本发明涉及蛋白多肽，特别涉及一种烟叶蛋白多肽的制备方法、一种益生菌烟叶蛋白多肽的制备方法、烟叶蛋白多肽的应用及益生菌烟叶蛋白多肽的应用。
背景技术：
1、蛋白多肽是一类由氨基酸组成的生物活性分子，具有广泛的生物功能和潜在的应用前景。烟草作为一种重要的经济作物，其蛋白质含量丰富，是目前研究的植物蛋白含量最高的作物之一，且易于提取，在食品、医药等领域有广泛的应用。然而，目前对于烟叶蛋白的利用主要集中在蛋白的直接利用上面，在烟叶蛋白多肽领域的应用研究相对较少，目前还没有烟叶蛋白多肽制备相关现有技术。公开号为cn 106117331 a的专利公开了一种从烟草下脚料中提取烟叶蛋白的方法，步骤为：称取烟草下脚料，清洗；按一定料液比加入缓冲液和提取液，混合后均匀研磨成浆液；将得到的浆液进行浆液压榨、滤膜过滤和离心机离心，加入液氮研磨充分，按一定料液比加入缓冲液，混合后均匀研磨成浆液；取浆液沉淀物，加入洗涤液充分混合、冷置、离心，进行浓缩并干燥后得到烟叶蛋白粉末，加入一定量的丙酮溶液和乙醇溶液，离心、振荡分离后加入酚/sds溶液，低温冷冻干燥，置于-80℃保存或直接进行蛋白电泳。该烟叶蛋白提取方法虽然能有效提取烟草下脚料中的蛋白，但方法较为复杂，例如采用液氮研磨等步骤，在工业生产的应用受到了极大的限制。且该法制得的仅为烟叶蛋白，与蛋白多肽相比，蛋白多肽具有吸收利用率高、生物活性强、口感及稳定性优异等特点，因此，研究烟叶蛋白多肽的制备方法是极为必要的。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明的目的是提供一种烟叶蛋白多肽的制备方法、一种益生菌烟叶蛋白多肽的制备方法、烟叶蛋白多肽的应用及益生菌烟叶蛋白多肽的应用。
2、本发明的目的之一是通过以下技术方案实现的：
3、烟叶蛋白多肽的制备方法，包括如下步骤：
4、s1.1种子培养基的配置：按比例1:0.5:1：200取胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠和水配置成种子培养基；
5、发酵培养基的配置：按比例1：0.5:1：200取烟叶蛋白、葡萄糖、氯化钠和水配置成发酵培养基；
6、s1.2对种子培养基和发酵培养基进行灭菌；
7、s1.3制备种子液：按比例1：20将益生菌菌种接种到灭菌后的种子培养基中30-40℃培养10-14小时制得种子液；
8、s1.4接种种子液：按比例1：5-20将种子液接种到灭菌后的发酵培养基中；
9、s1.5生物发酵：将接种后的发酵培养基置于30-40℃的恒温摇床中发酵36-60小时；
10、s1.6制备烟叶蛋白多肽：将发酵后的发酵液进行离心，取上清溶液，采用超滤膜进行超滤，取滤液冷冻干燥、粉碎、过筛网得烟叶蛋白多肽。
11、进一步，所述步骤s1.1中烟叶蛋白的制备方法包括如下步骤：
12、s3.1取新鲜烟叶，清洗干净，去除叶脉，按比例1：1加水，匀浆8-12分钟得匀浆液；
13、s3.2向匀浆液中加提取液使料液比为1：10，采用超声清洗机在35-55℃恒温条件下超声提取25-35分钟得提取溶液，所述提取液为pbs缓冲溶液，其ph为7.0-9.0，浓度为0.05mol/l；
14、s3.3将提取溶液进行离心处理获得上清溶液；
15、s3.4将上清溶液进行加热沉淀处理获得蛋白溶液；
16、s3.5将蛋白溶液进行离心处理获得沉淀烟叶粗蛋白；
17、s3.6按比例1：5向沉淀烟叶粗蛋白中加乙醇清洗后离心取沉淀蛋白，反复多次，将沉淀蛋白烘干、粉碎、过筛网得烟叶蛋白。
18、进一步，所述益生菌为鼠李糖乳杆菌、发酵乳杆菌或保加利亚发酵乳杆菌。
19、进一步，所述步骤s1.4中比例为1:10。
20、进一步，所述步骤s1.5中将接种后的发酵培养基置于37℃、150转/分钟的恒温摇床中发酵48小时。
21、进一步，所述步骤s3.2中比例为1:10，恒温温度为40℃，ph为8.0。
