本发明属于药物化学领域，更具体而言，涉及一类新的9,10-二氢菲类化合物，其制备方法及用于肝损伤治疗的药物中的用途。
背景技术：
肝脏不仅参与能量的储存及多种物质的合成与分解代谢，包括糖代谢、蛋白质代谢、脂肪代谢等，也参与人体代谢产生的毒素、药物分解代谢产物的解毒过程。肝脏作为“物质代谢中枢”，也是各种致病因子或疾病经常侵袭的器官，如药物、病毒、酒精、异常代谢、缺血再灌注等均可对肝脏造成损害，发生炎症反应。急、慢性肝炎最终转变为肝纤维化、肝硬化和肝细胞癌。全球原发性肝癌发病率居高不下，主要与急、慢性肝炎的高发病率有关。
目前临床上常见的保肝药物类型多样，其中以注射剂使用频率最高，如异甘草酸镁注射液、注射用还原型谷胱甘肽、注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸、多烯磷脂酰胆碱注射液。但是该类药物价格较高，不适合长期用药。口服剂型价格便宜、使用方便、疗效稳定、不良反应相对较少，适合患者长期服用；但是现在临床常用的口服药物存在诸多缺陷，如水飞蓟素存在生物利用度低、个体差异大等问题，而双环醇存在不良反应和停药反跳现象。因此，开发疗效确切，安全高效的口服保肝药物对于临床急、慢性肝损伤的治疗具有重要意义。
天然产物是新药创制的重要来源，从天然产物中发现活性先导化合物进而研发创新药物已被证明是行之有效的重要途径。9,10-二氢菲类化合物是一类普遍存在于兰科、灯心草科等植物中化合物，其结构中存在2个以上苯环，且含有多个酚羟基，具有芳香性和一定的疏水性。现有研究显示这类化合物普遍具有抗肿瘤、解痉、抗血小板凝集、抗过敏等生物活性，但该类化合物对肝损伤的保护作用尚未见文献报道。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一类能够用于肝损伤保护作用的9,10-二氢菲类化合物或其衍生物。
本发明的第一方面，提供了一种如下式i所示的化合物，或其药学上可接受的盐，水合物或溶剂合物的用途：
其中，
虚线表示化学键或无；
ra、rb和rc各自独立地选自下组：h、羟基、c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c2-c4烯基、-cho、-no2；
n、p各自独立地选自下组：0、1、2、3或4；
m选自下组：0、1或2；
rd为c2-c4烯基、或-(o)x-r；其中，所述的x为0或1，且所述的r为选自下组的结构单元失去一个氢原子形成的结构片段：取代或未取代的
或rd与ra、rb和rc中任一以及其各自相连的碳原子共同构成选自下组的基团：取代或未取代的3-7元杂环基、取代或未取代的3-7元环烷基；
除非特别说明，所述的取代是被选自下组的一个或多个取代基所取代：h、羟基、c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c2-c4烯基、-cho、-no2、或被一个或多个选自下组的基团取代的苯基：羟基、c1-c4烷基、c1-c4烷氧基；
其特征在于，用于制备治疗或预防肝损伤的药物组合物。
在另一优选例中，所述的r为选自下组的基团：取代或未取代的
在另一优选例中，所述的rd被选自下组的一个或多个取代基取代：h、羟基、c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c2-c4烯基。
在另一优选例中，所述的化合物具有如下式i-a或i-b所示的结构：
在另一优选例中，所述的化合物选自下组：
本发明的第二方面，提供了一种如下式ii所示的化合物，或其药学上可接受的盐，水合物或溶剂合物的用途：
其中，虚线表示化学键或无；
rd和re各自独立地选自下组：h、羟基、c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c2-c4烯基、-cho、-no2，或取代或未取代的苄基；
q、r各自独立地选自下组：0、1、2、3或4；
除非特别说明，所述的取代是被选自下组的一个或多个取代基所取代：h、羟基、c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c2-c4烯基、-cho、-no2、或被一个或多个选自下组的基团取代的苯基：羟基、c1-c4烷基、c1-c4烷氧基；
其特征在于，用于制备治疗或预防肝损伤的药物组合物。
在另一优选例中，所述的化合物选自下组：
本发明的第三方面，提供了一种如本发明第一或第二方面所述化合物的用途，所述的肝损伤选自下组：胆汁淤积症状的肝损伤，或肝炎。
在另一优选例中，所述的肝炎选自下组：中毒性肝炎(药物、化学物质和生物毒素)、酒精性肝炎、缺血性肝炎。
在另一优选例中，所述的肝损伤为药物导致的肝损伤，较佳地，所述的肝损伤为中草药导致的肝损伤。
本发明的第四方面，提供了一种选自下组的化合物：
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1：ys30对小鼠ccl4急性肝损伤的保护作用。小鼠血清中(a)alt(b)ast和c(c)ldh的水平(d)肝组织h&e染色后的病理分析。其中方框、箭头、实心三角分别表示肝组织肿胀、中心小叶坏死、炎症浸润。(e)h&e染色suzuki’s评分。###p<0.001，##p<0.01ccl4组vs.vehicle组；*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001vs.ccl4组。
图2：ys30对血清中炎症因子和肝脏脂质过氧化水平的影响。血清中(a)tnf-α(b)il-6水平(c)肝组织中脂质过氧化水平。###p<0.001，##p<0.01vsvehicle组，***p<0.001，**p<0.01，*p<0.01vsccl4组。
图3：ys30对小鼠缺血再灌注肝损伤的保护作用。小鼠血清中(a)alt，(b)ast，(c)ldh水平，(d)肝组织h&e染色后病理分析。其中方框、箭头、实心三角分别表示肝组织肿胀、中心小叶坏死、炎症浸润。(e)h&e染色suzuki’s评分。###p<0.001，##p<0.01i/r组vs.sham组；*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001vs.i/r组。
具体实施方式
本发明人经过长期而深入的研究，意外地发现，如本发明所述的一类9,10二氢菲类化合物具有良好的抗炎和抗氧化性能，尤其适合用于治疗由炎症和脂质过氧化为病理学基础的疾病如肝病，包括中毒性肝炎(药物、化学物质和生物毒素)、酒精性肝炎、缺血性肝炎等。基于上述发现，发明人完成了本发明。
术语
如本文所用，术语“c1-c6烷基”或“c1-c10烷基”指具有1～6个或1-10个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基，或类似基团。
术语“c3-c6环烷基”指具有3～6个碳原子的环烷基，例如环丙基、环丁基、甲基环丁基、环戊基，或类似基团。
术语“卤素”指f、cl、br和i。
本发明中，术语“含有”、“包含”或“包括”表示各种成分可一起应用于本发明的混合物或组合物中。因此，术语“主要由...组成”和“由...组成”包含在术语“含有”中。
本发明中，术语“药学上可接受的”成分是指适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)，即有合理的效益/风险比的物质。
本发明中，术语“有效量”指治疗剂治疗、缓解或预防目标疾病或状况的量，或是表现出可检测的治疗或预防效果的量。对于某一对象的精确有效量取决于该对象的体型和健康状况、病症的性质和程度、以及选择给予的治疗剂和/或治疗剂的组合。因此，预先指定准确的有效量是没用的。然而，对于某给定的状况而言，可以用常规实验来确定该有效量，临床医师是能够判断出来的。
在本文中，除特别说明之处，术语“取代”指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代基取代：卤素、未取代或卤代的c1-c6烷基、未取代或卤代的c2-c6酰基、未取代或卤代的c1-c6烷基-羟基。
除非特别说明，本发明中，所有出现的化合物均意在包括所有可能的光学异构体，如单一手性的化合物，或各种不同手性化合物的混合物(即外消旋体)。本发明的所有化合物之中，各手性碳原子可以任选地为r构型或s构型，或r构型和s构型的混合物。
如本文所用，术语“本发明化合物”指式i所示的化合物。该术语还包括及式i化合物的各种晶型形式、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有机酸；以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸。
如本文所用，术语“二聚体”指双苄或芪类、9,10-二氢菲或菲自身或者与其它双苄或芪类、9,10-二氢菲或菲通过c-o-c、或者c-c、或者同时通过c-o-c和c-c连接而成的二聚体。
9,10二氢菲类化合物或其类似物
本项目前期从兰科石仙桃属植物石仙桃(pholidotachinensislindl.)、灯心草科灯心草属植物灯心草(juncuseffususl.)、野灯心草(j.setchuensisbuchen.)分离得到一系列9,10-二氢菲类化合物。随后我们在内源性毒性物质(疏水胆酸)肝细胞损伤模型、外源性毒性物质(四氯化碳)小鼠肝损伤模型以及缺血再灌注小鼠肝损伤模型中验证了该类化合物的肝保护作用。
胆汁淤积是药物性肝损伤的常见并发症，伴随疏水胆酸(如去氧胆酸(deoxycholicacid，简写dca)和石胆酸(lithocholicacid，简写lca)在肝细胞中的蓄积。疏水胆酸能够破坏细胞基底外膜、细胞器膜并特异性破坏微管膜的外层，是导致肝细胞损伤的主要内源性物质之一。在大鼠原代肝细胞和人源诱导型肝样细胞(hihep细胞)中，我们发现该类化合物在0.1～25um浓度范围内能够显著对抗疏水胆酸dca和lca引起的肝细胞损伤的。这提示，该类化合物可能对于伴随胆汁淤积症状的一类肝损伤，如药物特别是中草药导致的肝损伤具有显著的改善作用。
本发明分离得到的9,10二氢菲类化合物或其类似物，具体包括：
第一类：石仙桃中所分离得到的化合物ys1～37
第二类：野灯心草中所分离得到的化合物xyw1～10：
第三类：灯心草中所分离得到的化合物xf1～11、14～20、24、29、33：
药物组合物和施用方法
由于本发明化合物具有优异的逆转肝损伤的活性，因此本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐，水合物或溶剂合物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于治疗、预防以及缓解各类肝损伤相关的疾病，如以炎症和脂质过氧化为病理学基础的一类肝炎。
本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-3000(活性剂量范围1-100mg/kg)mg本发明化合物/剂，更佳地，含有10-2000mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。
“药学上可以接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂
本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。
除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。
本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选6～600mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
与现有技术相比，本发明的主要优点包括：
1.本发现首次发现9,10-二氢菲、双苄(芪类)具有良好的保肝活性，较低的浓度范围即可对抗疏水胆酸诱导的原代肝细胞或人源诱导型肝样细胞损伤。与现有的保肝药物相比，其最大的优势在于可以口服，且表现出较明显的剂量依赖关系。
2.除了对抗疏水胆酸诱导的肝损伤外，本发明的活性化合物还具有抗氧化和抗炎的活性，对于以氧化应激和炎症为主要病理特征的肝炎，如中毒性肝炎(药物、化学物质和生物毒素)、酒精性肝炎、缺血性肝炎也有潜在的保护作用，并通过动物试验得到了证实。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
