本发明实施例涉及检测分析，具体涉及一种差巴嘎蒿hplc指纹图谱建立方法及应用。
背景技术：
1、差巴嘎蒿(artemisia halodendron)为菊科(compositae)蒿属(artemisia)半灌木植物，主要分布在呼伦贝尔沙地和科尔沁沙地的流动和半固定沙丘上，是科尔沁沙地半灌木群落的主要建群种和沙地草场退化过程的重要缓冲种。该植物地上部分入蒙药，在《中国沙漠地区药用植物》、《全国中草药汇编》、《中国中药资源志要》、《中国植物志》、《内蒙古植物药志》中均有记载，其味苦，性凉，具有杀虫、止痛、燥“希日乌素”、解痉、消肿等多种功效，用于治疗脑刺痛、痧症、痘疹、虫牙、“发症”、结喉、皮肤瘙痒、疥等病症。差巴嘎蒿含有黄酮类、酚类化合物、香豆素类、萜类等多种化学成分，具有杀虫抑菌、止咳平喘、保肝等作用。
2、指纹图谱能较全面地反映药物的化学成分种类及含量，可以在整体上对药物的质量进行描述和评价。其中，高效液相色谱(high performance liquid chromatographic，hplc)因其灵敏度高、稳定性好、分析速度快等特点而被广泛应用。目前尚未见到差巴嘎蒿地上部分的hplc指纹图谱的相关研究报道。
技术实现思路
1、为此，本发明实施例提供一种差巴嘎蒿hplc指纹图谱建立方法及应用，本发明所建立差巴嘎蒿地上部分hplc指纹图谱分析方法简单，重现性较好，可对差巴嘎蒿质量进行综合评价，为其质量控制及开发研究提供参考。
2、为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：
3、根据本发明实施例的第一方面，本发明实施例提供一种差巴嘎蒿hplc指纹图谱建立方法，所述方法包括如下步骤：
4、(1)供试品溶液和对照品溶液的制备：差巴嘎蒿药材粉碎过筛后进行回流醇提，除去溶剂，得到差巴嘎蒿提取物，加甲醇定容至刻度，超声溶解，滤过，得到供试品溶液；分别取圣草酚-7-甲醚、异樱花素对照品，用甲醇定容至刻度，得到对照品溶液；
5、(2)采用高效液相色谱对供试品溶液和标准品溶液进行检测，色谱条件为：色谱柱：wondasil c18，250mm×4.6mm，5μm；检测波长：288nm；进样量：10μl；柱温：30℃；流速：0.8ml·min-1；流动相b：甲醇，流动相d：0.2％甲酸水，洗脱方式为梯度洗脱：0～25min 22％～31％b；25～30min31％～40％b；30～40min 40％b；40～60min 40％～42％b；60～70min42％～60％b；70～90min 60％～62％b；90～110min 62％～61％b；110～120min 61％～60％b；保留时间：120min；
6、(3)记录不同产地及采收期差巴嘎蒿供试品溶液的hplc色谱图，并将各hplc色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，以中位数法建立hplc指纹图谱，生成包含共有峰的对照特征图谱。
7、进一步地，所述回流醇提的条件为：乙醇体积分数为90％，提取时间为2h，提取次数为3次，固液比为1：10。
8、进一步地，所述供试品溶液的制备包括如下步骤：
9、将差巴嘎蒿药材粉碎，过30目筛，取50.0g置于1000.0ml圆底烧瓶中，进行回流醇提，合并提取液，旋转蒸发仪浓缩至稠膏状后，在水浴锅上挥干，得到差巴嘎蒿提取物，精密称取20.0mg，置于10.0ml的容量瓶中，用甲醇定容至刻度，超声溶解得到2.0mg·ml-1的溶液，再用有机系0.22μm微孔滤头过滤，即得供试品溶液。
10、进一步地，所述对照品溶液的制备包括如下步骤：
11、分别取圣草酚-7-甲醚、异樱花素对照品1.0mg，置于10.0ml的容量瓶，用甲醇溶解至容量瓶刻度，得到浓度为0.1mg·ml-1的标准品溶液。
12、进一步地，所述对照特征图谱包含12个共有峰，其中圣草酚-7-甲醚为10号峰，异樱花素为12号峰。
13、根据本发明实施例的第二方面，本发明提供如上任一项所述的差巴嘎蒿hplc指纹图谱建立方法在差巴嘎蒿质量评价中的应用。
14、根据本发明实施例的第三方面，本发明提供一种差巴嘎蒿质量评价方法，所述方法包括如下步骤：
15、(1)将待测样品按照如上任一项的供试品溶液的制备，制成待测供试品溶液；
16、(2)将所述待测供试品溶液按照如上任一项的色谱条件进行检测，得到待测供试品溶液的hplc色谱图；
17、(3)将所述hplc色谱图与由如上任一项所述方法建立的差巴嘎蒿hplc指纹图谱进行比较，进行相似度评价。
18、进一步地，结合化学模式识别对差巴嘎蒿质量进行评价。
19、进一步地，所述化学模式识别包括聚类分析、主成分分析和正交偏最小二乘法-判别分析。
20、本发明实施例具有如下优点：
21、本发明通过采集33批次不同产地及采收期差巴嘎蒿(artemisia halodendron)，基于高效液相色谱(hplc)方法建立了差巴嘎蒿地上部分的指纹图谱，共匹配出12个共有峰，并指认出其中2个峰为圣草酚-7-甲醚和异樱花素2种指标性成分，进一步地，采用聚类分析、主成分分析(pca)和正交偏最小二乘法判别分析(opls-da)等化学识别模式筛选出6个影响差巴嘎蒿质量的潜在标记物，可应用于评价不同时期和采收期差巴嘎蒿质量。
22、本发明所建立差巴嘎蒿地上部分hplc指纹图谱分析方法简单，重现性较好，可对差巴嘎蒿质量进行综合评价，为其质量控制及开发研究提供参考。
1.一种差巴嘎蒿hplc指纹图谱建立方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的差巴嘎蒿hplc指纹图谱建立方法，其特征在于，所述回流醇提的条件为：乙醇体积分数为90％，提取时间为2h，提取次数为3次，固液比为1：10。
3.根据权利要求2所述的差巴嘎蒿hplc指纹图谱建立方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备包括如下步骤：
4.根据权利要求1所述的差巴嘎蒿hplc指纹图谱建立方法，其特征在于，所述对照品溶液的制备包括如下步骤：
5.根据权利要求1所述的差巴嘎蒿hplc指纹图谱建立方法，其特征在于，所述对照特征图谱包含12个共有峰，其中圣草酚-7-甲醚为10号峰，异樱花素为12号峰。
6.权利要求1-5中任一项所述的差巴嘎蒿hplc指纹图谱建立方法在差巴嘎蒿质量评价中的应用。
7.一种差巴嘎蒿质量评价方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
8.根据权利要求7所述的差巴嘎蒿质量评价方法，其特征在于，结合化学模式识别对差巴嘎蒿质量进行评价。
9.根据权利要求8所述的差巴嘎蒿质量评价方法，其特征在于，所述化学模式识别包括聚类分析、主成分分析和正交偏最小二乘法-判别分析。