22、本发明的目的之二是通过以下技术方案实现的：
23、烟叶蛋白多肽的应用，上述烟叶蛋白多肽用作食品、保健品或饲料的添加剂。
24、本发明的目的之三是通过以下技术方案实现的：
25、益生菌烟叶蛋白多肽的制备方法，包括如下步骤：
26、s2.1种子培养基的配置：按比例1:0.5:1：200取胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠和水配置成种子培养基；
27、发酵培养基的配置：按比例1：0.5:1：200取烟叶蛋白、葡萄糖、氯化钠和水配置成发酵培养基；
28、s2.2对种子培养基和发酵培养基进行灭菌；
29、s2.3制备种子液：按比例1：20将益生菌菌种接种到灭菌后的种子培养基中30-40℃培养10-14小时制得种子液；
30、s2.4接种种子液：按比例1：5-20将种子液接种到灭菌后的发酵培养基中；
31、s2.5生物发酵：将接种后的发酵培养基置于30-40℃、140-160转/分钟的恒温摇床中发酵36-60小时；
32、s2.6制备益生菌烟叶蛋白多肽：将发酵后的发酵液进行冷冻干燥、粉碎、过筛网得益生菌烟叶蛋白多肽。
33、进一步，所述益生菌为鼠李糖乳杆菌、发酵乳杆菌或保加利亚发酵乳杆菌。
34、本发明的目的之四是通过以下技术方案实现的：
35、益生菌烟叶蛋白多肽的应用，上述制备的益生菌烟叶蛋白多肽用作食品、保健品或饲料的添加剂。
36、本发明的有益效果是：
37、本发明的烟叶蛋白多肽和益生菌烟叶蛋白多肽的制备方法，采用益生菌对烟叶蛋白进行生物发酵，并对发酵条件进行了优化，使得烟叶蛋白多肽和益生菌烟叶蛋白多肽制备成本低，获取率高可达50％左右(获取率＝烟叶蛋白多肽质量/烟叶蛋白质量*100％)，在制备过程中48小时烟叶蛋白水解可达50％以上；该方法采用益生菌对烟叶蛋白进行发酵制备烟叶蛋白多肽或益生菌烟叶蛋白多肽，解决了烟叶蛋白苦涩异味的问题，且制备的烟叶蛋白多肽或益生菌烟叶蛋白多肽具有较好的抗氧化性。
38、本发明采用超声碱提+加热沉淀+乙醇清洗的提取方法提取烟叶蛋白，该方法简单、高效，提取的烟叶蛋白色泽均一，成浅绿色，烟叶蛋白的获取率(获取率＝烟叶蛋白质量/新鲜烟叶质量*100％)为4.37％。
39、本发明的其他优点、目标和特征在某种程度上将在随后的说明书中进行阐述，并且在某种程度上，基于对下文的考察研究对本领域技术人员而言将是显而易见的，或者可以从本发明的实践中得到教导。本发明的目标和其他优点可以通过下面的说明书和权利要求书来实现和获得。
1.烟叶蛋白多肽的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的烟叶蛋白多肽的制备方法，其特征在于：所述步骤s1.1中烟叶蛋白的制备方法，包括如下步骤：
3.根据权利要求1所述的烟叶蛋白多肽的制备方法，其特征在于：所述益生菌为鼠李糖乳杆菌、发酵乳杆菌或保加利亚发酵乳杆菌。
4.根据权利要求1所述的烟叶蛋白多肽的制备方法，其特征在于：所述步骤s1.4中比例为1:10。
5.根据权利要求1所述的烟叶蛋白多肽的制备方法，其特征在于：所述步骤s1.5中将接种后的发酵培养基置于37℃、150转/分钟的恒温摇床中发酵48小时。
6.根据权利要求2所述的烟叶蛋白多肽的制备方法，其特征在于：所述步骤s3.2中比例为1:10，恒温温度为40℃，ph为8.0。
7.烟叶蛋白多肽的应用，其特征在于：权利要求1-6任一制备的烟叶蛋白多肽用作食品、保健品或饲料的添加剂。
8.益生菌烟叶蛋白多肽的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
9.根据权利要求8所述的益生菌烟叶蛋白多肽的制备方法，其特征在于：所述益生菌为鼠李糖乳杆菌、发酵乳杆菌或保加利亚发酵乳杆菌。
10.益生菌烟叶蛋白多肽的应用，其特征在于：权利要求8或9制备的益生菌烟叶蛋白多肽用作食品、保健品或饲料的添加剂。