实施例中所使用的仪器和材料如下：
比旋光度：rudulphautopolvi自动旋光仪；
紫外光谱：shimadzuuv-2550型紫外光谱仪；
圆二色谱：jascoj-810分光偏振计；
质谱：waters3100sqdms(低分辨esi),watersxevoqtofms(高分辨esi)；
核磁共振谱：varianmercury-plus400型核磁共振仪，varianmr-400型核磁共振仪，brukeravanceiii500型核磁共振仪，δ(ppm)，以tms为内标；
mci树脂：chp20p(75-150μm)，mitsubishichemicalcorporation；
柱层析硅胶：200-300目，300-400目硅胶和硅胶h均为青岛海洋化工厂生产；
tlc预制薄层板：hsgf254为烟台化工厂生产；
葡聚糖凝胶：sephadexlh-20：pharmaciabiotechab，uppsala，sweden；
高效液相色谱和质谱联用仪：waters2695lc偶联waters2998dad、watersacquityelsd、waters3100sqdms，分析色谱柱型号：waters
手性分析hplc：jasco2000，daicelcolumns，2-propanol/hexane洗脱；
制备型hplc：agilent-variansd1lc偶联grace-alltech3000elsd、varianm701fractioncollector，制备色谱柱waters
显色检测方法：10％硫酸香兰醛溶液，uv254及uv365紫外灯；
实验用溶剂：分析级别溶剂(国药集团)，色谱级别溶剂(merckkgaa，germany)；实验动物：雄性icr小鼠，体重22-25g，雄性sd大鼠，体重200-250g。动物均购自上海斯莱克实验动物有限公司；
实验细胞：l929细胞来自中科院上海生科院细胞库。hihep细胞为转分化的人源肝细胞，由中科院生化细胞所惠利健老师惠赠。bmdm细胞分离自icr小鼠骨髓，大鼠原代肝细胞分离自sd大鼠；
实验试剂：dpph自由基购自上海麦克林生化科技有限公司；橄榄油，甲醛溶液，75％酒精，无水乙醇购自国药集团化学试剂有限公司；dmso，维生素c，水飞蓟素，白藜芦醇，地塞米松，脂多糖(lps)购自sigma-aldrich公司；双环醇购自中国药品生物制品检定所；1×ebss缓冲液，william’e培养基，青链霉素，胎牛血清(fbs)，胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂(its)，10×pbs购自gibco公司；高糖dmem培养基购自hyclone公司；ripa裂解液，no检测试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；小鼠tnfα和il-6elisa试剂盒购自杭州联科生物技术股份有限公司；alt，ast，ldh血生化检测试剂盒购自希森美康生物科技有限公司；iv型胶原酶购自上海鼎盛生物技术有限公司；percoll离心液购自ge公司；cck8试剂盒购自上海翊圣生物科技有限公司；
手术器械：眼科剪，眼科镊，200目/300目筛网，1ml注射器，其中剪刀、镊子和筛网需要提前灭菌、烘干；
实验仪器：低温高速离心机(eppendorf，5415r)，细胞培养箱(thermofisherscientific,371)，超纯水制备系统(pallcascada)，倒置荧光显微镜(olympusckx53)，超声波细胞粉碎机(上海必横，sksi)，多功能酶标仪(bioteksynergy4)，全自动血生化仪(sysmexjca-bm6010c)。
实施例1化合物的分离纯化及波谱数据
1.石仙桃植物中9,10-二氢菲、双苄类化合物的分离
将采自云南西畴的石仙桃1.84kg阴干后粉粹，用95％的工业乙醇10l室温浸泡5天，反复三次，合并提取液，减压浓缩得总浸膏236g。将总浸膏悬浮于2.0l的水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，减压蒸去有机溶剂，得棕褐色石油醚部位93g，乙酸乙酯部位10g，正丁醇部位45g。取石油醚部位(93g)，经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯，100:1～1:1)后分为9个馏分。馏分4经硅胶柱层析(石油醚-丙酮10：1～2:1)后在经过sephadexlh-20(meoh)纯化得ys24(lusianthridin,52mg).馏分5经sephadexlh-20(chcl3:meoh1:1)纯化得ys28(3,3',5-三羟基双苄,63mg)和ys32(3,3',5-三羟基芪,21mg)。馏分6经反复硅胶柱柱层析分离纯化得化合物ys25(coelonin,11mg)、ys26(dihydropinosylvin,二氢赤松素,140mg)、ys27(4-羟基-3-甲氧基双苄,43mg)、ys30(gigantol,ys30,60mg)、ys33(thunalbene,45mg)、ys34(3′-羟基-3,5-二甲氧基芪,35mg)。馏分7经过硅胶柱层析所得的小馏分继续再经过sephadexlh-20纯化，得化合物ys23(2-羟基-4,7-二甲氧基-9,10-二氢菲,23mg)和ys31(3-羟基-5-甲氧基芪,11mg)。馏分8先经过硅胶柱层析所得的小馏分继续再经过sephadexlh-20、制备型高效液相纯化，得化合物ys1(phochinenina,18mg),ys3～5(phochineninsc-e,4,72和59mg)、ys8(phochineninh,27mg)、ys11-12(phochineninskandl,7和4mg)、ys21(blestrina,16mg)、ys29(batatasiniii,14mg)、ys35(shancidin,48mg)、ys36[1-(4-羟基苄基)-4-甲氧基-2,7-二羟基-9,10二氢菲,8mg]、ys37(isoarundinini,114mg)。馏分9经过反复硅胶柱层析、sephadexlh-20柱层析后再经过制备型高效液相纯化，得化合物ys2(phochineninb,23mg)、ys6-7(phochineninsfandg,10和4mg)、ys9-10(phochineninsiandj,63和11mg)、ys15～17(phochineninso-q,11,57和48mg)、ys18(gymconpinc,60mg)、ys19(blestrianola,23mg)、ys20(flavanthrin,115mg)、ys22(phoyunnanind,24mg)。化合物的结构详见fig.1。
2、化合物的理化性质与波谱数据
ys1:phochinenina
棕色无定型粉末,uv(meoh)λmaxnm(logε):216(4.78)and299(4.17).eimsm/z(rel.int):348[m] ,hreimsm/z:348.1363[m] (calcdforc22h20o4,348.1364).1hnmr(300mhz,cd3od)δ6.39(1h,d,j＝2.4hz,h-4),6.70(1h,d,j＝2.4hz,h-6),6.85and7.27(each1h,d,j＝15.6hz,h-αandα’),6.91(1h,dd,j＝2.1and2.7hz,h-2’),6.84(1h,dd,j＝2.1and8.1hz,h-4’),7.12(1h,dd,j＝7.6and8.1hz,h-5’),6.87(1h,dd,j＝2.7and7.6hz,h-6’),3.98(2h,s,-ch2),6.59and6.99(each2h,d,j＝8.7hz,h-2”,3”,5”,6”),3.79(3h,s,5-ome).
ys2:phochineninb
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ys3:phochineninc
棕色无定型粉末,uv(meoh)λmaxnm(logε):201(4.79)and280(3.79).esi-
ms:m/z403.1[m na] ,379.1[m-h]-；hresi-ms:m/z403.1535(calcdforc23h24o5na,403.1521).1hnmr(300mhz,cd3od)δ6.32(1h,d,j＝2.1hz,h-4),6.26(1h,d,j＝2.1hz,h-6),2.52and2.69(each2h,m,h-αandα’),6.51(1h,t,j＝1.3hz,h-2’),6.51(1h,dd,j＝1.3and7.9hz,h-4’),7.00(1h,dd,j＝7.6and7.9hz,h-5’),6.54(1h,dd,j＝1.3and7.6hz,h-6’),3.83(2h,s,-ch2),6.62(1h,d,j＝2.0hz,h-2”),6.61(1h,d,j＝8.3hz,h-5”),6.45(1h,dd,j＝2.3and8.3hz,h-6”),3.73and3.69(each3h,s,3and3”-ome).
ys4:phochinenind
棕色无定型粉末,[α]20d-0.005(c0.315,meoh).uv(meoh)λmaxnm(logε):213(5.04),279(4.89),296(4.77).eimsm/z(rel.int):482[m ](100).hr-eimsm/z:482.1742[m ](calcdforc30h26o6,482.1729).1hnmr(600mhz,cd3od)δ6.57(1h,s,h-1),8.20(1h,d,j＝8.3hz,h-5),6.64(1h,dd,j＝2.4and8.3hz,h-6),6.65(1h,d,j＝2.4hz,h-8),2.75and2.79(each2h,m,h-9,10),6.84and8.15(each1h,s,h-1’,4’),6.34and6.38(each1h,d,j＝2.4hz,h-6’,8’),2.78(4h,s,h-9’,10’),3.75and3.77(each3h,s,2-och3,7’-och3).
ys5:phochinenine
棕色无定型粉末,[α]20d 0.005(c0.325,meoh).uv(meoh)λmaxnm(logε):216(4.71),279(4.52),297(4.41).eimsm/z(rel.int):482[m ](100).hr-eimsm/z:482.1734[m ](calcdforc30h26o6,482.1729).1hnmr(300mhz,cd3od)δ6.77and8.03(each1h,s,h-1,4),6.35and6.31(each1h,d,j＝2.4hz,h-6,8),2.73(4h,s,h-9,10),6.57(1h,s,h-2’),8.03(1h,d,j＝8.6hz,h-5’),6.63(1h,dd,j＝2.4and8.6hz,h-6’),6.59(1h,d,j＝2.4hz,h-8’),2.50and2.46(each2h,m,h-9’,10’),3.75and3.88(each3h,s,7-och3,3’-och3).
ys6：phochineninf
棕色无定型粉末,uv(meoh)λmaxnm(logε):282(4.51).eimsm/z(rel.int):482[m ](100).hr-eimsm/z:482.1739[m ](calcdforc30h26o6,482.1729).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ6.53(1h,s,h-1),7.95(1h,d,j＝8.6hz,h-5),6.61(1h,dd,j＝2.5and8.6hz,h-6),6.65(1h,d,j＝2.5hz,h-8),2.65(4h,s,h-9,10),6.57(1h,s,h-3’),7.96(1h,d,j＝8.6hz,h-5’),6.58(1h,dd,j＝1.6and8.6hz,h-6’),6.56(1h,d,j＝1.6hz,h-8’),2.46and2.31(each2h,m,h-9’,10’),3.18and3.81(each3h,s,4-och3,4’-och3).
