本发明属于水产动物人工养殖领域，涉及一种裂腹鱼的繁殖方法，尤其涉及一种异齿裂腹鱼的人工繁殖方法。
背景技术：
1、异齿裂腹鱼为高原冷水性鱼类，分布于雅鲁藏布江中上游干支流及附属水体中，为我国的特有种，多在水质清晰、砾石底质的河道处活动。主要以着生藻类为食，食物中偶见底栖无脊椎动物。异齿裂腹鱼食物组成中以着生藻类为食，刮食过程中摄入大量有机碎屑和少量的水蚯蚓等无脊椎动物。目前，由于河流筑坝和过度捕捞，裂腹鱼类的野生资源已经呈逐年下降的趋势。人工养殖亲鱼的培育是异齿裂腹鱼野外资源恢复的有效手段之一，人工养殖培育亲鱼后进行人工繁殖，然后把繁殖的鱼苗进行放流可以有效促进异齿裂腹鱼野生资源的恢复。
技术实现思路
1、为了解决背景技术中存在的上述技术问题，本发明提供了一种能够提高异齿裂腹鱼人工繁殖成功率以及可有效提高鱼苗成活率的异齿裂腹鱼的人工繁殖方法。
2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
3、一种用于鉴定异齿裂腹鱼的微卫星引物组，其特征在于：所述用于鉴定异齿裂腹鱼的微卫星引物组包括5组双重pcr体系引物组合，每组双重pcr体系引物组合中包括2对微卫星引物，所述用于鉴定异齿裂腹鱼的微卫星引物组的序列信息及组合方式分别是：
4、
5、
6、作为优选，本发明所提供的用于鉴定异齿裂腹鱼的微卫星引物组中微卫星引物对yclfy1和微卫星引物对yclfy2配合使用；微卫星引物对yclfy3和微卫星引物对yclfy4配合使用；微卫星引物对yclfy5和微卫星引物对yclfy6配合使用；微卫星引物对yclfy7和微卫星引物对yclfy8配合使用；微卫星引物对yclfy9和微卫星引物对yclfy10配合使用。
7、根据如前所述的用于鉴定异齿裂腹鱼的微卫星引物组在鉴定异齿裂腹鱼时的应用，尤其是在鉴定异齿裂腹鱼亲缘关系时的应用。
8、一种异齿裂腹鱼的人工繁殖方法，其特征在于：所述异齿裂腹鱼的人工繁殖方法包括以下步骤：
9、1)获得性腺发育成熟的异齿裂腹鱼；
10、2)基于用于鉴定异齿裂腹鱼的微卫星引物组对步骤1)所筛选得到的异齿裂腹鱼进行亲缘关系鉴定；
11、3)基于步骤2)获取得到的亲缘关系将步骤1)所筛选得到的异齿裂腹鱼配对后进行分池饲养；
12、4)对同一饲养池内的雌性异齿裂腹鱼以及雄性异齿裂腹鱼进行人工催产及受精，获得受精卵；
13、5)将步骤4)获取得到的受精卵在流水中进行鱼苗孵化；
14、6)将孵化后的鱼苗放入流水中进行鱼苗培育。
15、作为优选，本发明所采用的步骤2)的具体实现方式是：
16、2.1)提取步骤1)中所有异齿裂腹鱼的dna；
17、2.2)以步骤2.1)获取得到的dna为模板，以用于鉴定异齿裂腹鱼的微卫星引物组中的微卫星引物对为引物，进行pcr扩增并得到扩增产物；
18、2.3)将步骤2.2)得到的扩增产物进行聚丙烯凝胶电泳；
19、2.4)根据电泳结果绘制聚类发育树；
20、2.5)根据聚类发育树的不同分支判定异齿裂腹鱼的亲缘关系。
21、作为优选，本发明所采用的步骤2.2)中pcr扩增的反应体系为25ul，其中：0.5u/ulmix酶12.5ul、两对引物的上下游引物各1ul，dna模板2ul，超纯水6.5ul；所述pcr扩增反应程序为：94℃预变性3分钟；然后94℃变性30秒，58℃退火30秒，72℃延伸45秒，共35个循环；最后72℃延伸10分钟，4℃保存。
22、作为优选，本发明所采用的步骤1)的具体实现方式是：
23、1.1)获取异齿裂腹鱼；
24、1.2)人为判断步骤1.1)获取异齿裂腹鱼的性腺发育程度；人为判定的方式是采用b超技术和腹部柔软度方法；
25、1.3)挑选性腺发育成熟的异齿裂腹鱼。
26、作为优选，本发明所采用的步骤3)的具体实现方式是：
27、3.1)选择无亲缘关系或亲缘关系较远的异齿裂腹鱼；
