本发明涉及生物医药领域，具体涉及神经相关转录因子pax6的抑制剂在制备治疗前列腺癌的药物中的应用。
背景技术：
1、前列腺癌(pca)是男性常见的恶性肿瘤，其发病率与经济水平、饮食习惯和寿命有关。在西方，大多数前列腺癌患者在诊断时病情尚处于局限阶段，而在中国，大部分患者在确诊时已发展到晚期，五年生存率较低。中晚期前列腺癌主要通过去雄治疗(adt)，但第二代ar靶向药物的使用导致了神经内分泌转化的增加，形成了神经内分泌型前列腺癌(nepc)，其特点是低ar表达和不依赖ar信号传导。
2、nepc的发展涉及多种分子机制，包括基因组、表观遗传和转录等途径。研究发现，rb1丢失和tp53突变在nepc中更为常见，这些改变与nepc的耐药性和高转移性相关。从腺癌到nepc的转变反映了细胞谱系可塑性的概念，许多转录因子在此过程中起重要作用，如neurod1和brn2。
3、神经相关转录因子pax6是胚胎发育中神经系统发育的关键调节分子，特别是在神经管、前脑模式和视网膜细胞分化的形成中发挥作用。pax6基因编码的pax6蛋白包含两个dna结合结构域，pai和pd，它们使pax6能够与dna结合并调控其他基因的表达。这些结构域通过一个连接区连接，其中pai结构域包含一个dna结合区域，可以与特定dna序列结合。pax6在肿瘤发生和进展中也起着重要作用。它与gli和sox2的表达呈正相关，可能将癌细胞推向干细胞样状态。
技术实现思路
1、(一)解决的技术问题
2、尽管pax6在肿瘤中的作用已被研究，但其在前列腺癌治疗以及耐药性中的作用尚未明确。针对现有技术的不足，本发明提供了一种抑制pax6基因或pax6蛋白的物质治疗前列腺癌的应用，解决了前列腺癌治疗中的二代内分泌治疗药物耐药性问题。
3、(二)技术方案
4、为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：
5、本发明在一方面，提供了抑制神经相关转录因子pax6基因或pax6蛋白的试剂在制备治疗前列腺癌的药物、抑制前列腺癌神经内分泌转分化和/或增强前列腺癌细胞对二代内分泌治疗药物敏感性的药物中的应用。
6、在一个方面，本发明提供了一种含有编码抑制pax6基因表达的shrna的dna序列的重组载体在制备治疗前列腺癌的药物、抑制前列腺癌神经内分泌转分化和/或增强前列腺癌细胞对二代内分泌治疗药物敏感性的药物中的应用。
7、在一个方面，本发明提供了包括pax6基因或其蛋白的抑制剂和二代内分泌治疗药物的组合物在制备治疗前列腺癌的药物、抑制前列腺癌神经内分泌转分化和/或增强前列腺癌细胞对二代内分泌治疗药物敏感性的药物中的应用。
8、在一个方面，本发明提供了包括pax6基因或其蛋白的抑制剂和stat5a基因或其蛋白的抑制剂的组合物在制备治疗前列腺癌的药物、抑制前列腺癌神经内分泌转分化和/或增强前列腺癌细胞对二代内分泌治疗药物敏感性的药物中的应用。
9、在一个方面，本发明提供了一种抑制pax6基因表达的shrna。
10、在一个方面，本发明提供了一种含有编码抑制pax6基因表达的shrna的dna序列的重组载体。
11、在一个方面，本发明提供了一种用于治疗前列腺癌的药物组合物，所述药物组合物包括pax6基因或其蛋白的抑制剂和二代内分泌治疗药物。
12、在一个方面，本发明提供了一种用于治疗前列腺癌的药物组合物，所述药物组合物包括pax6基因或其蛋白的抑制剂和stat5a基因或其蛋白的抑制剂。
13、在一个实施例中，所述pax6基因的抑制剂可以是针对pax6基因的sirna、dsrna、mirna、shrna，也可以是针对pax6基因的基因编辑系统，例如talen、zfn、crspr/cas等。
14、在一个实施例中，所述针对pax6基因的shrna的核苷酸序列为：
15、shpax6#1:
16、正义链(f)：
17、ccgggcagacggcatgtatgataaactcgagtttatcatacatgccgtctgct tttt；
18、反义链(r)：
19、cgcgaaaaagcagacggcatgtatgataaactcgagtttatcatacatgccgt ctgc；
20、shpax6#2:
21、正义链(f)：
22、ccgggacttcagctgaagcggaagcctcgaggcttccgcttcagctgaagt cttttt；
23、反义链(r)：
24、cgcgaaaaagacttcagctgaagcggaagcctcgaggcttccgcttcagct gaagtc。
25、在一个实施例中，所述pax6基因的抑制剂包括抑制pax6基因表达的shrna或含有编码抑制pax6基因表达的shrna的dna序列的重组载体。
26、在一个实施例中，所述pax6蛋白的抑制剂可以是抗体、抗原结合片段或其它小分子药物。
