本发明属于农业生物技术应用领域，具体涉及一种多叶片数和高生物量的烟草株系的创制方法。
背景技术：
1、烟草是生物技术应用的模式植物，被广泛应用于有关病毒和转基因的研究；烟草叶片是生物反应器中重要的植物底盘，目前广泛应用于生产重组抗体、疫苗等重要的药用蛋白。此外，烟草的种子油含量高，无烟碱，饱和脂肪酸含量少，在替代食用油方面有潜在利用价值，还可以经过酯交换生产可再生生物燃料。因而，创制多叶片数、高生物量以及高种子产量的烟草株系，对合成生物学以及烟油利用具有重要的价值。
2、分枝在构成株型方面具有重要作用，其本身也有很高的观赏价值。在生产实践中，人们发现粮食作物的分枝、分蘖的多少会影响其结实率进而影响粮食产量。对于大豆、花生等豆科植物，有效分枝数目决定着作物荚果的数量；对于水稻、小麦等禾本科作物，有效分蘖数目决定作物穗数。所以，提高有效分枝的数目，可提高作物的产量。在玉米的栽培过程中发现其分枝越少，玉米产量越高，因而可以通过减少其分枝数达到增产的目的。分枝虽然受环境的影响，但主要还是由遗传物质决定。目前，在植物分枝分子方面的研究中，已在拟南芥、水稻、番茄、烟草等植物中发现了与分枝有关的基因并进行相关报道，这说明参与分枝的基因数量众多。
3、但是，目前还没有同时提升烟草生物量和种子产量的方法。本发明利用改变烟草株型调控基因，进一步影响烟草株型，从而获得多叶片、高生物量和高种子油含量的方法。
4、在本研究中，ntmbd1基因调节腋芽生长和分枝的数目，这使它成为作物遗传改良的宝贵基因。该基因不太适应于水稻、玉米、谷子等禾本科植物，因为分蘖过多会导致影响产量降低；然而，对于一些饲料作物，如紫花苜蓿、青贮玉米、甜高粱等，分枝越多，生物产量越高。因此，可以通过降低这些作物中mbd1同源基因及其表达，从而促进分枝的生长，进而提高生物产量。基于此，提出本发明。
技术实现思路
1、本发明的目的在于解决现有技术中存在的上述问题，提出了一种多叶片数和高生物量的烟草株系的创制方法，通过改变烟草株型调控基因，进一步影响烟草株型，或者通过采用crispr/cas9技术创制编辑材料的方法，实现了获得多叶片、高生物量和高种子油含量的烟草株系。
2、本发明的技术方案是：
3、本发明提供一种烟草mbd1突变体，所述突变体的氨基酸序列如seq id no.3所示。
4、进一步的，所述突变体是在seq id no.2的基础上，将第275位的色氨酸突变为终止密码子后得到。
5、本发明提供了一种多叶片数和高生物量的烟草株系的创制方法，所述方法通过以下任一种方式实现：
6、(1)创制并筛选烟草mbd1突变体；
7、(2)通过crispr/cas9创制编辑材料。
8、进一步的，所述方式(1)包括以下步骤：
9、在核苷酸序列seq id no.1的基础上，将cds第824位的鸟嘌呤突变为腺嘌呤，使其编码的蛋白在氨基酸序列中第275位的色氨酸突变为终止密码子，编码蛋白发生突变得到如seq id no.3所示的突变体，获得多叶片数和高生物量的烟草株系。
10、进一步的，所述方式(2)包括以下步骤：
11、1)针对序列为seq id no.6的靶向基因nbmbd1构建载体，设计nbmbd1编码区的靶点序列seq id no.7，与pdc40-u6-sg载体连接构建p40-max-sg3基因编辑载体；合成序列为seq id no.8和seq id no.9的两条单链的引物进行退火反应；
12、2)设计pdc40-u6-sg载体的酶切位点，选取bsai酶切位点，回收质粒；利用t4连接酶将靶点序列连接到表达载体中；
13、3)将构建好的载体导入eh105农杆菌感受态细胞，利用叶盘法转化本氏烟获得多分枝、高生物量的再生株系。
14、本发明的有益效果：
15、本发明通过定位分析控制mbd1突变体表型的基因，突变特定位点后得到突变体，应用于创制烟草株系，能够促进其分枝的生长，提升该烟草株系的叶片数和生物量，使得制得的烟草株系具有多叶片数、高生物量和高种子产量的特性。另外，这一多叶片数、高生物量、高种子产量的烟草株系的获得还可以通过采用crispr/cas9基因编辑技术创制编辑材料，获得的烟草株系可增加生物量。
1.一种烟草mbd1突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如seq id no.3所示。
2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体是在seq id no.2的基础上，将第275位的色氨酸突变为终止密码子后得到。
3.一种多叶片数和高生物量的烟草株系的创制方法，其特征在于，所述方法通过以下任一种方式实现：
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方式(1)包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方式(2)包括以下步骤：