ys7:phochinening
棕色无定型粉末,uv(meoh)λmaxnm(logε):211(4.60),263(4.66)357(3.48),375(3.53).eimsm/z(rel.int):480[m ](100).hr-eimsm/z:480.1575[m ](calcdforc30h24o6,480.1573).1hnmr(600mhz,cd3od)δ6.67(1h,s,h-2),8.10(1h,d,j＝8.9hz,h-5),6.66(1h,dd,j＝3.0and8.9hz,h-6),6.58(1h,d,j＝3.0hz,h-8),2.46and2.22(each2h,m,h-9,10),6.94(1h,s,h-2’),9.45(1h,d,j＝9.4hz,h-5’),7.12(1h,dd,j＝2.7and9.4hz,h-6’),7.11(1h,d,j＝2.7hz,h-8’),7.40and7.48(each1h,d,j＝9.0hz,h-9’,10’),3.95and4.15(each3h,s,3-och3,3’-och3).
ys8:phochineninh
棕色无定型粉末,uv(meoh)λmaxnm(logε):211(4.70),279(4.51),295(4.40).eimsm/z(rel.int):482[m ](100).hr-eimsm/z:482.1734[m ](calcdforc30h26o6,482.1729).1hnmr(600mhz,cd3cocd3)δ6.67(1h,s,h-2),8.12(1h,d,j＝8.5hz,h-5),6.71(1h,dd,j＝2.7and8.5hz,h-6),6.69(1h,d,j＝2.7hz,h-8),2.58(4h,m,h-9,10),6.67(1h,d,j＝2.8,h-1’),6.64(1h,dd,j＝2.8and8.8hz,h-3’),8.11(1h,d,j＝8.8hz,h-4’),6.46and6.38(each1h,d,j＝2.3hz,h-6’,8’),2.46(4h,s,h-9’,10’),3.89and3.83(each3h,s,3-och3,5’-och3).
ys9:phochinenini
棕色无定型粉末,[α]20d 0.008(c0.310,meoh).uv(meoh)λmaxnm(logε):200(5.61),278(5.58),297(5.44).eimsm/z(rel.int):482[m ](23).hr-eimsm/z:482.1726[m ](calcdforc30h26o6,482.1729).1hnmr(300mhz,cd3od)δ6.54(1h,s,h-2),8.22(1h,d,j＝8.6hz,h-5),6.67(1h,dd,j＝2.8and8.5hz,h-6),6.62(1h,d,j＝2.8hz,h-8),2.63(4h,s,h-9,10),6.58(1h,d,j＝2.8,h-1’),6.61(1h,dd,j＝2.8and8.5hz,h-3’),8.19(1h,d,j＝8.5hz,h-4’),6.33(2h,s,h-6’,8’),2.66(4h,m,h-9’,10’),3.89and3.83(each3h,s,3-och3,5’-och3).
ys10:phochineninj
棕色无定型粉末,uv(meoh)λmaxnm(logε):279(4.48).eimsm/z(rel.int):482[m ](37).hr-eimsm/z:482.1721[m ](calcdforc30h26o6,482.1729).1hnmr(600mhz,cd3od)δ6.57(1h,s,h-2),8.24(1h,d,j＝8.3hz,h-5),6.68(1h,dd,j＝2.3and8.3hz,h-6),6.64(1h,d,j＝2.3hz,h-8),2.63(4h,s,h-9,10),6.24and6.46(each1h,d,j＝2.6hz,h-1’,3’),8.03(1h,d,j＝9.5hz,h-5’),6.64(1h,dd,j＝2.6and9.5hz,h-6’),6.63(1h,d,j＝2.6hz,h-8’),2.64(4h,m,h-9’,10’),3.77and3.79(each3h,s,3-och3,4’-och3).
ys11:phochinenink
棕色无定型粉末,uv(meoh)λmaxnm(logε):201(4.68),279(4.22).eimsm/z(rel.int):484[m ](100).hr-eimsm/z:484.1894[m ](calcdforc30h28o6,484.1786).1hnmr(300mhz,cd3od)δ6.81and8.10(each1h,s,h-1,4),6.31and6.35(each1h,d,j＝2.7hz,h-6,8),2.75(4h,s,h-9,10),6.68(1h,dd,j＝2.3and8.3hz,h-6),6.64(1h,d,j＝2.3hz,h-8),6.33and6.34(each1h,d,j＝2.4hz,h-4’,6’),2.60and2.67(each2h,m,h-α,α’),6.40(1h,dd,j＝2.4and2.6hz,h-2”),6.47(1h,d,j＝2.4and8.0hz,h-4”),6.93(1h,dd,j＝7.4and8.0hz,h-5”),6.39(1h,dd,j＝2.6and7.4hz,h-6”),3.77and3.76(each3h,s,7-och3,3’-och3).
ys12:phochineninl
棕色无定型粉末,uv(meoh)λmaxnm(logε):201(4.74),279(4.29,297(4.12).eimsm/z(rel.int):484[m ](100).hr-eimsm/z:484.1879[m ](calcdforc30h28o6,484.1786).1hnmr(300mhz,cd3od)δ6.77and8.07(each1h,s,h-1,4),6.31and6.34(each1h,d,j＝2.6hz,h-6,8),2.71(4h,s,h-9,10),6.41and6.45(each1h,d,j＝1.1hz,h-2’,6’),2.86(4h,m,h-α,α’),6.68(1h,dd,j＝1.7and2.1hz,h-2”),6.60(1h,d,j＝1.7and7.9hz,h-4”),7.09(1h,dd,j＝7.5and7.9hz,h-5”),6.72(1h,dd,j＝2.1and7.5hz,h-6”),3.74and3.67(each3h,s,7-och3,5’-och3).
ys13:phochineninm
棕色无定型粉末,uv(meoh)λmaxnm(logε):201(4.83),280(4.33).ieimsm/z(rel.int):484[m ](100).hr-eimsm/z:484.1871[m ](calcdforc30h28o6,484.1786).cddatarecordedon-lineinhexane/ethanol7:3for(as)-13:λmax(φ):314(-2.3),299sh(-2.2),282(-2.4),268(0.9),257(-0.8),237(4.0),225(-6.9).(ar)-13:313sh(3.9),301(4.5),282(6.0),270(-0.5),257(1.6),237(-7.8),227(6.6).1hnmr(300mhz,cd3od)δ6.59(1h,s,h-3),8.03(1h,d,j＝8.5hz,h-5),6.62(1h,dd,j＝2.7and8.5hz,h-6),6.58(1h,d,j＝2.7hz,h-8),2.52and2.33(each2h,m,h-9,10),6.34and6.36(each1h,d,j＝2.5hz,h-4’,6’),2.54and2.56(each2h,m,h-α,α’),6.38(1h,dd,j＝2.1and2.1hz,h-2”),6.49(1h,d,j＝2.1and8.2hz,h-4”),6.94(1h,dd,j＝8.2and8.6hz,h-5”),6.37(1h,dd,j＝2.1and8.6hz,h-6”),3.89and3.74(each3h,s,2-och3,3’-och3).
ys14:phochineninn
棕色无定型粉末,uv(meoh)λmaxnm(logε):277(4.32),299(4.29).eimsm/z(rel.int):482[m ](100).hr-eimsm/z:482.1733[m ](calcdforc30h26o6,484.1729).1hnmr(600mhz,cd3od)δ6.71and8.04(each1h,s,h-1,4),6.27and6.32(each1h,d,j＝2.6hz,h-6,8),2.76(4h,s,h-9,10),6.89and6.35(each1h,d,j＝2.5hz,h-2’,6’),6.94and6.97(each1h,d,j＝16.6hz,h-α,α’),6.73(1h,dd,j＝1.7and2.1hz,h-2”),6.55(1h,d,j＝1.7and8.5hz,h-4”),7.02(1h,dd,j＝7.6and8.1hz,h-5”),6.76(1h,dd,j＝2.1and7.6hz,h-6”),3.74and3.86(each3h,s,7-och3,4’-och3).
ys15:phochinenino
棕色无定型粉末,uv(meoh)λmaxnm(logε):219(4.62),310(4.46).eimsm/z(rel.int):482[m ](100).hr-eimsm/z:482.1738[m ](calcdforc30h26o6,482.1729).1hnmr(500mhz,cd3od)δ6.73and8.08(each1h,s,h-1,4),6.29and6.33(each1h,d,j＝2.4hz,h-6,8),2.71(each2h,m,h-9,10),6.75and6.77(each1h,d,j＝1.3hz,h-2’,6’),7.09and7.12(each1h,d,j＝16.0hz,h-α,α’),6.96(1h,dd,j＝1.7and2.4hz,h-2”),6.67(1h,d,j＝2.4and8.0hz,h-4”),7.14(1h,dd,j＝7.7and8.0hz,h-5”),7.01(1h,dd,j＝1.7and7.7hz,h-6”),3.72and3.76(each3h,s,7-och3,5’-och3).
ys16:phochineninp
棕色无定型粉末,[α]20d 0.027(c0.305,meoh).uv(meoh)λmaxnm(logε):212(4.69),281(4.45),297(4.45).eimsm/z(rel.int):482[m ](100).hr-eimsm/z:482.1736[m ](calcdforc30h26o6,482.1729).1hnmr(300mhz,cd3od)δ6.63(1h,s,h-2),8.10(1h,d,j＝8.6hz,h-5),6.66(1h,dd,j＝2.5and8.6hz,h-6),6.60(1h,d,j＝2.5hz,h-8),2.47and2.28(each2h,m,h-9,10),6.48and6.94(each1h,d,j＝2.6hz,h-4’,6’),6.78and6.97(each1h,d,j＝16.0hz,h-α,α’),6.72(1h,dd,j＝2.1and2.1hz,h-2”),6.62(1h,d,j＝2.1and7.7hz,h-4”),7.07(1h,dd,j＝7.7and8.1hz,h-5”),6.86(1h,dd,j＝2.1and8.1hz,h-6”),3.89and3.84(each3h,s,3-och3,5’-och3).
ys17:rac-phochineninq
棕色无定型粉末,[α]20d0(c0.287,meoh).uv(meoh)λmaxnm(logε):205(4.88),282(4.35).eimsm/z(rel.int):512[m ](100).hr-eimsm/z:512.1842[m ](calcdforc31h28o7,512.1835).1hnmr(500mhz,cd3od)δ6.63(1h,s,h-3),8.04(1h,d,j＝8.6hz,h-5),6.64(1h,dd,j＝2.4and8.6hz,h-6),6.60(1h,d,j＝2.4hz,h-8),2.47(2h,m,h-9),2.38and2.22(each1h,m,h-10),6.22(1h,d,j＝2.1hz,h-2’),6.28(1h,dd,j＝1.5and2.1hz,h-4’),6.20(1h,d,j＝1.5hz,h-6’),4.43and5.37(each1h,d,j＝6.5hz,h-α,α’),6.91(1h,d,j＝2.1hz,h-2”),6.81(1h,d,j＝7.9hz,h-5”),6.79(1h,dd,j＝1.6and7.9hz,h-6”),3.92,3.84and3.71(each3h,s,4-och3,3’-och3,3”-och3).
ys18:gymconpinc
棕色无定型粉末,[α]20d 0.003(c0.315,meoh).uv(meoh)λmaxnm(logε):216(5.14),280(4.95),296(4.85).cddatarecordedon-lineinhexane/ethanol7:3for(as)-18:λmax(φ):307(8.7),287sh(5.5),271(-9.1),246(8.5),219(-9.7).(ar)-18:311(-8.8),286sh(-5.5),269(10.0),243(-8.3),222(9.8).