27、在一个实施例中，所述抑制pax6蛋白的抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、单链抗体(single chain antibody fragment，scfv)或纳米抗体等。
28、在一个实施例中，所述stat5a基因的抑制剂可以是针对stat5a基因的sirna、dsrna、mirna、shrna，也可以是针对stat5a基因的基因编辑系统，例如talen、zfn、crspr/cas等。
29、在一个实施例中，所述stat5a基因的抑制剂包括抑制stat5a基因表达的shrna或含有编码抑制stat5a基因表达的shrna的dna序列的重组载体。
30、在一个实施例中，所述针对stat5a基因的shrna的核苷酸序列为：
31、shstat5a#1:
32、正义链(f)：
33、caccgtccggcacattctgtacaatgctcgagcattgtacagaatgtgccgga tttttg；
34、反义链(r)：
35、aaaccaaaaatccggcacattctgtacaatgctcgagcattgtacagaatgt gccggac；
36、或
37、shstat5a#2:
38、正义链(f)：
39、caccgcccacgtttcccgggatatatctcgagatatatcccgggaaacgtggg tttttg；
40、反义链(r)：
41、aaaccaaaaacccacgtttcccgggatatatctcgagatatatcccgggaaac gtgggc。
42、在一个实施例中，所述抑制stat5a蛋白的抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、单链抗体(single chain antibody fragment，scfv)或纳米抗体等。
43、在一个实施例中，所述二代内分泌治疗药物即第二代ar靶向药物。可选地，包括恩杂鲁胺、阿比特龙。
44、(三)有益效果
45、本发明提供了一种抑制神经相关转录因子pax6的shrna在制备治疗前列腺癌的药物中的应用。与现有技术相比，具备以下有益效果：
46、鉴于目前对于前列腺癌二代内分泌治疗药物耐药的临床症状还没有可行的解决方案，发明首次揭示的pax6及其下游met及其下游stat5a可以作为潜在的药物靶点，通过抑制这些相关基因的表达或抑制其生物学功能，发挥抑制前列腺癌神经内分泌转分化的作用，以此增强肿瘤对前列腺癌二代内分泌治疗药物的敏感性。
1.抑制神经相关转录因子pax6基因或pax6蛋白的试剂在制备治疗前列腺癌的药物、抑制前列腺癌神经内分泌转分化和/或增强前列腺癌细胞对二代内分泌治疗药物敏感性的药物中的应用。
2.包括pax6基因或其蛋白的抑制剂和二代内分泌治疗药物的组合物在制备治疗前列腺癌的药物、抑制前列腺癌神经内分泌转分化和/或增强前列腺癌细胞对二代内分泌治疗药物敏感性的药物中的应用。
3.包括pax6基因或其蛋白的抑制剂和stat5a基因或其蛋白的抑制剂的组合物在制备治疗前列腺癌的药物、抑制前列腺癌神经内分泌转分化和/或增强前列腺癌细胞对二代内分泌治疗药物敏感性的药物中的应用。
4.一种用于治疗前列腺癌的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括pax6基因或其蛋白的抑制剂和二代内分泌治疗药物。
5.一种用于治疗前列腺癌的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括pax6基因或其蛋白的抑制剂和stat5a基因或其蛋白的抑制剂。
6.如权利要求1-3任一项所述的应用或权利要求4-5任一项所述的组合物，其特征在于，所述pax6基因的抑制剂包括针对pax6基因的sirna、dsrna、mirna、shrna，和/或针对pax6基因的基因编辑系统，所述基因编辑系统包括talen、zfn、crspr/cas；所述pax6蛋白的抑制剂包括抗体、抗原结合片段或其它小分子药物。
7.如权利要求3所述的应用或权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述stat5a基因的抑制剂包括针对stat5a基因的sirna、dsrna、mirna、shrna，和/或针对stat5a基因的基因编辑系统，所述基因编辑系统包括talen、zfn、crspr/cas；所述stat5a蛋白的抑制剂包括抗体、抗原结合片段或其它小分子药物。
8.如权利要求7所述的应用或组合物，其特征在于，所述针对stat5a基因的shrna的核苷酸序列选自shstat5a#1或shstat5a#2；
9.如权利要求2所述的应用或权利要求4任一项所述的组合物，其特征在于，所述二代内分泌治疗药物为第二代ar靶向药物；可选地，包括恩杂鲁胺、阿比特龙。
10.一种抑制pax6基因表达的shrna，所述shrna的核苷酸序列选自shpax6#1或shpax6#2；