28、3.2)将步骤3.1)获取得到的异齿裂腹鱼进行配对；
29、3.3)将配对成功的异齿裂腹鱼进行分池饲养，所述同一饲养池内的雌性异齿裂腹鱼的数量与雄性异齿裂腹鱼的数量之比是1：1。
30、作为优选，本发明所采用的步骤4)中人工催产的方式是采用注射催产激素法对雌性异齿裂腹鱼以及雄性异齿裂腹鱼进行注射dom和lhrh-a2催产；
31、所述步骤4)中受精的方式是对雌性异齿裂腹鱼以及雄性异齿裂腹鱼进行同步催产，采用干式受精法进行受精；
32、优选地，所述步骤5)中流水的环境是水中溶氧量大于6mg/l，孵化温度为7-10℃；
33、优选地，所述步骤6)中鱼苗培育的具体实现方式是：将刚孵化的鱼苗放入流水中，流水中的溶氧量大于6mg/l，水温为7-10℃，待卵黄囊消失后开始投喂红丝虫和丰年虫，每天采用饱食投喂法。
34、与现有技术相比，本发明具有以下的优点：
35、本发明提供了一种异齿裂腹鱼的人工繁殖方法，包括：1)获得性腺发育成熟的异齿裂腹鱼；2)基于用于鉴定异齿裂腹鱼的微卫星引物组对筛选得到的异齿裂腹鱼进行亲缘关系鉴定；3)基于亲缘关系将筛选得到的异齿裂腹鱼配对后进行分池饲养；4)对同一饲养池内的雌性异齿裂腹鱼以及雄性异齿裂腹鱼进行人工催产及受精，获得受精卵；5)将受精卵在流水中进行鱼苗孵化；6)将孵化后的鱼苗放入流水中进行鱼苗培育。本方法能够成功实现异齿裂腹鱼人工繁殖，能够异齿裂腹鱼的保护提供技术支撑；同时，利用发明所提供的人工繁殖方法进行繁殖异齿裂腹鱼时，能够有效避免近亲繁殖，比传统方法能够节省一半费用，不仅提高了异齿裂腹鱼的人工繁殖成功率，还提高了鱼苗的成活率，可以直接应用于异齿裂腹鱼的保护中，具有巨大的应用价值及极大推广价值。
1.一种用于鉴定异齿裂腹鱼的微卫星引物组，其特征在于：所述用于鉴定异齿裂腹鱼的微卫星引物组包括5组双重pcr体系引物组合，每组双重pcr体系引物组合中包括2对微卫星引物，所述用于鉴定异齿裂腹鱼的微卫星引物组的序列信息及组合方式分别是：
2.根据权利要求1所述的用于鉴定异齿裂腹鱼的微卫星引物组，其特征在于：所述用于鉴定异齿裂腹鱼的微卫星引物组中微卫星引物对yclfy1和微卫星引物对yclfy2配合使用；微卫星引物对yclfy3和微卫星引物对yclfy4配合使用；微卫星引物对yclfy5和微卫星引物对yclfy6配合使用；微卫星引物对yclfy7和微卫星引物对yclfy8配合使用；微卫星引物对yclfy9和微卫星引物对yclfy10配合使用。
3.根据权利要求1或2所述的用于鉴定异齿裂腹鱼的微卫星引物组在鉴定异齿裂腹鱼时的应用。
4.根据权利要求1或2所述的用于鉴定异齿裂腹鱼的微卫星引物组在鉴定异齿裂腹鱼亲缘关系时的应用。
5.一种异齿裂腹鱼的人工繁殖方法，其特征在于：所述异齿裂腹鱼的人工繁殖方法包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的异齿裂腹鱼的人工繁殖方法，其特征在于：所述步骤2)的具体实现方式是：
7.根据权利要求6所述的异齿裂腹鱼的人工繁殖方法，其特征在于：所述步骤2.2)中pcr扩增的反应体系为25ul，其中：0.5u/ul mix酶12.5ul、两对引物的上下游引物各1ul，dna模板2ul，超纯水6.5ul；所述pcr扩增反应程序为：94℃预变性3分钟；然后94℃变性30秒，58℃退火30秒，72℃延伸45秒，共35个循环；最后72℃延伸10分钟，4℃保存。
8.根据权利要求5或6或7所述的异齿裂腹鱼的人工繁殖方法，其特征在于：所述步骤1)的具体实现方式是：
9.根据权利要求8所述的异齿裂腹鱼的人工繁殖方法，其特征在于：所述步骤3)的具体实现方式是：
10.根据权利要求9所述的异齿裂腹鱼的人工繁殖方法，其特征在于：所述步骤4)中人工催产的方式是采用注射催产激素法对雌性异齿裂腹鱼以及雄性异齿裂腹鱼均注射dom和lhrh-a2进行催产；
