肽、阿必鲁肽、贝那鲁肽、他司鲁肽、苏帕鲁肽、艾塞那肽、或替尔泊肽。
7.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述glp—1类似物为利拉鲁肽。
8. 如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述利拉鲁肽样品作用浓度范围为2.7e-14~ 1.6e-9 m。
9.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述glp—1类似物为司美格鲁肽。
10. 如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述司美格鲁肽样品作用浓度范围为1.9e-14 ~ 1.9e-8 m。