1hnmr(500mhz,cd3od)δ6.57(1h,s,h-3),8.03(1h,d,j＝8.5hz,h-5),6.63(1h,dd,j＝2.7,8.5hz,h-6),6.60(1h,d,j＝2.7hz,h-8),2.53and2.50(each2h,m,h-9,10),6.32and6.37(each1h,d,j＝2.5hz,h-1’,3’),7.87and6.76(each1h,s,h-5’,7’),27.0(4h,s,h-9’,10’),3.88and3.74(each3h,s,4-ome,4’-ome).
ys19:blestrianola
浅黄色粉末，uv(meoh)λmaxnm(logε):276(4.54),285(4.61),200(4.45).esi-msm/z482.3[m h] .1hnmr(500mhz,cd3od)δ2.41-2.57(4h,m,h-9’,h-10’),2.72(4h,s,h-9,h-10),3.26and3.88(each3h,s,4,4’-ome),6.59and6.62(each1h,s,h-3’,h-1),6.60(1h,d,j＝2.6hz,h-8’),6.63(1h,dd,j＝8.6,2.6hz,h-6’),6.64(1h,dd,j＝8.4,2.6hz,h-6),6.66(1h,d,j＝2.6hz,h-8),8.05(lh,d,j＝8.6hz,h-5’),8.08(1h,d,j＝8.4hz,h-5).
ys20:flavanthrin
白色无定型粉末,[α]20d0(c0.380,meoh).cddatarecordedon-lineinhexane/ethanol7:3for(as)-20:λmax(φ):315(22.0),303sh(13.6),286sh(7.0),268(-18.9),251sh(5.6),236(20.4),221(-25.1),202(-30.9).(ar)-20:315(-39.1),305sh(-26.8),285sh(-13.6),269(-34.6),250sh(-12.8),236(-36.2),220(32.8),204(21.9).esi-msm/z.483.2[m h] .1hnmr(400mhz,cd3od)δ2.36and2.50(each4h,m,h-9,10,9’,10’),3.92(6h,s,7-ome,7’-ome),6.59(each1h,s,h-6,6’),6.66(2h,d,j＝2.3hz,h-1,1’),6.67(2h,dd,j＝8.3,2.3hz,h-3,3’),8.07(2h,d,j＝8.3hz,h-4,4’).
ys21:blestrina
白色粉末，uv(meoh)λmaxnm(logε):272sh(4.28),281(4.36),299(4.25).esi-msm/z483.2[m h] .1h-nmr(400mhz,cd3od)δ6.61(1h,s,h-3),8.06(1h,d,j＝8.6hz,h-5),6.64(1h,dd,j＝2.8,8.6hz,h-6),6.61(1h,dj＝2.8hz,h-8),2.55(4h,s,h-9,10),6.26and6.51(each1h,d,j＝2.6hz,h-1’,3’),8.01(1h,d,j＝9.2hz,h-5’),6.60-6.64(2h,m,h-6’,8’),3.86and3.77(each3h,s,4-ome,4’-ome).
ys22:phoyunnanind
白色粉末，uv(meoh)λmaxnm(logε):205(4.92),280(4.47).esi-msm/z484.2[m h] .1h-nmr(400mhz,acetone-d6)δ6.38and6.43(1h,d,j＝2.5hz,h-1,3),8.27(1h,d,j＝8.7hz,h-5),6.64(1h,dd,j＝2.8,8.7hz,h-6),6.69(1h,dj＝2.8hz,h-8),2.69(4h,m,h-9,10),6.41and6.50(each1h,d,j＝2.7hz,h-1’,3’),6.63(1h,m,h-2”),6.61(1h,ddd,j＝7.8,2.5,0.9hz,h-4”),7.02(1h,t,j＝7.8hz,h-5”),6.59(1h,dd,j＝7.8,0.9hz,h-6”),2.73(4h,m,h-α’,α”),3.80and3.70(each3h,s,2-ome,6’-ome).
ys23:7-hydroxy-2,4-dimethoxy-9,10-dihydrophenanthrene,7-羟基-2,4-二甲氧基-9,10-二氢菲
淡红色油状液体，ei-msm/z(％):256(100).1hnmr(500mhz,cdcl3):δ8.10(1h,d,j＝8.5hz,h-5),6.73(1h,d,j＝8.5hz,h-6),6.68(1h,s,h-8),6.45(1h,s,h-3),6.41(1h,s,h-1),3.85(3h,s,4-och3),3.82(3h,s,2-och3),2.73(4h,m,ch2-9,10).
ys24:lusianthridin
淡棕色粉末，ei-msm/z(％):242(100).1hnmr(500mhz,cd3od),δ7.08(1h,t,j＝7.8hz,h-7),6.84(1h,dd,j＝7.8,2.5hz,h-6),6.81(1h,dd,j＝7.8,2.5hz,h-8),6.57(1h,d,j＝2.5hz,h-3),6.53(1h,d,j＝2.5hz,h-1),3.95(3h,s,4-och3),2.67(4h,m,ch2-9,10)
ys25:coelonin
淡褐色油状液体，ei-msm/z(％):242(100).1hnmr(500mhz,acetone-d6)δ8.07(1h,d,j＝8.5hz,h-5),6.68(1h,d,j＝8.5hz,h-6),6.66(1h,s,h-8),6.45(1h,s,h-3),6.37(1h,s,h-1),3.86(3h,s,4-och3),2.70(4h,m,ch2-9,10).
ys26:dihydropinosylvin二氢赤松素
白色针状固体，ei-msm/z(％):214(55).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ2.73-2.90(4h,m,h-α,α’),6.19(1h,t,j＝2.1hz,h-4),6.24(2h,d,j＝2.1hz,h-2,6),7.10-7.20(3h,m,h-2’,4’,6’),7.25(2h,t,j＝7.5hz,h-3’,5’).
ys27:4-hydroxy-3-methoxybibenzyl4-羟基-3-甲氧基双苄
白色固体，ei-msm/z(％):228(69).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.32-7.27(2h,m,h-3’,5’),7.24-7.17(3h,m,h-2’,4’,6’),6.85(1h,d,j＝8.0hz,h-2),6.70(1h,dd,j＝8.0,1.9hz,h-4),6.62(1h,d,j＝1.9hz,h-6),3.84(3h,s,3-ome),2.95–2.84(4h,m,h-α,α’).
ys28:3,3',5-trihydroxy-bibenzyl,3,3',5-三羟基双苄
白色粉末，ei-msm/z(％):230(100).1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.08(1h,t,j＝7.5hz,h-5’),6.72(1h,m,h-2’),6.69(1h,m,h-6’),6.65(1h,dd,j＝7.5,2.0,h-4’),6.23(1h,s,h-6),6.23(1h,s,h-2),6.19(1h,s,h-4),2.77(4h,m,h-α,α’).
ys29:batatasiniii
白色固体,ei-msm/z(％):274(30).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.09(1h,t,j＝7.8,h-5’),6.65(1h,d,j＝7.8,h-6’),6.57(1h,d,j＝7.4,h-4’),6.60(1h,s,h-2’),6.82(1h,d,j＝8.2hz,h-2),6.73(1h,d,j＝2.0hz,h-6),6.63(1h,dd,j＝8.1,2.0hz,h-4),3.85(3h,s,4-och3),2.75(4h,m,h-α,α’).
6.84(1h,d,j＝8.0hz,h-2),6.68(1h,dd,j＝8.0,1.8hz,h-4),6.63(1h,d,j＝1.8hz,h-6),6.35–6.30(1h,m,h-4’),6.27-6.23(2h,m,h-2’,6’),3.84(3h,s,3-ome),3.75(3h,s,4’-ome),2.97-2.58(4h,m,h-α,α’).
ys30:gigantolys30
微黄色油状液体。ei-msm/z(％):274[m] ；1hnmr(400mhz；cdcl3)δ6.84(1h,d,j＝8.0hz,h-2),6.68(1h,dd,j＝8.0,1.8hz,h-4),6.63(1h,d,j＝1.8hz,h-6),6.35–6.30(1h,m,h-4’),6.27–6.23(2h,m,h-2’,6’),3.84(3h,s,3-ome),3.75(3h,s,4’-ome),2.97-2.58(4h,m,h-α,α’).
ys31:3-hydroxy-5-methoxystilbene3-羟基-5-甲氧基
白色固体，ei-msm/z(％):226(78)；1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ3.83(3h,s,5-ome),6.35(1h,t,j＝2.3hz),6.61(1h,t,j＝1.8hz),6.65(1h,t,j＝1.8hz),6.99(1h,d,j＝16.5hz,h-α),7.07(1h,d,j＝16.5hz,h-α’),7.26(1h,tt,j＝7.6and1.4hz,h-4’),7.36(2h,t,j＝7.6hz,h-3’,5’),7.50(2h,dd,j＝7.6hz,h-2’,4’).
ys32:3,3',5-trihydroxystilbene,3,3',5-三羟基芪
浅黄色油状胶体，ei-msm/z(％):228(100)；1h-nmr(400mhz,cd3od)δ6.19(1h,t,j＝2.1hz,h-2),6.47(2h,d,j＝2.1hz,h-4),6.68(1h,ddd,j＝7.8and2.4and0.6hz,h-5’),6.92(1h,d,j＝16.2hz,h-α),6.93(1h,t,j＝2.4hz,h-2’),6.96(1h,d,j＝16.2hz,h-α’),6.97(1h,d,j＝7.8hz,h-6’),7.15(1h,t,j＝7.8hz,h-4’).
