本发明涉及一种同时调节细胞表达产物聚体、电荷异质性和提高产量的方法，属于细胞领域。
背景技术：
1、市场上现行的和在研的治疗性抗体以及一些重组治疗性蛋白大部分都是由哺乳动物细胞(主要是中国仓鼠卵巢细胞，即cho细胞)表达的。蛋白多聚体含量是蛋白药物的关键属性(cqa)之一，受到了越来越多的关注。聚体的形成会影响最终的产品的安全性以及功效性。蛋白多聚体一般是通过共价键或者非共价键连接形成的。抗体二硫键连接在内质网中发生，内质网内氧化还原反应的发生都会直接影响到抗体二硫键连接。
2、治疗性的抗体或者重组蛋白除了聚体之外，还有电荷不均一性，电荷出现不均一性的主要原因包括蛋白质在不同位置发生的各种化学降解机制(如异构化、酰胺化、裂解以及氧化)和加成反应(共价加成或糖基化加成)。其中碱性峰主要来源于c末端赖氨酸的不均一性、甲硫氨酸氧化或天冬氨酸的转变等，酸性峰主要是来源于n-糖末端唾液酸化修饰、氨基酸残基脱酰胺等。这些导致分子发生变化的现象，会对分子的ph产生明显的影响，同时会对产物功能产生潜在影响。
3、生物药除了需要控制质量之外，产量也是最为关注的指标。质量满足的情况下，提高产量能够明显的降本增效。随着生物医药的不断发展对于成本的控制要求也越来越高，因此提产也是每个生物医药公司的目标。
4、对于聚体和电荷异质性或提产的调节主要从基因、培养基组分调节以及工艺调节进行改善。基因改善方式比较复杂，周期相对比较长，并且该类方法的安全性、复杂性以及稳定性都需要较长时间进行验证以及确定，对于生物制品的审批不利。培养基组分优化方式改善聚体，受到培养基组分的限制，操作复杂，很难聚体的实施。工艺调节方式进行改善，相对而言改善幅度偏小。目前也有不少的研究发现通过培养基添加剂方式能够改善聚体或电荷，例如添加硫酸铜或者β-巯基乙醇等能够改善产品聚体，通过添加黄酮类物质或者调节锌离子浓度能够改善蛋白的电荷异质性，通过提高补料量能够增加蛋白的产量。但是这些方法只能对一种质量属性或产量进行调节，对另外一种质量属性调节几乎没有效果。
5、本专利的目的是开发出一种同时调节细胞表达产物聚体、电荷异质性和提高产量的方法。
技术实现思路
1、本发明的宗旨是提供一种能够同时调节聚体、电荷异质性和提产的方法，使得对聚体、电荷异质性以及产量关注的产品通过本方法进行调节后，能够得到更好质量的产品，并且能够快速的满足需求。本发明具有工艺简单，经济高效等特点，适合工业生产。
2、本发明提供了一种同时调节聚体、电荷异质性和提产的方法，即在接种时添加牛磺酸和谷胱甘肽，同时调节cho细胞产物的聚体、电荷异质性以及提产。该方法能够在降低抗体聚体，改善抗体电荷异质性同时提升产量，该方法能够应用于抗体药物的质量改善以及提产。相比较添加硫酸铜、β-巯基乙醇等物质对于电荷异质性、聚体或提产等的单一作用，本发明所述方法能同时调节聚体、电荷异质性和提产。
3、为了解决现有技术的缺陷，本发明提供了一种同时调节聚体、电荷异质性和提产的方法，在细胞培养体系中添加调节剂对聚体、电荷异构体进行调节，所述调节剂为牛磺酸和谷胱甘肽；优选地，所述调节剂同时还能够提升产量。
4、在某些具体的方案中，所述细胞为cho-k1细胞；优选地，所述cho-k1细胞包含gs基因的表达载体，并且所述gs基因下游插入了外源基因。
5、在某些具体的方案中，所述牛磺酸在细胞培养体系中的终浓度为1.34-13.4mm。
6、在某些具体的方案中，所述谷胱甘肽在细胞培养体系中的终浓度为150-300μm。
7、在某些具体的方案中，所述调节剂在细胞培养体系中的终浓度为13.4mm牛磺酸和150μm谷胱甘肽。
8、在某些具体的方案中，所述方法包括：在细胞进行接种时加入调节剂。
9、上述方法可以通过本领域常见的化学成分限定的培养基进行分批补料培养细胞，在接种前添加牛磺酸和谷胱甘肽。例如，使用化学成分限定的cho培养基，采用分批补料方式进行培养。
10、在某些具体的方案中，所述方法的培养条件为36.5℃、5～8％co2、110～130rpm以及80％湿度。
11、在某些具体的方案中，培养至第五天时，降温至31～34℃。
12、本发明还提供一种调节剂，所述调节剂为牛磺酸和谷胱甘肽。
13、本发明还提供所述的调节剂在细胞培养中调节细胞表达产物聚体、电荷异质性和提高产量的应用。
14、本发明所述的原料以及试剂均有市售。
15、有益效果：
16、本发明在cho细胞培养体系中同时添加牛磺酸和谷胱甘肽，既能够降低抗体的聚体表达量，又能够降低抗体酸性异构体含量，同时还能够提高抗体的产量。所产生的效果如下：
17、(1)对聚体的影响：聚体表达量下降6.5％，主峰增加6.4％；
18、(2)对电荷异构体的影响，酸峰降低6.4％，碱峰降低4.8％，主峰提高11.2％；
19、(3)对产量的影响，产量提高0.79g/l。
20、与单独添加牛磺酸或谷胱甘肽相比，同时添加牛磺酸和谷胱甘肽对聚体、电荷异构体和产量起到协同促进作用，使聚体的下降程度提高了2.2倍，主峰提高程度提高了2.6倍；电荷异构体方面，使酸性峰含量的降低程度提高了1.3倍，主峰提高程度提高了3.6倍；同时，产量提高1.2倍。
21、总的来说，本发明操作简单，成本较低，适合各种治疗性抗体或生物类似药物的商业化生产。
1.一种同时调节细胞表达产物聚体、电荷异质性和提高产量的方法，其特征在于，在细胞培养体系中添加调节剂，所述调节剂为牛磺酸和谷胱甘肽。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述牛磺酸的终浓度为1.34-13.4mm。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述谷胱甘肽的终浓度为150-300μm。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在细胞接种时将调节剂添加至培养基中。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述产物包括但不限于单抗、双抗、重组蛋白。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞包括但不限于cho-k1细胞。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞的培养条件为：36.5℃、110～130rpm、5～8％co2、80％湿度。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，培养至第五天时，降温至31～34℃。
9.一种调节剂，其特征在于，所述调节剂含有牛磺酸和谷胱甘肽。
10.权利要求9所述的调节剂在细胞培养中调节细胞表达产物聚体、电荷异质性和提高产量的应用。