ys33:thunalbene
浅黄色油状胶体，ei-msm/z(％):242(86)；1h-nmr(500mhz,cd3od)δ6.95(1h,brs,h-2),6.68(2h,dd,j＝7.8,1.9hz,h-4),7.15(1h,t,j＝7.8hz,h-5),7.00(1h,d,j＝7.2hz,h-6),7.01(1h,d,j＝16.2hz,h-α),6.98(1h,d,j＝16.4hz,h-α’),6.59(1h,brs,h-2’),6.57(1h,brs,h-6’),6.28(1h,t,j＝2.1hz,h-4’),3.78(3h,s,och3-5’)
ys34:3’-hydroxy-3,5-dimethoxy-stilbene,3′-羟基-3,5-二甲氧基芪
白色固体，ei-msm/z(％):256(73)；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.21(1h,t,j＝7.7hz,h-5),7.05(1h,d,j＝7.7hz,h-6),7.00(1h,d,j＝16.7hz,h-α),6.98(1h,d,j＝16.7hz,h-α’),6.96(1h,d,j＝2.3hz,h-2),6.74(dd,1h,j＝7.7,2.3hz,h-4),6.64(2h,d,j＝2.2hz,h-2’,6’),6.39(1h,t,j＝2.2hz,h-4’),3.81(s,6h,och3-3’,5’).
ys35:shancidin
无色针状固体，ei-msm/z(％):348(100)；1h-nmr(500mhz,cd3od)δ2.45(2h,m,h-9),2.57(2h,m,h-10),3.88(3h,s,4-ome),3.93(2h,s,h-11),6.52(1h,s,h-3),6.58(1h,d,j＝2.5hz,h-8),6.62(1h,dd,j＝8.6,2.5hz,h-6),6.65(2h,d,j＝8.5hz,h-3’,5’),6.94(2h,d,j＝8.5hz,h-2’,6’),7.97(1h,d,j＝8.6hz,h-5).
ys36:9,10-dihydro-1-(4-hydroxybenzyl)-4-methoxy-2,7-phenanthrenediol，1-(4-羟基苄基)-4-甲氧基-2,7-二羟基-9,10二氢菲
淡黄色针状固体，ei-msm/z(％):348(100)；1h-nmr(500mhz,cd3cocd3)δ8.02(1h,d,j＝9.0hz,h-5),6.98(2h,d,j＝8.4hz,h-2’,6’),6.70(2h,d,j＝8.4hz,h-3’,5’),6.68(1h,s,h-8),6.65(1h,d,j＝9.0hz,h-6),6.62(1h,s,h-3),4.05(2h,s,ch2-11),3.83(3h,s,4-och3),2.62(4h,m,ch2-9,10).
ys37:isoarundinini
白色针状固体，msm/z(％):350(100).1h-nmr(500mhz,cd3od)δ2.90(4h,m,h-α,α’),3.87(2h,s,-ch2-ph),3.70(3h,s,3-ome),6.30and6.24(each1h,d,j＝2.4hz,h-4,6),6.54(1h,t,j＝2.3hz,h-2’),6.56(1h,dd,j＝7.9.2.3hz,h-4’),7.03(1h,t,j＝7.9hz,h-5’),6.56(1h,dd,j＝7.9,2.3hz,h-6’),6.64(2h,d,j＝8.5hz,h-3”,5”),6.95(2h,d,j＝8.5hz,h-2”,6”).
3.野灯芯草中9,10-二氢菲和菲类化合物的分离
野灯心草干燥全草9.5kg,用95％工业乙醇(35l)冷浸提取3次，每次3天，合并提取液，减压回收溶剂，得到总浸膏445g。将总浸膏溶解在水中，分别用乙酸乙酯和正丁醇分配萃取，得到乙酸乙酯部位217g，正丁醇层62g和水层153g。乙酸乙酯部位(217g)经硅胶柱层(石油醚-丙酮6:1～0:1)得到8个馏分。馏分3(16.7g)经硅胶柱层析(pe-异丙醚10:1～1:1)分离后所得次级馏分f3-1再经过异丙醚重结晶得到化合物xyw-1(juncuenina,51mg)，次级馏分f3-4经sephadexlh-20(氯仿-甲醇1:1)得到化合物xyw-5(dehydrojuncuenina,333mg)。馏分4(70.53g)经氯仿重结晶得到化合物xyw-3(juncueninc,22g)，母液经mci柱层析(etoh/h2o:30％～100％)后所得次级馏分f4-1经硅胶柱层析(pe:etoac6:1～1:1)、sephadexlh-20(氯仿-甲醇1:1)纯化得到化合物8(829mg)，9(971mg)，10(111mg)；次级f4-9(735mg)经sephadexlh-20(氯仿-甲醇：1:1)分离后再经制备tlc(pe:actone2:1)得到化合物xyw-6(dehydrojuncueninsb,17mg)。馏分5(10.146g)经mci柱层析(etoh/h2o30％～100％)所得次级馏分f5-5(314mg)经氯仿重结晶得到化合物xyw-4(juncuenind,66mg)；次级馏分f5-10(1.492g)经硅胶柱层析(pe:actone7:2)纯化后所得馏分经重结晶(meoh-pe)得到化合物xyw-7(dehydrojuncueninsc，28mg)。馏分6(12.11g)经甲醇重结晶后，剩余母液经mci柱层析(etoh/h2o30％～100％)后所得次级馏分f6-4(125mg)再经过sephadexlh-20(氯仿-甲醇2:1)纯化得到化合物xyw-2(juncueninb,32mg).
4.化合物的理化性质及波谱数据
xyw-1:juncuenina(2-羟基-1,7-二甲基-6-乙烯基-9,10-二氢菲)
白色无定形粉末；c18h18o,eimsm/z(％):250[m] (100)；hreimsm/z250.1358(calcd.forc18h18o,250.1358).1hnmr(300mhz,cdcl3)δ6.74and7.55(each1h,d,j＝8.3hz,h-3,4),7.76and7.01(each1h,s,h-5,8),2.80(4h,s,h-9,10),2.24and2.35(each3h,s,1-,7-me),6.95(1h,dd,j＝10.9,17.4hz,h-11),5.69(1h,dd,j＝1.5,17.4hz,h-12a),5.29(1h,dd,j＝1.5,17.4hz,h-12b),4.84(1h,br.s,2-oh).
xyw-2:juncueninb(2,6-二羟基-1-甲基-7羧基-8-乙烯基-9,10-二氢菲)
白色无定形粉末；c18h16o4,eimsm/z(％):296[m] (26)；hreimsm/z296.1050(calcd.forc18h16o4，296.1048).1hnmr(300mhz,cd3od)δ6.73and7.41(each1h,d,j＝8.3hz,h-3,4),7.13(1h,s,h-5),2.73(4h,m,h-9,10),2.17(3h,s,1-me),7.03(1h,dd,j＝11.0,17.8hz,h-11),5.04(1h,dd,j＝1.4,17.8hz,h-12a),5.42(1h,dd,j＝1.4,17.8hz,h-12b).
xyw-3：juncueninc(2,6-二羟基-1,7-二甲基-8乙烯基-9,10-二氢菲)
无色细小针晶(chcl3)；c18h18o2,eimsm/z(％):266[m] (100)；hreimsm/z266.1302(calcd.forc18h18o2,266.1307).1hnmr(300mhz,cdcl3)δ6.72and7.40(each1h,d,j＝8.4hz,h-3,4),7.06(1h,s,h-5),2.77(4h,m,h-9,10),2.01(6h,s,1-,7-me),6.75(1h,dd,j＝11.3,16.7hz,h-11),5.61(1h,dd,j＝2.1,16.7hz,h-12a),5.29(1h,dd,j＝2.1,16.7hz,h-12b),4.67and4.78(each1h,br.s,2-,6-oh).
xyw-4:juncuenind(2,8a-二羟基-1,7-二甲基-6-羰基-8-乙烯基-9,10-二氢菲)
淡黄色小方晶(chcl3)；c18h18o3，esimsm/z305.1[m na] ,hresimsm/z305.1143(calcd.forc18h18o3na,305.1154).1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ6.75and7.37(each1h,d,j＝8.8hz,h-3,4),6.32(1h,s,h-5),1.54and2.40(each1h,m,h-9),2.68and2.86(each1h,m,h-10),2.02and1.93(each3h,s,1-,7-me),6.70(1h,dd,j＝11.9,18.1hz,h-11),5.75(1h,dd,j＝2.1,18.1hz,h-12a),5.70(1h,dd,j＝2.1,11.9hz,h-12b),5.54and9.69(each1h,br.s,8a-,2-oh).
xyw-5：dehydrojuncuenina(2-羟基-1,7-二甲基6-乙烯基菲)
白色粉末；c18h16o,eimsm/z(％):248[m] (100),hreimsm/z248.1210(calcd.forc18h16o,248.1202).1hnmr(300mhz,cdcl3)δ7.15and8.50(each1h,d,j＝8.9hz,h-3,4),8.67and7.62(each1h,s,h-5,8),7.68and7.86(each1h,d,j＝9.2hz,h-9,10),2.60and2.53(each3h,s,1-,7-me),7.15(1h,dd,j＝10.9and17.4hz,h-11),5.87(1h,dd,j＝2.1and17.4hz,h-12a),5.43(1h,dd,j＝2.1and10.9hz,h-12b),4.93(1h,br.s,2-oh).
xyw-6：dehydrojuncueninb(2,6-二羟基-1,7-二甲基-8-乙烯基菲)
棕色粉末；c18h16o2,eimsm/z(％)264[m] (100),hreimsm/z264.1155(calcd.c18h16o2,264.1150).1hnmr(300mhz,acetone-d6)δ7.20and8.20(each1h,d,j＝9.1hz,h-3,4),8.01(1h,s,h-5),7.96and7.70(each1h,d,j＝9.6hz,h-9,10),2.57and2.38(each3h,s,1-,7-me),7.10(1h,dd,j＝9.0and15.9hz,h-11),5.75(1h,dd,j＝2.5and15.9hz,h-12a),5.70(1h,dd,j＝2.5and9.0hz,h-12b),8.42and8.66(each1h,br.s,2-,6-oh).
xyw-7：dehydrojuncueninc(2,6-二羟基-1-甲基-12-内酯-菲)
黄色小方晶(meoh-pe)；c18h14o4,eimsm/z(％):294[m] (69),hreimsm/z294.0910(calcd.forc18h14o4,294.0892).1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ7.26and8.50(each1h,d,j＝8.8hz,h-3,4),8.02(1h,s,h-5),7.84and7.76(each1h,d,j＝9.2hz,h-9,10),2.47(3h,s,1-me),6.70(1h,dd,j＝11.9,18.1hz,h-11),5.75(1h,dd,j＝2.1,18.1hz,h-12a),5.70(1h,dd,j＝2.1,11.9hz,h-12b),5.54and9.69(each1h,br.s,8a-,2-oh).
xyw-8：2,8-二羟基-1,6-二甲基-5-乙烯基-9,10-二氢菲
白色粉末；c18h18o2；esimsm/z:267[m h] .1h-nmr(300mhz,actone-d6):δ6.69(1h,d,j＝8.5hz,h-3)，7.44(1h,d,j＝8.5hz,h-4),6.75(1h,s,h-7),6.81(1h,dd,j＝11.3,18.5hz,h-11),5.47(1h,dd,j＝11.3,2.1hz,h-12a),5.19(1h,dd,j＝18.5,2.1hz,h-12b),2.67and2.57(each2h,m,h-9,10),2.25and2.23(each3h,s,1-,6-me).
xyw-9：灯心草菲酚
白色粉末；c17h16o2,esi-msm/z:253[m h] ,1hnmr(300mhz,actone-d6)：δ6.85(1h,d,j＝8.4hz,h-3),7.21(1h,d,j＝8.4hz,h-4)；6.89(1h,d,j＝2.7hz,h-6),6.91(1h,d,j＝2.7hz,h-8),6.94(1h,dd,j＝10.9,17.9hz,h-11)，5.62(1h,dd,j＝17.9,1.5hz,h-12a),5.20(1h,dd,j＝10.9,1.5hz,h-12b),2.67(4h,m,h-9,10),2.22(3h,s,1-me).
xyw-10：2,7-二羟基-1-甲基-5-乙烯基菲
白色粉末,c17h14o2,esi-msm/z:251[m h] .1hnmr(300mhz,actone-d6):δ7.21(1h,d,j＝8.8hz,h-3),8.51(1h,d,j＝8.8hz,h-4),7.27(1h,d,j＝1.5hz,h-6),7.22(1h,d,j＝1.5hz,h-8),7.91(1h,d,j＝9.0hz,h-9),7.66(1h,d,j＝9.0hz,h-10),7.49(1h,dd,j＝11.0,17.1hz,h-11),5.76(1h,dd,j＝17.1,1.5hz,h-12a),5.44(1h,dd,j＝11.0,1.5hz,h-12b),2.58(3h,s,1-me).
5.灯心草中9,10-二氢菲和菲类化合物的分离
将采自广西金秀县的灯心草(j.effusus)全草(10kg)粉碎，使用95％的工业乙醇浸泡四次，每次三天，合并提取液，减压浓缩除去乙醇得到深棕色的浸膏(605g)。将浸膏转移入25l龙头瓶，加入10l水，搅拌得到悬浮液，并依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯各萃取三次，减压浓缩分别得到石油醚部位75g，二氯甲烷部位165g，乙酸乙酯部位80g。
二氯甲烷部位以mci柱层析处理，依次以50、60、70、80、95％的乙醇-水洗脱，得到七个部位。参照石仙桃、野灯心草中化合物的分离纯化方法，反复运用硅胶柱层析、sephadexlh-20凝胶柱层析、制备型hplc等手段进行分离纯化，得到33个9,10-二氢菲类化合物，其中化合物xf-1～11、24、29为9,10-二氢菲/菲单体，xf-14～20、33为9,10-二氢菲/菲二聚体。
6.化合物的波谱数据
xf-1:juncueninh
无色方状晶体(丙酮)；esimsm/z249.2[m-h]-；hresimsm/z249.1302[m-h]-(calcdforc18h17o,249.1279).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ6.75and7.48(each1h,d,j＝8.4hz,h-3,4),7.51and7.13(each1h,d,j＝7.9hz,h-5,6),6.79(1h,dd,j＝11.4,17.9hz,h-11),5.61(1h,dd,j＝11.4,2.1hz,h-12a),5.24(1h,dd,j＝17.9,2.1hz,h-12b),2.91and.276(each2h,m,h-9,10),2.26and2.34(each3h,s,1-,7-me),5.16(1h,br.s,2-oh).
xf-2:juncuenini
浅黄色粉末；esimsm/z251.1[m-h]-；hresimsm/z251.1049[m-h]-(calcdforc17h15o2,251.1072).1hnmr(400mhz,acetone-d6)δ6.86and7.60(each1h,d,j＝8.4hz,h-3,4),8.12and7.18(each1h,s,h-5,8),10.28(1h,s,6-cho),2.84(4h,m,h-9,10),2.21and2.63(each3h,s,1-,7-me),8.42(1h,br.s,2-oh).
xf-3:juncueninj
浅黄色粉末；esimsm/z297.1[m-h]-；hresimsm/z297.1501[m-h]-(calcdforc19h21o3,297.1491).1hnmr(400mhz,acetone-d6)δ6.77and6.95(each1h,d,j＝8.3hz,h-3,4),6.95(1h,s,h-6),2.86and2.40(each2h,m,h-9,10),2.20and2.24(each3h,s,1-,8-me),4.80(1h,q,j＝6.3hz,h-11),1.50(3h,d,j＝6.3hz,h-12),2.88(3h,s,-ome),8.20and8.02(each1h,br.s,2-,7-oh).
xf-4:juncuenink
浅黄色粉末；esimsm/z281.3[m h] ；hresimsm/z281.1533[m h] (calcdforc19h21o2,281.1542).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ6.81and7.49(each1h,d,j＝8.6hz,h-3,4),7.09(1h,s,h-5),6.75(1h,dd,j＝14.1,17.9hz,h-11),5.61(1h,dd,j＝14.1,2.0hz,h-12a),5.20(1h,dd,j＝17.9,2.0hz,h-12b),2.74and2.79(each2h,m,h-9,10),2.21and2.24(each3h,s,1-,7-me),4.70(1h,br.s,6-oh),3.86(3h,s,2-ome).
xf-5:juncueninl
浅黄色粉末；esimsm/z310.1[m-h]-；hresimsm/z310.1092[m-h]-(calcdforc18h16no4,310.1079).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.46and6.68(each1h,s,h-4,8),6.79(1h,dd,j＝18.5,14.4hz,h-11),5.60(1h,dd,j＝14.4,1.2hz,h-12a),5.20(1h,dd,j＝18.5,1.2hz,h-12b),2.67and2.79(each2h,m,h-9,10),2.32and2.28(each3h,s,1-,6-me),11.10and4.70(each1h,br.s,2-,7-oh).
xf-6:juncueninm
浅黄色粉末；esimsm/z372.1[m-h]-；hresimsm/z372.1624[m-h]-(calcdforc24h22no3,372.1600).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ6.64and7.13(each1h,d,j＝8.4hz,h-3,4),6.76(1h,dd,j＝11.3,17.8hz,h-11),5.62(1h,dd,j＝11.3,1.9hz,h-12a),5.22(1h,dd,j＝17.8,1.9hz,h-12b),2.66(4h,m,h-9,10),2.26and2.29(each3h,s,1-,7-me),9.40(1h,s,1’-cho),6.96and6.24(each1h,dd,j＝2.6,3.6hz,h-2’,3’),4.15(2h,s,h-5’),5.11and5.23(each1h,br.s,2-,6-oh),9.68(1h,s,nh).
xf-7:dehydrojuncueninf
浅黄色粉末；esimsm/z246.9[m-h]-；hresimsm/z247.1145[m-h]-(calcdforc18h15o,247.1123).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.18and8.44(each1h,d,j＝8.9hz,h-3,4),8.44and7.46(each1h,d,j＝8.5hz,h-5,6),8.12and7.88(each1h,d,j＝9.5hz,h-9,10),7.07(1h,dd,j＝14.4,17.9hz,h-11),5.79(1h,dd,j＝14.4,2.0hz,h-12a),5.43(1h,dd,j＝17.9,2.0hz,h-12b),2.59and2.49(each3h,s,1-,7-me),5.48(1h,br.s,2-oh).
xf-8:dehydrojuncuening
浅黄色粉末；esimsm/z249.1[m-h]-；hresimsm/z249.0881[m-h]-(calcdforc17h13o2,249.0916).1hnmr(400mhz,acetone-d6)δ7.38and8.60(each1h,d,j＝8.9hz,h-3,4),9.12and7.74(each1h,s,h-6,8),7.76and8.08(each1h,d,j＝9.2hz,h-9,10),2.58and2.77(each3h,s,1-,7-me),10.42(1h,s,6-cho),8.73(1h,br.s,2-oh).
xf-9:dehydrojuncueninh
浅黄色粉末；esimsm/z265.2[m h] ；hresimsm/z265.1207[m h] (calcdforc18h17o2,265.1229).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.25and8.65(each1h,d,j＝9.3hz,h-3,4),7.19(2h,s,h-6,8),7.60and7.91(each1h,d,j＝9.2hz,h-9,10),7.47(1h,dd,j＝10.7,17.3hz,h-11),5.78(1h,dd,j＝17.3,1.6hz,h-12a),5.46(1h,dd,j＝10.7,1.6hz,h-12b),2.61(3h,s,1-me),3.97(3h,s,2-ome),5.10(1h,br.s,7-oh).
xf-10:dehydrojuncuenini
浅黄色粉末；esimsm/z279.1[m h] ；hresimsm/z279.1035[m h] (calcdforc18h15o3,279.1021).1hnmr(400mhz,acetone-d6)δ7.23and8.82(each1h,d,j＝9.3hz,h-3,4),8.04(1h,s,h-5),8.18and8.40(each1h,d,j＝9.5hz,h-9,10),7.14(1h,dd,j＝11.5,17.9hz,h-11),5.85(1h,dd,j＝11.5,2.0hz,h-12a),5.46(1h,dd,j＝17.9,2.0hz,h-12b),2.39(3h,s,7-me),11.01(1h,s,1-cho),12.94and9.02(each1h,br.s,2-,6-oh).
xf-11:dehydrojuncueninj
浅黄色粉末；esimsm/z297.1[m-h]-；hresimsm/z297.0682[m-h]-(calcdforc18h14o2cl,297.0682).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.39and8.79(1h,s,h-4,5),7.99and7.68(each1h,d,j＝9.5hz,h-9,10),7.05(1h,dd,j＝11.4,17.9hz,h-11),5.82(1h,dd,j＝11.4,2.0hz,h-12a),5.40(1h,dd,j＝17.9,2.0hz,h-12b),2.63and2.41(each3h,s,1,7-me),5.81and5.18(each1h,br.s,2-,6-oh).
xf-14:dijuncueninc
浅黄色粉末；esimsm/z529.2[m-h]-；hresimsm/z529.2370[m-h]-(calcdforc36h33o4,529.2379).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.45(2h,s,h-4,4’),7.05(2h,s,h-5,5’),6.76(2h,dd,j＝17.9,11.4hz,h-11,11’),5.63(2h,dd,j＝11.4,1.9hz,h-12a,12’a),5.22(2h,dd,j＝17.9,1.9hz,h-12,12’a),2.84(4h,m,h-9,9’),2.80(4h,m,h-10,10’),2.32(6h,s,1-,1’-me),2.23(6h,s,7-,7’-me),5.36(2h,s,3-,3’-oh),4.73(2h,br.s,6-,6’-oh).
xf-15:dijuncuenind
浅黄色粉末；esimsm/z529.1[m-h]-；hresimsm/z529.2391[m-h]-(calcdforc36h33o4,529.2379).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.45(2h,s,h-4,4’),6.67(2h,s,h-8,8’),6.86(2h,dd,j＝17.9,11.4hz,h-11,11’),5.47(2h,dd,j＝11.4,1.3hz,h-12a,12’a),5.14(2h,dd,j＝17.9,1.3hz,h-12b,12’b),2.70(4h,m,h-9,9’),2.76(4h,m,h-10,10’),2.33(6h,s,1-,1’-me),2.23(6h,s,6-,6’-me),5.43(2h,s,2-,2’-oh),5.99(2h,br.s,7-,7’-oh).
xf-16:dijuncuenine
浅黄色粉末；esimsm/z529.3[m-h]-；hresimsm/z529.2358[m-h]-(calcdforc36h33o4,529.2379).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.29and7.68(each1h,s,h-4,5),6.91(1h,dd,j＝11.5,17.5hz,h-11),5.82(1h,dd,j＝17.3,0.7hz,h-12a),5.40(1h,dd,j＝11.5,0.7hz,h-12b),2.74(4h,m,h-9,10),2.36and2.26(each3h,s,1-,7-me),7.49and6.68(each1h,s,h-4’,8’),6.86(1h,dd,j＝17.9,11.3hz,h-11’),5.46(1h,dd,j＝11.3,1.8hz,h-12’a),5.14(1h,dd,j＝17.9,1.8hz,h-12’b),2.74(4h,m,h-9’,10’),2.31and2.23(each3h,s,1’,6’-me).
xf-17:dijuncueninf
浅黄色粉末；esimsm/z527.1[m-h]-；hresimsm/z527.2231[m-h]-(calcdforc36h31o4,527.2222).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.50and7.00(each1h,s,h-4,5),6.78(1h,dd,j＝11.4,17.9hz,h-11),5.65(1h,dd,j＝11.4,1.9hz,h-12a),5.25(1h,dd,j＝17.9,1.9hz,h-12b),2.89(4h,m,h-9,10),2.30and2.22(each3h,s,1-,7-me),4.93and4.85(each1h,s,2-,6-oh),6.59and7.66(each1h,d,j＝9.3hz,h-3’,4’),8.11and7.79(each1h,d,j＝9.5hz,h-9’,10’),7.14(1h,dd,j＝17.9,11.4hz,h-11’),5.88(1h,dd,j＝11.4,1.9hz,h-12’a),5.46(1h,dd,j＝17.9,1.9hz,h-12’b),2.54and2.45(each3h,s,1’,7’-me),5.13and5.65(each3h,s,2’,6’-oh).
xf-18:dijuncuening
浅黄色粉末；esimsm/z527.2[m-h]-；hresimsm/z527.2234[m-h]-(calcdforc36h31o3,527.2222).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.58and6.71(each1h,s,h-4,8),6.71(1h,dd,j＝11.3,17.9hz,h-11),5.13(1h,dd,j＝11.3,1.9hz,h-12a),5.05(1h,dd,j＝17.9,1.9hz,h-12b),2.80(4h,m,h-9,10),2.28and2.19(each3h,s,1-,6-me),4.78and4.90(each1h,s,2-,7-oh),6.59and7.70(each1h,d,j＝9.3hz,h-3’,4’),8.10and7.78(each1h,d,j＝9.5hz,h-9’,10’),7.13(1h,dd,j＝17.9,11.4hz,h-11’),5.87(1h,dd,j＝11.4,1.9hz,h-12’a),5.46(1h,dd,j＝17.9,1.9hz,h-12’b),2.55and2.45(each3h,s,1’-,7’-me),4.96and5.70(each3h,s,2’-,6’-oh).
xf-19:dijuncueninh
浅黄色粉末；esimsm/z527.3[m-h]-；hresimsm/z527.2233[m-h]-(calcdforc36h31o4,527.2222).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.32and6.81(each1h,s,h-3,6),6.72(1h,dd,j＝10.9,15.1hz,h-11),5.42(1h,dd,j＝10.9,1.1hz,h-12a),4.83(1h,dd,j＝15.1,1.1hz,h-12b),2.82(4h,m,h-9,10),2.33and2.28(each3h,s,1-,8-me),6.62and7.70(each1h,d,j＝9.3hz,h-3’,4’),8.10and7.79(each1h,d,j＝9.5hz,h-9’,10’),7.12(1h,dd,j＝15.9,11.4hz,h-11’),5.87(1h,dd,j＝11.4,1.9hz,h-12’a),5.46(1h,dd,j＝15.9,1.9hz,h-12’b),2.55and2.44(each3h,s,1’-,7’-me).
xf-20:dijuncuenini
浅黄色粉末；esimsm/z525.3[m-h]-；hresimsm/z525.2084[m-h]-(calcdforc36h29o4,525.2066).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.07and9.04(each1h,d,j＝9.3hz,h-3,4),7.37and7.72(each1h,d,j＝9.4hz,h-9,10),7.43(1h,dd,j＝11.3,18.0hz,h-11),5.82(1h,dd,j＝11.3,1.6hz,h-12a),5.44(1h,dd,j＝18.0,1.6hz,h-12b),2.49(6h,s,1-,8-me),4.99and5.13(each1h,br.s,2-,7-oh),6.36and7.37(each1h,d,j＝9.4hz,h-3’,4’),8.18and7.82(each1h,d,j＝9.4hz,h-9’,10’),7.19(1h,dd,j＝17.9,11.4hz,h-11’),5.92(1h,dd,j＝11.4,1.8hz,h-12’a),5.52(1h,dd,j＝17.9,1.8hz,h-12’b),2.52and2.46(each3h,s,1’-,7’-me),4.77and5.30(each1h,br.s,2’-,6’-oh).
xf-24:2,7-二羟基-1,8-二甲基-5-乙烯基-9,10-二氢菲
白色无定型粉末,c18h18o2,esimsm/z：289.3[m na] ；1hnmr(400mhz,cdcl3):δ6.66(1h,d,j＝8.5hz,h-3),7.25(1h,d,j＝8.5hz,h-4),6.87(1h,s,h-6),2.69(4h,br.s,h-9,10),6.90(1h,dd,j＝10.8,17.4hz,h-11),5.16(1h,dd,j＝10.8,1.2hz,h-12a),5.58(1h,dd,j＝17.4,1.2hz,h-12b),2.26and2.30(3h,s,1-,8-me).
xf-29:dehydrojuncueninb(2,7-二羟基-1,6-二甲基-5-乙烯基-菲)
白色无定型粉末,c18h16o2,esimsm/z：287.3[m na] ；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.22and8.18(each1h,d,j＝8.6hz,h-3,4),7.90(1h,s,h-5),7.85and7.63(each1h,d,j＝9.2hz,h-9,10),7.09(1h,dd,j＝18.4,12.0hz,h-11),5.79(1h,dd,j＝12.8,1.6hz,h-12a),5.35(1h,dd,j＝12.8,1.6hz,h-12b),2.44and2.28(each3h,s,1-,6-me).
xf-33:8-[4-(2,7-二羟基-1,6-二甲基-5-乙烯基-9,10-二氢菲)基]-2,7-二羟基-1,6-二甲基-5-乙烯基-菲
白色无定型粉末,c36h32o4,esimsm/z:551.3[m h] ,1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.02and8.87(each1h,d,j＝9.2hz,h-3,4),7.37and7.78(each1h,d,j＝9.6hz,h-9,10),7.32(1h,dd,j＝18.0,11.2hz,h-11),5.76(1h,dd,j＝18.0,1.6hz,h-12a),5.38(1h,dd,j＝11.2,1.6hz,h-12b),2.56and2.52(each3h,s,1-,6-me),7.50and6.70(each1h,s,h-4’,8’),2.85and2.76(each2h,m,h-9’,10’),6.83(1h,dd,j＝18.0,11.2hz,h-11’),5.36(1h,dd,j＝2.0,18.0hz,h-12’a),5.11(1h,dd,j＝2.0,11.2hz,h-12’b),2.53and2.20(each3h,s,1’-,6’-me).
实施例2化合物对抗疏水胆酸肝细胞毒性的作用
胆汁淤积是药物性肝损伤的常见并发症，伴随疏水胆酸，如去氧胆酸(dca)和石胆酸(lca)在肝细胞中的蓄积，疏水胆酸能够破坏细胞基底外膜、细胞器膜并特异性破坏微管膜的外层，是导致肝细胞损伤的主要内源性物质之一。疏水胆酸诱导的肝细胞损伤模型可以初步用于评价化合物对抗胆酸毒性的作用，从而推测化合物对于伴有胆汁淤积症状的一类肝损伤，如药物尤其是中草药导致的肝损伤的保护作用。
1.实验方案
1.1化合物对抗dca诱导的大鼠原代肝细胞损伤
采用两步灌流法分离大鼠原代肝细胞，按照3×105个/ml的密度接种于96孔板中，贴壁4h后进行给药。用200μm的dca与相应的化合物共孵育大鼠原代肝细胞24h后，采用cck8法测定细胞活力。用多功能酶标仪测定450nm处的吸光度，吸光度与细胞活力成正比。根据细胞活力高低判断化合物保护作用强弱。
1.2化合物对抗dca诱导的hihep细胞损伤
将hihep细胞用hmm(hepatocytesmaintainingmedium)培养基进行培养，细胞长至90％融合率时，将细胞按照1×105个/ml的密度接种于96孔板中，培养3天后进行给药。用250μm的dca与相应的化合物共同孵育hihep细胞24h。随后用cck8法测定细胞活力，操作方法同上。
1.3化合物对抗lca诱导的hihep细胞损伤
hihep按照上述方法进行培养。用30μm的lca与相应的化合物共同孵育hihep细胞24h。随后用cck8法测定细胞活力，操作同上。
上述实验重复三次，给药组相比胆酸单独给药组(dca和lca)，细胞存活率高且两者具有统计学差异(p<0.05)的结果被视为有活性；三种模型中任一有活性的化合物，均被视为能够对抗疏水胆酸肝细胞毒性。
2.实验结果
实验结果显示，受测试的9,10二氢菲类化合物在0.1～25um浓度范围内表现出较明显的对抗疏水胆酸肝细胞毒性的作用，具有潜在的保肝作用，尤其是对于伴随胆汁淤积症状的肝损伤，如药物尤其是中草药导致的肝损伤具有潜在的保护作用。具体实验结果结果见表1。
实施例3化合物ys30对小鼠ccl4肝损伤的保护作用
ccl4诱导的小鼠急性肝损伤模型是临床前评价药物对抗急性肝损伤的常用模型之一。其损伤机制是ccl4在肝中被cyp2e1，cyp2b等代谢酶代谢为自由基，自由基与肝中的核酸、蛋白质以及脂质结合，导致核酸变性、蛋白合成受阻以及脂肪变性。上述病理变化会导致细胞的死亡，释放损伤模式因子(damps)，导致免疫细胞的激活，诱发炎症反应，从而导致下游爆发性肝损伤。氧化应激和炎症是肝损伤的两个重要病理进程，该模型可用于评价化合物对以炎症和氧化应激为主要病理学基础的一类肝炎的保护作用。其中包括中毒性肝炎(药物、化学物质和生物毒素)、酒精性肝炎、缺血性肝炎引起的肝损伤。
1.实验方案
1.1ccl4急性肝损伤模型
icr小鼠60只，随机分为7组，每组8只：溶媒组，ys30高剂量(40mg/kg·天)单独给药组，ccl4急性造模组，ccl4造模加阳性药双环醇组(200mg/kg·天)，ccl4造模加ys30低剂量(10mg/kg·天)、中剂量(20mg/kg·天)、高剂量(40mg/kg·天)组。ys30以相应的剂量连续灌胃7天，每天一次。双环醇以相应的剂量连续灌胃3天。溶媒组和ccl4急性造模组以溶媒0.5％吐温80进行连续灌胃7天。末次给药后1h，皮下注射0.5％ccl4橄榄油溶液(10ml/kg)。溶媒组和ys30单独给药组皮下注射相应体积橄榄油。所有小鼠禁食、自由饮水，造模之后16h采集样本。用戊巴比妥钠麻醉小鼠后摘眼球采血，解剖小鼠，取肝脏，一部分用生理盐水清洗后置于液氮速冻，放-80℃保存，用于后续生化指标的检测。剩余部分用福尔马林浸泡，用于苏木精-伊红染色。
1.2血生化指标的检测
将采集的小鼠血液样本静置30min后，8000rpm，离心10min，取血清。用全自动血生化仪(sysmexjca-bm6010c))检测血液中alt、ast、ldh的含量。
1.3h&e染色
取小鼠同一肝大叶浸泡于福尔马林，用于组织病理学分析。取同一部位肝组织进行石蜡包埋，获取3um切片，进行h&e染色，显微镜观察肝脏的病理变化，对肝组织的充血、空泡、坏死、炎症用suzuki’s评分法进行综合评估。
1.4炎症因子的检测
采用联科生物的炎症因子(tnf-α和il-6)elisa试剂盒检测小鼠血清中的炎症因子含量
1.5mda水平的检测
利用碧云天mda试剂盒检测组织样本中mda水平。取20-30mg肝组织样本，按照1:9加入预冷的pbs匀浆，12000rpm/min4℃离心10min取上清，利用bca试剂盒检测相应蛋白浓度，然后按照mda试剂盒说明书检测组织中mda含量。
2.实验结果
实验结果表明，ys30口服给药(10,20,40mg/kg)，可以剂量依赖性降低肝损伤小鼠alt、ast和ldh的水平(图1a-c)，同时改善肝脏组织的病理改变(图1d-1e)。说明ys30可以明显改善ccl4诱导的肝损伤。
进一步检测ys30对血清中炎症因子水平和肝中脂质过氧化水平的影响，结果表明(图2a-c)，ys30对急性肝损伤中的炎症因子tnf-α、il-6以及肝脏脂质过氧化(mda)水平有明显改善作用，这提示ys30对以炎症和氧化应激为主要病理学基础的一类肝损伤，如中毒性肝炎(药物、化学物质和生物毒素)、酒精性肝炎、缺血性肝炎均有潜在的保护作用。
实施例4化合物ys30对小鼠缺血再灌注肝损伤的保护作用
临床上，在肝脏移植、肝切除、创伤、出血性休克以及其他系统性低血流量疾病如败血症、呼吸衰竭、充血性心力衰竭等情况下均会发生肝脏缺血再灌注损伤。该损伤的机制与缺血期的氧化应激反应和再灌注时期的爆发性炎症反应相关。采用小鼠70％热缺血再灌注模型，可以模拟临床围手术期肝损伤，评价化合物对该类肝损伤的保护作用。
本发明所述化合物在体外均具有与ys30类似的抗氧化或/和抗炎活性，
1.实验方案
1.1小缺血再灌注肝损伤模型
c57/bl小鼠分为3组：假手术组(sham组)，缺血再灌注组(i/r)，ys30给药组(i/r ys30)。ys3040mg/kg使用生理盐水溶解，分别于手术前24h、12h、1h经尾静脉给药，根据文献报道构建70％热缺血再灌注模型，用4％水合氯醛(腹腔注射)麻醉小鼠后，沿腹中线开口，分离出肝动脉、肝门静脉、胆管，使用无创显微止血夹夹闭肝左叶和肝中叶肝动脉、肝门静脉、胆管造成肝70％缺血，缺血60min后，移除无创止血夹，恢复供血，缝合腹腔，再灌注6h后收集各组血液样本和组织样本。
1.2血生化指标检测
方法同上
1.3h&e染色
方法同上
2.实验结果
结果如图3所示，实验结果显示ys30能够显著改善缺血再灌注导致的小鼠肝损伤，对小鼠血清中alt，ast和ldh水平均有显著抑制作用，同时能够显著改善肝组织病理变化，说明ys30具有对抗临床上围手术期肝损伤的应用前景。
实施例59,10-二氢菲类活性化合物对肝损伤病理过程中氧化应激和炎症的影响
1、9,10-二氢菲类化合物抗氧化活性评价
1.1实验方案
dpph自由基清除实验：称取一定量的dpph试剂，用无水乙醇溶解，配制成0.2mm的dpph无水乙醇溶液，置于4℃冰箱待用。将待测化合物溶于dmso形成100mm的母液，再按照1:1000稀释于无水乙醇溶液中，形成100um的待测溶液。取100ul待测化合物(100um)或阳性药维生素c(100um)与100uldpph自由基乙醇溶液(0.2mm)加入96孔板中，同时设置不加药(以100ul无水乙醇代替)的dpph自由基组。阳性药和待测化合物均设置相应的不加dpph自由基(以100ul无水乙醇代替dpph自由基)的阴性对照孔，以扣除供试品自身颜色对于读数的影响。混匀后室温静置30min后，测定517nm处的吸光度。
dpph自由基清除率＝[oddpph-control-(oddpph-sample-odsample-control)]/oddpph-control*100％
其中，oddpph-control表示不加化合物加dpph组的od值平均值
oddpph-sample表示化合物 dpph组的od值
odsample-control表示不加dpph加化合物组的od值
1.2实验结果
水飞蓟素(100μm)的dpph自由基清除率为约为35％，我们规定dpph自由基清除率优于水飞蓟素，且具有统计学差异(p<0.05)的化合物为强抗氧化剂。结果显示，在测定的46个化合物中，有39个化合物(100μm)的dpph自由基清除率大于35％,定义为强抗氧化作用。结果见表2。
2、9,10-二氢菲类化合物抗炎活性评价
2.1实验方案
分离小鼠骨髓巨噬细胞(bmdm)，用含15％l929细胞上清液的高糖dmem培养基诱导单核细胞集落一周。将细胞接种到96孔板中，接种密度为5×105个/ml。培养24h后加入相应的药物进行孵育。将阳性药或者待测化合物10mm溶液按照1:1000溶于含10％fbs的高糖dmem培养基中。将待测药物(10μm)和1ug/ml的lps同时孵育bmdm，24h后收集上清进行no的检测。以no水平反应体系中炎症反应的强弱。从而判断化合物的抗炎作用。
2.2实验结果
阳性药地塞米松(10μm)能够显著抑制bmdm释放no，将给药组与lps诱导组进行对比，给药后no水平低于lps诱导组，且两者具有统计学差异(p<0.05)的化合物定义为具有抗炎作用。结果显示，在测定的46个化合物中，有21个化合物具有显著的抗炎作用。结果见表2。
表2：9,10-二氢菲类化合物的抗氧化和抗炎作用
上述试验结果表明，具有保肝活性的9,10-二氢菲类化合物具有与ys30类似的抗氧化或/和抗炎性质，对以炎症和氧化应激为主要病理学基础的一类肝损伤，如中毒性肝炎(药物、化学物质和生物毒素)、酒精性肝炎、缺血性肝炎也有潜在的保护作用。
结论：
ccl4诱导的小鼠急性肝损伤模型是临床前评价药物对抗异源物质(如酒精、药物、化学毒物)肝毒性的常用模型之一。其损伤机制是ccl4在肝中被cyp2e1、cyp2b等代谢酶代谢为自由基，自由基与肝中的核酸、蛋白质以及脂质结合，导致核酸变性、蛋白合成受阻以及脂肪变性。上述病理变化会导致细胞的死亡，释放损伤模式因子(damps)，导致免疫细胞的激活，诱发炎症反应，从而导致下游爆发性肝损伤。经体内药效验证，我们发现其中的代表性化合物ys30(gigantol)在动物水平对于ccl4诱导的急性肝损伤有着较好的保护作用，能够明显降低肝损伤引起的alt、ast和ldh升高(图1a)，组织病理学检测发现ys30能够改善肝组织中空泡、坏死和炎症等病理变化(图1b)。此外，动物实验结果同时显示ys30能够降低肝组织中炎症因子和脂质过氧化水平(图2)，提示其对于以炎症和脂质过氧化为病理学基础的一类肝炎，包括中毒性肝炎(药物、化学物质和生物毒素)、酒精性肝炎、缺血性肝炎等均有潜在的治疗作用。
为了验证该猜想，我们进一步在小鼠缺血再灌注损伤模型中考察了ys30的体内肝保护药效。临床上，在肝脏移植、肝切除、创伤、出血性休克以及其他系统性低血流量疾病如败血症、呼吸衰竭、充血性心力衰竭等情况下均会发生肝脏缺血再灌注损伤。该损伤的机制与缺血期的氧化应激反应和再灌注时期的爆发性炎症反应相关。实验结果显示，ys30显著改善缺血再灌注导致的小鼠血清alt、ast、ldh的升高以及肝组织病理学变化。可见ys30在临床肝脏围手术期肝损伤中具有潜在的治疗作用。
综上所述，本发明的9,10-二氢菲类化合物具有较好的肝保护作用，在伴随胆汁淤积症状的药物性肝损伤、中毒性肝炎、酒精性肝炎、肝脏围手术期肝损伤治疗中均有潜在的应用价值。
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